إنشاء نموذج يسببها جراحيا في الفئران المعنية بالتحقيق في دور وقائي من Progranulin في هشاشة العظام

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء نموذج DMM في الفئران ودراسة ظهور هشاشة العظام بعد جراحة DMM. بعد تحضير ، يتم إجراء شق طولي واحد من الرضفة الإنسية لفضح مفصل الركبة. بعد ذلك ، يتم تشريح كبسولة مفصل الركبة وإجراء خلع وسطي للركبة.

الخطوة الأخيرة هي قطع الرباط الظنبوب الغضروفي الإنسي وخياطة الركبة. في النهاية ، يتم استخدام التحليلات النسيجية المرضية لإظهار تدمير بنية المفصل بالإضافة إلى فقدان البروتيو والجليكان وهشاشة العظام. يتم تقييم الخطورة باستخدام درجات MANKIN من الزعفران وتلوين O.

بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة ما لم يروا الجراحة التي أجريت على الفئران. العرض المرئي لهذه الطريقة أمر بالغ الأهمية. نظرا لأن الخطوات التفصيلية يصعب تعلمها ويتم إجراؤها الآن تحت المجهر ، يجب التعرف بوضوح على كل بنية من مفصل الركبة.

لإنشاء هذا النموذج ، استعد لزعزعة استقرار الغضروف المفصلي الإنسي أو جراحة DMM عن طريق تخدير ذكر يبلغ من العمر ثمانية إلى 12 أسبوعا من C 57 أسود ستة فأر يزن حوالي 25 جراما. ثم ضع مرهم العين على العينين بعد حلق المنطقة المحيطة بالركبة. عقم الموقع بالبيتادين والكحول ثلاث مرات وقم بلف المنطقة جراحيا.

ابدأ الجراحة بعمل شق طولي قطري للرضفة الإنسي لكشف مفصل الركبة. ثم قم بقص كبسولة مفصل الركبة بعناية طوليا من خلال شق الرضفة الإنسي حتى ينكشف عظم الفخذ. بعد ذلك ، استخدم الملقط لفك هيكل الكبسولة عن طريق جعل القطع أوسع وأعمق.

الإمساك بالجزء البعيد من المخلب الخلفي برفق بيد واحدة. استخدم الملقط لإجراء خلع جانبي في رباط الرضفة والرضفة. يجب ألا يتطلب الخلع الكثير من القوة إذا تم قطع كبسولة المفصل بالتنقيط طوليا من محلول ملحي معقم بالتنقيط على سطح الغضروف المفصلي طوال الفترة المتبقية من الجراحة لمنعها من الجفاف.

الآن ، حدد الغضروف المفصلي الإنسي ، الذي يقع بين اللقمة الإنسية لعظم الفخذ والهضبة الإنسية للظنبوب. إذا لزم الأمر ، اسحب جانبا الوسادة الدهنية التي تغطي الرباط الظنبوبي الغضروفي لفضح الرباط الظنبوب الغضروي المفصلي ، الذي يربط الجانب الجانبي من الغضروف المفصلي الإنسي بالبروز بين اللقمة في الساق. أمسك المخلب الخلفي برفق بيد واحدة.

قم بإجراء جراحة DMM عن طريق قطع الرباط الظنبوب الإنسي بعناية بشفرة جراحية رقم 10. تأكد من عدم إصابة الغضروف المفصلي أو الأربطة الأخرى. بعد ذلك ، أغلق كبسولة مفصل الركبة بخياطة قابلة للامتصاص بستة قطع وقم بإغلاق الجلد بستة خياطة حريرية.

لتقليل آلام ما بعد الجراحة ، أعط حقنة تحت الجلد بمقدار 10 ملليغرام لكل كيلوغرام من ميلوكسيكام وأعد الفأر إلى قفصه بعد زوال التخدير. بعد عدة أسابيع من الجراحة ، ضحي بالفأر وقم بإزالة كلا الطرفين الخلفيين بشفرة رقم 10. ثم قم بتشريح الجلد والعضلات بعناية من الطرف الخلفي وقم بإصلاح العينة في 4٪ ألدهيد Paraform لمدة ثلاثة أيام في درجة حرارة الغرفة.

بعد ثلاثة أيام ، قم بإزالة الألدهيد الطلائلي وتنظيف العينات في الماء المقطر لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك ، قم بإزالة الكلس من العينات في EDTA عند أربع درجات مئوية لمدة أسبوعين. بعد أسبوعين ، قم بتجفيف العينات في تدرج الإيثانول.

بعد إزالة الإيثانول النهائي ، ضع العينات في ثلاثة حمامات لين لمدة ساعة واحدة لكل منها. بعد ذلك ، قم بتضمين العينات في قالب البارافين. استخدم ميكروتوم دوار لعمل خمسة أقسام ميكرون وجمع الأقسام على شريحة زجاجية.

استمر في قطع الأقسام السهمية التسلسلية من مركز اللقمة الجانبية إلى مركز اللقمة الإنسية لأداء تلطيخ الزعفران والصرف. أولا de parize الشرائح في سيلين لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. كرر حمام سيلين مرتين.

ثم قم بترطيب الشرائح في تدرج الإيثانول ينتهي بالماء المقطر. ثم ضع الشرائح من خلال محلول الهيماتين الحديدي من Weigert ، ومحلول أخضر سريع بنسبة 0.05٪ ، ومحلول حمض الأسيتيك بنسبة 1٪ ، ومحلول الزعفران و O بنسبة 0.1٪. الآن قم بتركيب الشرائح باستخدام وسيط راتنجي ، ودرجة الشرائح الملطخة بالزعفران و O بناء على فقدان لون الجليكان الأحمر في الغضروف وعلى النسبة المئوية لتدمير بنية الغضروف.

ثم قم بإجراء التحليل الإحصائي باستخدام نظام التسجيل النسيجي O-A-R-S-I. تظهر هذه الصور مفاصل الركبة مع تلطيخ الزعفران و O في النوع البري والفئران بالضربة القاضية PG rrn بعد ثمانية أسابيع من عملية زائفة أو جراحة DMM. لا يوجد تنكس واضح للغضروف في أي من الأنماط الجينية بعد عملية زائفة.

ومع ذلك ، بعد ثمانية أسابيع من عملية DMM ، كان هناك فقدان للجليكان البروتيو كما هو موضح من فقدان اللون الأحمر في الغضروف ، وكذلك تدمير بنية الغضروف كما هو موضح في الأسهم الحمراء في كل من الفئران من النوع البري و PGRN بالضربة القاضية مما يشير إلى التحريض الناجح للنمط الظاهري لالتهاب المفاصل العظمي. بعد جراحة DMM ، مقارنة درجات هشاشة العظام بين الفئران القاضية من النوع البري و PGRN. تظهر جراحة DMM التالية درجة أعلى بكثير في الفئران بالضربة القاضية مما يدل على أن فقدان PGRN أدى إلى نمط ظاهري أكثر حدة لهشاشة العظام كسيد.

يمكن القيام بهذه التقنية في غضون 10 إلى 15 دقيقة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء عملية DMM في الكتلة.