2 octobre 2014
Le modèle expérimental d’hémorragie sous-arachnoïdienne (HSA) par dérivation sanguine contrôlée par pression intracrânienne chez le lapin combine les procédures standard - canulation de l’artère sous-clavière et ponction transcutanée de la citerne magna, ce qui permet d’imiter étroitement les conditions physiopathologiques humaines après une HSA. Nous présentons des instructions étape par étape et discutons des points chirurgicaux clés pour une création expérimentale réussie de l’HSA.
L’objectif global de cette procédure est d’établir un modèle indépendant d’examen de la pression intracrânienne, ou shunt sanguin contrôlé par l’ICP, de l’hémorragie sous-arachnoïdienne aiguë ou de l’HSA chez le lapin. Ceci est accompli en canulant d’abord l’artère sous-clavière. Dans la deuxième étape, une angiographie par soustraction digitale est effectuée, puis des sondes de neurosurveillance et une aiguille d’accès à la colonne vertébrale sont placées dans la dernière étape.
L’aiguille d’accès à la colonne vertébrale et l’artère sous-clavière sont reliées à un shunt pour induire une HSA aiguë contrôlée par l’examinateur, un ICP indépendant, finalement le débit sanguin cérébral ICP, ou CBF et la réponse cardiorespiratoire de l’animal à l’HSA aiguë peuvent être surveillés. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine neurovasculaire, telles que la façon dont les lésions cérébrales précoces et les échantillons de vaisseaux cérébraux retardés contribuent à l’issue de la naissance et à la mortalité. Après une hémorragie sous-ique anévrismale, commencez par placer le lapin sous sédation en position couchée, les pattes avant et arrière fixées à la surface opératoire.
Installez un électrocardiogramme à trois canaux en tant que tel. Placez trois électrodes sous-cutanées de forme triangulaire sur la face ventrale du lapin. Ensuite, désinfectez la peau avec de la povidone iodée ou similaire sur le muscle pictural droit autour du tiers moyen de la clavicule, couvrez l’animal avec des feuilles stériles.
Après avoir infiltré le muscle pectoral avec des anesthésiques locaux, faites une incision cutanée paramoule latérale et exposez le muscle pectoral. Fendez la fibre musculaire vers le haut et vers l’bas par dissection contondante jusqu’à ce que l’artère sous-clavière puisse être visualisée. Ensuite, au microscope, disséquez l’artère sous-clavière à l’aide de deux micro-pinces droites, puis ligaturez-la distalement, et placez une ligature autour de l’extrémité proximale exposée à l’aide de quatre sutures en polyfilament O et d’une micro-pince incurvée.
Ensuite, utilisez un micro-ciseau incurvé pour inciser la paroi de l’artère sous-clavière et canuler l’artère rétrograde. Fixez ensuite le cathéter par une ligature à double nœud vers la ligature proximale, et en outre, fixez le cathéter par une ligature à double nœud vers la ligature distale afin d’empêcher la torsion artérielle ou la flexion des parties proximales de l’artère, et pour éviter le glissement ou l’hémorragie massive. Ensuite, prélevez des échantillons de sang pour l’état de l’analyse des gaz du sang artériel et surveillez en permanence les paramètres cardiovasculaires et respiratoires standard.
Placez un dispositif de dimensionnement externe sur les angles de la mandibule pour calibrer l’angiographie et permettre une comparaison exacte des mesures post-hoc de la ligne de base et du diamètre du vaisseau de suivi. Effectuez ensuite une injection rétrograde intra-artérielle en bolus de PIO non ionique à travers l’artère canulée, et rincez immédiatement la canule avec une solution saline pour éviter l’occlusion de l’échelle. Après l’angiographie de base par soustraction digitale, repositionnez le lapin en position couchée, en prenant soin de ne pas manipuler ou déplacer le cathéter intra-artériel.
Connectez la surveillance de la pression artérielle et commencez à surveiller en permanence les paramètres cardiovasculaires et respiratoires standard, y compris l’électrocardiogramme, la pression artérielle, la saturation périphérique en oxygène, le dioxyde de carbone expiratoire et la température centrale. Transférez les données via l’interface de sortie analogique vers un convertisseur numérique analogique, un enregistreur de données et stockez-les. Placez la tête dans un support à un angle de 30 degrés orienté vers le bas, puis désinfectez la peau de la tête et du cou avec de la povidone iodée trois fois pendant une minute chacune.
Après avoir recouvert la nouvelle zone chirurgicale avec des feuilles stériles, faites une incision cutanée médiane. Insérez un petit écarteur chirurgical pour faire trois ostéotomies rondes en fonction des repères externes du crâne et calibrez les sondes de neuromonitoring. Placez la pression intercrânienne et le laser doppler interparenchymateux, les pointes de neurosurveillance du flux sanguin et scellez les trous de fraise avec de la cire osseuse pour maintenir le liquide crânien serré et pour permettre une condition de crâne fermé afin de maintenir l’état d’équilibre de I-C-P-C-P-P et MAP.
Ensuite, insérez une aiguille d’accès à la colonne vertébrale pédiatrique de calibre 22 et de 40 millimètres par voie transcutanée dans la citerne magna. Faites ensuite glisser l’aiguille vers le bas le long de la protubérance occipitale externe osseuse jusqu’à ce qu’un espace soit détecté. Confirmez le bon positionnement de l’aiguille en observant l’écoulement spontané du liquide céphalo-rachidien avec la tête du lapin inclinée vers le bas à un angle de 20 à 30 degrés pendant quelques minutes.
Maintenant, utilisez un tube de surveillance de la pression rempli de sang pour connecter l’aiguille d’accès à la colonne vertébrale dans la citerne magna au robinet d’arrêt à trois voies attaché à l’artère sous-clavière préalablement cathétérisée. Ouvrez ensuite la connexion de dérivation entre l’artère sous-clavière et le sternum magna CI pour induire une hémorragie sous-arachnoïdienne. Après l’ouverture du shunt, la pression intracrânienne commence à augmenter à des valeurs proches de la pression artérielle diastolique.
À ce moment-là, le débit dans le shunt s’arrête si le plateau intercrânien est maintenu pendant plus de 10 secondes, ou si la pression diminue spontanément, fermez le shunt après que la pression intercrânienne ait atteint son pic, maintenez l’aiguille d’accès à la colonne vertébrale en place jusqu’à ce que la pression revienne à un état stable proche des valeurs de base. Enfin, retirez l’aiguille fine de débit sanguin cérébral et les sondes de pression intracrânienne. Bouchez les trous de fraise avec de la cire d’os, puis utilisez du sulfate de néomycine pour effectuer une irrigation rigoureuse de la plaie et suturer la peau.
Tout d’abord, suturez la peau sur les trous de fraise. Ensuite, après le repositionnement du lapin en position couchée et l’ablation du cathéter de l’artère sous-clavière, suturez le muscle pectoral et la peau. Le modèle de dérivation sanguine enragée de l’HSA décrit dans ce rapport produit une lésion cérébrale précoce dans l’hippocampe, le cortex basal et le système vasculaire cérébral dès 24 heures après la blessure, induisant une distribution sanguine caractéristique.
De plus, ce modèle déclenche des degrés modérés à sévères de vasospasme cérébral retardé au troisième jour. Après l’induction de l’HSA, le taux de mortalité de l’intervention est d’environ 20 % en raison d’un arrêt respiratoire ou d’une bradycardie sévère au moment de l’HSA aiguë au cours de laquelle les animaux sont sous anesthésie complète. D’un point de vue technique, ce modèle de dérivation sanguine permet une induction à la fois indépendante de l’examinateur et contrôlable.
Lors de cette procédure, il est important de se rappeler de sécuriser fermement cette artère sous-clavon, de prendre une grande voiture et de repositionner l’animal, et d’être très doux et patient pendant l’acupuncture Cy Sternum.
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Cet article présente une méthode permettant de mettre en place un modèle de dérivation sanguine contrôlé par la pression intracrânienne pour l'hémorragie sous-arachnoïdienne aiguë (HSA) chez le lapin. Le protocole reproduit de manière fidèle les conditions physiopathologiques humaines, offrant ainsi des informations précieuses sur l'HSA.
Des modèles animaux fiables qui reproduisent à la fois les séquelles précoces et différées de l'hémorragie sous-arachnoïdienne (SAH) sont essentiels pour la recherche neurovasculaire translationnelle et la validation préclinique de cibles thérapeutiques. Le modèle de dérivation sanguine chez le lapin permet une induction de la SAH indépendante de l'examinateur et contrôlée par la pression intracrânienne (ICP), soutenant ainsi des études mécanistiques reproductibles des lésions cérébrales aiguës et du vasospasme différé. Ce modèle comble un manque important dans la chaîne de découverte en offrant une plateforme robuste pour évaluer les mécanismes physiopathologiques et les interventions potentielles.
Ce modèle s'intègre à la continuité découverte-préclinique en permettant des études fondées sur des hypothèses concernant la physiopathologie de l'hémorragie sous-arachnoïdienne et des tests d'interventions.