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Bien que de nombreuses analyses expérimentales sont réalisées à température ambiante (« RT » pour « room temperature » en anglais ; ~20-25°C), il n’est pas inhabituel pour des expériences, ou parties d’expériences, d’exiger certain type de régulation de température. Cette vidéo explique les différentes raisons pour lesquelles une régulation est nécessaire et les températures auxquelles un scientifique pourrait vouloir « garder des éléments chauds ». Par exemple, parfois, les cellules ont besoin d’être cultivées dans un environnement proche de la température du corps (~37°C), la structure des protéines a besoin d’être modifiée (au delà de 56°C), ou les réactifs et les solutions doivent être chauffés (~100°C). La manière correcte de tenir un thermomètre et de mesurer la température tout en mélangeant un liquide est également expliquée. Puisqu’il n’est pas toujours évident de réguler la température dans le laboratoire, cette vidéo parle aussi des types d’équipements qu’il faudrait choisir dans chaque situation.
Il y a plusieurs moyens de réguler la température au labo. Parfois les réactifs ont besoin d’être chauffés, les cultures de cellules ont besoin d’être maintenues à des températures spécifiques pour une croissance optimale, et la température du corps d’un animal a besoin d’être régulée, pendant ou après les procédures chirurgicales. Cette vidéo va s’interesser de plus près aux moyens et raisons qui peuvent pousser un scientifique à rechauffer l’atmosphère, et les températures spécifiques utilisées pour chauffer des échantillons et réactifs.
Tout d’abord, il est important de noter que dans les procédures habituelles de laboratoire, nous parlons de température sur l’échelle de mesure des Celsius, ou Centigrade. Comme les autres unités de mesure métrique utilisées en science, le degré Celsius est l’une des unités standard du Système International pour la mesure de température.
Le thermomètre, comme vous le savez probablement déjà, est l’instrument utilisé pour mesurer la température.
Pour obtenir la lecture de température la plus précise d’un liquide que vous chauffez ou refroidissez, immergez le thermomètre d’au moins 10 à 15 cm, ou environ 4 à 6 pouces, au-dessous de la surface. Ensuite attachez précautionneusement le thermomètre en place, en prenant soin que l’instrument soit à au moins 5 cm, ou environ 2 pouces au-dessus du fond du récipient, et à au moins un thermomètre de largueur du côté latéral du récipient.
Si vous mélangez le liquide, vérifiez que le thermomètre ne bloque pas le mélangeur magnétique, auquel cas vous pourriez vous retrouver avec un dangereux probleme sur les bras.
Lisez l’indicateur de la température du liquide au niveau des yeux. Lorsque vous lisez le thermomètre, faites attention à ne pas le toucher le long de la tige. Votre chaleur corporelle pourrait affecter la précision de la mesure.
Ensuite, passons en revue quelques une des températures habituellement utilisées pour une grande partie des expériences.
En fonction du type de travail réalisé et du type d’équipement hébergé dans votre laboratoire, la température ambiante de la pièce devrait normalement être entre 20-25 °C. Il est généralement acquis qu’une expérience doit être réalisée à température ambiante si aucune température particulière n’est mentionnée. La température ambiante est souvent abréviée dans les protocoles par RT pour « Room Temperature » en anglais.
Lorsque vous êtes confrontés avec une procédure in vitro, l’expérience doit généralement être réalisée à 37 °C. Les procédés réalisés in vitro impliquent des tissus, cellules ou extraits, et essayent d’imiter les conditions qui existent à l’intérieur d’un organisme. Les expériences in vivo, d’autre part, sont réalisées dans l’organisme intact, et puisque les mammifères ont une température corporelle de 37 °C, les expériences de culture de cellules « in vitro » sont typiquement réalisées à cette température.
A des températures supérieures à 56°C, les protéines se déroulent, selon un procédé appelé dénaturation. Ceci peut être utile pour une variété de raisons, notamment l’ouverture ou le changement de forme d’une protéine pour une identification simplifiée par un anticorps de détection.
L’eau et quelques solutions à base d’eau, ou aqueuses, bouillent à approximativement 100 °C. Cela peut aussi être une bonne température à laquelle dissoudre des réactifs qui sont difficiles à amener en solution à température ambiante.
Fréquemment, un protocole expérimental indiquera que certaines étapes ont besoin d’être réalisées à une température spécifique.
Les expériences exécutées sur le banc de labo sont réalisées à environ 20-25°C, autrement dit à température ambiante.
A température ambiante, la plupart des réactifs et des cultures de cellules sont stables, bien que quelques réactifs ont besoin d’être protégés de la lumière, quelques expériences doivent être réalisées sous hotte pour maintenir la stérilité, et quelques tests doivent prendre place à l’intérieur d’une chambre humide, pour empêcher l’assèchement des tissus ou des réactifs expérimentaux.
Lorsque votre protocole dit de « dégeler les cellules ou un réactif particulier », utilisez un bain d’eau programmé à 37°C pour un chauffage lent et uniforme. A moins que votre protocole ne vous indique de chauffer à nouveau plus tard, retirez l’échantillon du bain marie dès que le dernier fragment de glace a fondu.
Si le protocole indique qu’un «milieu réchauffé » ou tout autre réactif préchauffé doit être utilisé, un bain marie à 37°C est aussi utile pour garder les solutions à une température constante et tempérée – mais pas trop chaude.
En vue de garder vos solutions libres de contamination ou de dilution par l’eau environnante, utilisez un flotteur en mousse pour décongeler des aliquotes de cellules gelées ou pour chauffer des microlitres de solution. Si un porte-tube plus sécurisé est préféré, un rack métallique peut également être utilisé dans ce but.
Pour des volumes de liquide plus importants, des racks en plastique ou des pinces en métal peuvent être utilisées pour tenir les échantillons droit dans le bain marie.
Lorsque vous êtes invités à incuber des cultures de cellules mammifères, cela signifie généralement placer les cellules dans un incubateur à 37°C, avec une atmosphère à 5% de dioxyde de carbone, et un plateau d’eau pour garder l’humidité de l’incubateur à environ 95%.
Parfois, les cellules bactériennes sont aussi cultivées à 37°C, dans un incubateur ou une pièce chauffée. Un incubateur à vibrations peut être utilisé lorsque vous voulez développer rapidement le nombre de culture de cellules bactériennes, tout en diminuant le temps de culture. En agitant le liquide de culture, vous assurez que les bactéries reçoivent des nutriments en suffisance car elles ne sédimentent pas au fond du tube.
Pour un chauffage ou une ébullition très rapide, des plaques chauffantes ont traditionnellement été utilisées. Maintenant que les micro-ondes sont habituellement trouvés dans les labos, ils peuvent également être utilisés pour bouillir rapidement des solutions aqueuses.
Maintenant jetons un oeil aux raisons pour lesquelles vous pourriez vouloir chauffer certaines choses au labo.
La fixation par la chaleur est un moyen simple et rapide pour fixer certains échantillons biologiques comme les cellules bactériennes ou les biomacromolécules à une lame de verre avant leur coloration. Ici vous voyez des étalements de chromosomes rendus possible par la fixation par la chaleur.
Chauffer et mélanger la solution liquide dans laquelle vous essayez de dissoudre un réactif solide peut aider à accélérer le procédé, comme la gélose en poudre qui est dissoute ici.
Beaucoup d’expériences sur cellules vivantes requièrent au minimum une période d’incubation. L’incubateur Incucyte permet l’imagerie en temps réel de la croissance cellulaire, sans perturber les cellules lorsque les récipients de culture sont retirés de l’incubateur.
L’imagerie de cellules vivantes peut être également réalisée avec des microscopes fixes. Ici les cellules sont maintenues dans un incubateur à imagerie pendant que leur activité avant et en réponse à l’addition d’un stimulus expérimental, est visualisée et enregistrée pour analyse future.
Vous venez de regarder l’introduction de JoVE à la régulation des températures de laboratoire à 23°C et au-delà. Dans cette vidéo nous avons vu quelques unes des pièces d’équipement de labo les plus communes pour chauffer les cellules, les animaux et les solutions, comment décider quelle pièce d’équipement utiliser pour chauffer les cellules ou solutions, et quelques raisons pour lesquelles la température pourrait devoir être régulée pendant une expérience. Merci de nous avoir regardé et souvenez-vous de tenir votre thermomètre avec attention!
Il existe de nombreuses façons de réguler la température en laboratoire. Parfois, les réactifs doivent être chauffés, les cultures cellulaires doivent être maintenues à des températures spécifiques pour une croissance optimale et la température corporelle des animaux doit être régulée pendant ou après les interventions chirurgicales. Cette vidéo examinera de plus près certaines des façons et des raisons pour lesquelles un scientifique pourrait vouloir chauffer les choses et les températures spécifiques utilisées pour réchauffer les échantillons et les réactifs.
Tout d’abord, il est important de noter que dans les procédures de laboratoire courantes, nous parlons couramment de température dans les mesures de degrés Celsius ou centigrades. Comme les autres unités de mesure métriques utilisées en science, le degré Celsius est l’une des normes du Système international d’unités pour mesurer la température.
Le thermomètre, comme vous le savez probablement déjà, est l’instrument utilisé pour mesurer la température.
Pour obtenir la lecture la plus précise de la température d’un liquide que vous chauffez ou refroidissez, plongez le thermomètre à au moins 10 à 15 cm, ou à environ 4 à 6 pouces sous la surface. Ensuite, fixez soigneusement le thermomètre en place, en veillant à ce que l’instrument se trouve à au moins 5 cm, ou environ 2 pouces, au-dessus du fond du récipient et à au moins une largeur de thermomètre sur le côté du récipient.
Si vous remuez le liquide, assurez-vous que le thermomètre ne sera pas heurté par le barreau d’agitation, sinon vous pourriez avoir un désordre dangereux sur vos mains.
Lisez l’indicateur de température du liquide à hauteur des yeux. Lors de la lecture d’un thermomètre, veillez à ne pas le toucher le long de la tige. La chaleur de votre corps peut affecter la précision de la mesure.
Ensuite, passons en revue certaines températures courantes auxquelles se déroulent de nombreuses expériences.
Selon le type de travail effectué dans votre laboratoire et le type d’équipement qui y est installé, la température ambiante de la pièce se situe normalement entre 20 et 25 °C. On peut généralement supposer qu’une expérience doit être réalisée à température ambiante si aucune exigence de température n’est indiquée autrement. La température ambiante est souvent abrégée dans les protocoles comme, vous l’avez deviné : RT.
Lorsque vous êtes confronté à un ?in vitro ? procédure, l’expérience doit généralement être menée à 37°C. Procédés qui sont réalisés « in vitro » impliquent des tissus, des cellules ou des extraits et tentent d’imiter les conditions qui existent à l’intérieur d’un organisme. Les expériences in vivo, en revanche, sont réalisées avec l’organisme intact, et puisque les mammifères ont une température corporelle de 37 ? C, « in vitro » Les expériences de culture cellulaire sont généralement réalisées à cette température.
À des températures supérieures à 56 ? C, les protéines se déploient, un processus appelé dénaturation. Cela peut être utile pour diverses raisons, notamment pour ouvrir et modifier la forme d’une protéine pour faciliter l’identification par un anticorps de détection.
L’eau et certaines solutions à base d’eau, ou aqueuses, bouillent à environ 100 °C. Il peut également s’agir d’une bonne température pour dissoudre des réactifs difficiles à mettre en solution à température ambiante.
Fréquemment, un protocole expérimental indiquera que certaines étapes doivent se dérouler à une température spécifique.
Les expériences menées sur le banc sont réalisées à environ 20-25 ? C, ou température ambiante.
À température ambiante, la plupart des réactifs et des cultures cellulaires sont stables, bien que certains réactifs doivent être protégés de la lumière, certaines expériences doivent être effectuées dans une hotte pour maintenir la stérilité, et certains tests doivent avoir lieu dans une chambre humide pour empêcher les tissus ou les réactifs expérimentaux de se dessécher.
Lorsque votre protocole dit, pour « décongeler en cellules ou en un réactif particulier », utilisez un bain-marie réglé à 37 ? C pour réchauffement lent et régulier. À moins que votre protocole n’indique un chauffage supplémentaire, assurez-vous de retirer votre échantillon du bain-marie dès que le dernier fragment de glace a fondu.
Si le protocole indique que les « milieux préchauffés » ou d’autres réactifs préchauffés doivent être utilisés, un 37 ? C le bain-marie est également utile pour maintenir les solutions à une température constante, chaude ? mais pas chaud -- température.
Afin de garder vos solutions exemptes de contamination ou de dilution de l’eau environnante, utilisez un support flottant en mousse pour décongeler des aliquotes congelées de cellules ou pour réchauffer des volumes de plusieurs microlitres de solution. Si un support de tube plus sûr est préféré, un support métallique peut également être utilisé à cet effet.
Pour de plus grands volumes de liquide, des supports en plastique ou des pinces métalliques peuvent être utilisés pour maintenir les échantillons à la verticale dans le bain d’eau.
Lorsqu’on vous demande d’incuber des cultures de cellules de mammifères, cela signifie généralement placer les cellules dans un 37 ? C, avec une atmosphère de dioxyde de carbone de 5 %, et un bac à eau pour maintenir l’incubateur à environ 95 % d’humidité.
Des cellules bactériennes sont aussi parfois cultivées à 37 ans ? C, dans un incubateur, une pièce chaleureuse. Un incubateur à agitation peut être utilisé lorsque vous souhaitez augmenter rapidement le nombre de cultures cellulaires bactériennes, tout en réduisant le temps de culture. En secouant les cultures liquides, vous vous assurez que les bactéries reçoivent suffisamment de nutriments car elles ne sédimentent pas au fond du tube.
Pour un chauffage ou une ébullition très rapide, des plaques chauffantes ont traditionnellement été utilisées. Maintenant que les micro-ondes sont couramment trouvées en laboratoire, elles peuvent également être utilisées pour faire bouillir rapidement des solutions aqueuses.
Jetons maintenant un coup d’œil à certaines des raisons pour lesquelles vous pourriez vouloir chauffer les choses en laboratoire.
La fixation à chaud est un moyen simple et rapide de fixer certains échantillons biologiques, comme des cellules bactériennes ou des biomacromolécules, sur une lame de verre avant la coloration. Ici, vous pouvez voir certaines propagations chromosomiques qui ont été rendues possibles par la fixation de la chaleur.
L’agitation chauffée de la solution liquide dans laquelle vous essayez de dissoudre un réactif solide peut aider à accélérer le processus, comme la gélose en poudre qui est dissoute ici.
De nombreuses expériences sur des cellules vivantes nécessitent au moins une période d’incubation. L’incubateur Incucyte permet d’imager en temps réel la croissance cellulaire, sans la perturbation des cellules qui peut se produire lorsque les récipients de culture sont retirés de l’incubateur.
L’imagerie de cellules vivantes peut également être réalisée avec des microscopes de bureau. Ici, les cellules sont maintenues dans un incubateur d’imagerie pendant que leur activité avant et en réponse à l’ajout d’un stimulus expérimental est visualisée et enregistrée pour une analyse ultérieure.
Vous venez de regarder l’introduction de JoVE à la régulation de la température de laboratoire à 23 ? C et supérieur.
Dans cette vidéo, nous avons passé en revue : certaines des pièces d’équipement de laboratoire les plus courantes pour chauffer les cellules, les animaux et les solutions, comment décider quelle pièce d’équipement utiliser pour chauffer les cellules ou les solutions, et différentes raisons pour lesquelles la température peut devoir être régulée pendant une expérience. Merci d’avoir regardé et n’oubliez pas de manipuler votre thermomètre avec précaution !
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