16 octobre 2013
Au cours des dernières années, de nouveaux endoscopes génération ont émergé comme aides à la recherche de diagnostic importants pour évaluer la colite murine et les tumeurs colorectales. Nous présentons ici un protocole détaillé pour l'évaluation endoscopique de tumeurs colorectales et inflammation chez des souris, ainsi que d'un système de pointage roman qui utilise des identificateurs décimaux pour documenter la sévérité de la colite endoscopique et tumeurs colorectales.
Je suis Tomohiro Kani, un visiteur de l’Université Nintendo de Tokyo, et je suis Fabio Elli, directeur du Centre de recherche sur la santé digestive, un cas de la faculté de médecine de l’Université Western Reserve. Dans cette vidéo, nous allons décrire notre méthodologie pour effectuer une coloscopie chez la souris. Soulignez l’importance de se familiariser avec l’anatomie endoscopique normale.
Décrire comment résoudre efficacement les problèmes pendant l’endoscopie afin de minimiser les traumatismes et les artefacts d’image. Et enfin, décrivez notre système de notation pour l’évaluation de l’inflammation intestinale dans le modèle oculaire mu de la colite et du cancer associé à la colite. Je vous remercie de votre attention.
Tout d’abord, installez le système d’endoscopie et fixez l’oscilloscope au centre du système vidéo et à la source lumineuse. Stérilisez l’endoscope et fixez-y une seringue pour l’insufflation d’air. Allumez ensuite le système et ajustez la balance des blancs avec l’animal.
Correctement anesthésié et retenu, commencez l’examen endoscopique. Des échantillons de biopsie peuvent être obtenus si nécessaire. Après la portée, réchauffez la souris avec une lumière pour la récupération à la fin.
Le système de notation pour l’évaluation de l’inflammation du côlon et du cancer du côlon associé au côlon est expliqué. Mise en place du système d’endoscopie. Le système d’endoscopie comprend le centre du système vidéo, une source lumineuse au xénon et un enregistreur vidéo.
Nous utilisons un urétéroscope humain pour la coloscopie chez la souris. Notre lunette URFV est une sonde vidéo flexible qui utilise un capteur CCD. Le diamètre extérieur du tube d’insertion est de 3,3 millimètres et l’extrémité distale de 2,8 millimètres de diamètre.
Pour commencer, fixez l’oscilloscope au centre du système vidéo et à la source lumineuse. Ensuite, stérilisez l’endoscope et la surface de l’objectif avec de l’éthanol à 70 %. Fixez ensuite une seringue de trois millimètres sur le canal de travail.
Ceci est utilisé pour réguler la quantité d’air intraluminal avec insufflation ou aspiration. Allumez l’interrupteur principal et configurez la balance des blancs. N’oubliez pas non plus de configurer en mode NBI Deux, anesthésant la souris.
Tout d’abord, je vais démontrer l’anesthésie par inhalation En utilisant du fluor, nous utilisons quatre à 5 % de fluor pour l’induction. Une fois que la souris a cessé de bouger, réduisez la concentration à la dose d’entretien de un à 2 %Retenez la souris sur la table en collant la queue et les membres inférieurs. Le ruban adhésif de la queue est particulièrement important pour maintenir la souris immobile pendant la portée.
Aussi, injection intrapéritonéale de tri bromo. L’éthanol peut être utilisé pour l’anesthésie. Trois. Les lésions périanales ne font pas partie de l’évaluation endoscopique, mais constituent un résultat important et doivent être observées avant l’insertion et ne doivent pas être confondues avec une hémorragie traumatique.
Avant l’insertion, enduire l’endoscope d’un lubrifiant chirurgical, assurez-vous de ne pas enduire le capteur CCD. Insérez la lunette dans l’anus. Cette insertion initiale doit être aussi douce que possible, car l’insertion aveugle peut endommager la muqueuse colique du côlon.
Allumez la lumière et commencez l’enregistrement. Poussez la seringue à air lentement et prudemment pour obtenir un champ de vision. Trop d’insufflation d’air peut tuer la bouche.
La présence d’un saignement spontané doit être évaluée lorsque l’endoscope est inséré dans l’angle du rectum ou du côlon. La manipulation ajuste la vue verticalement et le contrôle du couple est pour le réglage horizontal. La coordination entre ces deux contrôles est très importante.
Observez la transparence. Dans le côlon normal, la paroi est transparente avec une vascularisation normale et sans aucune épaisseur. La transparence est définie comme une visibilité transmurale des vaisseaux ou des organes extra-muros.
Le mouvement répétitif d’insertion et de retrait aide à l’évaluation dans le côlon normal. Les petits et les grands vaisseaux sont visibles pendant l’examen. Vous pouvez prendre des photos ou des échantillons de biopsie si nécessaire.
Vérifiez la présence d’un saignement de contact. Lors du retrait de l’endoscope, il n’est pas nécessaire de gratter la muqueuse intentionnellement. Le mode d’imagerie à bande étroite met l’accent sur les structures fines des vaisseaux dans les muqueuses.
Le rectum est entouré de muscles tandis que le côlon n’est pas fixé par les tissus environnants. En raison de cette différence anatomique, les viscères extra-muraux ne sont pas visibles dans le rectum. Les boulettes fécales sont parfois présentes près de l’anus.
Ils peuvent être éliminés par insufflation d’air, cependant, ils peuvent parfois persister et obstruer la vue endoscopique. Dans ces cas, nous utiliserons jusqu’à un mil de lavement PBS pour laver les selles. Les excréments sont généralement excrétés après quelques minutes.
La vue floue causée par la présence de taches sur l’objectif est également un problème courant, en particulier dans le cas de colite ou de saignement. Dans cette situation, nous avons essayé de nettoyer l’objectif avec insufflation d’air. Cette procédure peut réussir à dégager l’objectif sans retirer la lunette.
Le mouvement péristaltique est l’une des activités physiologiques normales de l’intestin. Étant donné que l’insufflation d’air ne réussit pas à dilater la lumière pendant le péristaltisme, vous devez attendre que l’onde péristaltique passe. Quatrièmement, les échantillons de biopsie sont obtenus à l’aide d’une pince à ventouse de biopsie flexible.
Les bonnets s’ouvrent et se ferment par la poignée. Insérez la pince dans le canal de travail. Attention à ne pas percer l’intestin.
Ouvrez les bonnets à une taille appropriée et placez l’embout sur la zone d’intérêt. Fermez doucement les bonnets et tirez fermement. Retirez l’échantillon par rinçage avec une solution appropriée.
Cinquièmement, la guérison. Après l’examen, réchauffez la souris jusqu’à ce qu’elle récupère. Nous utilisons une lumière électrique pour réchauffer six points pour l’inflammation du côlon.
Notre système de notation se compose de quatre paramètres, une lésion périanale, deux, la transparence de la paroi colique, trois saignements intestinaux et quatre lésions focales. Chaque paramètre peut être noté de zéro à trois. Le score total maximum est de 12.
De plus, nous avons inclus une échelle d’unités décimales qui peut être utilisée pour mettre en évidence des résultats endoscopiques spécifiques. La description détaillée de chaque paramètre est disponible dans le manuscrit ci-joint. Voici un résumé numéro un, lésion périanale.
Ce résultat doit être observé avant d’introduire l’endoscope dans le rectum. Cela évite la confusion avec les saignements traumatiques. Un score de zéro est normal.
Le score deux est pour une décharge sanglante. Le score trois concerne le tissu de granulation ou le prolapsus rectal. Deux.Transparence. Cela représente la capacité de visualiser les vaisseaux sanguins dans la paroi colique et les viscères environnants.
Un score de zéro indique que les vaisseaux sanguins sont clairement visibles. Marquez un point. Les petits navires sont partiellement invisibles, mais les grands récipients sont visibles.
Marquez deux. Les petits navires sont généralement invisibles et même les grands navires ne sont pas clairs. Marquer trois de la même manière que dans le score deux et l’aspect épaissi du côlon. Trois.
Les saignements, les saignements spontanés doivent être différenciés des saignements de contact. Jugez-le en conséquence. Le score un indique que le saignement de contact est induit par la procédure de cadrage standard douce, score trois.
Saignement spontané à l’entrée dans le côlon. Numéro quatre, lésion focale. Ces résultats reflètent des conditions locales qui accompagnent souvent l’inflammation.
Marquez un point. La plaque est une élévation plate recouverte d’une muqueuse apparemment normale. Marquez deux.
Les érosions de la zone d’extrémité rouge marquent trois. Érosions ulcéreuses recouvertes d’un matériau semblable à la fibrine. Le NBI est utile pour le reconnaître.
Descripteurs décimaux. Nous avons ajouté trois paramètres supplémentaires et leur avons attribué des notes décimales.0.1. Pour le score de sténose : 0,2 pour le score de déchirure ou de perforation intestinale : 0,5 pour la lésion tumorale, cas de présentation du premier cas.
Souris atteinte d’une infection à Clostridium difficile. Il a une transparence normale mais une érosion précoce. Une petite érosion est observée, mais la muqueuse de fond est normale.
En observant de près, un léger œdème entourant cette lésion est révélé. Aussi. Dans d’autres parties, il n’y a aucun signe indiquant la présence d’une inflammation. Deuxième cas.
Souris atteinte de colite induite par le DSS avec un régime riche en graisses. Une non-transparence, des saignements spontanés et une sténose sont observés dans ce cas. Au début, des saignements sont observés.
C’est spontané. Voici une restriction. Il n’est pas dilaté par l’insufflation d’air et l’endoscope ne peut pas passer à travers.
La muqueuse d’arrière-plan est rougie et épaissie. De plus, des coups de contact se produisent ici et là. Il indique la fragilité du côlon. Trois.
Souris atteinte de colite DSS chronique, de non-transparence, d’épaisseur de paroi et de protubérances tumorales sont observées. Généralement, l’épaisseur de la paroi des cols blancs est visible et la paroi n’est pas transparente. Il s’agit d’une ulcération autour des protubérances fléchisseuses spléniques qui sont remarquables.
Quatrième cas. Souris atteinte de colite associée au cancer induit par l’azoxyméthane et le DSS. Il a plusieurs tumeurs et ulcération.
Une grande lésion saillante de type plat se trouve sur la paroi droite et dans une zone un peu plus proximale, une autre lésion de type plat inférieure est visible. La structure de la surface est apparemment différente de celle de la muqueuse normale. Le NBI est utile pour la détection et le diagnostic d’une telle lésion.
Il existe une grande ulcération géographique recouverte de matière fibreuse dans le rectum. Merci d’avoir regardé.
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Cet article présente un protocole détaillé pour réaliser une coloscopie chez la souris, en se concentrant sur l'évaluation de l'inflammation intestinale et des tumeurs colorectales. Les auteurs introduisent un système de notation novateur permettant de documenter la gravité de la colite et des tumeurs à l'aide d'identifiants décimaux.
La cotation endoscopique validée dans les modèles murins permet une évaluation reproductible et quantitative de la gravité de la colite et des tumeurs colorectales, soutenant directement la validation des cibles et la réduction des risques mécanistiques dans la recherche sur les maladies gastro-intestinales. L'intégration de l'évaluation de l'inflammation et des tumeurs dans un seul flux de travail renforce la fiabilité prédictive et la continuité translationnelle, depuis la découverte précoce jusqu'aux études précliniques. Des systèmes de cotation standardisés facilitent la comparabilité entre études et la prise de décision à l'échelle du portefeuille en recherche et développement biopharmaceutique.
Ce système de cotation endoscopique validé s'inscrit dans la continuité découverte-préclinique, permettant la vérification d'hypothèses, l'évaluation de composés candidats et l'optimisation de modèles translationnels dans la recherche sur les maladies gastro-intestinales.