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DOI: 10.3791/50289-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article describes a procedure for isolating adult mouse cardiomyocytes using a Langendorff perfusion system. The isolated cells are suitable for culture and transfection, allowing for gene expression manipulation and functional analysis.
Nous décrivons ici l'isolement de cardiomyoctyes de souris adultes en utilisant un système de perfusion de Langendorff. Les cellules résultantes sont des ions Ca2 + à tolérance de repos électriquement et peuvent être cultivées et transfectées avec l'adénovirus ou de lentivirus de manipuler l'expression génique. Leur fonctionnalité peut également être analysé en utilisant le système MMSYS et techniques de patch-clamp.
L’objectif global de cette procédure est d’isoler la culture et de visualiser la contraction et la manipulation du calcium dans les cardiomyocytes miroirs adultes. Pour ce faire, il suffit d’abord de retirer le cœur du muren et de le placer à température ambiante. PBS, le cœur peut être canulé dans la boîte comme le montre le dessin animé ou directement sur l’aiguille attachée au système de perfusion, comme dans le film.
La troisième étape consiste à laver et à digérer le cœur en pompant la perfusion, le tampon, puis le tampon enzymatique à travers le système. La dernière étape consiste à couper les ventricules dans un bol de tampon de transfert et à hacher doucement le tissu avec une pince. En fin de compte, les résultats peuvent montrer la contraction des cellules cardiomyocytaires individuelles et la manipulation du calcium par le biais de mesures de longueur de cellules entières et/ou de sarcomères et de ratio.
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