L'évaluation de la fonction vasculaire chez les patients atteints de maladie rénale chronique

L’objectif global de l’expérience suivante est d’évaluer la fonction vasculaire Chez les patients atteints d’insuffisance rénale chronique, cela est réalisé en collectant d’abord des cellules endothéliales vasculaires chez les patients. La vitesse de l’onde de pouls aortique est ensuite évaluée pour mesurer la rigidité des grandes artères élastiques. Ensuite, la dilatation médiée par le flux de l’artère brachiale est mesurée afin d’évaluer la fonction endothéliale vasculaire.

En fin de compte, des résultats peuvent être obtenus qui caractérisent la fonction endothéliale vasculaire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine vasculaire, telles que ce qui se passe au niveau cellulaire pour l’expression de diverses protéines. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal car une pratique et une formation approfondies sont nécessaires pour maîtriser l’imagerie par échographie.

Lonnie Perino, un assistant de recherche de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Pour commencer, préparez le site avec un antiseptique topique. Ensuite, placez des rideaux fenêtrés stériles sur le site.

Une infirmière ou un médecin qualifié doit placer une intraveineuse et fixer un adaptateur de verrouillage de l’hep. Placez deux fils en J sur les rideaux pour dérouler la forme en J. Tirez l’arc du J sur les deux fils.

Une fois déroulé, débouchez le verrou et introduisez le JWI dans la veine sur environ huit centimètres. Poussez le fil d’avant en arrière plusieurs fois avant de le retirer pour éviter d’accumuler trop de sang sur le fil. Ensuite, utilisez des coupe-fils pour couper les fils afin qu’ils s’insèrent dans un tube conique de 50 millilitres contenant environ 30 millilitres de tampon de dissociation.

Répétez ces étapes pour le deuxième fil lorsque le prélèvement de l’échantillon est terminé. Retournez au laboratoire humide. Fixez les fils avec une paire de pinces et maintenez-les à l’intérieur du tube mais au-dessus de la solution pendant 10 minutes.

Utilisez une pipette motorisée pour rincer les fils avec un tampon de dissociation du tube. Relâchez le tampon de manière à ce qu’il descende sur toute la longueur des fils et secouez l’excès de liquide dans le tube. Retirez les fils et centrifugez l’échantillon en granulés.

Récupérer les échantillons et remettre en suspension la pastille dans du PBS avant la centrifugation. Pendant cinq minutes supplémentaires, utilisez une pointe de pipette à l’extrémité d’un tuyau d’aspiration pour laisser environ deux millilitres dans le tube. Aspirez le reste sans déranger la pastille.

Remettez la pastille en suspension et pipetez l’échantillon uniformément dans les zones ovales des huit lames précédemment étiquetées. Placez les lames dans l’incubateur à 37 degrés Celsius pendant cinq heures avant de les stocker à moins 80 degrés Celsius jusqu’à ce qu’elles soient prêtes à commencer l’analyse. Le sujet doit enfiler un short jetable et s’allonger sur le dos dans une pièce calme, sombre et climatisée.

Lorsque vous êtes prêt à commencer, positionnez les électrodes pour l’échographie et notre appareil de rigidité artérielle. Ensuite, placez le brassard de tensiomètre sur le sujet. Commencez les lectures de tension artérielle après 20 minutes, répétez les lectures jusqu’à ce que les mesures soient à moins de cinq millimètres du mercure.

Reposez-vous deux minutes entre chaque lecture et effectuez au moins trois. Ensuite, palpez le pouls de l’artère brachiale et placez le sonomètre pour enregistrer les formes d’ondes brachiales. Répétez l’opération pour les artères radiale, fémorale et carotide.

Mesurez la distance entre chacun de ces sites et l’encoche super sternale à l’aide d’un ruban à mesurer pour les artères brachiale, radiale et carotide et d’une règle coutumière pour le fémoral. Ensuite, calculez la vitesse de l’onde de pouls carotidienne, brachiale, carotidienne, radiale et fémorale carotidienne à l’aide d’un logiciel spécialisé. Placez le brassard de tensiomètre de l’avant-bras juste distal par rapport au processus de réon.

Réglez le logiciel vasculaire en mode de déclenchement et enregistrez au moins 10 cycles cardiaques de l’artère brachiale de base, des images échographiques et des mesures de la vitesse du flux sanguin. Un bras mécanique peut être utilisé pour stabiliser la sonde à ultrasons si vous le souhaitez. Ensuite, gonflez le brassard de tensiomètre de l’avant-bras à 250 millimètres de mercure.

Et lancez une minuterie. Demandez au participant de rester très immobile. Commencez à enregistrer les vitesses lorsque la minuterie indique quatre minutes et 45 secondes de déclenchement.

Relâchez le brassard à cinq minutes et changez l’échographie pour enregistrer des images en mode B. Lorsque l’horloge indique cinq minutes et 10 secondes. Continuez l’enregistrement jusqu’à ce que l’horloge indique sept minutes.

Ensuite, prenez la tension artérielle du sujet. Si la pression artérielle systolique est supérieure ou égale à 100 millimètres de mercure, placez 0,4 milligramme de nitroglycérine sublinguale sous la langue du sujet et commencez la minuterie. Démarrez l’enregistrement en mode B lorsque l’horloge indique trois minutes et arrêtez l’enregistrement.

Quand l’horloge indique huit minutes. Pour analyser les cellules endothéliales colorées, un seul expérimentateur en aveugle doit scanner les lames Systématiquement, les cellules endothéliales sont identifiées par une coloration positive pour la cadhérine VE et l’intégrité nucléaire est confirmée par une coloration positive pour la dapi. De plus, les cellules doivent être colorées pour la protéine d’intérêt.

Un total de 30 cellules par lame doit être imagé pour une analyse ultérieure. Répétez ce processus pour chaque lame du lot coloré, y compris la lame de contrôle VE. Un logiciel qualitatif est utilisé pour analyser l’intensité de la coloration de l’anticorps primaire d’intérêt.

Cette image montre le diamètre de référence de l’artère brachiale obtenu lors de l’évaluation d’un patient atteint d’une maladie rénale chronique après le relâchement du brassard pendant deux minutes. Cet enregistrement montre un changement de diamètre d’une onde R. Ces formes d’onde ont été obtenues au niveau de chacune des artères carotide et fémorale.

La différence de temps et de distance a été utilisée pour calculer un rapport de vitesse de l’onde de pouls aortique. Ici, l’intégrité nucléaire des cellules témoins et des cellules de patients a été analysée avec l’expression des cellules endothéliales DPI avec la cadhérine VE et pour l’enzyme oxydante N-A-D-P-H oxydase. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’obtenir des images échographiques, des formes d’onde et des images de cellules endothéliales de la plus haute qualité possible pour une évaluation précise et quantitative.

N’oubliez pas que travailler avec des échantillons humains peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que le port d’un équipement de protection individuelle approprié doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.