Name: Les modèles de souris pour lartériosclérose Graft (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Apprenez la transplantation d'aorte thoracique chez la souris pour étudier l'artériosclérose de greffe vasculaire. Ce modèle permet d'évaluer l'impact génétique sur la pathogenèse et d'améliorer la survie des greffons.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH R01 HL109420 à WM et AHA 9320033N à LY.

allogreffe de la souris et syngénéique modèle de transplantation de greffe Toutes les études sur les animaux ont été approuvés par l&#39;Institutional Animal Care et comités de l&#39;utilisation de l&#39;Université de Yale. Pour le modèle d&#39;allogreffe, les segments de l&#39;aorte thoracique du mâle, semaine 4-5 ancien WT (C57BL/6J) ou souris IFN-yR-KO sont interposés dans l&#39;aorte abdominale du récipiendaire féminine, 8-12 semaine WT aide d&#39;un bout à la fin de microchirurgie technique d&#39;anastomose (voir prochaine pour plus de détails). Pour le modèle de greffe syngénique, des segments de aorte thoracique de Male, 4-5 semaines vieilles souris WT ont été intercalés dans la aorte abdominale du mâle, 8-12 semaine IFN-γR1-KO en utilisant une technique de microchirurgie anastomose de bout en bout. Après 1 semaine après l&#39;opération, les animaux ont été inoculés avec iv Ad5.CMV-souris IFN-γ ou Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene) à 1 x 10 9 PFU. Sérum de souris IFN-γ ont été mesurés par ELISA (eBioscience) à 1 et 5 semaines après l&#39;administration de l&#39;adénovirus. Certains animaux ont reçu BrdU(Sigma-Aldrich) à 100 mg / kg sc pendant 2 semaines avant le sacrifice. End-to-end microchirurgie technique d&#39;anastomose (vidéo sera prise pour cette partie): 1. Procédure de donateurs <ol><li> Anesthésier les souris donneuses avec injection intrapéritonéale de kétamine (50 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg). </li><li> Après s&#39;être assuré une anesthésie adéquate, placer les souris donneuses sous le microscope opératoire à X8-30 grossissement sur un plateau dans une position couchée, et utiliser un tampon à l&#39;iode et un tampon à l&#39;alcool pour la préparation de la paroi thoracique. </li><li> Inciser la paroi antérieure du thorax par les nervures et le diaphragme afin d&#39;exposer le coeur. </li><li> Ouvrez l&#39;oreillette droite, injecter 10 ml d&#39;héparine (100 U / ml) solution saline dans le ventricule gauche pour chasser les souris en utilisant une seringue de 10 ml avec une aiguille de calibre 25. </li><li> Réséquer le cœur et les poumons pour exposer toute la longueur de l&#39;aorte thoracique. </li><li> Disséquer l&#39;aorte thoracique soigneusement afin de minimiser le traumatisme direct, tout en recueillante identifier, ligaturer et diviser les branches de bois à l&#39;aide de 11-0 suture près de l&#39;aorte. </li><li> Une fois l&#39;aorte thoracique est libre de tissu environnant, l&#39;accise l&#39;ensemble aorte thoracique pour une transplantation. </li><li> Rincer l&#39;extrémité coupée de l&#39;aorte du donneur avec une solution saline héparine (100 U / ml), et le ranger dans la même solution sur la glace (jusqu&#39;à 6 heures) jusqu&#39;à la transplantation. </li></ol> 2. Procédure de destinataire <ol><li> Injecter les souris receveuses avec le kétoprofène ip (5 mg / kg) pour l&#39;analgésie, et thenanesthetize les souris avec de la kétamine ip (50 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg). Les souris receveuses sont profondément anesthésiés dans les 10 minutes pour une durée de 60-90 minutes. Pendant l&#39;opération, le niveau de l&#39;anesthésie est évaluée toutes les 15 min en pinçant la paroi abdominale antérieure ou pied à l&#39;aide de pinces. Si l&#39;animal réagit aux stimuli nocifs à tout moment pendant l&#39;intervention chirurgicale, une dose supplémentaire de kétamine et de xylazine (1/4 ou 1/3 de la dose initiale) sera administré par SC ou IM </li><li> Après s&#39;être assuré une anesthésie adéquate, raser la fourrure dans la paroi abdominale antérieure avec un rasoir électrique, nettoyer la peau en utilisant Prep Pad d&#39;iode et Pad Prep alcool, couvrir les yeux à l&#39;aide pommade ophtalmique. Pendant la chirurgie, les techniques d&#39;asepsie suivants seront utilisés pour les opérations, y compris le nettoyage de la table d&#39;opération avec 10% de javel, le port de gants stériles et en utilisant des instruments de microchirurgie stérilisés (instruments stérilisés à la vapeur pour le début de l&#39;opération, puis verre chaud perle stérilisé instruments entre plusieurs opérations, etc.) </li><li> Placez les souris receveuses sous le microscope opératoire à un grossissement de X8-30 sur un plateau dans une position couchée. </li><li> Inciser la paroi abdominale à partir de la ligne médiane à xiphoïde pubis, et la propagation de la paroi abdominale en dehors à l&#39;aide d&#39;un micro-enrouleur pour exposer la cavité abdominale. </li><li> Rentrez les intestins haut et envelopper avec de la gaze humidifiée avec une solution saline. Les souris receveuses se refroidir par la perte de HEAt par les intestins extériorisés. Il est important de maintenir la chaleur animale. Toutefois, le conseil de chauffage n&#39;est pas utilisé pendant la chirurgie que l&#39;hypothermie modérée est bénéfique dans la prévention des lésions de la moelle pendant l&#39;occlusion du flux sanguin aortique ainsi que, il ya transfert de chaleur inefficace avec le flux sanguin absent dans la moitié inférieure du corps de la souris. </li><li> Déplacez les organes reproducteurs inferiorly, envelopper les domaines de l&#39;abdomen de souris receveuses avec de la gaze de solution saline solution humidifié, et l&#39;utiliser pour rentrer le rectum à droite de l&#39;abdomen. Les tissus exposés sont irrigués régulièrement avec une solution saline lors de la transplantation. </li><li> Disséquer carrément un segment d&#39;aorte entre le navire rénale proximale et distale bifurcation aortique et se séparer de la veine cave inférieure (VCI) soigneusement. </li><li> Identifier et ligaturer toutes les petites branches provenant de ce segment de l&#39;aorte abdominale à l&#39;aide 11-0 Polyamide monofilament suture. </li><li> Clampage du segment isolé d&#39;unaorte bdominal l&#39;aide de deux pinces vasculaires approximativement 5 mm d&#39;intervalle, un à chaque extrémité. </li><li> Transect l&#39;aorte abdominale entre les pinces à l&#39;aide de micro-ciseaux pointus pour créer des sites anastomotiques. </li><li> Réséquer un petit segment de l&#39;aorte abdominale (jusqu&#39;à 0,4 mm de longueur) d&#39;une extrémité de coupe de l&#39;aorte sectionnée destinataire pour s&#39;adapter à la prothèse aortique de donneur. </li><li> Rincer les segments aortiques entre les pinces en utilisant une solution saline héparinée pour enlever le sang résiduel. Les segments de l&#39;aorte entre les pinces et le greffon aortique de donneur sont irrigués périodiquement (100 U / ml) solution saline héparine (jusqu&#39;à 40 ml / kg) au cours de l&#39;anastomose. </li><li> Sectionner les deux côtés de l&#39;aorte du donneur avec des micro-ciseaux pointus afin de créer un greffon de segment de 2,5 mm de longueur pour la transplantation. </li><li> Placer la prothèse aortique de donneur en position orthotopique, anastomose extrémité proximale et distale du donneur de greffe à proximale et distale extrémité coupée du destinataire de l&#39;aorte abdominale, respectivement, avec une fin-tmotif o-end en utilisant 11-0 Polyamide monofilament suture. </li><li> Pour les sutures continues, placer les sutures de séjour à 3 et 9 heures premièrement. Entre deux sutures de séjour de chaque côté de la greffe, s&#39;anastomosent les deux bords coupés à 3-4 points de suture à l&#39;aide des sutures de course, et nouer les sutures de course pour rester sutures avec un double nœud. Comme les deux couches de fermeture sont continues, le risque de déhiscence est augmentée. Le greffon aortique donneur doit être d&#39;une longueur appropriée pour relier proximale et distale extrémité coupée du destinataire de l&#39;aorte abdominale. </li><li> Pour les sutures interrompues, de construire quatre anastomose à 3 et 9 heures dans les deux côtés de la greffe d&#39;une part, et anastomoser deux bords coupés à 3-4 points entre deux sutures de séjour de chaque côté de la greffe. </li><li> Relâcher la pince distale pour permettre l&#39;écoulement rétrograde en greffe, identifier les sites de saignement et de faire des points supplémentaires dans les 3 minutes. </li><li> Après avoir vérifié l&#39;hémostase satisfaisante, relâchez la pince proximale. </li><li> Confirmer la perméabilité du greffon selon la présence d&#39;une pulsation vigoureuse dans la greffe et le segment adjacent proximale de l&#39;aorte abdominale natif, en particulier dans le segment adjacent distale de l&#39;aorte abdominale et l&#39;artère mésentérique inférieure. Considérez thrombose dans des sites anastomotiques si la pulsation diminue au bout de quelques minutes après le rétablissement de la circulation sanguine. </li><li> Retourner les intestins dans la cavité abdominale. </li><li> Suturer fermer la paroi abdominale en utilisant 5-0 Nylon suture dans la couche musculaire et la couche de peau, respectivement. </li><li> Placez les souris receveuses dans une cage propre sur le dessus d&#39;un coussin chauffant, et d&#39;attendre 1-2 heures pour les souris à reprendre conscience et se remettre de l&#39;anesthésie. Il est important de maintenir la chaleur animale adéquate lors de la récupération. Gardez les souris dans la cage chaud et au sec avant sillage des animaux de l&#39;anesthésie. </li><li> Évaluer la fonction motrice des membres inférieurs après récupération de la souris, et encore le deuxième jour. Une chirurgie de transplantation réussie sera confirmée if aucun dysfonctionnement des membres postérieurs est observée chez les souris receveuses de la deuxième journée. </li><li> Administrer les souris receveuses au kétoprofène dans l&#39;eau potable (5 mg / kg / j = 27 ug / ml dans l&#39;eau potable) pendant 48 heures. Si des souris receveuses souffrent de douleur non soulagée par les analgésiques postopératoires comme en témoigne la perte de mobilité, absence de toilettage, anormale bottes posture, etc, ils seront euthanasiés. Les animaux seront euthanasiés à la fin des points prédéfinis après 1-60 jours. </li></ol> Analyse Graft greffons artériels dans allogreffe ont été achetés à 4 semaines et greffes dans le modèle de greffe syngénique ont 6 semaines après l&#39;opération (5 semaines après l&#39;infection virale) et analysés par les techniques histologiques standard pour Elastica-van Gieson (EVG) coloration, hématoxyline et l&#39;éosine (HE) coloration et immunofluorescence. Les photos ont été prises à l&#39;aide d&#39;un système de microscope immunofluorescence (Zeiss). Le comptage des cellules des noyaux entouré par immunomarquage positif a effectuered à fort grossissement et une moyenne de 5 sections pour chaque greffon. Les mesures de surface greffés de la lumière (à l&#39;intérieur de l&#39;endothélium), intima (entre la limitante élastique endothélium et interne, IEL), les médias (entre l&#39;IEL et limitante élastique externe, anguille), épaisseur de paroi (entre la limitante élastique endothélium et externe) et tout navire (à l&#39;intérieur de l&#39;anguille) ont été calculés à partir de 5 sections de série, 150 um d&#39;intervalle pour chaque greffon, en utilisant l&#39;analyse d&#39;image assistée par ordinateur et NIH image 1.60 ( <a href="http://rsbweb.nih.gov/nih-image/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/nih-image</a> ). L&#39;analyse statistique Toutes les données sont exprimées en moyenne ± SEM. À deux queues, des tests t appariés et une analyse ANOVA à deux voies ont été effectuées en utilisant le logiciel Prism (GraphPad Software). Différences avec P &lt;0,05 ont été considérées pour indiquer la signification statistique.

<ol><li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men%3A+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transplant. 24, 2003-2014 (2005).</li>
<li>Koulack, J., McAlister, V. C., MacAulay, M. A., Bitter-Suermann, H., MacDonald, A. S., Lee, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+minor+histocompatibility+antigens+in+the+development+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Importance of minor histocompatibility antigens in the development of allograft arteriosclerosis.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 80, 273-277 (1996).</li>
<li>Libby, P., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection.</a> Immunity. 14, 387-397 (2001).</li>
<li>Lorber, M. I., Wilson, J. H., Robert, M. E., Schechner, J. S., Kirkiles, N., Qian, H. Y., Askenase, P. W., Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+allogeneic+vascular+rejection+after+arterial+transplantation+and+peripheral+lymphoid+reconstitution+in+severe+combined+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human allogeneic vascular rejection after arterial transplantation and peripheral lymphoid reconstitution in severe combined immunodeficient mice.</a> Transplantation. 67, 897-903 (1999).</li>
<li>Minami, E., Laflamme, M. A., Saffitz, J. E., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracardiac+progenitor+cells+repopulate+most+major+cell+types+in+the+transplanted+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Extracardiac progenitor cells repopulate most major cell types in the transplanted human heart.</a> Circulation. 112, 2951-2958 (2005).</li>
<li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allograft+arteriopathy%3A+pathogenesis+update%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Allograft arteriopathy: pathogenesis update.</a> Cardiovasc. Pathol. 13, 33-40 (2004).</li>
<li>Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+vascular+disease%3A+immune+response+meets+the+vessel+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pathol%22%5BJournal%5D)">Graft vascular disease: immune response meets the vessel wall.</a> Annu Rev Pathol. 4, 19-47 (2009).</li>
<li>Nagano, H., Libby, P., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Stinn, J. L., Becker, G., Tilney, N. L., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+arteriosclerosis+after+T-cell-mediated+injury+in+transplanted+mouse+hearts%3A+role+of+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Coronary arteriosclerosis after T-cell-mediated injury in transplanted mouse hearts: role of interferon-gamma.</a> Am. J. Pathol. 152, 1187-1197 (1998).</li>
<li>Nagano, H., Mitchell, R. N., Taylor, M. K., Hasegawa, S., Tilney, N. L., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+deficiency+prevents+coronary+arteriosclerosis+but+not+myocardial+rejection+in+transplanted+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma deficiency prevents coronary arteriosclerosis but not myocardial rejection in transplanted mouse hearts.</a> J. Clin. Invest. 100, 550-557 (1997).</li>
<li>Raisanen-Sokolowski, A., Glysing-Jensen, T., Koglin, J., Russell, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+transplant+arteriosclerosis+in+murine+cardiac+allografts+placed+in+interferon-gamma+knockout+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reduced transplant arteriosclerosis in murine cardiac allografts placed in interferon-gamma knockout recipients.</a> Am. J. Pathol. 152, 359-365 (1998).</li>
<li>Salomon, R. N., Hughes, C. C. W., Schoen, F. J., Payne, D. D., Pober, J. S., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Coronary+Transplantation-Associated+Arteriosclerosis+-+Evidence+for+a+Chronic+Immune+Reaction+to+Activated+Graft+Endothelial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human Coronary Transplantation-Associated Arteriosclerosis - Evidence for a Chronic Immune Reaction to Activated Graft Endothelial Cells.</a> Am. J. Pathol. 138, 791-798 (1991).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., Ellis, P. S., Chandler, P. R., Simpson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+some+females+reject+males%3F+The+molecular+basis+for+male-specific+graft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Why do some females reject males? The molecular basis for male-specific graft rejection.</a> J. Mol. Med. 75, 103-114 (1997).</li>
<li>Shimizu, K., Sugiyama, S., Aikawa, M., Fukumoto, Y., Rabkin, E., Libby, P., Mitchell, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+bone-marrow+cells+are+a+source+of+donor+intimal+smooth-+muscle-like+cells+in+murine+aortic+transplant+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Host bone-marrow cells are a source of donor intimal smooth- muscle-like cells in murine aortic transplant arteriopathy.</a> Nat. Med. 7, 738-741 (2001).</li>
<li>Tellides, G., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+axis+in+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma axis in graft arteriosclerosis.</a> Circ. Res. 100, 622-632 (2007).</li>
<li>Tellides, G., Tereb, D. A., Kirkiles-Smith, N. C., Kim, R. W., Wilson, J. H., Schechner, J. S., Lorber, M. I., Pober, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+elicits+arteriosclerosis+in+the+absence+of+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes.</a> Nature. 403, 207-211 (2000).</li>
<li>Vassalli, G., Gallino, A., Weis, M., von Scheidt, W., Kappenberger, L., von Segesser, L. K., Goy, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alloimmunity+and+nonimmunologic+risk+factors+in+cardiac+allograft+vasculopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Alloimmunity and nonimmunologic risk factors in cardiac allograft vasculopathy.</a> Eur. Heart J. 24, 1180-1188 (2003).</li>
<li>Wang, Y., Bai, Y., Qin, L., Zhang, P., Yi, T., Teesdale, S. A., Zhao, L., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+induces+human+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion+by+phosphatidylinositol+3-kinase+dependent+mammalian+target+of+rapamycin+raptor+complex+1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma induces human vascular smooth muscle cell proliferation and intimal expansion by phosphatidylinositol 3-kinase dependent mammalian target of rapamycin raptor complex 1 activation.</a> Circ. Res. 101, 560-569 (2007).</li>
<li>Wang, Y., Burns, W. R., Tang, P. C., Yi, T., Schechner, J. S., Zerwes, H. G., Sessa, W. C., Lorber, M. I., Pober, J. S., Tellides, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+plays+a+nonredundant+role+in+mediating+T+cell-dependent+outward+vascular+remodeling+of+allogeneic+human+coronary+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb+J%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma plays a nonredundant role in mediating T cell-dependent outward vascular remodeling of allogeneic human coronary arteries.</a> Faseb J. 18, 606-608 (2004).</li>
<li>Yacoub-Youssef, H., Marcheix, B., Calise, D., Thiers, J. C., Benoist, H., Blaes, N., Segui, B., Dambrin, C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+vascular+rejection%3A+histologic+comparison+between+two+murine+experimental+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant.+Proc%22%5BJournal%5D)">Chronic vascular rejection: histologic comparison between two murine experimental models.</a> Transplant. Proc. 37, 2886-2887 (2005).</li>
<li>Yokota, T., Shimokado, K., Kosaka, C., Sasaguri, T., Masuda, J., Ogata, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitogenic+activity+of+interferon+gamma+on+growth-arrested+human+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">Mitogenic activity of interferon gamma on growth-arrested human vascular smooth muscle cells.</a> Arterioscler. Thromb. 12, 1393-1401 (1992).</li>
<li>Yu, L., Qin, L., Zhang, H., He, Y., Chen, H., Pober, J., Tellides, G., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AIP1+prevents+graft+arteriosclerosis+by+inhibiting+IFN-%CE%B3-dependent+smooth+muscle+cell+proliferation+and+intimal+expansion%5BTitle%5D)+AND+%22Cir.+Res%22%5BJournal%5D)">AIP1 prevents graft arteriosclerosis by inhibiting IFN-γ-dependent smooth muscle cell proliferation and intimal expansion.</a> Cir. Res. 109, 418-427 (2011).</li>
</ol>

Nous n&#39;avons rien à révéler.

Les protocoles décrits sont axés sur les modèles GA souris. Les procédures peuvent être appliquées à d&#39;autres modèles de transplantation de greffons. Ces modèles comprennent xénogreffe humanisée (c. segments d&#39;artère coronaire de l&#39;homme interposés dans le aortes infra-rénale de souris immunodéficientes), et le rejet aigu souris modèle GA (soit une aorte de souris d&#39;une souche génétique dans un autre destinataire de souche génétique). Nos modèles de souris décrites ne sont plus à fermer...

Arteriosclerois greffés (GA), également appelés vasculopathie d&#39;allogreffe, est une lésion pathologique qui se développe au fil des mois ou des années dans les organes transplantés caractérisées par diffus, une sténose circonférentielle de l&#39;ensemble de l&#39;arborescence vasculaire du greffon 7. Les stades précoces peuvent provoquer des sténoses excentriques et focal qui sont plus évidentes dans les artères, ce qui ressemble davantage sténoses observées dans l&#39;athérosclérose conventionnel. La perte de la lumière des vaisseaux greffés résulte de l&#39;expansion intimale due à l&#39;infiltration de cellules et les macrophages T hôte et en particulier à l&#39;accumulation de matrice extracellulaire et le muscle lisse en forme de cellules provient de greffon, l&#39;hôte ou les deux 5, 13, 19, qui est insuffisamment compensée par le remodelage vasculaire vers l&#39;extérieur. En allogreffes cardiaques, les lésions les plus cliniquement significatifs sont ceux dans les artères coronaires épicardiques et intramyocardique. En fin de compte, GA des artères coronaires provoquer une insuffisance cardiaque ischémique. GA est la principale cause de gr cardiaque tardperte arrière. Les sténoses de GA s&#39;arrêtent pas aux lignes de suture, impliquant fortement la réponse de l&#39;hôte à alloantigènes greffés dans sa pathogénie et qui nous conduit à classer GA comme une forme de rejet chronique 3. Cependant, d&#39;autres formes de lésions artérielles peuvent augmenter le risque de GA, soit par l&#39;augmentation de la charge nette de blessure ou en intensifiant et / ou la modulation de la réponse allo-immune. La cellule (CE) paroi endothéliale des artères greffe est conservé dans GA humaine et les régions les plus superficielles de l&#39;intima à côté de la doublure CE est le site le plus fortement infiltré par dérivée de l&#39;hôte IFN-γ-production des cellules T et les macrophages 11; dans certains patients GA est associé avec le développement de allo-anticorps donneur-spécifiques qui se lient au greffe CE 16, mais les vaisseaux montrent peu de signes de la nécrose fibrinoid qui est caractéristique de rejet humoral aigu 11. L&#39;élément le plus critique de GA pathogénie est l&#39;la prolifération des cellules musculaires lisses, comme au sein de l&#39;intima, si ce processus peut être arrêté, GA est peu probable pour progresser. Les travaux antérieurs de notre groupe avait montré que intimas des segments des artères coronaires humaines interposés dans la aorte sous-rénale de souris immunodéficientes développer en réponse à lymphocytes T humains par transfert adoptif allogéniques pour le donateur de l&#39;artère et que ce processus pouvait être inhibée par la neutralisation humain IFN- γ 18. En outre IFN-γ exogène humaine pourrait causer intimale (et médiane) des cellules musculaires lisses (CMLV) prolifération vasculaire dans ces greffons artériels en l&#39;absence de lymphocytes T humains 15, 17. (Il est important de noter que l&#39;homme et la souris IFN-γ ne traversent pas les espèces, en excluant les effets indirects sur l&#39;hôte de la souris dans ce système expérimental.) Ces modèles humanisés de souris ont l&#39;avantage de récapituler les cellules T humaines / interactions cellulaires vasculaires et l&#39;intima lésions sont largement composées de cellules humaines (c.-à-greffe dérivé),comme cela a été observé dans des échantillons cliniques, mais ils ne récapituler pas entièrement la situation clinique parce qu&#39;ils ignorent le rôle des macrophages de l&#39;hôte et éventuellement d&#39;autres types cellulaires impliqués dans les lésions de transplantation clinique. Un modèle classique de la souris de ce processus pourrait théoriquement remédier à ce problème, en complément des limites du modèle humanisé en impliquant le système immunitaire de l&#39;hôte complet et offrant l&#39;avantage supplémentaire de permettre l&#39;alimentation des approches génétiques de souris à appliquer à l&#39;AG. Les deux modèles de souris plus largement utilisés impliquent la transplantation cardiaque hétérotopique et l&#39;artère orthotopique transplantation 1. Les lésions qui se développent dans les artères de greffes cardiaques hétérotopiques sont en grande partie constitués de cellules de l&#39;hôte, probablement d&#39;origine de la moelle osseuse, tandis que les cellules intima des artères dans les greffes cardiaques humaines sont en majorité d&#39;origine du greffon 5, 13, 19. Il s&#39;agit d&#39;une distinction importante qui a conduit à développer des modèles alternatifs de souris. Interposition d&#39;une aorte de souris d&#39;une souche à un autre destinataire de la souche de souris est encore plus limitée de modèle pour le rejet chronique chez l&#39;homme parce que la réponse à médiation cellulaire de rejet aigu dans ce modèle de souris élimine complètement toutes les cellules vasculaires dérivées du donneur de la greffe à l&#39;intérieur de deux, trois, 19 semaines. Par conséquent, les modifications ultérieures vu dans le segment de vaisseau interposé sont uniquement une réponse des cellules hôtes qui ont repeuplées le décellularisé navire échafaudage, créant une situation très artefact d&#39;une pertinence limitée comme un modèle pour les changements dans les vaisseaux greffés qui se produisent dans la clinique. Nous avons récemment développé deux nouveaux modèles de souris pour contourner ces problèmes 21. Le premier modèle comporte l&#39;interposition d&#39;un segment de vaisseau à partir d&#39;une souris mâle dans une femelle receveuse de la même souche pure (C57BL/6J). Le deuxième modèle consiste à interposer un segment d&#39;artère d&#39;un type C57BL/6J donneur de souris sauvage dans une souris hôte de la même souche et le sexe qui n&#39;a pas la receptor IFN-γ pour (IFN-yR-KO), suivie par l&#39;administration d&#39;IFN-γ souris (envoyé par infection du foie de souris avec un vecteur adénoviral. Ici, nous décrivons les protocoles détaillés et les avantages de nos modèles GA de souris.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J (H-2b)</td><td>Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)</td><td>000664</td><td>Donneur(5 semaines) Receveur (8-12 semaines)</td></tr><tr><td>Chlorhydrate de kétamine </td><td>injectable Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td>Solution de stockage (50 mg/ml) Solution de travail (5 mg/ml)</td></tr><tr><td> Solution stérile de xylazine</td><td>Lloyd Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td>Solution de stockage (100 mg/ml) Solution de travail (1 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ketoprofène</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>NDC 0856-4396-01</td><td>Solution de stockage (100 mg/ml) Solution de travail orale (0,027 mg/ml)</td></tr><tr><td>Héparine sagent</td><td>savant pharmaceutique</td><td>NDC 25021-400</td><td>Solution de stockage (1000 U/ml) Solution de travail (100 U/ml)</td></tr><tr><td>Solution saline (stérile 0,9 % Chlorure de sodium)</td><td>CareFusion</td><td>AL4109</td><td></td></tr><tr><td>0,9 % Chlorure de sodium injectable</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td>Pour préparer l’anesthésique </td></tr><tr><td>Vaseline Pommade ophtalmique </td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Iode Prep Pads </td><td>Triad Disposables, Inc.</td><td>NDC 50730-3201-1</td><td></td></tr><tr><td>Tampons de préparation à l’alcool</td><td>McKesson Corp.</td><td>NDC 68599-5805-1</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Leica</td><td>MZ95</td><td></td></tr><tr><td>Micro Ciseaux</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5693</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort</td><td>F.S.T</td><td>15009-08</td><td>Pour transecter l’aorte du donneur ou du receveur </td></tr><tr><td>Ciseaux extra étroits</td><td>F.S.T</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Porte-aiguille/Pince</td><td>MICRINS</td><td>MI1542</td><td>Pour tenir l’aiguille</td></tr><tr><td>Pince</td><td>fine F.S.T</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>F.S.T</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Pince à motif standard</td><td>F.S.T</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>F.S.T</td><td>13011-12</td><td></td></tr><tr><td>LANCASTER Eye Speculum</td><td>Zepf Medical Instruments</td><td>42-1209-07</td><td></td></tr><tr><td>Micro Vascular Clip</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-6472</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip Pince d’application avec serrure</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>Suture monofilament en polyamide noir</td><td>AROSurgical Instruments Corporation</td><td>Suture #T4A10Q07</td><td>10-0, aiguille=70 microns</td></tr><tr><td>Suture en nylon monofilament noir</td><td> (Covidien)</td><td>SN-1956</td><td>Suture 6-0</td></tr><tr><td>Non-tissé Songes</td><td>McKesson Corp.</td><td>Réapprovisionnement N° 94442000</td><td></td></tr><tr><td>Seringue 1 ml</td><td>BD</td><td>REF 309659</td><td></td></tr><tr><td>Seringue</td><td>3 ml BD</td><td>REF 309657</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Seringue</td><td>BD</td><td>REF 309604</td><td></td></tr><tr><td>18G 1 1/2, Aiguille hypodermique</td><td>BD</td><td>REF 305196</td><td></td></tr><tr><td>25G 7/8, Aiguille hypodermique</td><td>BD</td><td>REF 305124</td><td></td></tr><tr><td>27G 1/2, Aiguille hypodermique</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td></td></tr><tr><td>30G 1/2, Aiguille Hypodermique</td><td>BD</td><td>REF 305106</td><td></td></tr><tr><td>Coussin de Cœur</td><td>Sunbeam</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>Tondeuse</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Table 2. Réactifs et équipements spécifiques.</td></tr></tbody></table>

les modèles de souris pour l&#39;artériosclérose graft

Mouse Models for Graft Arteriosclerosis

Arteriosclerois greffés (GA), également appelés vasculopathie d&#39;allogreffe, est une lésion pathologique qui se développe au fil des mois ou des années dans les organes transplantés caractérisées par diffus, une sténose circonférentielle de l&#39;ensemble de l&#39;arborescence vasculaire du greffon. L&#39;élément le plus critique de GA pathogénie est la prolifération des cellules musculaires lisses, comme au sein de l&#39;intima. Quand un segment d&#39;artère coronaire humaine est intercalé dans la aorte sous-rénale de souris immunodéficientes, les intimas pourraient être développer en réponse à lymphocytes T humains par transfert adoptif allogénique pour le donateur de l&#39;artère ou exogène humain IFN-γ en l&#39;absence de cellules T humaines. Interposition d&#39;une aorte de souris d&#39;une souche dans un autre destinataire de la souche de souris est limitée comme un modèle pour le rejet chronique chez l&#39;homme, car la réponse de rejet à médiation cellulaire aigu dans ce modèle de souris élimine complètement toutes les cellules vasculaires dérivées du donneur de la greffe dans les deux-trois semaines. Nous avons récemment développé deux nouveaux mOuse modèles de contourner ces problèmes. Le premier modèle comporte l&#39;interposition d&#39;un segment de vaisseau à partir d&#39;une souris mâle dans une femelle receveuse de la même souche pure (C57BL/6J). Le rejet de greffe dans cette affaire est dirigée uniquement contre les antigènes mineurs d&#39;histocompatibilité codées par le chromosome Y (présent chez l&#39;homme, mais pas la femelle) et la réponse de rejet qui s&#39;ensuit est assez indolent de préserver les cellules musculaires lisses dérivées du donneur pendant plusieurs semaines. Le deuxième modèle comprend l&#39;interposition d&#39;un segment d&#39;artère d&#39;un type C57BL/6J donneur de souris sauvage dans une souris hôte de la même souche et le sexe qui n&#39;a pas le récepteur de l&#39;IFN-γ, suivi par l&#39;administration de souris IFN-γ (envoyé par l&#39;infection de la souris foie avec un vecteur adénoviral. Il n&#39;ya pas de rejet dans ce cas comme donneur et souris receveuses sont de la même souche et le sexe, mais les cellules musculaires lisses des donateurs prolifèrent en réponse à la cytokine tandis que les cellules dérivées de l&#39;hôte, manquant de récepteurs pourcette cytokine, sont insensibles. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, les deux modèles peuvent être utilisés pour évaluer l&#39;effet de gènes spécifiques sur la progression GA. Ici, nous décrivons des protocoles détaillés pour nos modèles GA de souris.

Modèle souris allogreffe artériosclérose (GA): Dans ce modèle, une aorte du donneur masculin est transplanté dans récipiendaire féminine afin que l&#39;hôte induit réponses T allo-immunes à médiation cellulaire alloréactives contre un antigène mineur de Y (l&#39;antigène d&#39;histocompatibilité mineure HY spécifiques au mâle) exprimé sur le greffon 12, et à son tour des cellules T IFN-γ produite lecteurs VSMC prolifération 20 comme on l&#39;observe dans d&#39;autres modèles de tra...

Nous décrivons les protocoles de nos arteriosclerois de greffe de souris (GA) des modèles qui impliquent interposition d&#39;un segment de vaisseau de la souris sur un receveur de la même souche consanguine. Par rétrocroisant changements génétiques dans le donneur de navire, le modèle permet d&#39;évaluer l&#39;effet de gènes spécifiques sur GA.

Les modèles de souris pour l&#39;artériosclérose Graft

Graft arteriosclerois (GA),  also called allograft vasculopathy, is a pathologic lesion that develops over  months to years in transplanted organs ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de transplanter un vaisseau donneur dans l'aorte abdominale d'un receveur. La première étape consiste à disséquer l'aorte thoracique de la souris donneuse. Ensuite, des sites d'anastomose sont créés dans l'aorte abdominale de la souris receveuse.Le vaisseau donneur est ensuite implanté dans l'aorte abdominale du receveur. En fin de compte, une transplantation réussie peut être évaluée par la fonction motrice intacte des membres postérieurs de la souris receveuse. Ce modèle va donc nous aider à comprendre la pathogenèse de la sclérose artérielle du greffon.Et c'est techniquement difficile, ce qui nécessite beaucoup de pratique et que le patient soit parfait. Ainsi, la démonstration de la procédure sera effectuée par le Dr Chen, assisté par Louanne. Commencez par confirmer la profondeur adéquate de l'anesthésie chez la souris donneur.Une fois anesthésié, placer la souris en position dorsale sur un plateau sous un microscope opératoire. Nettoyer la poitrine par des nettoyages répétés avec de l'iode et de l'alcool, puis exposer le cœur, le rincer avec du sérum physiologique, et retirer le cœur et les poumons afin de mettre entièrement à n

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

Nous décrivons une technique dans laquelle une section de l'aorte abdominale d'une souris est transplanté orthotopique juste au-dessous des artères rénales dans un receveur allogène ou syngéniques. Cette technique peut être utile dans les études où la transplantation de grandes artères de taille uniforme est jugée avantageuse.

Transplantation orthotopique aortique chez la souris pour l&#39;étude des maladies vasculaires

Nous démontrons un modèle de ligature artérielle roman dans le muscle spinotrapezius murin, y compris une procédure étape par étape et une description de l'instrumentation nécessaire. Nous décrivons la chirurgie et la mesure des résultats pertinents relatifs au remodelage du réseau vasculaire et une vasodilatation fonctionnelle en utilisant la microscopie confocale et intravitale.

Modèle murin Spinotrapezius pour évaluer l&#39;impact de la ligature artériolaire sur la fonction microvasculaire et Rénovation

L’analyse ex vivo des lésions artérielles à partir de modèles animaux de maladies cardiovasculaires repose classiquement sur des techniques histologiques et immunohistochimiques. Ceux-ci fournissent des mesures en 2 dimensions dans les lésions en 3 dimensions. Ce manuscrit décrit la génération de lésions artérielles pour une analyse quantitative en 3 dimensions à l’aide de la tomographie par projection optique.

Génération et quantification 3-Dimensional des lésions artérielles chez la souris utilisant la tomographie optique de projection

Les modèles animaux se sont révélés être des outils précieux dans la définition de mécanismes spécifiques hôtes et pathogènes qui contribuent au développement de l'inflammation chronique. Nous décrivons ici un modèle murin d'infection par voie orale avec l'agent pathogène humain Porphyromonas gingivalis et méthodologies de détail pour évaluer la progression de l'inflammation au niveau des sites locaux et systémiques.

Un modèle de souris pour l&#39;inflammation chronique induite par pathogène sur les sites locaux et systémiques

Nous décrivons un protocole pour la greffe d’interposition aortique chez la souris. L’objectif du protocole est de fournir un modèle permettant d’étudier les processus pathologiques et les stratégies thérapeutiques pertinents aux réactions allo-immunes dans les artères et aux modifications artérielles qui en résultent et qui contribuent à l’échec de la transplantation d’organe.

Modèle murin de rejet vasculaire allo-induite et Transplant artériosclérose

Nous présentons un modèle d’aortique transplantation orthotopique utilisant la technique de la manche chez les souris. C’est une méthode très rapide d’anastomose, qui peut être utilisée dans les études des maladies vasculaires.

Utilisant la Technique de la manche dans un modèle murin de la greffe aortique - une vidéo d’instruction

Les modèles murines de l'athérosclérose sont des outils utiles pour étudier les voies pathogènes au niveau moléculaire, mais exigent une quantification normalisée du développement des lésions. Ce protocole décrit une méthode optimisée pour déterminer la taille de lésion dans les vaisseaux artériels principaux comprenant la racine aortique, l'arc aortique, et l'artère brachiocéphalique.

Quantification de l'athérosclérose chez les souris

Cet article démontre une approche chirurgicale efficace pour établir une ischémie aiguë chez la souris avec une petite incision. Cette approche peut être appliquée par la plupart des groupes de recherche sans aucune mise à niveau du laboratoire.

Un modèle chirurgical modifié de l’ischémie du membre postérieur chez des souris ApoE-/- utilisant une incision miniature

Nous démontrons l’induction chimique de la dilatation des gros vaisseaux sanguins chez la souris comme modèle pour l’étude de la dysfonction cérébrovasculaire, qui peut être utilisé pour la modélisation de la démence vasculaire et de la maladie d’Alzheimer. Nous démontrons également la visualisation du système vasculaire en injectant un composé de caoutchouc de silicone et en fournissant un guidage visuel clair pour mesurer les changements dans la taille des vaisseaux sanguins.

Une approche visuelle pour induire la dolichoectasie chez la souris afin de modéliser le dysfonctionnement cérébrovasculaire médié par les grands vaisseaux

La méthode de l’aiguille de la sténose asymétrique bilatérale de l’artère carotide commune est proposée pour créer un modèle murin de déficience cognitive vasculaire et de démence. Elle donne des résultats à plus long terme par rapport aux modèles précédemment établis et est compatible avec l’IRM en direct. La représentation visuelle démontrant la procédure fournit des conseils pour maîtriser la chirurgie.

Un modèle murin de déficience cognitive vasculaire et de démence basé sur la sténose bilatérale asymétrique de l’artère carotide commune guidée par aiguille

Ici, un protocole est présenté pour l’implantation d’un greffon vasculaire issu de l’ingénierie tissulaire dans l’artère carotide de souris à l’aide de la technique du ballonnet, fournissant un modèle animal approprié pour l’étude des mécanismes de régénération du tissu vasculaire.

Implantation d’une greffe vasculaire issue de l’ingénierie tissulaire dans l’artère carotide de souris via la technique du brassard

Apprenez la transplantation d'aorte thoracique chez la souris pour étudier l'artériosclérose de greffe vasculaire. Ce modèle permet d'évaluer l'impact génétique sur la pathogenèse et d'améliorer la survie des greffons.

Les modèles de souris pour l'artériosclérose Graft

Explorer plus de vidéos