Name: 5/6e néphrectomie en association avec High Salt Diet Nitric Oxide Synthase et inhibition pour provoquer la maladie rénale chronique chez le rat Lewis (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Découvrez une méthode en deux étapes pour induire une maladie rénale chronique chez le rat Lewis par néphrectomie partielle, inhibition de la synthase de l'oxyde nitrique et régime riche en sel.

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Nous remercions Krista den Ouden pour son excellente assistance technique. Cette technique a été soutenu financièrement par la Fondation canadienne du rein néerlandais, subvention C06.2174. MCV est soutenue par l&#39;organisation néerlandaise pour la recherche scientifique (NWO) Vidi-subvention 016.096.359.

Toutes les expériences sont exécutées conformément aux lignes expérimentales de guide éthique animale du comité d&#39;animal expérimental Utrecht. Le protocole est réalisé sous la direction et l&#39;approbation du soin des animaux de l&#39;institution de l&#39;auteur et du comité de l&#39;emploi. CKD est induite chez le mâle consanguin rats Lewis (Charles River, Sulzfeld, Allemagne) à l&#39;âge de 8 semaines. Les rats sont logés dans des conditions standard dans un environnement, de la lumière à température et humidité contrôlées. 1. Préparation de chirurgie <ol><li> Stériliser les instruments chirurgicaux: <ul><li> 1 tissu étudiant forceps 1-2 dents 12 cm </li><li> 1 étudiant au forceps de modèle standard </li><li> 2 Semken forceps </li><li> 1 Ciseaux Mayo </li><li> 1 étudiant ciseaux à iris </li><li> 1 Olsen-Hegar porte-aiguille avec des ciseaux </li><li> Blanket </li></ul></li><li> Consultez la liste d&#39;inventaire: <ul><li> Table d&#39;opération avec coussin chauffant et lampe </li><li> O <sub&gt; 2, l&#39;isoflurane </li><li> Tissus </li><li> Shaver </li><li> Scales </li><li> Ensemble opératoire stérile </li><li> 5x5 de gaze stérile et 10x10 </li><li> 70% d&#39;alcool </li><li> Une solution à 0,9% de NaCl </li><li> Seringue de 1 ml </li><li> Aiguilles (25G) </li><li> Tapis de mousse: Spongostan </li><li> Vicryl 4.0 et 5.0 </li><li> La buprénorphine 0,03 mg / kg (1:10 dilué dans du sel physiologique) </li><li> Cage propre pour les rats après une chirurgie </li></ul></li></ol> 2. Right Side uninéphrectomie <ol><li> Désinfecter la table avec 70% d&#39;alcool. </li><li> Lieu rat dans une boîte à induction et induire une anesthésie avec 4% d&#39;isoflurane et 1 litre flux de O 2. Remarque: en fonction de la souche de rat utilisée, avant et analgésie périopératoire sont prescrits, cela doit être discuté avec le vétérinaire local. </li><li> Transfert rat à table et lieu nez dans le cône. Le rat et le cône de nez sont placés sur un bloc de chauffage pour maintenir la température du corps du rat. Le rat is aérée avec un mélange de 2% d&#39;isoflurane et 1 litre d&#39;O 2. </li><li> Raser le flanc du rat et désinfecter avec de l&#39;alcool. Laver et désinfecter les mains et porter des gants chirurgicaux stériles. Portez un chapeau à tête et un masque. Faire un 1 à 1,5 cm incision parallèle aux côtes à l&#39;aide de forceps anatomiques et des ciseaux émoussés. Exposer le rein par dissection des muscles du dos. </li><li> Le pôle inférieur du rein est visible, utiliser soigneusement les petits forceps émoussé pour saisir le tissu adipeux périrénal. Externaliser le rein en tirant doucement sur la graisse péri-rénale avec une pince. Prenez soin de ne pas perturber la glande surrénale au cours de cette procédure. La glande surrénale peut être facilement retiré en plaçant une pince sur le site médial dans le tissu adipeux et déplacée légèrement vers le haut entre les glandes surrénales et les reins comme le montre la figure 2. </li><li> Placez les reins doucement sur de la gaze et claire qui entoure le tissu adipeux et conjonctif. Identifier l&#39;artère et la veine rénales et placer une ligature (5.0vicryl) avec un seul noeud autour des vaisseaux, mais ne pas attacher le noeud. </li><li> Déplacer le noeud lâche soigneusement le long des vaisseaux vers l&#39;aorte par environ 0,5 cm, pour créer un espace entre le rein et le noeud. Ceci est fait pour empêcher la ligature de glisser après la coupe. </li><li> Noeud de cravate avec deux doubles noeuds. Si la perfusion est arrêtée, la couleur du rein change immédiatement au brun. Ne pas couper les extrémités de la ligature. </li><li> Couper les vaisseaux rénaux proches du rein et enlever le rein. Tirez doucement sur les longues extrémités de la ligature pour vérifier le saignement des vaisseaux rénaux. La ligature doit rester en place sur le navire. Couper les longues extrémités de la ligature. Remarque, les artères rénales restantes se rétractent dans la cavité abdominale immédiatement. </li><li> Épongez les reins excisée sécher et peser. </li><li> Fermer l&#39;incision du muscle squelettique à l&#39;exploitation sutures avec Vicryl 5.0. Injecter 0,10 ml (0,03 mg / kg) buprénorphine im dans le membre postérieur. Fermez lepeau avec Vicryl 4.0 avec sutures intracutanées. Cela empêche les rats de l&#39;ouverture de la plaie. Note: en raison d&#39;une dépression respiratoire chez le rat Lewis, nous ne donnons analgésie post-opératoire juste avant d&#39;éteindre le isoflurane. </li><li> Abriter le rat dans une cage solitaire propre avec un accès facile à la nourriture et à l&#39;eau. Placez la moitié de la cage sur le réchauffement pad O / N et vérifier le rat soigneusement le lendemain. Lorsque la plaie est fermée et le rat est actif, ce qui est normalement comprise entre 6 et 12 h après l&#39;opération, le rat peut être placé en arrière dans le logement de groupe. </li></ol> 3. Côté gauche de la néphrectomie total <ol><li> Sept jours plus tard, les mêmes préparations sont réalisées sur le côté gauche que pour la droite, comme décrit de 2,1 à 2,5. Avant l&#39;intervention, la quantité de tissu rénal qui doit être éliminée correspond à environ 2/3rds du poids du rein droit est calculé. Préparez de petits morceaux de mousse gel (Spongostan, Johnson &amp; Johnson, New Jersey) avant la chirurgie. </li&gt; <li> Placez ciseaux pointus autour du pôle supérieur du rein gauche et la résection du pôle supérieur d&#39;un seul coup (pour l&#39;emplacement des ciseaux, voir figure 3). Couvrir immédiatement avec un morceau de mousse de gel et d&#39;exercer une légère pression avec une gaze stérile. </li><li> Répéter avec le pôle inférieur du rein comme dans 3.3. </li><li> Soulevez rein pour empêcher la coagulation sur la peau. Maintenir une légère pression sur les deux coussinets de mousse de gel avec de la gaze stérile jusqu&#39;à ce que le saignement s&#39;arrête. Lorsque le saignement persiste, ajouter un tapis de mousse. </li><li> Placez reste rein avec coussinets en mousse de gel adhérentes à l&#39;intérieur de l&#39;abdomen. Fermez le muscle et la peau et suivez 02.09 à 02.12. </li></ol> 4. Sham chirurgie <ol><li> Contrôles opérés Sham subissent la même procédure afin d&#39;exposer les reins. Au lieu d&#39;extirper le rein ou de couper les poteaux une semaine plus tard, les deux reins sont décapsulés à un intervalle d&#39;une semaine, en prenant soin de ne pas perturber les glandes surrénales. Fermeture de la plaie et les soins post-opératoires sont identical à 2.11 et 2.12. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

L&#39;ablation chirurgicale de 5/6e de la masse rénale chez le rat Lewis, combiné avec un régime riche en sel et l&#39;inhibition de la NOS temporaire conduit à un modèle de CKD qui ressemble CKD humaine et permet d&#39;étudier les mécanismes de causalité et l&#39;efficacité des interventions thérapeutiques en CKD. Le modèle de néphrectomie 5/6e est un modèle bien connu et largement décrit pour CKD. Toutefois, la simple élimination 5/6e de la masse rénale n&#39;entraîne pas d&#39;insuffisanc...

En raison de sa nature progressive, qui a suivi une maladie rénale en phase terminale, et la morbidité cardiovasculaire et la mortalité associée, CKD est un problème croissant de santé publique 1. Le ralentissement de la progression CKD est donc une priorité majeure de santé. Depuis CKD est caractérisée par des désordres complexes de l&#39;homéostasie, les modèles animaux d&#39;intégration sont nécessaires pour étudier le développement et la progression de l&#39;IRC. Le rein est constitué d&#39;un large éventail de différents types de cellules qui interagissent les uns avec les autres. Cette complexité ne peut être mimée in vitro. Pour étudier les interventions thérapeutiques en CKD, nous utilisons le modèle 5/6e de néphrectomie d&#39;ablation, un modèle expérimental bien connu de la maladie rénale progressive, ressemblant à plusieurs aspects de la MRC humaine 2,3. La réduction brute de la masse rénale glomérulaire progressive et provoque des blessures tubulo-interstitielle, la perte de néphrons résiduelles et le développement de l&#39;hypertension systémique et glomérulaire. Il est associé avec progressive intrarénal perte capillaire 4, l&#39;inflammation et la glomérulosclérose. Les facteurs de risque pour CKD invariablement impact sur ​​la fonction endothéliale 5. Nous avons utilisé une souche de rats (Lewis) qui est relativement résistant au développement de la MRC et donc nous avons combiné suppression des 5/6e de la masse rénale avec de l&#39;oxyde nitrique (NO) épuisement 6, 7, 8 et un régime élevé de sel 9. Après l&#39;arrivée et l&#39;acclimatation, les animaux reçoivent un inhibiteur de la NO synthase (L-NNA) additionné à l&#39;eau potable (20 mg / L) pour une période de 4 semaines, suivie par droit uninéphrectomie face (UNX) avec la poursuite de la L-NNA après deux jours . Une semaine plus tard, la néphrectomie subtotale (SNX), à savoir l&#39;élimination de 2/3rds de la masse rénale est effectuée sur le côté gauche. Après SNX, les animaux sont autorisés à récupérer pendant 2 jours, puis à nouveau de 20 mg / L dans l&#39;eau potable LNNA pour une période de 4 semaines. Un régime élevé en sel (6%), complété en rez-de-chow (voir la ligne du temps Figure 1), se poursuit tout au long de l&#39;expérience. Til raison pour effectuer la UNX sur le côté droit et le SNX sur le côté gauche, c&#39;est que les vaisseaux rénaux sont plus longs sur le côté gauche, ce qui facilite l&#39;accès du rein sans étirer les vaisseaux trop quand le rein est exposée à l&#39;extérieur du corps . Dans la littérature, les modèles sont décrits dans laquelle les pôles du rein gauche sont éliminés en premier, suivi par UNX du rein droit une semaine plus tard 10,11,12. Dans nos mains ce modèle a montré un développement beaucoup plus rapide de l&#39;insuffisance rénale, mais aussi une plus grande variation de la perte de la fonction rénale. Progression de l&#39;insuffisance rénale est suivie dans le temps par la mesure de l&#39;urée plasmatique, la pression artérielle systolique et de la protéinurie. Par six semaines après SNX, l&#39;insuffisance rénale a développé, caractérisé par une réduction marquée du taux de filtration glomérulaire (69%) et une circulation efficace de plasma rénal (62%) 13 sur l&#39;hypertension (pression artérielle systolique&gt; 150 mmHg), protéinurie (&gt; 50 mg/24 h) et doux urémie (&gt; 10 mm). Ses caractéristiques histologiques comprennent Tubuldommage o-interstitielle traduit par une inflammation, une atrophie tubulaire et une fibrose et une glomérulosclérose focale conduisant à une réduction massive des glomérules saines au sein de la population restante (&lt;10%). Suivi jusqu&#39;à 12 semaines après SNX montre la progression de l&#39;IRC, en fournissant une fenêtre d&#39;opportunité pour l&#39;évaluation des interventions thérapeutiques.

<table><tbody><tr><td>&nbsp ;</td><td>&nbsp ;</td><td>&nbsp ;</td><td><fort>réactif</fort></td></tr><tr><td>L-NNA</td><td>Sigma-aldrich</td><td>N5501</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Spongostan dental : coussinets en mousse de gel 1x1x1 cm</td><td>Johnson& Johnson</td><td>Ms0005</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36</td><td>Ethicon</td><td>V303H</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36</td><td>Ethicon</td><td>V392H</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Buprénorphine (0,3 mg/ml)</td><td>Par l’intermédiaire d’un pharmacien local commandé par Reckitt Benckiser pharmaceuticals</td><td>unknown</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>&nbsp ;</td><td>&nbsp ;</td><td><fort>Équipement</solide></td></tr><tr><td>Pince à tissus pour l’étudiant - 1x2 dents 12 cm</td><td>Outils de sciences fines (FST)</td><td>91121-12</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pince à motif standard pour étudiant</td><td>FST</td><td>91100-12</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Ciseaux Mayo</td><td>FST</td><td>14010-15</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>2X Pince Semken</td><td>FST</td><td>11008-13</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Ciseaux à iris d’étudiant</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Porte-aiguille</td><td>FST</td><td>12002-14</td><td>&nbsp ;</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> </td></tr></tbody></table>

5/6e néphrectomie en association avec high salt diet nitric oxide synthase et inhibition pour provoquer la maladie rénale chronique chez le rat lewis

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

L&#39;insuffisance rénale chronique (IRC) est un problème mondial. Le ralentissement de la progression CKD est une priorité majeure de santé. Depuis CKD est caractérisée par des désordres complexes de l&#39;homéostasie, les modèles animaux d&#39;intégration sont nécessaires pour étudier le développement et la progression de l&#39;IRC. Pour étudier le développement d&#39;interventions thérapeutiques CKD et roman en CKD, nous utilisons le modèle d&#39;ablation par néphrectomie 5/6e, un modèle expérimental bien connu de la maladie rénale progressive, ressemblant à plusieurs aspects de la MRC de l&#39;homme. La réduction brute de la masse rénale glomérulaire progressive et provoque des blessures tubulo-interstitielle, la perte de néphrons résiduelles et le développement de l&#39;hypertension systémique et glomérulaire. Elle est également associée avec la perte progressive intrarénal capillaire, l&#39;inflammation et la glomérulosclérose. Les facteurs de risque pour CKD invariablement impact sur la fonction endothéliale. Pour imiter cela, nous combinons l&#39;enlèvement de 5/6e de la masse rénale avec de l&#39;oxyde nitrique (NO) de l&#39;épuisement et une alimentation riche en sel. Après l&#39;arrivée et l&#39;acclimatation, les animaux recevoir un inhibiteur de la NO-synthase (NG-nitro-L-arginine) (L-NNA) additionné à de l&#39;eau potable (20 mg / L) pendant une période de 4 semaines, suivie de droite uninéphrectomie verso. Une semaine plus tard, une néphrectomie subtotale (SNX) est réalisée sur le côté gauche. Après SNX, les animaux sont autorisés à récupérer pendant deux jours, puis LNNA dans l&#39;eau potable (20 mg / L) pour une nouvelle période de 4 semaines. Un régime élevé en sel (6%), complété en rez-de-chow (voir la ligne du temps Figure 1), se poursuit tout au long de l&#39;expérience. Progression de l&#39;insuffisance rénale est suivie dans le temps par la mesure de l&#39;urée plasmatique, la pression artérielle systolique et de la protéinurie. Par six semaines après SNX, l&#39;insuffisance rénale s&#39;est développée. La fonction rénale est mesurée en utilisant l&#39;inuline «gold standard» et acide para-amino hippurique (PAH) technologies de déminage. Ce modèle de CKD est caractérisée par une réduction du taux de filtration glomérulaire (DFG) et le flux plasmatique rénal efficace (ERPF), hypertension (pression artérielle systolique&gt; 150 mmHg), protéinurie (&gt; 50 mg/24 h) Et l&#39;urémie légère (&gt; 10 mm). Ses caractéristiques histologiques incluent des dommages tubulo-interstitielle réfléchie par une inflammation, une atrophie tubulaire et une fibrose et une glomérulosclérose focale conduisant à une réduction massive des glomérules saines au sein de la population restante (&lt;10%). Suivi jusqu&#39;à 12 semaines après SNX montre la progression de l&#39;IRC.

Après néphrectomie subtotale, environ 1/6e de la masse rénale totale est laissée. Figure 4 montre le poids de la partie enlevée du rein droit avec moyenne et l&#39;écart dans deux expériences précédentes. Il convient de garder à l&#39;esprit que dans la semaine après UNX, l&#39;hypertrophie du rein gauche se produit, indiquant que le poids qui doit être retiré calculé en fonction du poids du rein droit se traduit toujours en moins de 5/6e enlèvement. Cependant, comme il n&#39;est pas possible de détermi...

Une méthode en deux étapes pour établir l&#39;insuffisance rénale chronique (IRC) chez le rat Lewis par l&#39;ablation chirurgicale 5/6e de la masse rénale est décrite. Combinaison de la procédure chirurgicale, NOS-inhibition et une alimentation riche en sel conduit à un modèle ressemblant CKD humaine, permettant l&#39;étude des mécanismes et le développement de nouvelles interventions thérapeutiques causales.

5/6e néphrectomie en association avec High Salt Diet Nitric Oxide Synthase et inhibition pour provoquer la maladie rénale chronique chez le rat Lewis

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

L'objectif général de cette procédure est d'induire une maladie rénale chronique chez le rat Lewis. Cela est réalisé en administrant d'abord le bloqueur de l'oxyde nitrique, la NG-nitro-L-arginine, ou LNNA, pendant une période de quatre semaines. Ensuite, le rein droit entier est retiré.Ensuite, une semaine plus tard, les deux tiers du rein gauche sont retirés. Enfin, pendant le traitement par LNNA et un régime riche en sel, l'évolution de l'insuffisance rénale chez le rat est suivie au fil du temps. En définitive, des résultats peuvent être obtenus qui montrent une maladie rénale chronique installée, grâce à la collecte d'urine pour la mesure des protéines et de l'hématocrite, ainsi que de l'IAU dans le sang, le plasma, l'urine ou ces trois fluides, et de la pression artérielle systolique.La fonction rénale est finalement déterminée par l'inuline et le taux de para-aminohippurate, ou clairance du PAH. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la néphrologie, telles qu'une meilleure compréhension de la pathologie de l'IRC, et peut être utilisée pour étudier l'effet d'interventions thérapeutiques. Quatre semaines avant la procédure initiale de néphr

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La détermination du débit de filtration glomérulaire (DFG) est l’étalon-or pour évaluer la fonction rénale globale. Cependant, les procédures traditionnelles de mesure de ce paramètre sont lourdes et nécessitent un investissement en temps important. Nous décrivons ici une méthode plus rapide et peu invasive pour déterminer le DFG par voie transcutanée.

Évaluation transcutanée de la fonction rénale dans Rongeurs Conscious

Ce manuscrit fournit une intervention chirurgicale en deux étapes détaillées pour effectuer la néphrectomie partielleth 5/6 de la souris (PNx) avec ligature du pôle. Quatre semaines après la chirurgie, par rapport aux souris opérés, les souris PNx développé la fibrose cardiaque, hypertrophie cardiaque, anémie, insuffisance rénale et une diminution de la fonction cardiaque systolique et diastolique.

Un modèle de néphrectomie souris 5/6ème qui induit la cardiomyopathie et urémique expérimentale

Ce manuscrit décrit les protocoles de microscopie vidéo in vitro pour l’évaluation de la fonction vasculaire dans les artères de résistance cérébral de rat. Le manuscrit décrit également les techniques pour l’évaluation des microvaisseaux densité avec la perfusion lectine et tissu fluorescent étiquetée à l’aide de débitmétrie Doppler Laser.

Évaluation des mécanismes de contrôle vasculaire utilisant la microscopie vidéo des artères de résistance isolée de Rats

Le but de ce manuscrit et protocole est d’expliquer et de démontrer en détail la procédure chirurgicale de transplantation rénale orthotopique chez le rat. Cette méthode est simplifiée pour obtenir la perfusion correcte du rein donneur et raccourcir le temps de reperfusion en utilisant la technique de l’anastomose du brassard veineux et urétral.

Greffe orthotopique de rein de rat: une approche chirurgicale nouvelle et simplifiée

Un modèle murin Goldblatt modifié à 2 reins 1 clip (2K1C) a été développé en utilisant des tubes en polyuréthane pour initier une sténose de l’artère rénale, induisant une augmentation de l’expression de la rénine et des lésions rénales. Ici, nous décrivons une procédure détaillée de préparation et de placement du brassard sur l’artère rénale pour générer un modèle murin 2K1C reproductible et cohérent.

Un modèle modifié de régulation de la rénine dans la sténose de l’artère rénale

Le modèle de transplantation rénale orthotopique chez le rat contribue à étudier le mécanisme du rejet de l’allogreffe rénale. Le modèle actuel augmente la survie des receveurs sans interférence avec l’apport sanguin et le reflux veineux du bas du corps en utilisant une anastomose de bout en bout de l’implantation rénale et une méthode « tunnel » de bout en bout de l’anastomose uretère-vessie.

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5/6 Néphrectomie par bipolectomie aiguë par laparotomie médiane chez le rat

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Modèle murin de transition d’une maladie rénale aiguë à chronique induite par une ischémie rénale/lésion de reperfusion

La production endogène d'oxyde nitrique (NO) réglemente une grande variété de fonctions biologiques. Il est de plus en plus clair que la perturbation ou une dysrégulation de la signalisation du NO base est impliqué dans de nombreuses maladies humaines. Méthodes de quantification pertinente NO métabolites peuvent fournir de nouveaux biomarqueurs de diagnostic ou de pronostic de la maladie humaine.

Techniques d&#39;analyse permettant de doser la bioactivité d&#39;oxyde nitrique

Découvrez une méthode en deux étapes pour induire une maladie rénale chronique chez le rat Lewis par néphrectomie partielle, inhibition de la synthase de l'oxyde nitrique et régime riche en sel.

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