5/6e néphrectomie en association avec High Salt Diet Nitric Oxide Synthase et inhibition pour provoquer la maladie rénale chronique chez le rat Lewis

L'objectif général de cette procédure est d'induire une maladie rénale chronique chez le rat Lewis. Cela est réalisé en administrant d'abord le bloqueur de l'oxyde nitrique, la NG-nitro-L-arginine, ou LNNA, pendant une période de quatre semaines. Ensuite, le rein droit entier est retiré.

Ensuite, une semaine plus tard, les deux tiers du rein gauche sont retirés. Enfin, pendant le traitement par LNNA et un régime riche en sel, l'évolution de l'insuffisance rénale chez le rat est suivie au fil du temps. En définitive, des résultats peuvent être obtenus qui montrent une maladie rénale chronique installée, grâce à la collecte d'urine pour la mesure des protéines et de l'hématocrite, ainsi que de l'IAU dans le sang, le plasma, l'urine ou ces trois fluides, et de la pression artérielle systolique.

La fonction rénale est finalement déterminée par l'inuline et le taux de para-aminohippurate, ou clairance du PAH. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la néphrologie, telles qu'une meilleure compréhension de la pathologie de l'IRC, et peut être utilisée pour étudier l'effet d'interventions thérapeutiques. Quatre semaines avant la procédure initiale de néphrectomie, commencer à administrer 20 milligrammes par litre de l'inhibiteur de la synthase de l'oxyde nitrique LNNA dans l'eau de boisson du rat.

Suivant ce calendrier. Avant de commencer la procédure, utilisez de l'alcool à 70 % pour désinfecter la table. Pour vous préparer à la chirurgie, commencez par stériliser les instruments suivants : une pince à tissus d'étudiant de 12 centimètres avec une à deux dents, une pince d'étudiant de modèle standard, deux pinces de Simkin, une paire de ciseaux de Mayo, une paire de ciseaux à iris d'étudiant et un porte-aiguille Olson Heger avec ciseaux.

Préparez ensuite l'inventaire suivant : une table d'opération équipée d'un tapis chauffant, d'une lampe, d'oxygène et d'isoflurane ; un rasoir ; des instruments chirurgicaux stériles ; des compresses stériles de 5 × 5 et 10 × 10 ; de l'alcool à 70 % ; une solution de chlorure de sodium à 0,9 % ; une seringue d'un millilitre ; des aiguilles de calibre 25 ; des tampons de gel mousse ; des fils résorbables Vicryl 4,0 et 5,0 ; de la buprénorphine à 0,03 milligramme par kilogramme ; et une cage propre pour les rats après la chirurgie.

Après avoir induit l'anesthésie dans une chambre d'induction avec 4 % d'iso-fluorane et administré une pré-analgésie, si nécessaire, transférez le rat sur le coussin chauffant en position latérale gauche sur la table et ventilez-le à l'aide d'un embout nasal avec un mélange de 2 % d'iso, de fluorane et d'un litre d'oxygène. Rasez le flanc du rat et désinfectez le site chirurgical à l'alcool.

Étant donné que l'intervention chirurgicale se déroule dans un environnement semi stérile, nous désinfectons la peau rouge uniquement à l'alcool pour une préparation plus stérile. Le brossage avec du Bétadine peut être utilisé, puis on met une coiffe chirurgicale et un masque, avant de se laver et de désinfecter les mains avant d'enfiler des gants chirurgicaux stériles. Ensuite, à l'aide d'une pince anatomique et de ciseaux mousseux, pratiquez une incision d'un à un centimètre et demi de longueur, parallèlement aux côtes.

Ensuite, par une dissection émoussée des muscles du dos, exposez le rein droit. Une fois que le pôle inférieur du rein est visible, utilisez la petite pince effilée pour saisir délicatement le tissu adipeux périrénal. Puis, à l’aide de la pince, tirez doucement sur le tissu adipeux périrénal en prenant soin de ne pas perturber la glande surrénale, et externalisez le rein afin de le séparer de la glande surrénale.

Positionnez une pince au niveau du site médial dans le tissu adipeux et déplacez doucement le tissu vers le haut, entre la glande surrénale et le rein. Placez délicatement le rein sur un tampon de gaze et débarrassez-le de tout tissu adipeux et conjonctif environnant. Identifiez l'artère et la veine rénales et desserrez-les légèrement.

Placer une ligature avec un nœud simple autour des vaisseaux pour empêcher la ligature de glisser. Après la coupe, déplacer soigneusement le nœud libre le long des vaisseaux en direction de l'aorte, d'environ 0,5 centimètre, afin de créer un espace entre le rein et le nœud. Ensuite, faire deux nœuds doubles sans couper les extrémités de la ligature.

Si la profusion est correctement interrompue, la couleur du rein devient immédiatement brune. Ensuite, sectionner les vaisseaux rénaux près du rein et l'extraire. Tirer doucement sur les extrémités longues du ligature pour vérifier toute hémorragie des vaisseaux rénaux.

La ligature doit rester en place sur le vaisseau. Coupez les extrémités longues de la ligature. Les vaisseaux rénaux résiduels se rétracteront dans la cavité abdominale.

Utilisez immédiatement des points de suture continues en Vicryl 5,0 pour fermer le muscle squelettique de la membre postérieure. Injectez par voie intramusculaire 0,03 milligramme par kilogramme de buprénorphine. Ensuite, utilisez des points de suture intradermiques en Vicryl 4,0 pour fermer la peau.

Ensuite, séchez le rein excisé par tamponnement et pesez-le. Laissez le rat se remettre dans une cage individuelle propre, placée à moitié sur un tapis chauffant avec accès à de la nourriture et de l'eau, et surveillez-le conformément au protocole décrit dans le texte. Sept jours plus tard.

En prévision d'une deuxième intervention chirurgicale, calculez le poids d'environ les deux tiers du rein droit et préparez de petits morceaux de mousse de gel. Répétez la procédure décrite pour extérioriser le rein gauche et détacher la glande surrénale de celui-ci. Placez des ciseaux pointus autour du pôle supérieur du rein gauche et résectionnez le pôle supérieur d'un seul mouvement, recouvrez immédiatement avec un morceau de mousse de gel et appliquez une pression douce à l’aide d’une compresse stérile.

Ensuite, résectionner le pôle inférieur du rein et le recouvrir de manière similaire afin d'éviter la formation de caillots sur la peau. Soulever le rein et utiliser un pansement stérile pour exercer une pression douce sur les deux tampons de gel mousse jusqu'à l'arrêt du saignement. Si le saignement persiste au niveau d'un autre tampon de mousse, replacer le rein résiduel avec les tampons de gel mousse adhérents à l'intérieur de l'abdomen, puis fermer les muscles et la peau.

Suivez la même procédure que celle décrite précédemment pour surveiller la récupération et loger le rat. Après une néphrectomie partielle, environ un sixième de la masse rénale totale reste. Cette figure montre le pourcentage calculé de la masse rénale retirée du rein droit, avec la moyenne et l'écart type.

Dans nos expériences précédentes, au cours de la semaine suivant la néphrectomie unilatérale, une hypertrophie du rein gauche se produit, entraînant une légère sous-estimation de la quantité souhaitée de tissu rénal à retirer, laquelle était basée sur le poids calculé du rein droit. Toutefois, étant donné qu'il n'est pas possible de déterminer le poids du rein gauche, cette méthode constitue la façon la plus précise d'ablation d'environ cinq sixièmes de la masse rénale. La progression de l'insuffisance rénale est suivie par la collecte d'urine pour la mesure des protéines et de la créatinine, par la prise de sang pour la détermination de l'urée plasmatique et de la créatinine, ainsi que par la mesure de la pression artérielle systolique.

La clairance de la créatinine peut être calculée, mais elle a tendance à sous-estimer la diminution du DFG en raison de la sécrétion tubulaire importante de créatinine chez le rat, ce qui souligne l'importance de la méthode de référence pour déterminer la fonction rénale par la clairance de l'inuline et du PAH. Conners a décrit l'ensemble de la procédure. La clairance de l'inuline et du PAH est calculée à partir de leur concentration dans l'échantillon d'urine, du débit urinaire et de leur concentration plasmatique. Au fil du temps, les rats atteints de maladie rénale chronique ou IRC développent une hypertension, une anémie, une protéinurie, une diminution importante du débit de filtration glomérulaire et du débit plasmatique rénal efficace.

Après six semaines, une insuffisance rénale chronique (IRC) installée s'est développée, ce qui constitue un point temporel approprié pour tester des interventions de sauvetage. À ce stade, une durée prolongée, une progression marquée de l'hypertension et une protéinurie sont observées, tandis que l'hématocrite et la fonction rénale montrent une détérioration modérée. D'autres symptômes, non ciblés dans nos expériences, incluent des troubles du métabolisme du calcium, du phosphate et des lipides, ainsi que bien d'autres facteurs dépendant de la souche de rats utilisée. Le développement de l'IRC peut varier considérablement selon la souche de rat Lewis utilisée ici.

Un régime riche en sel et un inhibiteur de l'oxyde nitrique ont été ajoutés afin d'induire une hypertension et une dysfonction endothéliale. Une seule étape. Cette technique peut être réalisée en environ 20 à 50 minutes si elle est effectuée correctement.

Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez bien comprendre comment induire une maladie rénale chronique chez les loose reds en réalisant une néphrectomie partielle étagée.