10 juillet 2014
Les modèles murins sont devenus de plus en plus populaires dans les études de neurosciences comportementales. Au fur et à mesure que les modèles progressent, il est important de développer des mesures comportementales sensibles spécifiques à la souris. Ce protocole décrit la tâche d’atteinte de la matrice de pâtes, qui est une tâche motrice qualifiée à utiliser dans des modèles murins d’AVC.
L’objectif global de cette procédure est d’évaluer les effets comportementaux de l’utilisation compensatoire d’un membre et d’un modèle murin d’AVC. Pour ce faire, il suffit d’abord de déterminer le membre qui peut atteindre le membre préféré en permettant aux souris d’atteindre l’un ou l’autre membre pendant les procédures de mise en forme. La deuxième étape consiste à établir l’habileté motrice en entraînant uniquement le membre d’atteinte préféré sur la tâche d’atteinte de la matrice de pâtes.
Ensuite, l’utilisation compensatoire du membre est enseignée par des souris entraînées à utiliser le membre le moins affecté sur la matrice de pâtes. Atteindre la tâche commençant quatre jours après une lésion ischémique unilatérale controlatérale au membre d’atteinte préféré. La dernière étape consiste à évaluer l’effet d’un entraînement des membres moins affecté sur le résultat fonctionnel du membre affecté par l’AVC.
En fin de compte, l’altération de l’état fonctionnel du membre affecté est démontrée par une diminution du nombre d’atteintes réussies sur plusieurs jours de tests. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans la recherche fondamentale sur l’AVC, y compris quelles sont les implications des interventions comportementales sur les résultats fonctionnels. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal à cause du temps et des patients nécessaires pour enseigner aux souris cette tâche hautement qualifiée.
L’avantage est que la sensibilité de ce test dépasse celle des autres tests sensori-moteurs. Chez la souris. Commencez la procédure en coupant des morceaux de pâtes CAPI non cuits à l’aide d’une lame de rasoir.
Placez ensuite les morceaux de pâtes dans la matrice de pâtes. Habituez une souris à la chambre d’essai pendant trois sessions de cinq à 10 minutes chacune, avec une matrice de pâtes complète placée à l’avant et plusieurs morceaux de pâtes au fond pour manger afin de façonner le tronçon. Placez la souris dans la chambre d’essai avec une matrice de pâtes complète devant elle, comme dans l’entraînement à l’habitation.
Notez le nombre de portées avec chaque membre et indiquez le nombre de portées avec les membres droit et gauche. Séparément. Définissez une portée comme l’extension d’un membre à travers l’ouverture de portée, de sorte que le poignet brise le plan de la chambre, rendant les quatre pattes visibles à l’extérieur de la chambre. Il n’est pas nécessaire que la portée soit dirigée vers les pâtes ou qu’elle entre en contact avec elles pendant les séances de façonnage.
Limitez la souris à un maximum de 10 portées ou 10 minutes de temps dans la chambre, selon ce qui se produit. Tout d’abord, pour encourager la souris à atteindre. Tenez plusieurs morceaux de pâtes juste à l’intérieur de la chambre par l’ouverture de portée.
Retirez les morceaux de pâtes lorsque la souris montre de l’intérêt, par exemple en reniflant ou en mordant, l’encourageant ainsi à atteindre les morceaux de pâtes qui se retirent. Si les souris ne montrent pas d’intérêt pour les pâtes sèches, ce que les pointes des pâtes morcèlent dans une petite tasse d’eau tiède pour les rendre plus appétissantes. Les séances de mise en forme sont également utilisées pour déterminer la préférence des membres.
Lorsqu’une souris présente un minimum de 70 % de ses portées quotidiennes avec un seul membre, ces quatre membres sont définis comme le membre préféré. Placez une souris dans la chambre de test avec une matrice à moitié pleine devant. Entraînez la souris à n’atteindre qu’avec son membre préféré en remplissant uniquement le signe de la matrice controlatérale au membre préféré.
Pendant cette phase d’entraînement, laissez la partie de la matrice correspondant au membre le moins affecté non remplie afin de décourager les tentatives de portée avec ce membre. Administrez une fois par jour, des séances d’entraînement de 15 minutes ou de 100 portées pour aider la souris à apprendre à cibler et à casser les morceaux de pâtes. Au cours des premières séances d’entraînement, exercez une petite pression sur les morceaux de pâtes pendant qu’ils sont dans la matrice en tenant légèrement un autre morceau de pâte, derrière et perpendiculairement à la cible visée.
Cette petite quantité de soutien aide à stabiliser les pâtes fines et est plus facile à saisir pour la souris. Pour atteindre avec succès, la souris doit passer par l’ouverture. Prenez un morceau de pâte, cassez le morceau de pâte et retirez-le de la matrice.
Consignez le nombre total de mèches jusqu’à un maximum de 100, ainsi que le nombre et l’emplacement des morceaux de pâtes brisés avec succès. Dans cette procédure. Entraînez le membre le moins affecté en commençant quatre jours après l’agression ischémique du cortex moteur controlatéral au membre qui atteint le choix.
Tout comme pour l’entraînement préopératoire à la portée, administrez une fois par jour, 15 minutes ou 100 séances d’entraînement à la portée. Retirez la première colonne de pâtes pour la première semaine d’entraînement des membres moins affectés. Afin de vous assurer que les tentatives d’atteinte précoce avec le membre affecté ne réussissent pas, placez la souris dans la chambre d’atteinte avec la matrice à moitié remplie devant.
Assurez-vous que la moitié remplie de la matrice est opposée à la moitié remplie préopératoire, ce qui forcera la souris à atteindre maintenant un membre moins affecté. Encouragez l’extension de ce membre par l’ouverture d’atteinte en renforçant l’extension de ce membre par l’ouverture d’accès. Lorsque la souris étend le membre le moins affecté au cours des premiers jours d’entraînement, placez un petit morceau de pâtes sur le sol de la chambre d’étirement.
Que la portée réussisse ou non, ne comptez que les portées effectuées avec le membre le moins affecté dans le total de 100 portées. Ne comptez pas les tentatives furtives avec le membre affecté dans le nombre total de portées. Ensuite, retournez la colonne verticale la plus médiale de pâtes dans la matrice après les sept premiers jours d’entraînement des membres les moins affectés, enregistrez le nombre total de portées et le nombre et l’emplacement des morceaux de pâtes brisés avec succès pour déterminer l’impact de l’utilisation compensatoire du membre le moins affecté sur la récupération fonctionnelle du membre affecté par l’AVC.
Testez les performances du membre affecté sur le PMRT. Après un entraînement des membres moins affectés. Placez la matrice devant la chambre orientée de manière identique aux procédures de formation préopératoires.
Cela obligera les souris à atteindre avec leur enregistrement de membre affecté par l’AVC, le nombre total de portées et le nombre et l’emplacement des morceaux de pâtes brisés avec succès pour comparer avec les niveaux de performance avant l’AVC. Voici les modèles représentatifs d’atteinte avec le membre affecté de souris avant et après l’agression ischémique unilatérale du cortex sensorimoteur opposé au membre préféré. Antérieur désigne des morceaux de pâtes situés de plus en plus loin devant la souris, tandis que latéral désigne des morceaux de pâtes situés de plus en plus sur le côté de la souris.
Les changements représentatifs du modèle du membre affecté au cours des jours d’entraînement postopératoire sont illustrés ici. Ce graphique montre un exemple représentatif de la façon dont l’entraînement des membres moins affectés affecte les performances du membre affecté lors de l’entraînement PMRT du membre moins affecté pendant 15 jours après une agression ischémique unilatérale du cortex sensorimoteur, altère le résultat fonctionnel du membre affecté et nuit à la récupération réussie lors de la tentative de cette procédure. Il est important de ne pas oublier de trop entraîner les souris pendant la phase de mise en forme en les laissant atteindre trop de fois.
Sinon, la courbe d’apprentissage ne reflétera pas fidèlement le stade précoce de l’apprentissage de ce test. En suivant cette procédure. D’autres méthodes, notamment l’immunohistochimie, la cartographie corticale et l’imagerie in vivo, peuvent être utilisées pour étudier d’autres questions concernant l’impact des interventions comportementales sur la neuroanatomie.
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Ce protocole décrit la tâche de saisie de la matrice de pâtes, une tâche motrice spécialisée conçue pour des modèles murins d'accident vasculaire cérébral. Elle vise à évaluer les effets comportementaux de l'utilisation compensatoire d'un membre suite à une lésion ischémique unilatérale.
Ce protocole fournit un test comportemental sensible permettant d'évaluer l'apprentissage des habiletés motrices et l'utilisation compensatoire des membres chez les modèles précliniques d'accident vasculaire cérébral. Il permet aux chercheurs de quantifier les résultats fonctionnels et d'évaluer l'impact de stratégies d'entraînement rééducatif sur les trajectoires de récupération. L'approche soutient la validation ciblée et la réduction des risques mécanistiques dans le développement de neurothérapeutiques en reliant les interventions comportementales à la récupération de la fonction motrice.
La méthode s'intègre dans le continuum de découverte, depuis la validation précoce de la cible jusqu'aux tests d'efficacité préclinique, permettant une évaluation itérative de la fonction motrice au cours des différentes phases de l'étude.