Name: Isolement, culture et caractérisation fonctionnelle des adultes Cardiomyoctyes souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-24T18:10:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: Apprenez à isoler des cardiomyocytes adultes de souris par perfusion Langendorff pour étudier la contraction et le calcium. Cette méthode permet la culture, la transfection virale et l'analyse fonctionnelle des cellules cardiaques.

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<ol><li>Chlopcikova, S., Psotová, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+rat+cardiomyocytes-a+model+for+the+study+of+morphological%2C+biochemical+and+electrophysiological+characteristics+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Papers%22%5BJournal%5D)">Neonatal rat cardiomyocytes-a model for the study of morphological, biochemical and electrophysiological characteristics of the heart.</a> Biomedical Papers. , (2001).</li>
<li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+ascending%3A+perspectives+for+human-disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nat. Cell Biol. 9, 993-999 (2007).</li>
<li>Ballou, L. M., Lin, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+and+mTOR+kinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Rapamycin and mTOR kinase inhibitors.</a> J. Chem. Biol. 1, 27-36 (2008).</li>
<li>Brette, F., Orchard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Tubule+Function+in+Mammalian+Cardiac+Myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">T-Tubule Function in Mammalian Cardiac Myocytes.</a> Circ Res. , (2003).</li>
<li>Sakata, Y., Hoit, B., Liggett, S., Walsh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decompensation+of+pressure-overload+hypertrophy+in+G%3Fq-overexpressing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Decompensation of pressure-overload hypertrophy in G?q-overexpressing mice.</a> Circulation. , (1998).</li>
<li>Lieu, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+Transverse+Tubules+Contributes+to+Non-Uniform+Ca+2%2BWavefronts+in+Mouse+and+Human+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Absence of Transverse Tubules Contributes to Non-Uniform Ca 2+Wavefronts in Mouse and Human Embryonic Stem Cell-Derived Cardiomyocytes.</a> Stem Cells and Development. 18, 1493-1500 (2009).</li>
<li>Lim, H., De Windt, L., Mante, J., Kimball, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+cardiac+hypertrophy+in+transgenic+disease+models+by+calcineurin+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Reversal of cardiac hypertrophy in transgenic disease models by calcineurin inhibition.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 32 (4), 697-709 (2000).</li>
<li>Muthuchamy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+a+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+mutation+in+alpha-tropomyosin+manifests+cardiac+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of a familial hypertrophic cardiomyopathy mutation in alpha-tropomyosin manifests cardiac dysfunction.</a> Circ. Res. 85, 47-56 (1999).</li>
<li>Müller, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+the+cardiac+sodium+calcium+exchanger+promoter+in+adult+and+neonatal+cardiomyocytes+by+Nkx2.5+and+serum+response+factor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of the cardiac sodium calcium exchanger promoter in adult and neonatal cardiomyocytes by Nkx2.5 and serum response factor.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 34, 807-821 (2002).</li>
<li>Epstein, F., Hunter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+for+cardiac+hypertrophy+and+failure%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways for cardiac hypertrophy and failure.</a> New England Journal of Medicine. 341 (17), 1276-1283 (1999).</li>
<li>Snopko, R., Aromolaran, A., Karko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+modifies+Ca+2%2B+signaling+during+excitation-contraction+coupling+in+neonate+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">Cell culture modifies Ca 2+ signaling during excitation-contraction coupling in neonate cardiac myocytes.</a> Cell Calcium. , (2007).</li>
<li>Ranu, H., Terracciano, C., Davia, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Na%2B%2FCa2%2B-exchanger+overexpression+on+excitation-contraction+coupling+in+adult+rabbit+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Effects of Na+/Ca2+-exchanger overexpression on excitation-contraction coupling in adult rabbit ventricular myocytes.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 34 (4), 389-400 (2002).</li>
<li>Kaab, S., Nuss, H. B., Chiamvimonvat, N., O'Rourke, B., Pak, P. H., Kass, D. A., Marban, E., Tomaselli, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionic+mechanism+of+action+potential+prolongation+in+ventricular+myocytes+from+dogs+with+pacing-induced+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Ionic mechanism of action potential prolongation in ventricular myocytes from dogs with pacing-induced heart failure.</a> Circ. Res. 78 (2), (1996).</li>
<li>Splawski, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variant+of+SCN5A+sodium+channel+implicated+in+risk+of+cardiac+arrhythmia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Variant of SCN5A sodium channel implicated in risk of cardiac arrhythmia.</a> Science. 297, 1333-1336 (2002).</li>
<li>Zhou, Y., Wang, S., Zhu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+and+adenoviral+infection+of+adult+mouse+cardiac+myocytes%3A+methods+for+cellular+genetic+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Culture and adenoviral infection of adult mouse cardiac myocytes: methods for cellular genetic physiology.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 279 (1), 429-436 (2000).</li>
<li>Sussman, M., Lim, H., Gude, N., Taigen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+cardiac+hypertrophy+in+mice+by+calcineurin+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Prevention of cardiac hypertrophy in mice by calcineurin inhibition.</a> Science. , (1998).</li>
<li>Heinzel, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impairment+of+diazoxide-induced+formation+of+reactive+oxygen+species+and+loss+of+cardioprotection+in+connexin+43+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Impairment of diazoxide-induced formation of reactive oxygen species and loss of cardioprotection in connexin 43 deficient mice.</a> Circ. Res. 97, 583-586 (2005).</li>
<li>Li, X., Heinzel, F. R., Boengler, K., Schulz, R., Heusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+connexin+43+in+ischemic+preconditioning+does+not+involve+intercellular+communication+through+gap+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Role of connexin 43 in ischemic preconditioning does not involve intercellular communication through gap junctions.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 36, 161-163 (2004).</li>
<li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J., Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li>
<li>Nakamura, A., Rokosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LV+systolic+performance+improves+with+development+of+hypertrophy+after+transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">LV systolic performance improves with development of hypertrophy after transverse aortic constriction in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 281 (3), 1104-1112 (2001).</li>
<li>Boström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PGC1-%3F-dependent+myokine+that+drives+brown-fat-like+development+of+white+fat+and+thermogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A PGC1-?-dependent myokine that drives brown-fat-like development of white fat and thermogenesis.</a> Nature. 481, 463-468 (2012).</li>
<li>Liao, R., Jain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+functional+analysis+of+adult+mouse+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and functional analysis of adult mouse cardiomyocytes.</a> Methods Mol. Med. 139, 251-262 (2007).</li>
<li>Volz, A., Piper, H. M., Siegmund, B., Schwartz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+of+adult+ventricular+rat+heart+muscle+cells+in+serum-free+primary+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Longevity of adult ventricular rat heart muscle cells in serum-free primary culture.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 23, 161-173 (1991).</li>
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<li>Yang, J., Delaloye, K., Lee, U. S., Cui, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+Clamp+and+Perfusion+Techniques+for+Studying+Ion+Channels+Expressed+in+Xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes.</a> J. Vis. Exp. (47), e2269(2011).</li>
<li>Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+Clamp+Recording+of+Ion+Channels+Expressed+in+Xenopus+Oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in Xenopus Oocytes.</a> J. Vis. Exp. (20), e936(2008).</li>
<li>Arman, A. C., Sampath, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+Clamp+Recordings+from+Mouse+Retinal+Neurons+in+a+Dark-adapted+Slice+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation.</a> J. Vis. Exp. (43), e2107(2010).</li>
<li>Wen, H., Brehm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paired+patch+clamp+recordings+from+motor-neuron+and+target+skeletal+muscle+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Paired patch clamp recordings from motor-neuron and target skeletal muscle in zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (45), e2351(2010).</li>
<li>Maier, S., Westenbroek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+unexpected+role+for+brain-type+sodium+channels+in+coupling+of+cell+surface+depolarization+to+contraction+in+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">An unexpected role for brain-type sodium channels in coupling of cell surface depolarization to contraction in the heart.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (6), 4073-4078 (2002).</li>
<li>Shroff, S. G., Saner, D. R., Lal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+micromechanical+properties+of+cultured+rat+atrial+myocytes+measured+by+atomic+force+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dynamic micromechanical properties of cultured rat atrial myocytes measured by atomic force microscopy.</a> Am. J. Physiol. 269, 286-292 (1995).</li>
<li>Domke, J., Parak, W. J., George, M., Gaub, H. E., Radmacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+mechanical+pulse+of+single+cardiomyocytes+with+the+atomic+force+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22European+Biophysics+Journal%22%5BJournal%5D)">Mapping the mechanical pulse of single cardiomyocytes with the atomic force microscope.</a> European Biophysics Journal. 28, 179-186 (1999).</li>
<li>Smith, B. A., Tolloczko, B., Martin, J. G., Grütter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+the+Viscoelastic+Behavior+of+Cultured+Airway+Smooth+Muscle+Cells+with+Atomic+Force+Microscopy%3A+Stiffening+Induced+by+Contractile+Agonist%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Probing the Viscoelastic Behavior of Cultured Airway Smooth Muscle Cells with Atomic Force Microscopy: Stiffening Induced by Contractile Agonist.</a> Biophysical Journal. 88, 2994-3007 (2005).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils n&#39;ont aucun intérêt financier concurrents.

Dans ce rapport, nous avons décrit les techniques nécessaires pour permettre l&#39;isolement et la culture des adultes CM du coeur de la souris. Notre technique permet une étude subséquente de la fonction et de l&#39;excitabilité CM utilisant les procédés décrits ci-dessus. Le paramètre critique pour l&#39;étude de la fonctionnalité des adultes MC est la santé et la qualité de l&#39;isolement CM. Comme décrit ci-dessus, nos techniques permettent un rendement élevé de cellules fonctionnelles qui se prêtent à une manipula...

Des modèles murins de maladie cardio-vasculaire ont servi d&#39;outils efficaces pour élucider les mécanismes de la maladie 1,2 fondamentales, ainsi que pour l&#39;identification de cibles thérapeutiques potentielles 1,3. En particulier, l&#39;utilisation des deux modèles murins de maladies cardiaques acquises (tels que la pression de surcharge) et 4,5 modèles de souris transgéniques ont fait progresser notre compréhension de la maladie cardiaque 6-8. L&#39;utilisation de techniques de culture de cellules à étudier cascades de signalisation 3,9,10 et modifications dans les protéines individuelles qui sous-tendent l&#39;excitabilité cellulaire et le couplage excitation-contraction dans le coeur de 11 à 13 au niveau de la cellule unique ont complété les modèles in vivo de souris. Cependant, le manque de lignées cellulaires appropriées qui reflètent la structure et la fonction des adultes CM a une limitation importante. Les investigateurs ont tenté de surmonter ce par l&#39;étude de protéines individuelles, telles que des canaux ioniques, dans des systèmes d&#39;expression hétérologues <sup&gt; 14, et bien que ces études nous ont fourni des informations utiles en termes de biophysique de canaux ioniques ou le trafic de protéines, représentation inadéquate de la micro-natif de la CMS est une limitation importante. Deuxièmement, puisque la plupart de ces cellules hétérologues n&#39;ont pas un appareil contractile mature, il n&#39;a pas été possible d&#39;étudier la fonction contractile et l&#39;interaction complexe entre l&#39;excitabilité cellulaire et la contraction. Pour cette raison, les chercheurs se sont tournés vers des cultures de cellules primaires cardiaque pour beaucoup de leurs études fonctionnelles in vitro. Enfin, des études de cardiomyocytes isolés permettent d&#39;évaluer la fonction contractile sans les facteurs de confusion de préparation multicellulaire y compris l&#39;effet de cicatrice ou de la fibrose et de l&#39;orientation des fibres. Néonatales cardiomyocytes ventriculaires de rat primaires (NRVMs) sont relativement facile à la culture, peuvent être infectées par des adénovirus et lentivirus de manipuler l&#39;expression du gène 15, une ont donc été utilisée avec succès une, mais des limites de leur propre. Bien qu&#39;ils fournissent un microenvironnement physiologique 1 et ont été le cheval de bataille du champ de signalisation, des différences substantielles entre la morphologie et l&#39;organisation subcellulaire de NRVMs et cardiomyoctyes adultes en font un modèle pour l&#39;étude des flux ioniques et couplage excitation-contraction dans le coeur adulte insuffisant . Plus particulièrement NRVMs définitif n&#39;ont pas une sous-système tubulaire t-4. Depuis Ca 2 + flux et dynamique dépendent de façon critique sur des T-tubulaire maturité et le réticulum sarcoplasmique (RS) la structure 6, Ca 2 + dynamique et des études fonctionnelles de la contractilité cardiaque dans NRVMs ne sont pas un reflet exact de ces processus critiques dans les cardiomyocytes adultes. De plus, certains composants de voies de signalisation diffèrent entre les souriceaux nouveau-nés et les adultes 9, fournissant ainsi une autre limitation pour étudier les processus de la maladie et leur impact sur l&#39;excitabilité cellulaire et la contractilité dans NRVMs. Enfin, la distribution de la machinerie contractile conduit à un raccourcissement de la cellule multidirectionnel et non uniforme limitant la précision des mesures contractiles. L&#39;utilisation des cardiomyocytes adultes isolés fournit donc un système de modélisation plus précise in vitro. La croissance extraordinaire des connaissances rendue possible par la manipulation génétique de la souris souligne l&#39;importance d&#39;obtenir des cardiomyocytes isolés fonctionnels de souris. En fait, la caractérisation des adultes CM isolés à partir des modèles de souris a mis en lumière de nombreux événements biologiques et pathologiques. CM isolés à partir de modèles de souris transgéniques ont permis d&#39;études du gain ou de la perte de la fonction des protéines sur les propriétés contractiles des cellules simples 2,16, et la viabilité des modèles de maladies telles que l&#39;ischémie / reperfusion 17,18, complétant ainsi les informations obtenues à partir de Des études in vivo sur l&#39;souris soi. Utilisation d&#39;adulte isolé CM de modèles murins de maladie cardiaque acquise 3,19,20 (comme aortique surcharge transversale de pression induite par constriction, qui imite l&#39;hypertension ou la sténose aortique) ou de l&#39;exercice 5,21 (pour la modélisation de l&#39;hypertrophie physiologique) permet à l&#39;examen de l&#39;interaction des cascades de signalisation impliquées dans ces processus avec de l&#39;excitabilité cellulaire et le couplage excitation-contraction au niveau de la cellule unique. En outre, la capacité de manipuler l&#39;expression des gènes en utilisant l&#39;expression du gène conduit adenovirus en adulte CM nous donne l&#39;occasion de disséquer les composants de voies de signalisation complexes. Du point de vue électrophysiologique, la tension de cellule entière et expériences actuelles de serrage sur adulte isolé CM ont été essentiels dans la compréhension de la nature des flux ioniques au départ et dans divers états pathologiques. En raison de la structure complexe de la membrane cellulaire et la prote différentieldans les structures d&#39;échafaudage entre adultes GC et NRVMs ou des lignées de cellules hétérologues, la possibilité de patcher les cellules adultes donne une bien meilleure représentation des effets de certaines protéines membranaires, des protéines structurelles et canaux ioniques partenaires d&#39;interaction sur les composantes électrophysiologiques du cœur adulte. En dépit de ces avantages importants dans l&#39;étude adultes cardiomyocytes murins, l&#39;isolement et la culture de cardiomyocytes de souris adultes ont été difficiles, insistant sur la nécessité d&#39;une description systématique et précise de la méthodologie pour isoler les cardiomyocytes de souris viables et à les maintenir en culture à la poursuite de la manipulation génétique en utilisant virale vecteurs. Des études antérieures ont utilisé soit des adultes de la souris aiguë isolé GC ou adulte de rat cultivés GC. Ces derniers sont plus facile à la culture de la souris adulte MC, et la plupart des expériences de manipulation expression génique in vitro ont utilisé rat adulte GC. Peu d&#39;études ont modifié avec succès et une enquête fonctil&#39;expression du gène onal des adultes de la souris CM, présentant une grande limitation dans le champ d&#39;expériences. Par conséquent, nous présentons ici en détail ces méthodes, modifiés à partir des enquêtes précédentes, pour l&#39;isolement 7,8,22, culture 3,10,15,23, infection adénoviral 11-13,15, et l&#39;analyse fonctionnelle de cardiomyoctyes ventriculaires de souris adultes. Ce protocole d&#39;isolement des résultats dans Ca 2 +, les cardiomyocytes excitables tolérantes que nous avons cultivées avec succès jusqu&#39;à 72 h et transfectées de façon transitoire avec l&#39;adénovirus. La fonctionnalité de ces cellules isolées peuvent être évaluées à l&#39;aide du système d&#39;imagerie et MMSYS 14,24 patch clamp, qui sera également discuté.

<table><tbody><tr><td>Chlorure</td><td>de sodium Sigma</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de magnésium</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate de sodium monobasique</td><td>Sigma</td><td>S8282</td><td></td></tr><tr><td>D-glucose minimum</td><td>Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Taurine</td><td>Sigma</td><td>T0625</td><td></td></tr><tr><td>2,3-Butanedione Monxime</td><td>Sigma</td><td>B0752</td><td></td></tr><tr><td>Collagénase B</td><td>Roche Applied Science</td><td>11088807001</td><td></td></tr><tr><td>Collagénase D</td><td>Roche Applied Science</td><td>11088858001</td><td></td></tr><tr><td>Protéase XIV de Streptomyces griseus</td><td>Sigma</td><td>P5147</td><td></td></tr><tr><td>Albumine de sérum bovin</td><td>Sigma</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de calcium</td><td>Sigma</td><td>C8106</td><td></td></tr><tr><td>Milieux essentiels minimaux</td><td>Sigma</td><td>51411C</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’albumine à partir de sérum bovin</td><td>Sigma</td><td>A8412</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Sigma</td><td>G3126</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Milieu insuline-transfertrine-sélénite sodique supplément</td><td>Sigma</td><td>I1884</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de césium</td><td>Sigma</td><td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/289329?lang=en&amp ; region=US » target="_blank">289329</a></td><td></td></tr><tr><td>Glutamate</td><td>Sigma</td><td>G3291</td><td></td></tr><tr><td>Adénosine 5'-triphosphate sel de magnésium</td><td>Sigma</td><td>A9187</td><td></td></tr><tr><td>Éthylène glycol-bis(2-amin&#8211 ; thylether)-N,N,N',N'-acide tétraacétique</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’hydroxyde de césium</td><td>Sigma</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’hydroxyde de tétraéthylammonium</td><td>Sigma</td><td>86643</td><td></td></tr><tr><td>OptiVisor Verre optique Visière binoculaire</td><td>Dohegan Optical Company Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pince à tissus, 5,5 », 1x2 dents</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-8164</td><td></td></tr><tr><td>Pince Moloney - 4,5 » (11,5 cm) de long, légère courbure, dentelée </td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-8254</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 Forceps, Dumostar, taille de la pointe 0,17 x 0,10 mm</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-4966</td><td></td></tr><tr><td>Packer Moustique Pince 5 » Droite Plate</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-7114</td><td></td></tr><tr><td>Micro Ciseaux de Dissection 4.5 » Courbé Sharp/Sharp </td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-5917</td><td></td></tr><tr><td>Micro Ciseaux de Dissection 3.5 » Straight Sharp/Sharp20mm</td><td>Roboz Scientific</td><td>RS-5907</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement, culture et caractérisation fonctionnelle des adultes cardiomyoctyes souris

Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

L&#39;utilisation des cardiomyocytes primaires (CMS) dans la culture a fourni un complément puissant pour des modèles murins de la maladie de coeur dans l&#39;avancement de notre compréhension de la maladie de coeur. En particulier, la capacité à étudier l&#39;homéostasie ionique, de la fonction de canal ionique, l&#39;excitabilité cellulaire et le couplage excitation-contraction et leurs altérations dans des conditions pathologiques et par des mutations pathogènes ont conduit à des avancées importantes au niveau des maladies cardiaques. En outre, l&#39;absence d&#39;une ligne suffisante de cellules immortalisées à imiter les adultes GC, et les limites de néonatale CM (qui n&#39;ont pas beaucoup de la caractéristique de la biomécanique structurale et fonctionnelle des adultes MC) dans la culture ont entravé notre compréhension de l&#39;interaction complexe entre les voies de signalisation, les canaux ioniques et les propriétés contractiles du coeur adulte renforcer l&#39;importance d&#39;étudier adultes cardiomyocytes isolés. Ici, nous présentons des procédés pour l&#39;isolement, la culture, la manipulation de l&#39;expression de gène par adenovirus expreprotéines sseD et analyse fonctionnelle ultérieure de cardiomyocytes de la souris adulte. L&#39;utilisation de ces techniques permettra de développer une approche mécanistique dans les voies de régulation de l&#39;excitabilité cellulaire, Ca 2 + dynamique et la contractilité de signalisation et de fournir une caractérisation beaucoup plus physiologiquement pertinents de maladies cardio-vasculaires.

L&#39;isolement des résultats cardiomyoctyes adultes dans des cellules en forme de baguette, striées, et quiescentes (pas spontanément battant) (Figure 5A). Les cellules mortes seront look arrondi et aucun stries seront présents. Cellules au repos peuvent être cultivées et transfectées avec l&#39;adénovirus de manipuler l&#39;expression des gènes (figures 5B et 5C). Après 24 heures de culture, la morphologie des cellules vivantes ne change pas, ils sont encore Ca 2...

Nous décrivons ici l&#39;isolement de cardiomyoctyes de souris adultes en utilisant un système de perfusion de Langendorff. Les cellules résultantes sont des ions Ca2 + à tolérance de repos électriquement et peuvent être cultivées et transfectées avec l&#39;adénovirus ou de lentivirus de manipuler l&#39;expression génique. Leur fonctionnalité peut également être analysé en utilisant le système MMSYS et techniques de patch-clamp.

Isolement, culture et caractérisation fonctionnelle des adultes Cardiomyoctyes souris

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler, de cultiver et de visualiser la contraction et la gestion du calcium dans les cardiomyocytes adultes de souris. Cette opération s'effectue tout d'abord en retirant le cœur de souris et en le plaçant à température ambiante dans du PBS. Le cœur peut alors être canulé dans la boîte selon ce qui est illustré dans le schéma, ou directement sur l'aiguille fixée au système de perfusion, comme montré dans la vidéo.La troisième étape consiste à laver et digérer le cœur par perfusion pulsée, en faisant circuler un tampon, puis un tampon enzymatique à travers le système. La dernière étape consiste à découper les ventricules dans une boîte contenant du tampon de transfert et à hacher délicatement le tissu à l’aide de pinces. En fin de compte, les résultats peuvent montrer la contraction des cardiomyocytes individuels et la gestion du calcium par des mesures de la cellule entière et/ou de la longueur des sarcomères ainsi que par des rapports métriques.Des indicateurs de calcium tels que le RO 2:00 AM avec le système optique ionique. En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés, car il peut être délicat de su

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Cultures de cardiomyocytes de souris primaires sont un des outils les pivots de l'enquête de l'organisation et de la fonction myofibrillaire. Le protocole suivant décrit l'isolement et la culture des cardiomyocytes primaires de coeurs de souris néonatales. Les cultures de cardiomyocytes résultants peuvent être ensuite utilisés pour une variété de tests biomécaniques, biochimiques et cellulaires biologiques.

Isolement et culture de cardiomyocytes de souris néonatales

Des cardiomyocytes individuels de souris de type sauvage et mutantes peuvent être isolés du cœur afin d’étudier leur contractilité et leurs transitoires calciques. Cela permet de caractériser la contribution du dysfonctionnement cellulaire au dysfonctionnement cardiaque, quelle qu’en soit la cause.

L&#39;isolement et l&#39;analyse physiologique de cardiomyocytes de souris

Nous décrivons une méthode fiable pour l'isolement des cardiomyocytes de souris adultes. Ce protocole donne un résultat cohérent pour la culture des cardiomyocytes adultes fonctionnels à partir d'une variété de souris génétiquement modifiées.

Isolement et culture de cardiomyocytes adultes de souris pour Signalisation cellulaire et<em&gt; In vitro</em&gt; Hypertrophie cardiaque

Ce protocole décrit une méthode étape par étape pour l’isolement reproductible et la culture à long terme de cardiomyocytes de souris adultes avec un rendement, une pureté et une viabilité élevés.

L&#39;isolement, la culture et la transduction des adultes cardiomyocytes souris

Les méthodes sont mises en évidence pour l'isolement des myocytes nœud sino-auriculaire (SAMS) provenant de souris adulte pour les études électrophysiologiques de patch-clamp ou d'imagerie. Les cellules isolées peuvent être utilisés directement ou peuvent être maintenues en culture pour permettre l'expression de protéines d'intérêt, comme rapporteurs codés génétiquement.

Méthodes pour l&#39;isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes

L’objectif général du présent article est de normaliser le protocole pour l’isolement, caractérisation et différenciation des cellules souches cardiaques (CSCs) du coeur de souris adulte. Nous décrivons ici une méthode de centrifugation en gradient de densité d’isoler CCS murins et les méthodes élaborées pour la culture, la prolifération et la différenciation dans les cardiomyocytes CSC.

Isolement, caractérisation et différenciation des cellules souches cardiaques du coeur de souris adulte

Ce protocole est utilisé pour isoler les cardiomyocytes auriculaires simples du cœur adulte de souris en utilisant une approche de digestion de morceau. Cette approche est utilisée pour isoler les myocytes auriculaires de droite ou de gauche qui peuvent être utilisés pour caractériser l'électrophysiologie du myocyte auriculaire dans les études de patch-clamp.

Isolement des myocytes auriculaires des souris adultes

Ici, nous présentons un protocole pour l’isolement, la transfection, et la culture à long terme de la souris adulte et les cardiomyocytes de rat.

Isolation, transfection et culture à long terme des cardiomyocytes adultes de souris et de rats

Une méthode est décrite pour l’isolement simultané des myocytes et des non-myocytes des atria et des ventricules d’un coeur adulte simple de souris. Ce protocole a comme résultat des rendements cohérents des myocytes cardiaques et des non-myocytes fortement viables et détaille les conditions optimales de culture cellule-spécifique pour le phénotypage et l’analyse in vitro.

Isolement et culture simultanés des myocytes auriculaires, des myocytes ventriculaires et des non-myocytes provenant d’un cœur de souris adulte

L’étalon-or en cardiologie pour les expériences fonctionnelles cellulaires et moléculaires sont les cardiomyocytes. Cet article décrit les adaptations à la technique non-Langendorff pour isoler les cardiomyocytes de souris.

Une méthode simple et efficace pour isoler systématiquement les cardiomyocytes de souris

Apprenez à isoler des cardiomyocytes adultes de souris par perfusion Langendorff pour étudier la contraction et le calcium. Cette méthode permet la culture, la transfection virale et l'analyse fonctionnelle des cellules cardiaques.

Isolement, culture et caractérisation fonctionnelle des adultes Cardiomyoctyes souris

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