De cellules vivantes analyse du cycle de Drosophila Tissus en utilisant le Attune acoustique Cytometer Concentrer et Vybrant DyeCycle ADN Violet Stain

L’objectif global de cette procédure est de mesurer la phase relative du cycle cellulaire et la taille cellulaire des tissus avec des populations cellulaires génétiquement manipulées et marquées avec GFP ou RFP chez la drosophile. Tout d’abord, mettez en place des croisements génétiques pour générer une descendance contenant des cellules marquées avec les protéines fluorescentes souhaitées et avec les manipulations génétiques souhaitées dans un tissu ou une population spécifique de cellules. À l’étude, isolez proprement le tissu souhaité de la descendance du stade de développement approprié, puis dissociez le tissu en une suspension cellulaire unique et colorez-le avec un colorant d’ADN viable pour mesurer le contenu de l’ADN.

Analysez les échantillons dissociés colorés par cytométrie en flux. En fin de compte, les résultats in vivo mesurent les changements dans la taille des cellules et la phase du cycle cellulaire causés par les manipulations génétiques à l’étude. Le principal avantage de cette technique par rapport à la méthode existante de cytométrie en flux sur des tissus de drosophile vivants à l’aide de colorants ultraviolets est que le colorant violet à cycle de colorant est compatible avec les cytomètres de paillasse moins coûteux contenant un laser violet 4, 0, 5, qui peut être acheté avec un petit budget et maintenu à l’échelle d’un seul laboratoire.