Murin de transplantation de la cornée: Un modèle pour étudier la forme la plus courante de la transplantation d'organes solides

Les souris ont été utilisées comme modèle pour étudier de nombreuses formes de transplantation, y compris la greffe de cornée. Nous décrivons dans ce rapport un modèle murin pour la transplantation cornéenne aiguë et tardive.

L’objectif global de la procédure suivante est d’introduire un modèle de rejet aigu de l’allogreffe cornéenne. Ceci est accompli en retirant d’abord la cornée du donneur. Les prochaines étapes de la procédure consistent à préparer le lit de greffe receveur et à suturer la cornée du donneur en place.

Ensuite, l’intégrité du greffon est testée, et s’il n’y a pas de fuites, la paupière est suturée fermée. Au bout d’une semaine, l’opacité de la greffe cornéenne est évaluée pour mesurer le rejet de l’allogreffe. En fin de compte, le modèle peut être utilisé, peut tester une variété de stratégies thérapeutiques pour définir les facteurs les plus importants liés au rejet de l’allogreffe des greffes d’organes solides.

La greffe de cornée est la plus courante aux États-Unis. Il existe plusieurs modèles d’animaux disponibles pour cette procédure, mais les souris sont les plus couramment utilisées. Ce modèle a été utilisé pour définir des facteurs, impliquant à la fois le rejet et l’acceptation de la greffe de cornée.

Après avoir anesthésié les souris donneuses et receveuses et confirmé leur état anesthésié par un pincement de l’orteil, appliquez une pommade lubrifiante pure sur les yeux qui ne subissent pas de chirurgie. Fixez ensuite la tête avec l’œil donneur à l’horizontale sur un support solide et mobile à l’aide d’une bande de ruban adhésif sur le cou. Maintenant, à l’aide d’une dent de deux millimètres de diamètre dont l’extrémité a été teinte au bleu de méthyle, tracez le contour du site central de greffe de cornée.

Ensuite, avec un couteau ophtalmique à 15 degrés, la lame pénètre dans la cornée pour éviter d’endommager le cristallin sous-jacent. Injectez la solution viscoélastique dans la chambre antérieure afin que la chambre devienne plus profonde. Maintenant, excisez le greffon donneur avec des ciseaux de Venise et transférez le greffon dans un plat de HBSS sur de la glace jusqu’à ce qu’il soit utilisé pour réaliser des madres, administrez quelques gouttes de 1 % d’aide et de chlorhydrate d’éfrin à 2,5 % dans l’œil du receveur.

Ensuite, à l’aide d’une dent de 1,5 millimètre, tracez le contour du site de greffe comme décrit précédemment, à l’aide d’une lame de couteau ophtalmique à 15 degrés, pénétrez la cornée et injectez une solution viscoélastique dans la chambre antérieure pour l’approfondir. Afin de maintenir l’espace entre la cornée du donneur et le cristallin, cela réduit le risque d’endommager le cristallin sous-jacent et l’endothélium du donneur. À l’aide de ciseaux Venise, retirez le bouton cornéen central délimité du récipient et jetez-le.

Ajoutez un milieu viscoélastique à la zone libérée par l’ablation du bouton cornéen pour protéger les cellules endothéliales cornéennes contre les dommages causés par contact direct avec le cristallin. Placez maintenant la cornée du donneur sur le lit de greffe à l’aide d’une micro-pince à pointe très fine. Placez la première bouchée de suture en nylon 11.0 dans le côté donneur à travers la cornée du donneur à environ 90 % de l’épaisseur totale.

Puis du côté du receveur à la même profondeur, puis attachez. Continuez à fixer la cornée transplantée à l’aide de sutures interrompues au milieu du cardinal. Au total, huit à 10 sutures suffisent.

Maintenant, reformez et lavez la chambre antérieure avec une injection de solution saline. Vous pouvez également injecter de l’air dans la chambre antérieure pour la reformer. Après l’injection, testez doucement l’intégrité du greffon à l’aide d’une éponge de cellulose.

Enfin, évaluez l’œil. Déterminez si la pupille est ronde et si la chambre antérieure semble normale. Si la greffe semble bonne, appliquez une pommade antibiotique et fermez éventuellement la paupière avec une suture en soie 7.0 en postopératoire.

Surveillez la souris jusqu’à ce qu’elle soit complètement réveillée, puis continuez à l’observer dans sa cage d’accueil pendant deux jours. Retirez les sutures de la souris anesthésiée entre quatre et sept jours après l’opération. Après avoir retiré les sutures, observez la souris pendant plusieurs jours.

À l’aide d’une échelle d’opacité, évaluez chaque cornée avec un score de zéro à cinq. Un zéro indique qu’il n’y a pas d’opacité. Un score de un correspond à une opacité superficielle minimale.

Un score de deux indique une opacité légère à plus profonde avec une pupille sous-jacente perceptible. Et l’iris est le signe d’un score de trois pour les cornées à opacité stromale où l’iris n’est pas visible en détail à l’exception des bords de la pupille. S’il y a une opacité stromale dense et qu’aucune structure sous-jacente n’est visible, donnez au greffon un score de quatre.

Si, s’il y a une opacité complète avec un œdème stromal intensif et que la pupille et l’iris sont complètement obscurcis, alors marquez le greffon un cinq. Le protocole textuel suggère également une échelle de zéro à huit pour l’infiltration des vaisseaux sanguins. Une grande variété de manipulations peut être effectuée à l’aide du modèle de greffe.

Par exemple, des cellules de rate peuvent être ajoutées à la chambre antérieure à partir de la souris donneuse. Une fois que le donneur est euthanasié, retirez la rate et transférez-la dans une passoire cellulaire à l’aide d’un piston de seringue de trois millilitres, perturbez la rate, puis lavez les cellules de la rate dans 10 millilitres de HBSS, remettez en suspension les cellules lavées dans 10 millilitres de HBSS et comptez les cellules avec un hémocytomètre. Conservez les cellules à température ambiante jusqu’à ce qu’elles soient utilisées plus tard.

Avant d’effectuer la greffe de cornée, injectez les cellules dans la chambre antérieure de l’œil controlatéral à l’aide d’un microscope de dissection, injectez 1 million de cellules de rate dans cinq microlitres de HBSS à partir d’une aiguille de calibre 33. Le modèle a été utilisé pour tester si la tolérance systémique des lymphocytes T de l’allo-antigène aux allo-antigènes exprimés par l’allogreffe cornéenne du donneur pourrait améliorer la survie du greffon. Des souris BC ont été tolérées aux allo-antigènes C 57 black 10 par injection de cellules de rate B 10 dans la chambre antérieure.

Cela n’a pas amélioré l’acceptation de l’allogreffe cornéenne. Des études démontrent que l’établissement d’une tolérance spécifique de l’antigène à l’allo-antigène, mesurée par les réponses DTH, n’affecte pas le résultat des allogreffes cutanées ou cornéennes. Une étude similaire a montré que lorsque la tolérance DTH était établie chez les souris BAB c envers les allo-antigènes B 10, la greffe de peau épargnant une partie ou la totalité des allo antigènes B 10 n’augmentait pas la survie.

Ainsi, le C intestinal avec un DTH spécifique de l’antigène établi n’a pas bénéficié de manière mesurable des allogreffes de cornée ou de peau. Comme vous pouvez le voir dans l’expérience d’aujourd’hui, la greffe de cornée est une procédure techniquement difficile. Cependant, c’est le meilleur modèle pour étudier les cellules et les facteurs qui déterminent le succès ou l’échec du graphique.