Name: Procédures didentification des prions infectieux Après passage dans le système digestif dune espèce aviaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-06T21:30:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Découvrez comment identifier les prions infectieux après leur passage dans le système digestif des corbeaux d'Amérique. Cette méthode permet d'évaluer la transmission des encéphalopathies spongiformes transmissibles chez les animaux sauvages.

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Nous tenons à remercier S. Werner pour fournir les corbeaux utilisées dans cette étude et l&#39;USDA, APHIS, WS, CNRF personnel de soins aux animaux pour les soins et la surveillance des animaux. La mention ou utilisation d&#39;un produit n&#39;implique pas l&#39;approbation de l&#39;USDA. Le financement de cette étude a été fourni par l&#39;USDA, APHIS, les Services vétérinaires.

Notre protocole est adapté de celui que nous avons déjà publié 7. Toutes les procédures impliquant des animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de protection et d&#39;utilisation des animaux de l&#39;United States Department of Agriculture (USDA), Animal et Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services (WS), Centre national de la recherche faunique (CNRF). Une. Corneille gavage <ol><li> Estimer le temps de passage de la «matière cérébrale pseudo &#39;à travers le tube digestif des corneilles d&#39;Amérique. <ol><li> Mélangez 5 ml de cuit et des œufs brouillés ensemble avec un colorant bleu et gavage 1 vol en utilisant un 2 en aiguille de gavage (Figure 1). </li><li> Vérifiez vol toutes les 30 min jusqu&#39;à ce que les matières fécales bleu / vert teinté ne sont plus excrétée. </li></ol></li><li> Obtenir C57BL / 6 cerveaux de souris RML (souche Chandler) infectés non infectées et malades en phase terminale. </li><li> Générer un 20% en poids / volume normal et infecté souris homogénat de cerveau dans un homogénéisateur balle de mélangeur avec 1xtampon phosphate salin (PBS) et des perles de verre, puis centrifuger à 3000 g pendant 1 min pour éliminer plus grand de particules. Retirer le surnageant et diluer avec un volume égal de PBS 1x à générer un poids / volume à 10% dans du PBS stérile. Congeler à -80 ° C jusqu&#39;à ce que nécessaire. </li><li> 17 heures avant de gavage enlever les aliments, mais pas l&#39;eau, des stylos d&#39;oiseau. </li><li> Allouer au hasard corbeaux à des groupes de traitement et de gavage par voie orale chaque vol avec 5 ml d&#39;homogénat de cerveau de souris normales ou infecté en utilisant un 2 en aiguille de gavage. </li><li> Transfert chante dans des cages individuelles et de collecter et mutualiser toutes les matières fécales dans chaque cage pour 4 heures après gavage (Figure 2). </li><li> Homogénéiser les fèces regroupés pour chaque vol dans un homogénéisateur balle de mélangeur avec des perles de verre jusqu&#39;à obtenir une texture uniforme. * Excréments Corneille sont pour la plupart de liquide et peuvent être mélangées facilement. </li><li> Pour chaque vol, diluer 500 pi d&#39;homogénat fécale dans 9,5 ml 1x PBS pour un volume total de 10 ml. </li><li> Centrifuger le homogena fécalete pendant 15 min à 1400 x g et le surnageant extrait. </li><li> Pour réduire au minimum le risque d&#39;une infection microbienne secondaire, traiter surnageant avec 1 ul de 100 unités / ml de pénicilline et 100 pg / ml de streptomycine (Invitrogen, NY) par 100 ul d&#39;homogénat puis placer sous une lumière UV à température ambiante pendant 20 minutes pour réduire risque de contamination virale et bactérienne. Après l&#39;exposition aux UV, les échantillons soniquer dans un appareil à ultrasons Mp 3000 à la mise en 70 pour 30 secondes de perturber la membrane de tous les microbes restants. </li></ol> 2. Souris inoculation <ol><li> Répartir au hasard les souris à des groupes de traitement suivants (Tableau 1): <ol><li> Groupe 1 - souris positifs du traitement par voie intrapéritonéale inoculés (IP) avec 1 ml d&#39;homogénat fécale de corbeaux gavage par voie orale avec 5ml infectés cerveaux de souris. </li><li> Groupe 2 - Négatif souris inoculées de traitement IP avec 1 ml d&#39;homogénat fécale de corbeaux gavage par voie orale avec des cerveaux de souris normales 5ml. </li><li> Diluer infected et normale homogénat de cerveau de souris pour les groupes 3 et 4 à 1:100 p / v dans du PBS 1x. </li><li> Groupe 3 - souris témoins positifs IP inoculé avec 1 ml de la souris infectée-homogénat de cerveau. </li><li> Groupe 4 - Négatif souris témoins inoculées ip avec 1 ml de la normale homogénat de cerveau de souris. </li></ol></li></ol><table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Groupe Traitement </td><td> Nombre d&#39;animaux </td></tr><tr><td> Groupe 1 </td><td> Tremblante + Corneille matières fécales </td><td> 100 </td></tr><tr><td> Groupe 2 </td><td> Tremblante - Corneille matières fécales </td><td> 25 </td></tr><tr><td> Groupe 3 </td><td> Cerveau tremblante + souris </td><td> 10 </td></tr><tr><td> Groupe 4 </td><td> Tremblante - cerveau de souris </td><td> 5 </td></tr></tbody></table> . Tableau 1 État de la tremblante inoculum (+ positif, négatif -) et le nombre d&#39;animaux utilisés 7. <ol start="2"><li> Intrapéritonéale inoculer la souris: <ol><li> Scruff souris par dorsale cou fourrure avec le pouce et l&#39;index et faire tourner doucement pour exposer la face ventrale. </li><li> Élever extrémité postérieure de la souris si la tête est légèrement inférieure. </li><li> Insérez l&#39;aiguille 25 G 1 cm à travers la peau, 1 cm de la ligne médiane latérale, et 1-2 cm en avant de l&#39;articulation sacro-iliaque en utilisant une seringue sans aiguille de verrouillage. </li><li> Injecter 1 ml inoculer lentement dans la cavité du corps de la souris. </li></ol></li></ol> 3. Surveillance de souris <ol><li> Surveillance de souris quotidienne jusqu&#39;à ce qu&#39;ils expriment des signes cliniques de la tremblante de la souris. Les signes cliniques peuvent inclure: cyphose, l&#39;ataxie, la queue raide, absence de toilettage, une émaciation, et la léthargie. </li><li> Score des souris pour chacun des signes cliniques 6 lorsque les signes visibles sont évidents, où 0 = aucun visible, 1 = modérée, et 2 = sévère. </li><li> Euthanasier les souris quand scores totaux quotidiens pour chaque signe atteindre ≥ 8 pour 1 jour, ≥ 6 en continu pendant 3 jours, ou à 365 jours après l&#39;inoculation (dpi). </li><li> Cerveaux récolte euthan immédiatement aprèsasie et conserver à -70 ° C. </li><li> Pour confirmer un diagnostic de la tremblante, digérer des échantillons de cerveau avec 3 pi d&#39;un 50 pg / ml de solution de protéinase K (PK) dilué comme suit: 3.1. PK ul, 12,5 ul d&#39;EDTA 500 mM, pH 8, 109,39 ul de 1 x PBS pendant 30 min à 45 ° C, puis inactiver la PK en ajoutant 8 pi de tampon de chargement et l&#39;incubation des échantillons à 95 ° C pendant 5 min. Charger les échantillons sur un gel SDS-PAGE à 12%, électrophorèse et transfert sur membrane PVDF Immobilon bloc et avec 5% de lait écrémé dans 0,2% de Tween 20 dans du PBS pendant 1 heure à température ambiante. Ensuite, la sonde avec un anticorps monoclonal anti-PrP BAR224 conjugué à la peroxydase de raifort, dilué dans Superblock, pendant 1 h à température ambiante. Rincer la membrane pendant 1 h avec du PBS-Tween 20 0,2%. Pour visualiser, incuber Western blot 5 min avec un substrat chimioluminescent et une image sur un système de documentation de gel G-box. </li></ol>

<ol><li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epizootiology+of+chronic+wasting+disease+in+free-ranging+cervids+in+Colorado+and+Wyoming%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming.</a> Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Horizontal prion transmission in mule deer.</a> Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).</li>
<li>Sigurdson, C. J., Adriano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Wasting+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Chronic Wasting Disease.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1772 (6), 610-618 (2007).</li>
<li>Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+of+prion+transmission+in+mule+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Emerging+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Environmental sources of prion transmission in mule deer.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).</li>
<li>Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infectious+prions+in+pre-clinical+deer+and+transmission+of+chronic+wasting+disease+solely+by+environmental+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure.</a> PLoS ONE. 4 (6), e5916(2009).</li>
<li>VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+remains+infectious+after+passage+through+digestive+system+of+American+crows+%28Corvus+crachyrhunchos%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos).</a> PLoS ONE. 7 (10), e45774(2012).</li>
<li>Imran, M., Mahmood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+animal+prion+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Virology+Journal%22%5BJournal%5D)">An overview of animal prion diseases.</a> Virology Journal. 8 (493), (2011).</li>
<li>Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+expanding+universe+of+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+PATHOGENS%22%5BJournal%5D)">The expanding universe of prion disease.</a> PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26(2006).</li>
<li>Bruce, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmissions+to+mice+indicate+that+%27new+variant%27+CJD+is+caused+by+the+BSE+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent.</a> Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).</li>
<li>Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+lateral+transmission+of+scrapie+between+sheep+kept+under+natural+conditions+using+lymphoid+tissue+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy.</a> Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).</li>
<li>Collinge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+prion+zoonoses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The risk of prion zoonoses.</a> Science. 335 (6067), 411-413 (2012).</li>
<li>Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prion+agent+diversity+and+species+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Prion agent diversity and species barrier.</a> Veterinary Research. 39 (47), (2008).</li>
<li>Harrington, R. D., Baszler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+species+barrier+limits+transmission+of+chronic+wasting+disease+to+mink+%28Mustela+vison%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+General+Virology%22%5BJournal%5D)">A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison).</a> The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).</li>
<li>Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mites+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Mites as vectors for scrapie.</a> Lancet. 347 (9008), 1114(1996).</li>
<li>Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fly+larvae+and+pupae+as+vectors+for+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Fly larvae and pupae as vectors for scrapie.</a> Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).</li>
<li>Matthews, D., Cooke, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+for+transmissible+spongiform+encephalopathies+in+non-ruminant+livestock+and+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Revue+Scientifique+Et+Technique-Office+International+Des+Epizooties%22%5BJournal%5D)">The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish.</a> Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).</li>
<li>Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deer+carcass+decomposition+and+potential+scavenger+exposure+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).</li>
<li>Scherbel, C., Pichner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+of+scrapie+associated+prion+protein+%28PrPSc%29+by+the+gastrointestinal+microbiota+of+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle.</a> Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).</li>
<li>Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transportation+of+prion+protein+across+the+intestinal+mucosa+of+scrapie+susceptible+and+scrapie-resistant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep.</a> Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).</li>
<li>Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+sheep+scrapie+brain+homogenate+to+rumen-simulating+conditions+does+not+result+in+a+reduction+of+PrP%28Sc%29+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Letters+in+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels.</a> Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).</li>
<li>Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excretion+of+BSE+and+scrapie+prions+in+stools+from+murine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models.</a> Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).</li>
<li>Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+shedding%2C+alimentary+clearance+and+intestinal+spread+of+prions+in+hamsters+fed+with+scrapie%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie.</a> Veterinary Research. 40 (1), 4(2009).</li>
<li>Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+domestic+cats+to+chronic+wasting+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease.</a> Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).</li>
<li>Bjorndal, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flexibility+of+digestive+responses+in+two+generalist+herbivores%2C+the+tortoises+Geochelone+carbonaria+and+Geochelone+denticulate%5BTitle%5D)+AND+%22Oecologia%22%5BJournal%5D)">Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate.</a> Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).</li>
<li>Clark, R. G., Gentle, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimates+of+grain+passage+time+in+captive+mallards%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Estimates of grain passage time in captive mallards.</a> Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).</li>
<li>Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feed+intake%2C+digestion+and+passage+of+proboscis+monkey+%28Nasalis+larvatus%29+in+captivity%5BTitle%5D)+AND+%22Primates%22%5BJournal%5D)">Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity.</a> Primates. 33 (3), 399-405 (1992).</li>
<li>Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+feeding+strategies+and+potential+disease+transmission+in+Wisconsin+white-tailed+deer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer.</a> Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).</li>
<li>Pulford, B., Spraker, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+PrPCWD+in+feces+from+naturally+exposed+Rocky+Mountain+elk+%28Cervus+elaphus+nelsoni%29+using+protein+misfolding+cyclic+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification.</a> Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).</li>
<li>Hicks, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guano+deposition+in+an+Oklahoma+crow+roost%5BTitle%5D)+AND+%22Condor%22%5BJournal%5D)">Guano deposition in an Oklahoma crow roost.</a> Condor. 81 (3), 247-250 (1979).</li>
<li>Aldous, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Winter+habits+of+crows+in+Oklahoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Winter habits of crows in Oklahoma.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Nous démontrons une procédure pour documenter le passage du matériau PrP Res par le système digestif des corneilles. Nous avons utilisé des méthodes conventionnelles pour déterminer si les corbeaux ont la capacité de translocation matériau PrP Res à des zones géographiques indemnes de la maladie. D&#39;autres ont évalué la résistance de la PrP Res de ruminants et de rongeurs 19-21 22,23 sucs digestifs, les deux qui n&#39;ont pas réussi à éliminer. Les futures applications de c...

Les encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST) sont des maladies infectieuses mortelles neurodégénératives qui affectent la faune, les animaux domestiques et les humains. L&#39;agent infectieux des EST de maladies semble être mal repliées ou isoformes PrP pathogènes (RES) des protéines prions 1. Les EST animales comprennent la maladie du dépérissement chronique (MDC) dans le cerf mulet (Odocoileus hemionus), le cerf de Virginie (Odocoileus virginianus), le wapiti (Cervus elaphus), et de l&#39;orignal (Alces alces); la tremblante chez les ovins et les caprins; l&#39;encéphalopathie spongiforme bovine ( ESB) chez les bovins domestiques; transmissible encéphalopathie du vison en vison d&#39;élevage, l&#39;encéphalopathie spongiforme féline chez les chats; exotique ongulés encéphalopathie spongiforme dans le zoo exotique rumine de la famille des bovidés et l&#39;encéphalopathie spongiforme bovine chez les primates non humains 8. La maladie EST humaine unique, variant de la maladie de Creutzfeldt-Jakob, est rare et la pensée d&#39;être acquis par la consommation de la PrP Res-contaminalimentaire ATED 9. De même, l&#39;ESB peut infecter les humains si bœuf contaminé est consommé 10. De toutes les maladies de l&#39;EST, tremblante et la MDC sont les deux seuls les épidémies et les sources d&#39;infection autonomes sont présumés être d&#39;un animal à 2,3,11 ainsi que de sources environnementales 4-6. La recherche suggère que la plupart des maladies de l&#39;EST nécessitent des périodes d&#39;incubation prolongées notables d&#39;événements d&#39;exposition naturelles de matières PrP Res à la manifestation de signes cliniques 2-4,6,8 et les barrières d&#39;espèces apparentes minimiser, mais n&#39;éliminent pas le risque de transmission inter-espèces 12-14 . Identification des mécanismes de propagation des prions infectieux (PrP Res) de matériau est extrêmement important pour répondre à des questions sur la façon dont les EST se déplacent à travers le paysage. Des études expérimentales ont suggéré que les insectes 15,16, la volaille et les porcs 17, et la corneille d&#39;Amérique (Corvus brachyrhynchos) 7,18 sont des porteurs passifs ou disperseurs de matériel PrP Res. Passage de matériel PrP Res par le système digestif des corneilles a été récemment documentée, ce qui démontre le rôle qu&#39;ils peuvent jouer dans la dispersion des maladies de l&#39;EST 7. Ces résultats rendent plausible que les corneilles, un trésor, pourraient rencontrer, consomment, et le transport du matériel infectieux par les fèces dépôt, dans les zones exemptes de la maladie. Les procédures que nous démontrons ici ont été utilisés pour documenter le passage du matériau PrP Res par le système de digestion des corbeaux et facilitera grandement l&#39;application de ces méthodes à un autre fixateur et modèles carnivore espèces spécifiques dans la recherche de futurs correspondants. Dans cette étude, les méthodes classiques ont été utilisés pour étudier des moyens non conventionnels de la traite matériau PrP Res, qui pourrait contribuer à la propagation et l&#39;impact global de la matière PrP Res.

<table><tbody><tr><td>RML Souche Chandler souris adaptée à la tremblante</td><td>Rocky Mountain Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RC57BL/6 souris</td><td>Hilltop Lab Animals Corbeaux</td><td></td><td></td></tr><tr><td>américains capturés</td><td></td><td></td><td>à l’état sauvage</td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate</td><td>Invitrogen</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Misonix</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Proteinase-K solution</td><td>Roche</td><td>3115887001</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de chargement</td><td>Invitrogen</td><td>NP0007 et 0009</td><td></td></tr><tr><td>Bis-tris SDS PAGE 12 % gel</td><td>Invitrogen</td><td>NP0342</td><td></td></tr><tr><td>Immobilon Membrane PVDF</td><td>Millipore</td><td>1SEQ00010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Bullet mélangeur homogénéisateur</td><td>Braintree Scientific</td><td>BBX24B</td><td></td></tr><tr><td>2,3 mm billes de zircone/silice</td><td>BioSpec Products</td><td>11079125Z</td><td></td></tr><tr><td>Bar224 anticorps monoclonal anti-PrP</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009035</td><td></td></tr><tr><td>Superblock</td><td>Thermo Scientific</td><td>37517</td><td></td></tr><tr><td>substrat chimiluminescent</td><td>Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>G-box système de documentation sur gel</td><td>Syngene</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

procédures d&#39;identification des prions infectieux après passage dans le système digestif d&#39;une espèce aviaire

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

Prion infectieux (PrP Res) matériau est probablement la cause d&#39;accidents mortels, neurodégénérative encéphalopathie spongiforme transmissible (EST) maladies 1. Transmission de maladies de l&#39;EST, telles que la maladie du dépérissement chronique (MDC), est présumé être d&#39;un animal à 2,3 ainsi que de sources environnementales 4-6. Charognards et carnivores ont un potentiel de translocation matériau PrP Res par la consommation et l&#39;excrétion de charogne CWD contaminés. Des travaux récents ont documenté le passage du matériau PrP Res par le système digestif des corneilles d&#39;Amérique (Corvus brachyrhynchos), un trésor commun nord-américain 7. Nous décrivons les procédures utilisées pour documenter le passage du matériau PrP Res par des corneilles d&#39;Amérique. Crows ont été gavés avec RML-souche de tremblante adaptée à la souris et leurs excréments ont été recueillis 4 h après gavage. excréments de corneille ont ensuite été regroupées et injectées par voie intrapéritonéale àSouris C57BL / 6. Les souris ont été suivies quotidiennement jusqu&#39;à ce qu&#39;ils ont exprimé des signes cliniques de la tremblante de la souris et ont ensuite été euthanasiés. Souris asymptomatiques ont été suivis pendant 365 jours après inoculation. Western blot a été effectuée pour confirmer le statut de la maladie. Les résultats ont révélé que les prions infectieux restent après avoir traversé le système digestif des corbeaux et sont présents dans les fèces, ce qui provoque la maladie chez des souris d&#39;essai.

Les procédures utilisées démontrent que le système digestif des corbeaux n'élimine pas PrP Res infectivité 4 h après gavage oral de la tremblante homogénat de cerveau 7. Tous les vingt corbeaux qui ont été gavés avec du matériel PrP Res été transmises matériau PrP Res par les fèces de souris. Souris malades ont été identifiés par la manifestation de signes cliniques de la tremblante à la souris et la confirmation de la maladie a été complétée par une analyse Western blot. ...

Les charognards ont le potentiel de translocation infectieuses transmissibles prions de l&#39;encéphalopathie spongiforme dans leurs excréments dans les zones exemptes de la maladie. Nous détail les méthodes utilisées pour déterminer si prions de la tremblante adaptée à la souris restent infectieux après le passage à travers le tractus digestif des corneilles d&#39;Amérique (Corvus brachyrhynchos), une consommation courante des animaux morts.

Procédures d&#39;identification des prions infectieux Après passage dans le système digestif d&#39;une espèce aviaire

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

L’objectif global de cette procédure est de documenter le passage de matériel infectieux PreOn dans le système digestif de la Corneille d’Amérique. Pour ce faire, il faut d’abord jauger les corbeaux avec du matériel PreOn infectieux. La deuxième étape consiste à collecter les excréments de corbeau pendant quatre heures après le gavage et à les préparer pour l’injection dans les souris.Ensuite, les souris sont inoculées par voie intrapéritonéale avec un millilitre d’homogénat fécal de corbeau. La dernière étape consiste à surveiller les souris quotidiennement jusqu’à ce qu’elles expriment des signes cliniques de grattage de souris. En fin de compte, l’analyse par transfert Western est utilisée pour confirmer la présence de PreOn infectieux dans le modèle murin et vérifier la transmission de la maladie.L’idée que les corbeaux pouvaient transporter. La MDC nous est arrivée un jour d’hiver où, après nous être rendus à une installation de wapitis en captivité où nous faisions des recherches et avons vu des wapitis tués sur la route se nourrir par des corbeaux, et plus tard ce jour-là, des corbeaux sortant du ciel de nulle part, atterrissant dans ces mangeoires, se nourrissant juste à cô

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Nous décrivons ici un nouveau test pour la surveillance et le trafic de l'absorption du prion par les cellules immunitaires, immédiatement après l'inoculation intrapéritonéale en purifiant et en fluorescence étiquetage tiges prion agrégés à partir de tissu cérébral infecté, puis le suivi de leur absorption et le mouvement à partir du site d'injection et la caractérisation des cellules médiation de ces événements.

Surveillance des cellules immunitaires trafic fluorescent Rods Prion heures après l&#39;infection par voie intrapéritonéale

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Diagnostic rapide du virus de la grippe aviaire chez les oiseaux sauvages: L&#39;utilisation d&#39;un portable RT-PCR et lyophilisés réactifs dans le domaine

Une méthode pour préserver, de détecter et de séquence d'ARN à partir des virus grippaux aviaires a été validé et étendu en utilisant des échantillons de fèces naturelle des oiseaux. Cette technique élimine la nécessité de maintenir une chaîne du froid et la manipulation des virus infectieux et peuvent être appliquées dans un de 96 puits à haut débit de configuration.

Surveillance de l&#39;influenza aviaire aux ALE Cartes: méthodes de terrain, la biosécurité et les questions de transport Résolu

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

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Détection de protéines prions anormales dans le tissu cérébral à l’aide de l’immunohistochimie

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Protocole d’examen clinique pour détecter la tremblante atypique et classique chez les moutons

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Évaluation de l&#39;encéphalopathie spongiforme transmissible barrières d&#39;espèces avec une<em&gt; In Vitro</em&gt; Test Prion de conversion des protéines

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L’immunomarquage de la protéine prion anormale à l’aide de protocoles d’immunohistochimie nécessite des méthodologies spécifiques de préparation d’échantillons et d’anticorps anti-PrP. Le présent protocole décrit les étapes clés du démasquage des épitopes pour assurer un immunomarquage approprié de la PrP et minimiser la coloration de fond non spécifique. De plus, cette approche tient compte des mesures de biosécurité lors de la réalisation d’études immunohistochimiques avec les tissus infectés...

Détection de la protéine prion anormale par immunohistochimie

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Test par balayage du laboratoire de sécurité des prions

Découvrez comment identifier les prions infectieux après leur passage dans le système digestif des corbeaux d'Amérique. Cette méthode permet d'évaluer la transmission des encéphalopathies spongiformes transmissibles chez les animaux sauvages.

Procédures d'identification des prions infectieux Après passage dans le système digestif d'une espèce aviaire

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