Un modèle murin d'ischémie myocardique-reperfusion par ligature de l'artère interventriculaire antérieure

L’objectif global de cette procédure est d’obstruer le flux sanguin dans une partie du cœur pour produire une lésion d’ischémie et de reperfusion. Pour simuler un infarctus du myocarde, cela se fait en effectuant d’abord une thoracotomie pour exposer l’artère descendante antérieure gauche ou LAD. Dans la deuxième étape, une suture est attachée autour du DAL pour arrêter la circulation sanguine.

Ensuite, après une période ischémique, la suture est retirée et l’artère est reperfusée avec du sang. Dans la dernière étape, l’incision chirurgicale est fermée. En fin de compte, la gravité de l’infarctus du myocarde peut être mesurée par l’analyse des taux sériques de biomarqueurs et de l’histologie du tissu cardiaque.

Le principal avantage de notre méthode existante pour simuler l’infection malardi est qu’il est facile de trouver la LED et de mettre la suture dans la bonne position. Eh bien, la démonstration visuelle est si importante parce que les manipulations sont très difficiles à apprendre, et les descriptions écrites ne transmettent pas la complexité de ces manipulations. Il s’agit d’une procédure assez difficile et, en général, les gens sont inexpérimentés avec elle et auraient du mal à identifier la LED ou à contrôler le saignement s’il commence pendant la procédure.

Eh bien, l’une des implications est que cette approche peut être utilisée pour tester l’efficacité de composés thérapeutiques dans le traitement de l’infarcs du myocarde. Parce qu’un modèle animal doit être utilisé dans ces approches pour pouvoir le mesurer efficacement, je commence par coller une longueur de deux soies chaudes, suturer d’au moins 10 centimètres de long sur une plate-forme chirurgicale. Ensuite, enroulez la suture autour des incisives supérieures avant de la souris anesthésiée, tirez la souris tendue, puis collez la queue sur la plate-forme et les pattes sur les côtés du corps de l’animal.

Après avoir nettoyé les sites chirurgicaux rasés avec de la bétadine et de l’alcool, placez la plate-forme avec la tête de souris pointant vers l’extrémité du banc et coupez une incision cervicale médiane de 0,5 centimètre dans la peau. Séparez les lobes de la glande thyroïde à leur niveau pour exposer le muscle Sterno OIDs où la trachée peut être vue sous le muscle. Ensuite, retirez l’aiguille intérieure d’un trocart de calibre 18, puis utilisez une main pour déplacer légèrement la langue de la souris vers le haut avec une paire de pinces incurvées.

Trouvez la trachée à travers l’incision cutanée cervicale, puis utilisez l’autre main pour insérer doucement le tube d’intubation du trocart jusqu’à ce qu’il soit visible à l’intérieur de la trachée. Maintenant, réglez un respirateur pour animal évacuant 2 % d’isoflurane dans l’oxygène à un débit de 0,4 litre par minute pour fournir une ventilation artificielle à l’animal, à l’aide d’un connecteur en forme de Y modifié pour fixer le tube d’intubation au ventilateur, le positionnement correct du tube trachéal peut être confirmé en jugeant de l’expansion thoracique symétrique. Retirez le ruban adhésif sur la queue et tournez doucement la souris pour la placer en position de décubitus latéral droit pour l’intervention chirurgicale ultérieure.

Ensuite, fixez à nouveau la queue et les pattes à la plate-forme avec du ruban adhésif pour effectuer la thoracotomie. Tout d’abord, faites une incision oblique d’environ un centimètre de long et de deux millimètres du bord sternal gauche dans la direction de l’endroit où la patte avant gauche rencontre le corps. Environ un à deux millimètres en dessous de l’endroit où la patte et le corps se rejoignent.

La veine thoracique superficielle se trouve près de ce site, et l’incision doit être faite de manière à ce que l’extrémité latérale de l’incision monte jusqu’à la veine, mais ne la coupe pas. Coupez le muscle thoracique pour exposer les côtes en dessous. Prendre soin d’éviter de blesser accidentellement le navire.

Ouvrez ensuite la cavité thoracique avec une incision de six à huit millimètres dans le troisième espace intercostal, à un minimum de deux millimètres du bord sternal où se trouve l’artère thoracique interne, en prenant soin de ne pas endommager l’artère. Ensuite, insérez des écarteurs de poitrine faits maison dans l’incision et tirez doucement vers l’arrière pour ouvrir l’incision jusqu’à ce qu’elle atteigne une largeur de huit à 10 millimètres. En prenant soin d’éviter le poumon, le cœur devrait maintenant être partiellement visible sous les poumons.

À l’aide de la pince incurvée, soulevez doucement le péricarde, séparez-le, puis faites glisser le tissu derrière l’écarteur. Utilisez maintenant un endoscope de dissection pour localiser l’artère coronaire descendante antérieure gauche, ou DAL, qui descend au milieu de la paroi cardiaque à partir de l’apex du cœur jusqu’au ventricule gauche et apparaît rouge vif et pulsant fortement à la surface du cœur. La veine cardiaque est parfois confondue avec le DAL, mais un éclairage adéquat peut aider à distinguer les deux vaisseaux.

Si l’éclairage est trop brillant, il peut être difficile de visualiser les différences de couleur entre les récipients. Ensuite, placez un fragment de coton d’un à deux millimètres entre l’oreillette gauche et le ventricule gauche. Pour soulever l’oreillette gauche et aider à exposer le LAD et à clarifier sa position, utilisez le tronc pulmonaire pour identifier l’oracle gauche afin de maintenir le cœur en place et simplifier le ligaturage, appliquez doucement une pression immédiatement en dessous du point de ligature prévu à environ deux millimètres plus bas que la pointe de l’Oracle gauche.

Ensuite, utilisez une aiguille effilée pour passer une suture en soie de six ans sous le DAL, en prenant soin de ne pas pénétrer dans la chambre du ventricule gauche ou d’endommager le DAL. Faites un double nœud lâche avec la suture, en laissant une boucle de deux à trois millimètres de diamètre. Ensuite, placez un morceau de tube PE 10 de deux à trois millimètres de long dans la boucle et serrez la boucle autour de l’artère et du tube.

Fixez la boucle en faisant un nœud coulant supplémentaire, en prenant soin de ne pas endommager la paroi du ventricule. Confirmez l’occlusion du DAL en vérifiant l’apparition d’une pâleur ou d’une couleur dans la paroi antérieure du ventricule gauche, qui devrait apparaître quelques secondes après la ligature. Ensuite, retirez l’écarteur et pincez la peau avec une pince bulldog pour fermer temporairement la plaie après la période d’ischémie, retirez la pince bulldog et insérez les écarteurs thoraciques pour exposer la ligature.

Défaites ensuite le nœud et retirez la tubulure PE 10 Après 15 à 20 secondes, confirmez la reperfusion en observant un retour de la couleur rouge rose dans la paroi antérieure du ventricule gauche. Enfin, pour fermer la cavité thoracique, l’incision se referme dans le troisième espace intercostal avec quatre sutures en soie. Prendre soin de garder les poumons à l’écart de la suture tout en faisant les nœuds de suture.

Appliquez une légère pression sur la poitrine avec le porte-aiguille pour minimiser l’air qui pourrait être emprisonné dans la cavité thoracique. Ensuite, utilisez quatre sutures continues en soie aut pour fermer toutes les couches musculaires de la poitrine, puis utilisez des sutures en nylon pour fermer la peau avec une autre suture continue. Lorsque la suture est terminée, cessez l’écoulement de l’isoflurane pendant que l’oxygène continue de circuler.

Ensuite, après avoir surveillé attentivement l’animal jusqu’à ce qu’il reprenne une respiration normale, extubez la souris en retirant lentement le tube pour éviter l’aspiration de toute cavité buccale. L’application de sécrétions de colorant bleu en jachère permet de résoudre la zone du cœur où se produit l’occlusion du LAD, tandis que les cœurs qui ne sont pas colorés avec un colorant bleu ne montrent que la zone d’infarctus après 24 heures d’infarctus de reperfusion. Les zones blanches doivent être distinguées des zones à risque en rouge et des zones non à risque.

Chez le bleu, la taille de l’infarctus dépend de la durée de l’ischémie. Il est important de noter que les niveaux oculaires de troponine cardiaque sont faibles chez les animaux opérés fictivement qui subissent toutes les interventions chirurgicales, à l’exception de l’ischémie et de la reperfusion, par rapport aux animaux qui subissent un infarctus du myocarde. Cela indique que la chirurgie simulée ne produit pas de pathologie cardiaque significative tandis que la lésion d’ischémie reperfusion est suffisante pour produire une élévation de ce biomarqueur largement utilisé pour l’infarctus du myocarde.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de mener une intervention chirurgicale survivante chez les souris pour simuler l’infection malardi Eh bien, après cette procédure, d’autres méthodes telles que l’histologie, la coloration du cœur peuvent être effectuées pour déterminer la taille de l’infarctus et l’efficacité des différentes thérapies. Il est important de se rappeler que, comme il s’agit d’une procédure invasive, vous devez gérer correctement la douleur et la détresse, et il est important de gérer cette douleur en fournissant des analgésiques conformément aux directives locales, aux directives de votre établissement et aux directives nationales. Une chose importante à retenir pour cette expérience est de la concevoir de manière à répondre à votre question spécifique.

Par exemple, si vous devez avoir un infarctus sévère, vous devrez peut-être prolonger la période ischémique pendant la chirurgie.