Name: Évaluation de la vidange gastrique chez des souris diabétiques non obèses aide dun 13 C -octanoïque test respiratoire à lacide (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Apprenez à mesurer la vidange gastrique chez des souris diabétiques non obèses à l'aide d'un test respiratoire à l'acide octanoïque marqué au carbone 13. Cette méthode non invasive permet des mesures répétées pour étudier la gastroparésie.

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Cette publication vidéo a été rendue possible grâce au financement de l&#39;Institut national du diabète et des maladies digestives et rénales (NIDDK) pour le projet de Programme de subventions &quot;pathobiologie du système entérique» DK 68055. Christopher T. Creedon a été soutenue par le public Rochester Ecoles Programme de mentorat. Nous remercions M. Gary Stoltz pour l&#39;assistance technique, Mme Kristy Zodrow pour l&#39;assistance secrétariat et le Dr Douglas Baer de Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).

1. La formation et l&#39;habituation des souris <ol><li> Avant l&#39;analyse, mettre toutes les souris dans les enceintes d&#39;essai pour 2-4 heures avec débit d&#39;air constant afin de les habituer aux conditions d&#39;essai. Cela réduit considérablement le niveau de stress qui pourraient causer de détection aberrante de la vidange gastrique. Traiter les souris de la même manière que si l&#39;expérience de la vidange gastrique était en marche. Préparer le jaune d&#39;œuf (voir plus loin) sans ajouter de l&#39;acide octanoïque et nourrir 0,2 g à chaque souris. </li><li> Répétez ce processus jusqu&#39;à ce que les souris sont suffisamment formés (en général 2-3 fois). Les souris sont généralement s&#39;habituent facilement aussi longtemps que les conditions environnementales sont restés les mêmes. </li></ol> Remarque: non habitués souris continuent à se déplacer pendant environ 1 heure après le transfert à la chambre, et de déféquer et d&#39;uriner fréquemment, tandis que les souris habitués rapidement s&#39;installer dans leur nouvel environnement et se reposer tranquillement. Aucunte: Pendant l&#39;expérience: animaux Surveiller les signes de perte d&#39;accoutumance comme une miction excessive, la défécation, le manque d&#39;intérêt à manger l&#39;œuf. Si c&#39;est le cas, pensez à réutiliser habituer dans une chambre vide 1-2 fois avant d&#39;obtenir des données gastriques vidange. La cohérence est très importante lors de cette expérience. Faire les choses exactement de la même façon à chaque fois que c&#39;est la seule façon d&#39;obtenir des résultats fiables et reproductibles. Cela inclut accorder un traitement (par exemple l&#39;insuline) tous les jours dans le même temps, ne pas séparer les souris de leurs compagnons de cage sauf si c&#39;est absolument nécessaire, le jeûne, les souris et de lancer le test de la vidange gastrique, en même temps, et la manipulation des souris de la même manière. 2. Préparation du repas test contenant des isotopes <ol><li> Commencez par peser 5 g de jaune d&#39;oeuf dans un tube Falcon de 50 ml. Répétez ces étapes chaque jour expérimental pour préparer un repas d&#39;épreuve frais. </li><li> Ajouter 10 ul d&#39;acide octanoïque avec un concentrtion de 2 pl / g dans le tube Falcon de 50 ml contenant de l&#39;œuf et mélanger vigoureusement pendant 1 min avec une spatule dans le tube falcon. </li><li> L&#39;œuf est ensuite transféré dans un bécher en verre et chauffé au-dessus d&#39;un bec Bunsen jusqu&#39;à ce qu&#39;il se coagule et sa consistance est apte à faire des petites boules. Cela prend habituellement environ 30 secondes. </li></ol> Remarque: Les boules de jaune d&#39;œuf doit peser 0,2 g par souris. Il est important de garder la dose cumulée constante chez toutes les souris. 3. Démarrage de l&#39;expérience <ol><li> Une fois formés et prêts pour la vidange gastrique, rapide chez les souris pendant la nuit (12 h) sur un métal &quot;mesh-bas&quot; rack jeûne pour empêcher la coprophagie. Assurez-vous qu&#39;ils aient libre accès à l&#39;eau potable. Depuis souris diabétiques sont utilisés dans l&#39;expérience actuelle, ils ne devraient pas être à jeun depuis plus de 16 heures. </li><li> Commencez par la mise en place des chambres de vidange gastrique. Utilisez chambres propres et des couvertures qui ont été séchés à l&#39;air. En outre, toutetubes reliant les chambres à l&#39;analyseur ou le CO 2 de l&#39;air d&#39;alimentation doit être exempt d&#39;humidité, l&#39;eau peut interférer avec le signal lu par l&#39;analyseur </li><li> Relier les chambres de tubes d&#39;entrée qui fournissent un flux d&#39;air constant. Puis connecter les tubes de sortie des chambres de la machine. Fermer les tubes et allumez le flux d&#39;air. </li></ol> Remarque: Appliquer une très petite quantité de vaseline à la fin des couvercles de couverture afin qu&#39;ils ferment facilement et sont bien scellés. Cette étanchéité est nécessaire de collecter tout le dioxyde de carbone produit par les souris. 4. Procédures expérimentales <ol><li> Commencez par peser chaque souris. Le poids corporel est une mesure de leur bonne santé continue. Ensuite, placez chaque souris dans la chambre appropriée. Il est bien sûr important d&#39;avoir l&#39;air circulant dans les chambres à l&#39;heure actuelle. </li><li> Pour démarrer la mesure, permettre aux souris de s&#39;acclimater à la chambre avant de réglertion des niveaux d&#39;air. </li><li> Une fois que les souris semblent calmes, ce qui peut prendre quelques minutes, régler le débit d&#39;air pour chaque chambre de la souris. Cela peut être différent pour chaque souris. Typiquement, le débit d&#39;air est ajusté au début de l&#39;expérience afin de s&#39;assurer que CO 2 expiré atteint des niveaux détectables par tout l&#39;équipement est utilisé, et de faire en sorte que le niveau reste assez faible pour assurer une rotation de l&#39;air en bonne santé. Nous utilisons premiers niveaux de CO 2 entre 1000 et 1500 parties par million. </li><li> Si des difficultés avec les ajustements, vérifier les fuites d&#39;air. Ensuite, répétez le processus pour chacune des chambres et regarder une autre série de mesures pour voir si les ajustements apportés au flux d&#39;air ont corrigé le niveau de CO 2. Il est important d&#39;obtenir une ligne de base stable à lire avant de nourrir les souris. Nous utilisons une machine avec une fonction de calibrage automatique. Si ce n&#39;est pas le cas, l&#39;étalonnage doit être vérifié. </li><li> Lorsque ceci est réalisé, administrer le repas oeufà la première de la souris et enregistrer le temps de chaque souris reçoit la nourriture. </li><li> Nous exécuter la procédure pendant 4 heures pour obtenir des valeurs suffisamment pour ajuster la courbe 13 CO 2 pour chaque enrichissement de la souris. Arrivée sur les souris toutes les 30-60 min pour s&#39;assurer que les niveaux de CO 2 sont encore sécuritaires pour les souris. </li><li> Préparer de nouvelles boîtes contenant de la nourriture avant la fin de l&#39;essai, les souris peuvent commencer à manger immédiatement après l&#39;essai est terminé. </li></ol>

<ol><li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li>
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</ol>

Les auteurs déclarent n&#39;avoir aucun conflit d&#39;intérêts financiers.

La technique décrite ici permet d&#39;répétées et non invasive la mesure in vivo de la vidange gastrique solide chez la souris. Ce système présente l&#39;avantage que les animaux ne sont pas retenus dans la chambre de mesure, ce qui leur permet de se déplacer et de tourner librement. Comme il s&#39;agit d&#39;un environnement peu familier, les souris ont encore besoin d&#39;être formés et habitués aux chambres d&#39;essais pour prévenir les effets du stress sur la vidange gastrique. En général, nous su...

Ce manuscrit décrit les considérations techniques et méthodologiques liées à la mesure non invasive de la vidange gastrique chez la souris. En suivant le protocole décrit ici, les enquêteurs de façon fiable et reproductible suivre l&#39;évolution de la vidange gastrique due au développement de la maladie, d&#39;étudier l&#39;impact des agents pharmacologiques sur la vidange gastrique et le suivi de la réponse de la vidange gastrique pour le traitement de maladies sous-jacentes ou les défauts 6,8, 11,12. Dans les publications antérieures, l&#39;application de 13 C tests d&#39;haleine acide octanoïque a été montré pour être un moyen utile de mesurer la vidange gastrique chez les humains et les animaux 3,8. Ce document décrit en détail les procédures nécessaires pour obtenir des données fiables sur la 8 6 à mois nécessaires pour une étude longitudinale de la vidange gastrique chez des souris atteintes de diabète. Les avantages de suivre ce protocole par rapport aux méthodes déjà publiées sont que l&#39;enquêteur ne peut être assuré le obtaine donnéesd sera fiable et reproductible. En outre, le système automatisé de collecte et d&#39;analyse des échantillons de gaz décrit ici augmente le nombre d&#39;animaux qui peuvent être suivis simultanément dans une étude. Dans l&#39;ensemble, l&#39;objectif de cet article est d&#39;identifier les facteurs clés qui maintiennent l&#39;habituation des souris à l&#39;épreuve et que réduire la variabilité des résultats obtenus. Pour la mesure in vivo de la vidange gastrique, les souris sont mises à jeun pendant la nuit et placés dans les chambres d&#39;essai en plastique transparent avec débit d&#39;air constant. Après les souris se habitué aux tubes, base 13 CO exhalé 2 niveaux sont déterminés et le débit ajusté en conséquence. Ensuite, on administre un repas d&#39;épreuve composé de jaune d&#39;oeuf mélangé à 13 C marqué par l&#39;acide octanoïque. Parce que les souris sont mises à jeun et formés, ils mangent généralement le repas test à moins de 2 min. L&#39;administration d&#39;acide octanoïque n&#39;est pas absorbé dans l&#39;estomac, mais sera repris dans le duodénum und obtiendrez métabolisé dans le foie en 13 CO 2, qui est libéré et expiré, résultant en un enrichissement de 13 CO 2 dans l&#39;air ambiant. Des échantillons d&#39;air sont prélevés à des intervalles de temps déterminés et analysés par l&#39;analyseur isotopique du carbone. L&#39;étape limitante dans tout ce processus est la vidange gastrique et l&#39;excrétion pulmonaire de 13 CO 2 correspond directement avec la vidange gastrique du repas étiquetés. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Figure 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Figure 1. Schéma du dispositif de vidage gastrique. Après une nuit de jeûne, les souris sont placées dans des chambres transparentes leur permettant de se déplacer et de tourner librement. Un tube d&#39;entrée d&#39;air permet afflux fraîche et constante et une sortie mène à l&#39;analyseur isotopique pour mesurer la 13 C-à-12Rapport C dans l&#39;air expiré. La chambre dispose également d&#39;un orifice central pour la livraison de denrées alimentaires contenant [13 C]-octanoïque.

<table border="1"><tbody><tr><td> NOM </td><td> ENTREPRISE </td><td> NOMBRE CAT </td><td> COMMENTAIRES </td></tr><tr><td> Une source d&#39;amenée d&#39;air constant, le débit et la composition </td><td> alimentation en air centrale dans le centre de recherche </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 ml chambre d&#39;échantillonnage qui a l&#39;air d&#39;admission, de sortie d&#39;air, et l&#39;ouverture administration des produits alimentaires Tubes en plastique pour alimentation en air </td><td> In-house construit </td><td></td><td></td></tr><tr><td> L&#39;acide octanoïque </td><td> Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Pour préparer le repas d&#39;œufs: <ul><li> petit bécher </li><li> Tube de 50 ml en plastique </li><li> Bec Bunsen </li><li> œuf </li><li> spatule </li></ul></td><td> Tout fournisseur </td><td></td><td> Tâcher deêtre cohérent avec le fournisseur oeuf puisque le contenu nutritionnel et la palatabilité des œufs peuvent affecter la vidange gastrique et l&#39;ingestion du repas </td></tr><tr><td> Le dioxyde de carbone isotope analyseur </td><td> Los Gatos Research Inc (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Évaluation de la vidange gastrique chez des souris diabétiques non obèses aide d&#39;un [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-octanoïque test respiratoire à l&#39;acide

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Gastriques études vidange chez la souris ont été limités par l&#39;incapacité à suivre les changements de vidange gastrique chez le même animal, depuis les techniques les plus couramment utilisées nécessitent l&#39;abattage des animaux et la récupération post-mortem de l&#39;1,2 repas. Cette approche empêche études longitudinales afin de déterminer les modifications de la vidange gastrique avec l&#39;âge et la progression de la maladie. L&#39;couramment utilisés [13 C]-octanoïque test respiratoire à l&#39;acide pour l&#39;homme 3 a été modifié pour une utilisation chez les souris et les rats 06.04 7 et nous avons précédemment montré que ce test est fiable et sensible aux variations de la vidange gastrique en réponse à la drogue et au cours de progression de la maladie diabétique 8. Dans cette vidéo de présentation du principe et de la mise en œuvre pratique de ce test modifié est expliqué. Comme dans l&#39;étude précédente, les souris NOD LTJ sont utilisés, un modèle de diabète de type 1 9. Une partie de ces souris développent les symptômes de la gastroparésie, une complication de diabetes caractérisé par la vidange gastrique retardée, sans obstruction mécanique de l&#39;estomac 10. Cet article montre comment former les souris pour le test, la façon de préparer le repas test et obtenir 4 h gastriques données vidange et comment analyser les données obtenues. L&#39;analyseur d&#39;isotopes du carbone utilisé dans la présente étude est approprié pour le prélèvement automatique des échantillons d&#39;air à partir de 12 souris en même temps. Cette technique permet au suivi longitudinal de la vidange gastrique des grands groupes de souris atteintes de diabète ou d&#39;autres maladies de longue date.

A données représentatives établies à partir de trois différentes souris est illustré à la figure 2. Le graphique noir représente les points de données provenant d&#39;une souris avec la vidange gastrique normale. Elle montre la fraction de 13 C qui est récupérée dans l&#39;air expiré, exprimée en pourcentage de la dose administrée par heure, exprimée en fonction du temps. La courbe bleue est d&#39;une souris avec une accélération de la vidange gastrique avec une valeur moitié de T 40 min et l...

Détermination de la vidange gastrique avec un non-invasive [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoïque test respiratoire à l&#39;acide pour la gastroparésie suivi dans des souris femelles NOD LTJ.

Évaluation de la vidange gastrique chez des souris diabétiques non obèses aide d&#39;un [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanoïque test respiratoire à l&#39;acide

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

L'objectif général de cette procédure est d'établir une méthode pour la mesure in vivo de la vidange gastrique chez la souris à l'aide d'un test respiratoire à l'acide octanoïque marqué au 13 carbone. Les souris et d'autres petits animaux se sont bien sûr révélés très utiles pour nous aider à comprendre la physiopathologie des maladies ; notre laboratoire étudie la gastroparésie, et l'un des problèmes posés par la gastroparésie est que, pour étudier la maladie, nous devons suivre la vidange gastrique dans le temps. Cela a constitué un obstacle avec les techniques actuelles, car celles-ci exigent que l'on introduise une substance, sous forme liquide ou solide, dans l'estomac de la souris, puis que l'on sacrifie l'animal quelque temps plus tard afin d'estimer ce qui a quitté l'estomac.Ce que nous souhaitions faire était d'établir une technique non invasive pour mesurer la vidange gastrique, et ce que nous avons fait est d'adapter le test respiratoire connu aux acides aminés marqués au 13 carbone afin de pouvoir l'utiliser chez la souris. Cela nous permet d'effectuer des mesures répétées dans le temps, puis de corréler ce que nous observons avec l'histologie ainsi qu'avec la physiologie. Le matériel que nous utilisons ici nous permet d'automatiser la procédure, bien qu'elle puisse bien sûr également être réalisée manuellement.L'avantage de l'automatisation réside non seulement dans le fait que nous pouvons effectuer beaucoup plus de mesures de vidange gastrique au fil du temps, mais aussi que nous pouvons réellement les réaliser simultanément sur plusieurs souris. Nous allons présenter ici une méthode permettant de travailler jusqu'à 12 souris en même temps. L'animation suivante montre le montage de notre expérience de vidange gastrique pour la mesure in vivo de la vidange gastrique.Les souris sont placées dans des tubes en plastique transparents avec un flux d'air constant. Après que les souris se sont habituées aux tubes et après réglage du flux d'air, nous leur administrons un repas-test composé de jaune d'œuf mélangé à de l'acide octanoïque marqué au 13 carbone. Comme les souris sont attachées et entraînées, elles consomment généralement le repas-test.En moins de deux minutes, l'acide OCT NOIC administr&eacute; sera absorb&eacute; au niveau du duod&eacute;num et m&eacute;tabolis&eacute; par le foie, puis lib&eacute;r&eacute; et expir&eacute;, ce qui entra&icirc;ne un enrichissement en dioxyde de carbone 13C dans l'air ambiant, mesur&eacute; ensuite par notre analyseur d'isotopes. Examinons plus en d&eacute;tail ce qui se passe dans l'organisme de la souris. Apr&egrave;s ingestion du repas-test contenant l'acide OCT NOIC marqu&eacute; au 13C, le repas p&eacute;n&egrave;tre dans l'estomac.L'acide OCT NOIC reste intact dans l'estomac. Après son passage à travers le pylore, il est rapidement absorbé au niveau du duodénum. Le composé marqué atteint le foie par la veine porte et est métabolisé en dioxyde de carbone marqué au 13 carbone.Le dioxyde de carbone marqué est libéré dans le sang veineux et est expiré. L'étape limitante de vitesse dans l'ensemble de ce processus est la vidange gastrique. Cela signifie que l'excrétion pulmonaire du dioxyde de carbone 13 correspond directement à la vidange gastrique du repas marqué.Des échantillons d'air sont prélevés à des intervalles de temps déterminés et analysés à l'aide d'un analyseur d'isotopes du carbone. Différents analyseurs d'isotopes peuvent être utilisés. Dans cette étude, nous avons choisi d'utiliser un analyseur d'isotopes du carbone LGR 13 à faible GATOS.La collecte d'échantillons pendant quatre heures permet d'obtenir des cinétiques reproductibles de dioxyde de carbone marqué au 13, reflétant la vitesse de vidange gastrique. Ajustement des courbes. L'utilisation d'une régression non linéaire permet de calculer les temps de demi-vide.Cette procédure convient au suivi de souris atteintes d'une maladie chronique. Dans cette étude particulière, nous utilisons des souris femelles non obèses diabétiques, N-O-D-L-T-J, qui constituent un modèle du diabète de type 1 humain. Avant l'analyse, toutes les souris sont laissées en temps d'acclimatation dans les chambres d'essai afin de minimiser leur niveau de stress.Étant donné qu'un retard du vidage gastrique est un indicateur caractéristique du stress chez les souris, les souris non habituées continuent de se déplacer pendant environ une heure après leur transfert dans la chambre et défèquent ainsi qu'urinent. Fréquemment, les souris sont considérées comme correctement habituées lorsqu'elles s'adaptent rapidement à leur nouvel environnement. Après transfert dans la chambre, suivant une brève période d'exploration, les souris habituées restent tranquillement au repos dans la chambre.Dans les souris habituées, les résultats du test de vidange gastrique doivent montrer une variabilité intra-souris inférieure à 10 %. Une fois entraînées et prêtes pour le test de vidange gastrique, les souris doivent être privées de nourriture le jour précédant l'expérience. Les souris sont privées de nourriture pendant la nuit sur une grille de jeûne à fond en treillis métallique.Pour prévenir la phasie, veillez à ce qu'elles aient un accès libre à l'eau potable. Les souris diabétiques ne doivent pas être privées de nourriture plus de 16 heures. La constance est extrêmement importante lors d'une expérience de MCN gastrique.Des facteurs tels que la manipulation des souris de la même manière, le jeûne des souris à la même heure chaque jour, la vérification des taux de glucose et l'administration d'insuline à la même heure chaque jour sont extrêmement importants, car tous ces facteurs modifieront les données de MTN gastrique. Les matériaux que nous utilisons pour la préparation du repas à base d'œuf sont un œuf, de l'acide oléique, un bécher en verre, un tube Falcon et une spatule à extrémité courbée.Commencez par peser cinq grammes de jaune d'œuf dans un tube Falcon de 50 millilitres. Ensuite, ajoutez 10 microlitres d'acide okin NOIC à une concentration de deux microlitres par gramme dans le tube Falcon contenant l'œuf, puis mélangez vigoureusement à l’aide d'une spatule dans le tube Falcon. Pendant une minute, transférez ensuite l'œuf dans un bécher en verre et chauffez-le au-dessus d'un bec Bunsen jusqu'à ce qu'il coagule et que sa consistance soit appropriée.Pour former de petites boules, cela prend généralement environ 30 secondes. Les boules de jaune d'œuf doivent peser 0,2 gramme par souris. Il est important de maintenir la dose cumulée constante chez toutes les souris.Notre plage de récupération admissible de la dose cumulative est de 55 à 100 %. Commencez par installer les chambres de vidange gastrique. Utilisez des chambres et des couvercles propres ayant été séchés à l'air. En outre, tous les tubes reliant la chambre à l'analyseur ou à l'apport d'air au dioxyde de carbone doivent être exempts d'humidité.L'humidité peut interférer avec le signal rouge détecté par l'analyseur. Connectez les chambres aux tubes d'entrée qui fournissent un flux d'air purgé d'hydrocarbures. Il est important que cet air soit toujours constant, car toute variation de la quantité de dioxyde de carbone pourrait modifier la valeur de base.Ensuite, reliez les tubes de sortie des chambres à la machine, fermez les tubes et activez le flux d'air. Appliquez une très petite quantité de vaseline à l'extrémité des couvercles afin qu'ils se ferment correctement et soient hermétiquement scellés. Ce scellement étanche est nécessaire pour recueillir tout le dioxyde de carbone produit par les souris.Peser les souris à l'aide d'un petit support pour souris afin de réduire leur niveau de stress. Le poids corporel est déterminé comme indicateur de leur bonne santé continue. Ensuite, placer chaque souris dans la chambre appropriée.Il est important que l'air circule dans les chambres à ce moment-là. Chaque souris est implantée avec un dispositif de suivi. Les données relatives au poids de la souris, à la glycémie et aux traitements sont enregistrées à l'aide d'une base de données logicielle qui utilise ce numéro.Nous utilisons un logiciel qui nous permet de relier automatiquement le numéro d'identification de la souris directement aux données stockées. Cela peut bien sûr également être fait manuellement. Pour démarrer la mesure, laissez les souris s'acclimater aux chambres avant de régler les niveaux d'air.Une fois que les souris semblent calmes, ce qui peut prendre quelques minutes, ajustez le débit d'air pour chaque chambre de souris. Cet ajustement peut varier selon chaque souris. En général, le débit d'air est réglé au début de l'expérience afin de s'assurer que le dioxyde de carbone expiré atteint un niveau détectable par l'équipement utilisé, tout en restant suffisamment bas pour garantir un renouvellement sain de l'air.Nous utilisons des niveaux initiaux de dioxyde de carbone compris entre 1000 et 1500 parties par million ; en cas de difficultés lors des réglages, vérifiez la présence de fuites d'air. Ensuite, répétez le processus pour chacune des chambres et surveillez un nouveau cycle de mesures afin de déterminer si les réglages effectués sur le débit d'air ont corrigé le niveau de dioxyde de carbone. Il est important d'obtenir une lecture stable de la ligne de base avant de nourrir les souris.Une fois ceci réalisé, donnez le repas aux œufs au premier souris et enregistrez l'heure à laquelle chaque souris reçoit sa nourriture. Nous effectuons la procédure pendant quatre heures afin d'obtenir suffisamment de valeurs pour ajuster la courbe d'enrichissement en dioxyde de carbone 13 pour chaque souris. Vérifiez les souris toutes les 30 à 60 minutes pour vous assurer que les niveaux de dioxyde de carbone restent sûrs.Pour les souris, notre appareil mesure toutes les 25 secondes les concentrations de dioxyde de carbone 12, de dioxyde de carbone 13 et d'eau. Ainsi, 12 souris peuvent être analysées simultanément avec un intervalle de cinq minutes entre chaque mesure. Si vous effectuez des prélèvements manuellement ou utilisez un autre dispositif, veillez à obtenir vos mesures à des intervalles d'au moins cinq à dix minutes.Préparez de nouveaux cages contenant de la nourriture avant la fin du test afin que les souris puissent commencer à manger immédiatement après la fin du test. Ce graphique représente les points de données d'une souris présentant une vidange gastrique normale. Il montre la fraction de carbone 13 récupérée dans l'air expiré, exprimée en pourcentage de la dose administrée par heure, en fonction du temps.Les points de données sont ajustés par une courbe ayant l'équation suivante. Pourquoi le pourcentage de carbone 13 récupéré dans l'air expiré par heure et une constante de régression B et CA ? La demi-vie est calculée en introduisant les paramètres de cette courbe dans la fonction gamma inverse, comme établi dans une étude précédente de notre laboratoire ; le temps normal de demi-vide gastrique pour une souris NOD non diabétique âgée de neuf à quinze semaines varie de 62 à 131 minutes, tel qu'illustré par la boîte grise.La courbe bleue provient d'une souris présentant une vidange gastrique accélérée avec une valeur de T½ de 40 minutes, et la courbe rouge provient d'une souris présentant une vidange gastrique retardée avec une valeur de T½ de 168 minutes. En conclusion, cette vidéo montre comment mesurer la vidange gastrique solide au moyen d'un test respiratoire non invasif. Chez la souris, nous avons montré comment préparer les animaux pour le test, préparer la nourriture et recueillir les données.Cette méthode de mesure de la vidange gastrique solide par l'administration d'acide OCT au 13 carbone a déjà été décrite chez l'homme, et nous avons adapté le protocole pour son utilisation chez la souris. Ce protocole nous fournit une méthode précieuse pour mesurer de façon répétée la vidange gastrique chez un même animal, ce qui permet d'étudier la vidange gastrique dans le cadre de maladies chroniques. Cette méthode présente plusieurs applications futures.Par exemple, l'évaluation de différents médicaments pour le traitement de la gastroparésie diabétique.

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