Ultrasound Imaging guidée injection intracardiaque de développer un modèle de souris de cancer du sein métastases cérébrales Suivi par IRM longitudinale

L'objectif général de cette procédure est d'utiliser une échoguidance pour établir un modèle murin de métastases cérébrales du cancer du sein, qui pourra ensuite être surveillé par IRM. Cela est réalisé en collectant des cellules cancéreuses du sein à tropisme cérébral et en les injectant dans le ventricule gauche. À l'aide de l'échoguidance, le développement tumoral intracrânien est ensuite suivi.

L'utilisation de l'IRM et la confirmation des métastases par coloration hématoxyline-éosine permettent finalement une injection précise guidée par imagerie, ce qui peut augmenter significativement la réussite du suivi, de la formation et du développement des métastases cérébrales du cancer du sein. L'IRM longitudinale permet un suivi non invasif de la formation et du développement du cancer du sein.

Tous les protocoles animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux du Centre médical de l'Université du Texas Southwestern. Pour ce protocole, préparez des cellules M-D-A-M-B 2 31 B-R-G-F-P cultivées dans un milieu DMEM contenant 10 %FBS, 1 %glutamine et 1 %pénicilline. La streptomycine surveille toujours l'état des cellules et remplacez le milieu tous les deux à trois jours. Lorsqu'une confluence de 80 % est atteinte, détachez les cellules à l'aide de trypsine et récupérez-les.

Commencez par éliminer complètement le milieu ancien à l’aide d’une pipette à vide. Ensuite, ajoutez cinq millilitres de PBS pour laver doucement les cellules jusqu’à ce que toutes soient recouvertes de PBS. Puis, retirez le liquide de lavage.

Ensuite, ajoutez 1,5 millilitre de trypsine dans la boîte. Inclinez doucement la boîte pour vous assurer que toutes les cellules soient recouvertes de trypsine. Replacez la boîte dans l’incubateur à cellules à 37 degrés Celsius.

Attendre une minute et observer les cellules au microscope. Si elles sont rondes et flottantes, elles se sont détachées. Ajouter trois millilitres de milieu pour arrêter la digestion et transférer le mélange cellulaire dans un tube de centrifugation à l’aide d’une pipette.

Centrifuger le mélange à 1 160 ×g pendant cinq minutes. Ensuite, retirer soigneusement le milieu à l’aide d’une pipette à vide. Puis, resuspendre délicatement les cellules dans cinq millilitres de milieu sans sérum à l’aide d’une pipette, jusqu’à ce qu’aucun culot cellulaire évident ne soit visible et que la solution paraisse homogène à 50 microlitres du mélange cellulaire.

Ajouter 50 microlitres de bleu de trypan une fois bien mélangé. Ajouter des aliquotes de 10 microlitres à plusieurs lamelles de numération cellulaire. Ensuite, compter les cellules à partir des valeurs du compteur de cellules.

Calculez et utilisez la moyenne de tous les dénombrements par once. Préparez maintenant une suspension cellulaire plus précise. Centrifugez-les à nouveau et resuspendez-les à raison de 175 000 cellules par 100 microlitres de milieu sans sérum.

Ensuite, conserver les cellules sur de la glace pour l'injection intracardiaque. Pour ce protocole, utiliser des souris femelles BC nude âgées de six à huit semaines. Se connecter au système d'imagerie et initialiser le transducteur.

7 0 4 à 40 mégahertz. Commencez une nouvelle étude et remplissez les invites d'information en conséquence. Ensuite, anesthésiez la souris et administrez l'anesthésique au moyen d'un cône nasal.

Pendant l'injection guidée, régler la température de la table d'imagerie à 37 degrés Celsius et fixer la souris sur la table en position supine. Maintenir le gel échographique à 37 degrés Celsius avant l'imagerie et en appliquer sur la poitrine de la souris. Placer maintenant le transducteur dans son support et l'abaisser à la profondeur d'imagerie souhaitée.

Ensuite, déplacez la platine jusqu'à ce que le ventricule gauche soit identifié en utilisant l'aorte ascendante comme repère, puis verrouillez la platine à l'endroit où la vue est la plus nette. Prélevez maintenant 100 microlitres du mélange cellulaire refroidi dans une seringue d'un millilitre équipée d'une aiguille de calibre 22. Fixez la seringue chargée sur le support de seringue.

Ensuite, déplacez la seringue vers la poitrine. Avant d'entrer dans la souris, déplacez-la soigneusement de côté jusqu'à ce que la pointe de l'aiguille se trouve dans le champ d'imagerie. Ajustez la hauteur et l'angle de l'aiguille pour viser le ventricule gauche, puis, une fois en position, pénétrez rapidement l'aiguille à travers les couches cutanée et musculaire jusqu'au ventricule gauche.

Sous la guidance de l'image échographique, un signe d'insertion réussie dans le ventricule gauche est le reflux de sang artériel rouge vif dans la seringue. Injectez ensuite lentement le mélange cellulaire une fois l'insertion terminée, retirez l'aiguille, soulevez le transducteur et nettoyez le gel échographique avec une compresse humide. Puis libérez l'animal du ruban adhésif et transférez-le dans une cage propre équipée d'un tapis chauffant préalablement réchauffé.

Observer la souris jusqu'à ce qu'elle récupère complètement, puis la surveiller quotidiennement pendant quelques jours. En utilisant une résolution de 78 micromètres carrés en mode standard, des lésions hyperintenses en IRM peuvent être identifiées à un diamètre de 310 micromètres. Étant donné que les métastases dans cette étude étaient très petites et que la nécrose et l'œdème étaient minimes, la lésion hyperintense sur les images pondérées en T2 représentait fidèlement la tumeur.

Les études longitudinales par IRM de masse permettent une évaluation in vivo non invasive de la croissance tumorale. L'IRM à haute résolution a permis de détecter plusieurs petites lésions trois semaines après l'injection intracardiaque ; à la quatrième semaine, toutes les lésions observées lors de l'examen précédent avaient augmenté de taille. De nouvelles lésions sont apparues sur les images pondérées en T2.

La coloration H et E a révélé des lésions métastatiques diffuses ou la coloration H et E a mis en évidence des lésions métastatiques de type en grappes. Des vaisseaux élargis étaient souvent observés autour de la tumeur, indiquant qu'une angiogenèse non par bourgeonnement était en cours. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière réaliser une injection guidée par imagerie échographique dans le ventricule gauche du cœur d'une souris.