Expérimentation

Le but général de cette procédure est de fournir un test simple de labyrinthe en Y afin d'évaluer l'olfaction chez Drosophila melanogaster. Cette approche consiste tout d'abord à priver les mouches de nourriture pendant 16 à 18 heures, afin de les motiver à explorer de nouveaux environnements contenant des stimuli volatils. La deuxième étape de la procédure consiste à monter le dispositif en labyrinthe en Y contenant des sources d'odeurs déposées sur du papier filtre, telles qu'une solution d'acide acétique dans un solvant comparée au solvant seul.

La troisième étape consiste à introduire rapidement et délicatement les mouches dans le tube de chargement. Après plusieurs heures, la dernière étape consiste à noter la position des mouches dans le labyrinthe. En fin de compte, les résultats peuvent révéler une réponse à l'odeur à partir des données obtenues avec le labyrinthe en Y.

Nous avons eu pour la première fois l'idée de cette méthode lorsque nous avons souhaité disposer d'une technique simple et peu coûteuse pour tester la réponse olfactive des phylums. Un avantage de cette technique par rapport aux autres options est qu'elle permet aux mouches de prendre une décision sans subir un stress excessif. La procédure sera démontrée par Megan Simon, étudiante en doctorat de mon laboratoire. Pour ce protocole, préparez une lignée de mouches ISOinisée présentant des phénotypes comportementaux stables et marqués. Toute souche de ce type peut servir de témoin de référence pour le test olfactif ; pour chaque souche génétique destinée à être utilisée dans l'expérience, effectuez un croisement répété avec la souche de référence sur cinq générations.

Accouplez des femelles d'une souche expérimentale unique à plusieurs mâles isogéniques pour chaque croisement récurrent. Pour les expériences olfactives, élevez les drosophiles sur un milieu standard à base de farine de maïs contenant un antibiotique, sous un cycle lumineux 1212, et à 25 degrés Celsius.

Les expériences doivent toujours être réalisées à 25 degrés Celsius et sous une lumière dans le spectre rouge éloigné, invisible pour la drosophile. Il doit également être possible d'aérer complètement la pièce entre les expériences avant de réaliser le test le lendemain matin. À la fin de la journée, transférez des cohortes de 10 à 20 lignées expérimentales dans des flacons en verre, l'humidité étant fournie par une serviette humide.

Les mouches doivent être testées entre 16 et 18 heures, sinon elles pourraient mourir de déshydratation ou de faim le jour suivant. Assemblez le labyrinthe en Y. Commencez par relier le connecteur en forme de Y à deux fioles en verre à l’aide de connecteurs en mousse munis d’embouts de pipettes coupés, qui forment des conduits ; leur forme conique crée des passages à sens unique.

La troisième branche du Y est reliée à un tube de chargement fabriqué à partir de la partie large d'une pointe de pipette et permet le passage du flacon de chargement au point de choix du labyrinthe. Au-delà de chaque tunnel convergent se trouve un flacon en verre, dont l'un doit être chargé avec une charge d'aromate. Ces charges consistent en des bolus de 40 microlitres imprégnés dans des carrés de papier absorbant de 28 millimètres de côté.

Lequel des deux contient l'odeur doit alterner aléatoirement pour effectuer d'abord le test. Refroidissez. Les mouches sur de la glace brièvement, afin que leur activité ralentisse. Ceci doit se faire sous une lumière rouge éloignée provenant d'ampoules DEL, et à 25 degrés Celsius, déposez délicatement le groupe de mouches dans le flacon de chargement et chargez le labyrinthe en Y avec les mouches en test.

Ne pas utiliser d'anesthésie gazeuse. Il est essentiel de transférer les mouches dans le tube de chargement rapidement et délicatement. C'est en réalité l'étape la plus délicate de cette expérience, car les mouches doivent se réveiller rapidement avant la diffusion des autres dans la masse en Y.

Les mouches doivent pouvoir explorer le labyrinthe pendant 24 heures, afin qu'un nombre maximal de mouches migre vers l'un ou l'autre des flacons en verre. Le nombre de mouches présentes dans les différents tubes sert à calculer l'indice olfactif. Des méthodes statistiques classiques doivent être appliquées à cette valeur obtenue à partir du comportement de jusqu'à 10 mouches.

Si des cohortes de 10 mouches ne fournissent pas des résultats cohérents, les essais peuvent être réalisés avec des cohortes de 20 mouches. Pour nettoyer les composants du labyrinthe, faites-les tremper démontés dans du RBS 35 MD toute la nuit. Rincez ensuite à l’eau du robinet et effectuez un dernier rinçage à l’eau désionisée avant de les faire sécher à l’air.

Réponses standard à un odorant. À l’aide du labyrinthe en Y, on observe une attraction, une indifférence ou une évitement. Par exemple, les mouches Canton-S évitent fortement l’acide acétique à 10 %, alors qu’elles n’évitent pas l’acide phéno acétique à 10 %.

Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de garder à l'esprit que ce test d'ondes constitue un environnement artificiel pour les mouches. Cette procédure pouvant être suivie comme une méthode, des expériences en arène ou des tests internes peuvent être réalisés afin de confirmer les réponses olfactives des mouches dans différentes conditions. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de tester simplement les réponses olfactives des *filano gaste* à l'aide du test SW.