Name: Une modification In vitro Invasion Test pour déterminer le rôle potentiel des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance dans le cancer Médiation invasion cellulaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: Découvrez un test d'invasion in vitro modifié pour étudier le rôle des hormones et des cytokines dans l'invasion des cellules cancéreuses. Cette méthode permet d'évaluer l'indice d'invasion de différentes variantes cellulaires.

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Les auteurs mentionnent les sources de financement de la D’Youville College School of Pharmacy, Buffalo, NY.

1. Préparer les différents médias et Composants supplémentaires <ol><li> Avant l&#39;expérience, préparer des milieux consistant en DMEM ou un autre support spécifiés avec l&#39;addition de FBS soit normale, FBS charbon de bois, charbon ou FBS plus le composant à tester. Notez que plusieurs composants peuvent être testés dans chaque expérience. </li><li> Peser et diluer les hormones, les facteurs de croissance, cytokines ou de façon appropriée pour être dissous dans le sérum dépouillé de charbon de bois à la concentration physiologique. </li></ol> 2. Préparer la Matrice Collagène on Ice <ol><li> Préparation 2 ml collagène I matrice, à 2,2 mg / ml en ajoutant les composants suivants stérilisées par filtration sur de la glace: 10 x 200 pi de PBS (pH 7,4), 5,4 pi de NaOH 1 N, 600 pi d&#39;eau distillée deux fois 2 O, et 1,2 ml de collagène de type I (à 3,63 mg / ml). </li><li> Conserver la solution de collagène I sur la glace jusqu&#39;au moment de l&#39;assiette. </li></ol> 3. Préparer la migration / invasion Plaques pour le dosage &lt;/ P&gt; <ol><li> Pour chaque lignée cellulaire à tester, en utilisant une plaque de chambre de 24 puits à puits qui 12 contiennent des inserts. Utilisez les 12 puits supplémentaires qui ne contiennent pas inserts pour ajouter les médias chimioattractives et le transfert des inserts pour la mise en place expérimentale. REMARQUE: une matrice de collagène sur des plaques avec un polyéthylène téréphtalate (PET) et la membrane 8 um de taille de pore est optimale pour les lignées cellulaires utilisent ici. Cependant, une matrice de matrigel dans des plaques pré-revêtues peut également être substitué par la taille des pores en fonction de la diminution de la lignée cellulaire à l&#39;étude. </li><li> Identifiez clairement la plaque, en utilisant trois puits par condition étant analysés (migration FBS, migration CS-FBS, invasion FBS, et d&#39;invasion CS-FBS ainsi que FBS-migration pour un contrôle, la lignée cellulaire non invasive). Dosage par déplacement migration à travers les pores d&#39;une membrane en PET, et l&#39;invasion de dosage par circulation à travers une matrice de collagène ou de matrigel et ensuite à travers les pores dans la membrane. Utiliser différents marqueurs de couleur pour chaque état de la cellule à unid dans le processus de placage. </li></ol> 4. Verser l&#39;invasion Matrice <ol><li> Pipetter prudemment 75 ul de la solution de matrice de collagène dans les inserts à être utilisés pour des essais d&#39;invasion. Faites preuve de prudence pour éviter les bulles. Disperser les bulles par l&#39;application d&#39;une pointe de pipette à la surface inversée. </li><li> Transférer la plaque avec les inserts revêtus de collagène à un incubateur à CO2 à 37 ° C et 5% pendant 30 minutes pour permettre au gel de se solidifier. </li></ol> 5. Plaque les cellules sur la membrane ou d&#39;invasion Matrice <ol><li> Pendant ce temps, Trypsiniser cellules et ajouter du contenu multimédia avec 10% de FBS. Spin cellules à 200 g pendant 5 min sur une centrifugeuse de table et rincer 3x dans un milieu sans sérum. </li><li> Remettre en suspension dans un milieu sans sérum. Compter les cellules avec un hémocytomètre ou un comptoir de diaporama automatique. Ajouter un milieu sans sérum à une concentration finale de 5 x 10 4 cellules / ml. </li><li> Lorsque la matrice de collagène est solidifié (après 30 minutes), ajouter 700 ul de milieu avec soit2% de FBS ou définis charbon-FBS à chaque puits. Sur les 12 inserts par plaque: <ul><li> 3 inserts ont collagène et les puits avec les médias + 2% de FBS </li><li> 3 inserts ont collagène et les puits avec les médias + 2% CS-FBS </li><li> 3 inserts ne ont pas le collagène et les puits avec les médias + 2% de FBS </li><li> 3 inserts ne ont pas le collagène et les puits avec les médias + 2% CS-FBS </li></ul><ol><li> Utilisation des plaques supplémentaires en fonction du nombre de facteurs à tester et d&#39;une commande pas de collagène correspondant à chaque condition. </li></ol></li><li> Ajouter suspension cellulaire aux inserts à 5 x 10 4 cellules / ml, le placage 500 cellules par ul insert dans tous les inserts de migration et d&#39;invasion. </li><li> Incuber les cellules pendant 22 heures à 37 ° C. </li></ol> 6. quantifier le nombre de Migration et invasion des cellules <ol><li> Mettre en place la coloration des puits en utilisant du méthanol fixateur, l&#39;éosine, et hématoxyline, dans des puits séparés. </li><li> Utilisez des cotons-tiges pour éliminer les cellules et la matrice de chaque puits.Rrepeat avec deuxième application de l&#39;écouvillon pour chaque puits. </li><li> Avec une pince, tremper chaque insert 5 fois pendant 1 seconde dans chacune des trois solutions de suite. </li><li> Laisser sécher inserts O / N. </li><li> Soit i) supprimer des filtres avec un scalpel, couper soigneusement autour des bords et monter sur une lame avec lamelle et l&#39;immersion d&#39;huile, ou ii) les inserts permettent de sécher O / N inversé et utilisent les inserts directement pour la microscopie. </li><li> Le lendemain, voir des diapositives ou des inserts sous un microscope avec un objectif 20X et prendre cinq images de différentes régions du filtre. Pour améliorer la cohérence, de prendre quatre champs extérieurs et un centre. </li><li> Compter les cellules pour toutes les conditions en utilisant le logiciel ImageJ et appliquer les formules ci-dessous. </li><li> Déterminer l&#39;invasion de pour cent comme suit: # Moyenne des cellules envahissantes travers collagène je insère = a Moyenne # des cellules migrant à travers insert de commande = b Invasion% = (a / b) * 100 </li><li> Déterminer l&#39;indice Invasion de 2% de FBS comme suit: % Invasion des cellules en cours d&#39;analyse (à 2% de FBS) = c % Invasion de cellules de contrôle non invasifs en (2% de FBS) = d Invasion Index (FBS) = (c / d) </li><li> Déterminer l&#39;indice Invasion 2% CS-FBS comme suit: % Invasion des cellules en cours d&#39;analyse (dans 2% CS-FBS) = e % Invasion des cellules non invasives de contrôle dans (2% CS-FBS) = f Indice Invasion (CS-FBS) = (e / f) </li></ol> 7. Répétez Protocole expérimentale visant à comparer charbon-FBS FBS charbon-dénudés + X n avec de multiples facteurs combinés <ol><li> Répéter la procédure plusieurs fois que nécessaire en utilisant différents composants de &quot;X&quot; ou une combinaison de composants. </li><li> Appliquer les calculs pour déterminer la contribution de chaque facteur &quot;X&quot; pour les effets de la migration et d&#39;invasion. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Tumeur métastase est un processus en plusieurs étapes. Les cellules doivent franchir la membrane basale, intravasate soit dans le système lymphatique ou le sang microvaisseaux, dans lesquels ils sont transportés à des sites distants. Les cellules tumorales puis extravasent et colonisent dans un macrométastase 12. La progression à travers la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT), l&#39;invasion tumorale et la métastase a été renforcée par des hormones stéroïdes 13,14, les facteurs de croissance...

Un nouveau dosage d&#39;invasion a été développé dans le but d&#39;identifier l&#39;implication de certaines hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance chimiotactiques comme dans l&#39;invasion des cellules cancéreuses. La capacité des cellules tumorales à envahir à travers la matrice extracellulaire (ECM) est une caractéristique du phénotype métastatique 3.1. chambres d&#39;invasion ont été largement utilisés comme outils pour étudier in vitro l&#39;invasion des cellules cancéreuses et la migration et peuvent fournir des connaissances sur les mécanismes de l&#39;invasion et la métastase tumorales in vivo. Les chambres sont constituées d&#39;inserts de culture de cellules cylindriques emboîtés dans les puits de plaques de culture de cellules. Le fond des inserts en polycarbonate ou polystyrène sont des membranes semi-perméables des tailles de pores définies. Dans l&#39;essai d&#39;invasion standard, les cellules sont ensemencées sur la membrane de l&#39;insert avec du milieu sans sérum et on les place dans des puits de culture de cellules qui sont remplis de sérum ou de sérum comme agents chimio-attractifs pour set jusqu&#39;à un chimioattractives vigueur. Cela conduit de force cellules de se déplacer à travers la membrane semi-perméable (migration) ou encore, par un revêtement de la matrice extracellulaire (invasion), qui peut ensuite être teinté avec des colorants classiques pour détecter et quantifier le nombre de cellules. Le nombre de cellules est ensuite normalisée en fonction de l&#39;étendue de la migration et de l&#39;invasion dans une lignée cellulaire non invasive. Cette méthode permet à un chercheur d&#39;évaluer le potentiel invasif de différents types de cellules dans une variété de conditions, y compris les manipulations génétiques. Les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance sont des éléments essentiels de sérum et sont représentés plus en plus à être associé à l&#39;entraînement du phénotype invasif 4. Cependant, la nature, le rôle et la spécificité de ces molécules sériques chimioattractives dans la médiation invasion encore demeurent insaisissables. Le défi reste à déterminer quels facteurs spécifiques dans le sérum ou de sérum comme chimioattractifs sont responsables de la conduiteinvasion des cellules cancéreuses ainsi que des molécules qui peuvent inhiber le processus d&#39;invasion. Dans ce rapport, nous décrivons une méthodologie pour évaluer l&#39;implication potentielle des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance présents dans le sérum, en tant que molécules de conduire l&#39;chimioattraction et l&#39;invasion des cellules cancéreuses. Dans ce protocole modifié proposé, le charbon de décapage est utilisé pour éliminer les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance de 2% de sérum bovin fœtal (FBS) pour générer 2% FBS charbon de bois (CS-FBS). Les deux 2% de FBS et 2% CS-FBS sont utilisés comme agents de mettre en place la force chimioattractives à conduire l&#39;invasion des cellules cancéreuses. Utilisation de 2% de CS-FBS comme agent chimio-attractifs par rapport à la normale 2% de FBS offre plusieurs avantages, y compris d&#39;une part, et le plus en évidence, la possibilité d&#39;étudier le phénotype d&#39;invasion du cancer en l&#39;absence réduit / relative des hormones, des cytokines et des facteurs de croissance. Il permet également à l&#39;enquêteur de déterminer si l&#39;élimination collective des hormones, facteurs de croissance, et CYtokines entraîne une augmentation ou diminution de l&#39;indice invasive. Le dosage est alors conçue pour déterminer si l&#39;addition d&#39;un composant individuel, désignée comme «X» peut inhiber, diminuer, augmenter ou rétablir l&#39;indice invasive à sa valeur initiale (voir les figures 2 et 3). Bien que cette méthodologie est spécifique pour atteindre les niveaux physiologiques de l&#39;élément qui est éliminée à partir du sérum au cours de charbon décapage, il convient également de noter que le charbon de décapage peut aussi affecter les voies de transduction du signal. Par exemple, il a été rapporté que le charbon de décapage peut diminuer l&#39;activité de la phosphatase alcaline de cellules ostéoprogénitrices et induire l&#39;adipogenèse par la réduction des activateurs de 5 MAPK. Charcoal médias dénudées sont commercialement disponibles et sont basés sur le protocole décrit qui combine charbon dextran et incubées avec du sérum fœtal bovin O / N 6. Cet essai a été développé en Response à un résultat rapporté par Zucker et al. 7 Les auteurs ont démontré que le phénotype mutant affectant une communication écart de jonction fait preuve d&#39;une augmentation de l&#39;indice d&#39;invasion lors de la migration vers la normale médias avec 2% de FBS. Cette augmentation a été éliminée avec le remplacement de sérum de charbon-dépouillé. De ce fait, les auteurs ont conclu que ce mutant affecté migration vers une molécule lipophile (plus spécifiquement, une hormone, un facteur de croissance ou cytokines) 7. Il est bien connu que les hormones, facteurs de croissance, cytokines et médiateurs voies impliquées dans la promotion de la tumeur et invasion quatre signalisation. Ainsi, il est important pour les chercheurs scientifiques pour déterminer quel facteur (s) sont le moteur de l&#39;invasion tumorale des cellules cancéreuses ou des mutants particulier à l&#39;étude. L&#39;essai est conçu pour examiner le rôle des composants individuels lors de leur concentration physiologique telle que déterminée en fonction de la différence entre la concentration du composant et# 8220; X &quot;dans FBS normale et le CS-FBS. Grâce au développement de ce test, les enquêteurs peuvent gagner plus de perspicacité dans la voie invasive spécifique régissant leur système. Des hormones, des facteurs de croissance, cytokines et ont souvent été considérés comme des promoteurs de tumeurs 8. Certains de ces facteurs tels que EGF sont utilisés comme sources directes pour chimioattractifs dans des chambres d&#39;invasion neuf. Ainsi, il semble probable que ceux-ci représentent les principales composantes du sérum qui invasion tumorale directe. Ce protocole propose un moyen simple, mais significative, de la modification de l&#39;essai in vitro classique dans d&#39;invasion qui permet à un chercheur pour évaluer l&#39;implication des hormones, des facteurs de croissance, des cytokines dans la médiation et le potentiel invasif des cellules cancéreuses. Cependant, le test est conçu pour fournir à l&#39;enquêteur une réponse quant à savoir si la procédure sera efficace pour leur étude à une étape précoce dans l&#39;analyse, afin de ne pas utiliser un temps précieux et ressources si jugées inutiles. Cette méthode utilise CS-FBS et se appuie sur la discrétion des enquêteurs à laquelle les molécules de poursuivre en tant que candidats de plomb qui interviennent potentiellement invasion des cellules cancéreuses. Les résultats de ces analyses devraient se avérer utiles dans l&#39;identification des composants du sérum qui servent d&#39;agents chimio-attractifs ou des inhibiteurs de la lignée cellulaire particulière ou un mutant de l&#39;étude. En outre, cette approche peut aider l&#39;enquêteur d&#39;identifier les voies de signalisation clés soit favoriser ou inhiber l&#39;invasion des cellules cancéreuses; dirigeant ainsi l&#39;avenir la conception de médicaments.

<table><tbody><tr><td>Inserts de contrôle BioCoat avec 8.0 & micro ; m membrane PET</td><td>Corning</td><td>354578</td><td>12 dans chacune des deux plaques de 24 puits. PET = polyéthylène téréphtalate</td></tr><tr><td>Collagène I, queue</td><td>de rat Corning</td><td>354236</td><td>Source = tendon de queue de rat, pureté = 90 %</td></tr><tr><td>Fixateur ; Diff-Quick</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NC9844047</td><td>Fixateur à base de méthanol, hématoxyline/éosine</td></tr><tr><td>Sérum fœtal</td><td>bovin Life Technologies</td><td>16000</td><td>Désigné comme FBS</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin dépouillé de charbon de bois</td><td>Life Technologies</td><td>12676</td><td>Désigné comme CS-FBS</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Thermo Scientific Hyclone</td><td>SH30070</td><td>Désigné comme FBS</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin dénué de charbon de bois</td><td>Thermo Scientific Hyclone</td><td>SH30068</td><td>Désigné CS-FBS</td></tr></tbody></table>

une modification<em&gt; in vitro</em&gt; invasion test pour déterminer le rôle potentiel des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance dans le cancer médiation invasion cellulaire

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

Le sérum sanguin sert de chimioattractant vers laquelle les cellules cancéreuses migrent et envahissent, ce qui facilite leur intravasation en microvaisseaux. Cependant, les molécules réelles vers lequel les cellules migrent demeurent insaisissables. Ce test d&#39;invasion modifié a été mis au point pour identifier les cibles qui entraînent la migration et l&#39;invasion cellulaire. Cette technique compare l&#39;indice d&#39;invasion dans trois conditions pour déterminer si une hormone spécifique, le facteur de croissance ou cytokine joue un rôle dans la médiation le potentiel invasif d&#39;une cellule cancéreuse. Ces conditions comprennent i) de sérum fœtal bovin normal (FBS), ii) charbon-FBS (CS-FBS), qui supprime les hormones, les facteurs de croissance et des cytokines et iii) molécule CS-FBS + (notée &quot;X&quot;). Un changement important dans l&#39;invasion des cellules CS-FBS avec par rapport à FBS, indique l&#39;implication des hormones, des cytokines ou des facteurs de croissance dans la médiation de la modification. Les molécules individuelles peuvent ensuite être ajoutés revenir à CS-FBS pour doser leur capacité à reverset ou sauver le phénotype d&#39;invasion. En outre, deux ou plusieurs éléments peuvent être combinés pour évaluer l&#39;effets additifs ou synergiques de plusieurs molécules dans la conduite ou l&#39;inhibition de l&#39;invasion. Dans l&#39;ensemble, ce procédé permet au chercheur de déterminer si les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance / ou jouent un rôle dans l&#39;invasion cellulaire en agissant comme agents chimio-attractifs ou des inhibiteurs de l&#39;invasion d&#39;un type particulier de cellule cancéreuse ou un mutant spécifique. En identifiant chimiotactiques et des inhibiteurs spécifiques, ce dosage d&#39;invasion modifié peut aider à élucider les voies qui dirigent l&#39;invasion des cellules du cancer de signalisation.

L&#39;indice d&#39;invasion est calculé pour chaque condition de normalisation selon l&#39;une lignée cellulaire non invasive. Pour les expériences, on utilise la ligne 1205Lu cellulaire de mélanome et les lignées cellulaires stables variantes établi comme nos lignes envahissantes ainsi que la variante non invasive prémalignes, WM793 partir duquel les cellules ont été dérivées 1205Lu 10 qui sert de contrôle logique. Nous utilisons également collagène I que la matrice d&#39;invasion parce que ce est le composa...

Cet article vidéo décrit une méthode in vitro modifiée pour examiner le rôle des hormones, des cytokines et/ou des facteurs de croissance dans l’invasion des cellules cancéreuses.

Une modification<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Test pour déterminer le rôle potentiel des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance dans le cancer Médiation invasion cellulaire

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

L'objectif général de l'expérience suivante est d'établir un test in vitro permettant d'examiner le rôle des hormones, des cytokines et/ou des facteurs de croissance dans la promotion de l'invasion des cellules cancéreuses. Cet objectif est atteint en déterminant s'il existe une différence entre l'indice d'invasion de différentes variantes ou mutants cellulaires dans une deuxième étape. Le test d'invasion est répété à l'aide d'un milieu traité au charbon actif, qui élimine toutes les hormones, facteurs de croissance ou cytokines présents dans le sérum.Le test d'invasion est ensuite répété en ajoutant un facteur connu spécifique au milieu dépourvu de charbon actif, afin de déterminer si la migration vers ce facteur améliore ou inhibe l'invasion. Les résultats montrent les variations de l'indice d'invasion pour des populations cellulaires spécifiques observées lors de la migration vers des facteurs expérimentaux connus, en se basant sur la normalisation des résultats par rapport à l'indice d'invasion de populations cellulaires non invasives. J'ai eu pour la première fois l'idée de cette méthode lorsque je réalisais un test d'invasion classique, et j'ai remarqué qu'il existait une différence significative entre les indices d'invasion de différents mutants cellulaires.L'avantage principal de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme le test d'invasion traditionnel, est qu'elle permet d'étudier spécifiquement le rôle des hormones, des facteurs de croissance spécifiques et des cytokines dans la promotion ou l'inhibition de l'invasion cellulaire. Cette méthode pourrait aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la recherche sur le cancer, notamment quels facteurs conduisent à la métastase cancéreuse. Les implications de cette technique pourraient offrir une approche thérapeutique pour la conception future de médicaments. Pour chaque lignée cellulaire à tester, utiliser une plaque de 24 puits avec 12 inserts.Ensuite, étiquetez les plaques selon les conditions à analyser. Puis, ajoutez soigneusement 75 microlitres d'une solution fraîchement préparée de matrice de collagène dans chaque insert qui sera utilisé pour un test d'envahissement, en prenant soin de ne pas former de bulles. Incubez ensuite les plaques avec les inserts recouverts de collagène à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone pendant 30 minutes afin de permettre la solidification du gel.Après avoir détaché les cellules expérimentales à l’aide de trypsine, ajouter du milieu complémenté avec 10 % de FCS pour inactiver l’enzyme et laver les cellules trois fois dans du PBS. Ensuite, resuspendre le culot dans un milieu sans sérum et dénombrer les cellules. Ajouter le milieu sans sérum à une concentration finale de 50 000 cellules par millilitre lorsque la matrice de collagène est solidifiée.Au bout de 30 minutes, ajouter 700 microlitres de milieu contenant soit 2 % de FBS défini, 2 % de FBS traité au charbon actif ou 2 % de FBS traité au charbon actif plus le composant supplémentaire dans chaque puits. Ajouter 500 microlitres de suspension cellulaire dans un milieu sans sérum dans la partie supérieure de chaque insert de migration ou d' invasion. Incuber les tests pendant 22 heures à 37 degrés Celsius.Ensuite, ajoutez du méthanol, du fixatif, de l'éosine et de l'hématine dans trois des puits vides de la plaque à chambre. Puis, retirez les cellules et la matrice du haut de chaque insert à l’aide de deux passages consécutifs avec un coton-tige. Utilisez ensuite des pinces.Trempez chaque insert cinq fois, pendant une seconde à chaque fois, dans chacune des trois solutions de coloration successivement, puis laissez les inserts sécher toute la nuit, placés à l’envers. Le jour suivant, utilisez un objectif 20 x pour acquérir des images des cellules présentes sur les inserts en observant directement les inserts colorés.Cinq images sont prises pour chaque échantillon, y compris quatre provenant des champs périphériques de la membrane et une du centre. Enfin, à l’aide du logiciel ImageJ, comptez les cellules pour chaque image et calculez l’indice d’invasion normalisé par rapport à une lignée cellulaire non invasive. Ce modèle illustre les résultats potentiels pouvant être observés lors d’un test d’invasion et explique comment interpréter les données correspondantes.Chaque cercle illustre un résultat représentatif pour un filtre coloré provenant de l'une des trois conditions testées, et chaque point représente une cellule ayant traversé la matrice d'invasion et colorée sur le dessous de la membrane. L'indice d'invasion est ensuite calculé pour chaque condition selon sa normalisation par rapport à une lignée cellulaire non invasive. Par exemple, dans cette expérience représentative, trois hormones ont été testées afin d'identifier un facteur x éventuel.Deux des hormones n'ont eu aucun effet sur l'indice d'invasion, mais l'une d'elles s'est révélée posséder des propriétés inhibitrices. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en environ quatre heures le premier jour et une heure le deuxième jour, si toutes les étapes sont correctement effectuées. Lors de l'utilisation de cette technique, il est important d'étiqueter soigneusement chaque insert cellulaire individuel.Nous avons utilisé un système codé par couleurs et différents points pour étiqueter soigneusement chaque insert cellulaire. D'autres méthodes, comme les modèles murins in vivo pour la métastase, pourraient être utilisées afin de valider les résultats obtenus in vitro. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'évaluer la pertinence physiologique de facteurs tels que les hormones, les facteurs de croissance et les cytokines, en tant qu'activateurs ou inhibiteurs de l'invasion cellulaire dans un modèle in vitro.Merci pour votre intérêt porté à notre vidéo et bonne chance avec vos expériences.

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Un test pour mesurer quantitativement Transforming Growth Factor (TGF)-β-induite invasion dans des gels de collagène en 3 dimensions est décrite. Ce test prend avantage de la série MCF10A de lignées cellulaires, qui représentent les différentes étapes du développement du cancer du sein. Cette méthode peut être adoptée pour être utilisé avec d'autres lignées cellulaires et pourraient être utilisées pour étudier d'autres activateurs ou des inhibiteurs potentiels de l'invasion.

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Cette vidéo décrit la technique d’utilisation d’une matrice native pour étudier l’invasion des cellules tumorales. La technique utilisée dans ce test permet d’évaluer les interactions entre les cellules épithéliales et mésenchymateuses dans un cadre 3D sans avoir besoin d’une matrice synthétique ou étrangère.

Essai d’invasion de cellules tumorales : une méthode 3D in vitro basée sur une matrice native pour évaluer les interactions entre les cellules épithéliales et mésenchymateuses

Couramment utilisés, des méthodes très accessibles pour examiner la migration cellulaire et l'invasion in vitro sont décrits. La première méthode est la fermeture de la plaie dosage de cellules qui mesure la motilité cellulaire. La deuxième méthode est la migration et l'invasion essai transwell qui évalue la capacité chimiotactique et invasif des cellules.

Dans la migration cellulaire in vitro et Invasion dosages

L'invasion des cellules de cancer ovarien dans la garniture de mésothéliales du péritoine est un processus dynamique dans le temps. Utilisant un véritable analyseur de temps, la capacité d'invasion des cellules cancéreuses de l'ovaire dans un modèle sphéroïde mésothélial co-culture de cellules peut être quantifié sur des périodes de temps prolongées, apportant des éclairages sur les facteurs régissant le processus métastatique.

Évaluation de Cancer de l&#39;ovaire Spheroid attachement et l&#39;invasion des cellules mésothéliales en temps réel

L’invasion des tissus normaux environnants est une caractéristique déterminante des tumeurs malignes. Nous fournissons ici un test simple et semi-automatisé sur microplaque d’invasion dans une biomatrice 3D naturelle qui a été illustré par un certain nombre de modèles de cancers humains avancés.

Tridimensionnelle (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Ici, nous présentons un protocole d'étudier l'invasion des cellules tumorales dans des fragments de tissus normaux vivant en trois dimensions. Cette technique de culture d'organe est principalement appliqué pour tester des médicaments potentiellement anti-invasif in vitro.

Chick Coeur Invasion Assay pour tester les techniques invasives des cellules cancéreuses et l&#39;activité des composés potentiellement anti-invasives

Cette méthode évalue l’invasion des cellules cancéreuses des sphéroïdes dans une matrice 3D environnante.  Les sphéroïdes sont générés par la méthode de culture de gouttes suspendues, puis intégrés dans une matrice composée de matériaux de membrane basale et de collagène de type I.  L’invasion des sphéroïdes est ensuite surveillée.

Une cellule cancéreuse Spheroid test pour évaluer Invasion dans un Cadre 3D

Ce protocole décrit une analyse inversée invasion verticale qui pourrait être utilisée pour quantifier les capacités de migration et invasion des cellules dans un décor en trois dimensions tout en préservant le microenvironnement cellulaire. Ce dosage est adapté aux cellules rares et/ou sensibles.

Déplacement vers le haut : Un Simple et Flexible In Vitro Invasion en trois dimensions Assay protocole

L'exemple d'invasion cellulaire in vitro est utilisé pour mesurer le potentiel de la métastes du cancer en quantifiant le potentiel cellulaire d'invasion et de migration à l'aide d'inserts de culture cellulaire contenant de la matrice protéique. Les cellules sont mises au défi de migrer à travers la matrice protéique et une membrane poreuse, vers un chimioattractant, puis quantifiées par microscopie légère.

L'utilisation de cellules de tumeur mammaire de souris dans un analyse d'invasion in vitro comme mesure du comportement cellulaire oncogène

L’invasion est un phénomène biologique majeur dans le développement et la progression du cancer. Ce processus est influencé par les cellules non néoplasiques et les composants du microenvironnement tumoral. Le but de cette étude est de décrire une méthode alternative pour analyser l’invasion des cellules tumorales in vitro à l’aide de cultures tridimensionnelles (3D).

Stratégie alternative pour analyser l’invasion cellulaire in vitro de cultures 3D

Découvrez un test d'invasion in vitro modifié pour étudier le rôle des hormones et des cytokines dans l'invasion des cellules cancéreuses. Cette méthode permet d'évaluer l'indice d'invasion de différentes variantes cellulaires.

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