Parabiose chez la souris: un protocole détaillé

L’objectif global de cette procédure est d’effectuer l’union parabiotique de deux souris pour étudier un système circulatoire partagé. Pour ce faire, il faut d’abord pratiquer une incision sur les côtés adjacents des animaux. Une fois que le fascia est séparé, les deux souris sont fermement connectées au niveau des articulations du coude et du genou.

La dernière étape consiste à relier la peau des deux animaux par une suture continue. En fin de compte, l’analyse cytométrique en flux peut montrer un chimérisme sanguin dans les 10 à 14 jours suivant l’intervention. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme la greffe de moelle osseuse ou l’injection de cellules, est qu’elle ne nécessite pas d’immunosuppression et permet également le maintien de la circulation CX pendant une longue période de temps.

La démonstration de la procédure sera punctu jaw. Le chirurgien animalier de mon laboratoire Au moins deux semaines à l’avance, a mis en place plusieurs cages de paires de souris du même sexe, de préférence femelles, de la même génétique, de la même taille et du poids similaires. Une fois qu’un couple harmonieux a été sélectionné, effectuez la parabiose dans une salle de chirurgie animale propre.

Assurez-vous que toutes les surfaces de contact, les outils et les gants sont stériles. Anesthésie les souris dans une chambre d’induction à joint PAI reliée à un vaporisateur isofluoré. Une fois l’anesthésie induite, maintenez-la tout au long de la procédure.

À l’aide d’un cône nasal, délivrant une concentration plus faible de fluor, rasez maintenant leur fourrure abdominale sur les côtés opposés et appliquez une pommade ophtalmique. Puis de manière aseptique. Préparez les zones rasées en les essuyant soigneusement avec des lingettes imbibées de bétadine suivies de lingettes imbibées d’alcool.

Ensuite, transférez les souris dans un coussin chauffé recouvert d’un tampon stérile. Pour l’analgésie, utilisez du carprofène et de la buprénorphine. Positionnez les souris sur le côté dos à dos avec les zones rasées vers le haut.

Couvrez ensuite les souris avec un rideau stérile, en exposant uniquement la zone d’opération. À l’aide d’un ciseau bien aiguisé, effectuez des incisions cutanées longitudinales sur les côtés de chaque animal, en commençant à un demi-centimètre sous l’articulation du genou et en terminant à un demi-centimètre au-dessus du coude. Après l’incision, détachez doucement la peau du fascia sous-cutané en tenant la peau vers le haut avec une paire de pinces incurvées et en séparant le fascia avec une deuxième paire.

Pour créer un demi-centimètre de peau libre, les LEC et les articulations du genou sont clairement distinguables. Après l’incision cutanée, commencez à joindre les LEC gauche et droit. Pliez d’abord le coude de la première souris et passez l’aiguille de la suture 3.0 sous Theon.

Deuxièmement, pliez le coude de la deuxième souris et passez la même suture en dessous. Fixez fermement les articulations par un double nœud chirurgical. Ensuite, connectez les articulations du genou en suivant la même procédure.

Suite à la fixation des joints. Reliez la peau des deux animaux avec une suture résorbable continue à cinq oh Vicryl. Commencer ventralement à partir du coude pour éviter la rupture et la séparation de la peau.

Effectuez des fermetures de sutures serrées de la peau dans la zone autour des coudes et des genoux. La connexion des souris de peau est une étape critique de cette procédure. Il est important de s’assurer que les souris sont étroitement jointes pour éviter la rupture et la séparation après la chirurgie.

Par conséquent, tous les quatre à cinq mois, nous confirmons que la peau est bien unie. Une fois l’attache cutanée ventrale terminée, placez les souris en position couchée et continuez la suture dorsale en terminant par un double nœud chirurgical. Vérifiez la continuité de la suture et confirmez qu’elle n’a pas d’ouvertures.

Terminez la chirurgie en administrant un demi-millilitre de chlorure de sodium à 0,9 % par voie sous-cutanée à chaque animal pour prévenir la déshydratation. Gardez les animaux sur le coussin chauffant jusqu’à ce qu’ils se rétablissent. Hébergez chaque couple parabiotique dans une cage propre avec des granulés de nourriture humidifiés pour minimiser la tension liée à la recherche de nourriture tout en s’adaptant à l’existence parabiotique

Placez les granulés de nourriture sur le sol de la cage. Assurez-vous également de fournir du matériel de nidification au cours des 48 premières heures postopératoires. Administrer le carprofène toutes les 24 heures et administrer la buprénorphine toutes les 12 heures par jour pendant deux semaines.

Surveillez les animaux pour détecter des signes de douleur et de détresse, tels que des secousses, une léthargie, une mastication de la queue, un dos arqué, un manque de toilettage, etc. Pour prévenir les infections bactériennes au cours des 10 premiers jours postopératoires, traitez les souris avec une suspension orale de sulfaméthoxazole et de triméthoprime dans leur bouteille d’eau. Un cisme sanguin se produira 10 à 14 jours après la chirurgie.

Donc, après deux semaines, prélevez du sang dans les veines de leur queue pour confirmer que cela s’est produit. Utilisez la cytométrie en flux pour analyser le sang. Diluer deux à trois gouttes dans 500 microlitres d’EDTA de 10 millimolaires.

Ensuite, mélangez soigneusement la dilution avec 500 microlitres de 2 % de dextrine dans du PBS. Incuber le mélange de sang à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes, puis faites-le tourner pour recueillir le surnageant. Car en pratique.

Les paires de probiotiques peuvent être conservées ensemble pendant neuf mois et séparées sans aucune complication. Effectuez la procédure inverse sur une surface chirurgicale stérile. Utilisez le même protocole d’anesthésie que celui décrit précédemment et retirez les cheveux de la zone entourant la suture initiale.

Après avoir préparé aseptiquement la peau rasée, administrez les analgésiques et couvrez la zone chirurgicale avec un drap à l’aide de ciseaux tranchants. Séparez les souris par une incision longitudinale le long de la suture latérale pour séparer les articulations, coupez les nœuds de la suture qui les relie sur chaque souris. Coupez la peau le long de l’incision pour lisser les bords.

Ensuite, rattachez la peau avec une suture Vicryl continue résorbable à cinq oh pour prévenir la déshydratation, administrez un demi-millilitre de chlorures de sodium à 0,9 % par voie sous-cutanée, puis gardez les animaux sur un animal chauffé jusqu’à ce qu’ils se remettent de l’anesthésie. En utilisant les mêmes traitements postopératoires analgésiques et antibactériens que ceux décrits précédemment, le résultat attendu d’une parabiose de deux organismes est la contribution égale de chaque système circulatoire animal à une circulation sanguine commune. L’équilibrage du sang de souris de type Parabios Wild et de souris positives à la GFP a été étudié par cytométrie en flux conformément aux études précédentes.

Le sang de la souris de type sauvage a révélé la présence d’un chimérisme, comme l’indiquent environ la moitié des cellules sanguines positives à la GFP et l’autre moitié des cellules sanguines de type sauvage une fois maîtrisé. Cette technique peut être réalisée en 45 à 60 minutes si elle a fonctionné correctement.