Name: Manipulation du Rat coton en études pour lévaluation pré-clinique de virus oncolytiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: Apprenez une méthode de manipulation sécurisée des rats coton pour réduire leur stress lors de la capture. Cette technique améliore le bien-être animal et la fiabilité des études précliniques.

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Breanne Cuddington est titulaire d’une bourse de recherche de la Fondation canadienne du cancer du sein. Ces travaux ont été financés par des subventions de fonctionnement de la Société de recherche sur le cancer et de l’Institut de recherche de la Société canadienne du cancer (anciennement l’Alliance canadienne de recherche sur le cancer du sein). Nous remercions Ann Tollefson (École de médecine de l’Université Saint Louis) pour les cellules LCRT et les Drs Kathleen Delaney et Marion Corrick pour l’assistance technique concernant l’hébergement des rats de coton et la sédation.

<ol><li>Cervantes-Garcia, D., Ortiz-Lopez, R., Mayek-Perez, N., Rojas-Martinez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolytic+virotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Oncolytic virotherapy.</a> Ann Hepatol. 7 (1), 34-45 (2008).</li>
<li>Vaha-Koskela, M. J., Heikkila, J. E., Hinkkanen, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolytic+viruses+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Oncolytic viruses in cancer therapy.</a> Cancer Lett. 254 (2), 178-216 (2007).</li>
<li>Abril, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+viral+and+host+factors+contribute+to+neurovirulence+of+bovine+herpesviruses+1+and+5+in+interferon+receptor-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Both viral and host factors contribute to neurovirulence of bovine herpesviruses 1 and 5 in interferon receptor-deficient mice.</a> J Virol. 78 (7), 3644-3653 (2004).</li>
<li>Nakamichi, K., Matsumoto, Y., Otsuka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+infection+of+bovine+herpesvirus+1+in+non-permissive+murine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Defective infection of bovine herpesvirus 1 in non-permissive murine cells.</a> J Vet Med Sci. 63 (10), 1139-1142 (2001).</li>
<li>Boukhvalova, M. S., Blanco, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cotton+rat+sigmodon+hispidus+model+of+respiratory+syncytial+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Microbiol+Immunol%22%5BJournal%5D)">The cotton rat sigmodon hispidus model of respiratory syncytial virus infection.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 372, 347-358 (2013).</li>
<li>Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+immunity+in+the+respiratory+tract+and+protection+from+bovine+herpesvirus+type+1+infection+by+different+routes+of+immunization+with+recombinant+adenovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Viral+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction of immunity in the respiratory tract and protection from bovine herpesvirus type 1 infection by different routes of immunization with recombinant adenovirus.</a> Viral Immunol. 11 (2), 79-91 (1998).</li>
<li>Hughes, T. C. R., Lilley, C. E., Ponce, R., Kaufman, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+analysis+of+an+oncolytic+herpesvirus+encoding+granulocyte-macrophage+colony+stimulating+factor+for+the+treatment+of+malignant+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncolytic+Virotherapy%22%5BJournal%5D)">Critical analysis of an oncolytic herpesvirus encoding granulocyte-macrophage colony stimulating factor for the treatment of malignant melanoma.</a> Journal of Oncolytic Virotherapy. 3, 11-20 (2014).</li>
<li>Jones, C., Chowdhury, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+biology+of+bovine+herpesvirus+type+1+%28BHV-1%29%2C+its+role+as+a+cofactor+in+the+bovine+respiratory+disease+complex+and+development+of+improved+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Health+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">A review of the biology of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1), its role as a cofactor in the bovine respiratory disease complex and development of improved vaccines.</a> Anim Health Res Rev. 8 (2), 187-205 (2007).</li>
<li>Jones, C., Chowdhury, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+herpesvirus+type+1+%28BHV-1%29+is+an+important+cofactor+in+the+bovine+respiratory+disease+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Clin+North+Am+Food+Anim+Pract%22%5BJournal%5D)">Bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) is an important cofactor in the bovine respiratory disease complex.</a> Vet Clin North Am Food Anim Pract. 26 (2), 303-321 (2010).</li>
<li>Hushur, O., Takashima, Y., Matsumoto, Y., Otsuka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction+of+bovine+herpesvirus+1+%28BHV-1%29+growth+in+non-permissive+cells+beyond+the+expression+of+immediate+early+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Restriction of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) growth in non-permissive cells beyond the expression of immediate early genes.</a> J Vet Med Sci. 66 (4), 453-455 (2004).</li>
<li>Cuddington, B. P., Dyer, A. L., Workenhe, S. T., Mossman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolytic+bovine+herpesvirus+type+1+infects+and+kills+breast+tumor+cells+and+breast+cancer-initiating+cells+irrespective+of+tumor+subtype%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Oncolytic bovine herpesvirus type 1 infects and kills breast tumor cells and breast cancer-initiating cells irrespective of tumor subtype.</a> Cancer Gene Ther. 20 (5), 282-289 (2013).</li>
<li>Cuddington, B. P., Mossman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permissiveness+of+Human+Cancer+Cells+to+Oncolytic+Bovine+Herpesvirus+1+Is+Mediated+in+Part+by+KRAS+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Permissiveness of Human Cancer Cells to Oncolytic Bovine Herpesvirus 1 Is Mediated in Part by KRAS Activity.</a> J Virol. 88 (12), 6885-6895 (2014).</li>
<li>Small, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+trial+of+intravenous+CG7870%2C+a+replication-selective%2C+prostate-specific+antigen-targeted+oncolytic+adenovirus%2C+for+the+treatment+of+hormone-refractory%2C+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A phase I trial of intravenous CG7870, a replication-selective, prostate-specific antigen-targeted oncolytic adenovirus, for the treatment of hormone-refractory, metastatic prostate cancer.</a> Mol Ther. 14 (1), 107-117 (2006).</li>
<li>Freytag, S. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+I+study+of+replication-competent+adenovirus-mediated+double+suicide+gene+therapy+for+the+treatment+of+locally+recurrent+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Phase I study of replication-competent adenovirus-mediated double suicide gene therapy for the treatment of locally recurrent prostate cancer.</a> Cancer Res. 62 (17), 4968-4976 (2002).</li>
<li>Benjamin, R., Helman, L., Meyers, P., Reaman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I%2FII+dose+escalation+and+activity+study+of+intravenous+injections+of+OCaP1+for+subjects+with+refractory+osteosarcoma+metastatic+to+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">A phase I/II dose escalation and activity study of intravenous injections of OCaP1 for subjects with refractory osteosarcoma metastatic to lung.</a> Hum Gene Ther. 12 (12), 1591-1593 (2001).</li>
<li>Prince, G. A. The Cotton Rat in Biomedical Research. Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.nal.usda.gov/awic/newsletters/v5n2/5n2princ.htm">http://www.nal.usda.gov/awic/newsletters/v5n2/5n2princ.htm</a> 3-5 (1994).</li>
<li>Tsai, J. C., Garlinghouse, G., McDonnell, P. J., Trousdale, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+animal+model+of+adenovirus-induced+ocular+disease.+The+cotton+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">An experimental animal model of adenovirus-induced ocular disease. The cotton rat.</a> Arch Ophthalmol. 110 (8), 1167-1170 (1992).</li>
<li>Ginsberg, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+investigating+the+molecular+pathogenesis+of+adenovirus+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A mouse model for investigating the molecular pathogenesis of adenovirus pneumonia.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88 (5), 1651-1655 (1991).</li>
<li>Russell, S. J., Peng, K. W., Bell, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncolytic+virotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Oncolytic virotherapy.</a> Nat Biotechnol. 30 (7), 658-670 (2012).</li>
<li>Mossman, K. L., Saffran, H. A., Smiley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+ICP0+mutants+are+hypersensitive+to+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus ICP0 mutants are hypersensitive to interferon.</a> J Virol. 74 (4), 2052-2056 (2000).</li>
<li>Mossman, K. L., Smiley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+ICP0+and+ICP34.5+counteract+distinct+interferon-induced+barriers+to+virus+replication%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus ICP0 and ICP34.5 counteract distinct interferon-induced barriers to virus replication.</a> J Virol. 76 (4), 1995-1998 (2002).</li>
<li>Hummel, J. L., Safroneeva, E., Mossman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ICP0-Null+HSV-1+and+interferon+signaling+defects+in+the+effective+treatment+of+breast+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of ICP0-Null HSV-1 and interferon signaling defects in the effective treatment of breast adenocarcinoma.</a> Mol Ther. 12 (6), 1101-1110 (2005).</li>
<li>Papp, Z., Middleton, D. M., Mittal, S. K., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+immunization+with+recombinant+adenoviruses%3A+induction+of+immunity+and+protection+of+cotton+rats+against+respiratory+bovine+herpesvirus+type+1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Mucosal immunization with recombinant adenoviruses: induction of immunity and protection of cotton rats against respiratory bovine herpesvirus type 1 infection.</a> J Gen Virol. 78 (11), 2933-2943 (1997).</li>
<li>Papp, Z., Babiuk, L. A., Baca-Estrada, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+pre-existing+adenovirus-specific+immunity+on+immune+responses+induced+by+recombinant+adenovirus+expressing+glycoprotein+D+of+bovine+herpesvirus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">The effect of pre-existing adenovirus-specific immunity on immune responses induced by recombinant adenovirus expressing glycoprotein D of bovine herpesvirus type 1.</a> Vaccine. 17 (7-8), 933-943 (1999).</li>
<li>Mittal, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+systemic+and+mucosal+immune+responses+in+cotton+rats+immunized+with+human+adenovirus+type+5+recombinants+expressing+the+full+and+truncated+forms+of+bovine+herpesvirus+type+1+glycoprotein+gD%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Induction of systemic and mucosal immune responses in cotton rats immunized with human adenovirus type 5 recombinants expressing the full and truncated forms of bovine herpesvirus type 1 glycoprotein gD.</a> Virology. 222 (2), 299-309 (1996).</li>
<li>Steel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syngeneic+Cotton+Rat+Cancer+Model+for+Replicating+Adenoviral+Vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Syngeneic Cotton Rat Cancer Model for Replicating Adenoviral Vectors.</a> Molecular Therapy. 13 (1), 123(2006).</li>
<li>Toth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cotton+rat+tumor+model+for+the+evaluation+of+oncolytic+adenoviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses.</a> Hum Gene Ther. 16 (1), 139-146 (2005).</li>
<li>Toth, K., Spencer, J. F., Wold, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunocompetent%2C+semi-permissive+cotton+rat+tumor+model+for+the+evaluation+of+oncolytic+adenoviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Immunocompetent, semi-permissive cotton rat tumor model for the evaluation of oncolytic adenoviruses.</a> Methods Mol Med. 130, 157-168 (2007).</li>
<li>Steel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunocompetent+syngeneic+cotton+rat+tumor+models+for+the+assessment+of+replication-competent+oncolytic+adenovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Immunocompetent syngeneic cotton rat tumor models for the assessment of replication-competent oncolytic adenovirus.</a> Virology. 369 (1), 131-142 (2007).</li>
<li>Workenhe, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+HSV-mediated+oncolysis+shapes+the+antitumor+immune+response+and+contributes+to+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunogenic HSV-mediated oncolysis shapes the antitumor immune response and contributes to therapeutic efficacy.</a> Mol Ther. 22 (1), 123-131 (2014).</li>
<li>Sobol, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+antiviral+immunity+is+a+determinant+of+the+therapeutic+success+of+oncolytic+virotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Adaptive antiviral immunity is a determinant of the therapeutic success of oncolytic virotherapy.</a> Mol Ther. 19 (2), 335-344 (2011).</li>
<li>Prince, G. A. The Cotton Rat in Biomedical Research. Animal Welfare Information Center Newsletter. 5 (2), 
 
 <a target="_blank" href="http://www.nal.usda.gov/awic/newsletters/v5n2/5n2princ.htm">http://www.nal.usda.gov/awic/newsletters/v5n2/5n2princ.htm</a> (1994).</li>
</ol>

Les auteurs reconnaissent qu’il n’y a aucun conflit d’intérêts financier lié à cette recherche.

Les rats cotonniers sont très excitables et ont une forte réponse de fuite. Par conséquent, des précautions particulières doivent être prises pour minimiser tout stress excessif sur l’animal. La configuration de la cage décrite permettra de capturer facilement et en toute sécurité les animaux, l’emplacement du tube d’enrichissement étant de la plus haute importance. Lors de la mise en place des cages, assurez-vous que les tubes d’enrichissement répondent aux exigences de taille et de forme et qu’ils sont correctement ori...

Les virus oncolytiques (OV) se répliquent sélectivement dans des cellules tumorales en exploitant les différences biochimiques entre les cellules normales et tumorales 1,2. Il existe deux types de VO: ceux qui ne nécessitent pas une mutation pour atteindre oncolyse sélective, dénommé naturels des virus de type sauvage et celles qui doivent être conçus pour atteindre oncolyse sélective. La collection de mutations au sein d&#39;un type de tumeur donné détermine la nature de l&#39;avantage sélectif de croissance pour les cellules normales pour une VO 2. La sécurité et l&#39;avantage d&#39;utiliser VO a été démontrée dans des essais cliniques 3-7. Malgré les progrès dans le domaine de virothérapie oncolytique il existe des écarts entre les résultats pré-cliniques et cliniques, ce qui suggère que de meilleurs modèles sont nécessaires pour évaluer l&#39;efficacité antitumorale de VO. Herpèsvirus bovin de type 1 (BHV-1) est un membre de la famille des Herpesviridae, et Alphaherpesviridae sous-famille. BHV-1 initiAtes bovin de complexe des maladies respiratoires chez les bovins, se manifestant dans une grande variété de symptômes ressemblant à un mauvais rhume 8,9. BHV-1 se lie à des récepteurs fixation et d&#39;entrée utilisées par le HSV-1, comme le sulfate d&#39;héparane et nectin-1 10. Cependant, il se lie CD155 à la place de nectin-2 10. BHV-1 a une gamme d&#39;hôtes très étroit de telle sorte qu&#39;elle est incapable d&#39;entrer efficacement et initier la réplication dans les cellules murines normales et transformées 3,4,10. Cela rend l&#39;utilisation de modèles murins classiques problématique. La capacité oncolytique de BHV-1 a été démontrée in vitro 11,12. BHV-1 a été montré pour initier la réplication et à tuer des cellules tumorales humaines provenant de diverses origines histologiques, comprenant des cellules de cancer du sein et le cancer du sein cellules initiatrices 11,12. Cependant, la capacité anti-tumorale de BHV-1 doit être évaluée in vivo dans le cadre d&#39;un hôte immunocompétent. Adénovirus humain (Ad), pour lesquelsil ya 57 sérotypes identifiés, provoque le plus souvent une maladie respiratoire chez les humains. Vecteurs Ad oncolytiques ont été évalués pour leur efficacité antitumorale avec plusieurs avançant dans les essais cliniques de 13 à 15. Malgré des données pré-cliniques prometteurs, les résultats cliniques ont été à la hauteur des attentes. Des modèles de xénogreffes tumorales humaines sont généralement utilisés pour étudier l&#39;efficacité antitumorale de vecteurs Ad, bien qu&#39;ils présentent une atténués réponses immunitaires au virus 16,17. En outre, les modèles murins syngéniques sont non permissif à l&#39;infection de l&#39;annonce, ce qui rend l&#39;évaluation des réponses immunitaires de l&#39;hôte en utilisant ces modèles irréalisables 17,18. Le système immunitaire de l&#39;hôte a été identifié comme le mécanisme le plus influent par lequel VO provoquent la mort des cellules tumorales 19. les réponses antitumorales et entre rendues tolérantes antigène associé à une tumeur non rendues tolérantes (TAA) et modèles diffèrent peuvent influer grandement sur le succès de la thérapie OV. Le HSV-1 OV KM100 (ICP0 N212VP16 en 1814 20) 20,21 provoqué une régression des tumeurs chez 80% des souris porteuses de tumeurs dans un modèle de cancer mammaire 22 de l&#39;antigène T du polyome Moyen murin. Cependant, dans ses deux modèles-/ neu, l&#39;efficacité antitumorale de KM100 a varié entre 20% régression complète chez des souris syngéniques et la stase tumorale dans transgénique, souris HER2-rendues tolérantes. Ensemble, ces données soulignent l&#39;importance d&#39;évaluer pleinement VO utilisant des modèles animaux qui récapitulent mieux le paysage immunitaire humain pour bien comprendre quelles sont les caractéristiques déterminer le succès thérapeutique. Le rat de coton (Sigmodon de hispidus), indigène de l&#39;Amérique du Nord et du Sud, est le plus souvent utilisé comme un modèle de l&#39;infection par le virus respiratoire syncytial (tel que revu à 5). rats de cotonniers sont également utilisés dans le BHV-1-anti- recherche de vaccination qu&#39;ils récapitulent la pathologie associée à la maladie respiratoire bovine complexe 6,23. En outre, le BHV-1 chez des rats de cotonest immunogène, induisant des muqueuses et soutenue des réponses immunitaires systémiques 6,23-25. Les lignées cellulaires ont été tirés de fibrosarcome spontanée et ostéosarcomes de la glande mammaire (de LCRT) et d&#39;os (CCRT et TRCV), respectivement 26. rats de coton ont été utilisés pour évaluer l&#39;efficacité in vivo des vecteurs Ad oncolytiques comme ils sont sensibles à l&#39;infection annonce et présentent une pathologie semblable aux humains 27-29. L&#39;utilisation de modèles immunodéprimés pour l&#39;évaluation pré-clinique de VO sont non seulement moins indicative de réponses cliniques au traitement mais ils ne parviennent pas à prendre en compte le rôle du système immunitaire dans virothérapie oncolytique 30,31. Par conséquent, le coton et les modèles syngéniques de rats rendus tolérants tumeur de carcinome mammaire et l&#39;ostéosarcome sont des modèles pertinents pour évaluer l&#39;efficacité préclinique de VO, comme BHV-1 et des annonces qui ne peut être étudiée en utilisant des modèles murins classiques.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco' Eagle modifié' s medium&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque&nbsp ;</td></tr><tr><td>1X Saline tamponnée au phosphate&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Peut préparer en laboratoire, filtrer pour stériliser</td></tr><tr><td>200 mM L-glutamine</td><td>Gibco</td><td>25030164</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>100x antibiotique-antimycosique&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr> de <tr><td>sérum fœtal bovin</td><td>Quality Biological Inc.</td><td>110-001-101HI</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>T-150cm2 flacon de culture tissulaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-80</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>1X TypLE Express</td><td>Life Technologies</td><td>12604-013</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire à 12 puits, fond plat</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-29</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque, doit être traité par culture tissulaire</td></tr><tr><td>alamarBlue</td><td>Life Technologies</td><td>DAL1025</td><td>Peut utiliser un réactif alternatif pour déterminer la viabilité cellulaire</td></tr><tr><td>8640 Teklad 22/5 Régime alimentaire pour rongeurs</td><td>Harlan&nbsp ;</td><td>8640</td><td></td></tr><tr><td>Litière pour rongeurs en épi de maïs de 1/8 po</td><td>Harlan</td><td>7092</td><td></td></tr><tr><td>Nestlets</td><td>Ancare-Fabriqué</td><td></td> <td>en fibre de coton vierge pulpée, sans poussière et autoclavable</td></tr><tr><td>Tubes coniques de 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque, doit être stérile</td></tr><tr><td>Isoflurane USP, 99,9 %, anesthésique par inhalation</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td>M60302</td><td></td></tr><tr><td>70 % d’éthanol</td><td></td><td></td><td>Peut préparer en laboratoire</td></tr> du <tr><td>formol tamponné neutre à 10 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>NAPCO NapFlow 1200 Classe II A/B3 Biosécurité Enceinte de sécurité microbiologique (hotte de culture cellulaire)</td><td>NAPCO</td><td>Modèle utilisé non disponible actuellement</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>Thermo Fisher Scientific Bain d’eau chauffé de précision</td><td>Fisher Modèle scientifique</td><td>utilisé non disponible actuellement&nbsp ;</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td colspan="4">[en-tête]</td></tr><tr><td>Hémacytomètre Reichert</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z359629</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>Typhoon Trio BioAnalyzer&nbsp ;</td><td>Le modèle GE Healthcare Life Sciences</td><td>utilisé n’est pas disponible actuellement.</td><td>Peut utiliser n’importe quel lecteur de plaque de fluorescence</td></tr><tr><td>Tecan Safire2 Lecteur de microplaques multi-détection</td><td>Tecan</td><td>Modèle utilisé non disponible actuellement.</td><td>Peut utiliser n’importe quel lecteur de plaque de fluorescence</td></tr><tr><td>Centrifugeuse de paillasse Allegra 6R</td><td>Beckman Coulter</td><td>366816</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>Machine d’anesthésie de table</td><td>VetEquip</td><td>Modèle utilisé non disponible actuellement.</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque, doit être portable</td></tr><tr><td>Wahl Mini tondeuse à cacahuètes</td><td>Wahl</td><td></td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque de petites tondeuses</td></tr><tr><td>Seringues à insuline 29 G x 1/2', 0,3 mL</td><td>BD</td><td>329464</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque. Les seringues à insuline sont recommandées car elles facilitent les injections à travers le rat peau dure.</td></tr><tr><td>Cotons-tiges</td><td>MedPro</td><td>018-425</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection à pointe acérée</td><td>Fisher Scientific</td><td>8940</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr><tr><td>Pince à disséquer les tissus</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-812-41</td><td>Peut utiliser n’importe quelle marque</td></tr></tbody></table>

manipulation du rat coton en études pour l&#39;évaluation pré-clinique de virus oncolytiques

Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses

Les virus oncolytiques sont une nouvelle thérapie anticancéreuse capable de cibler les cellules tumorales, tout en laissant les cellules saines intactes. Pour que cette stratégie soit couronnée de succès, des études récentes ont montré que l’implication du système immunitaire de l’hôte est essentielle. Par conséquent, la virothérapie oncolytique doit être évaluée dans le contexte d’un modèle immunocompétent. De plus, l’étude des thérapies antitumorales dans des modèles animaux tolérés pourrait mieux récapituler les résultats observés dans les essais cliniques. Les rats cotonniers, couramment utilisés pour étudier les virus respiratoires, constituent un modèle attrayant pour étudier la virothérapie oncolytique, car les modèles syngéniques du carcinome mammaire et de l’ostéosarcome sont bien établis. Cependant, il y a un manque d’informations publiées sur la procédure de manipulation appropriée pour ces rongeurs très excitables. L’approche de manipulation et de capture décrite minimise le stress des animaux pour faciliter l’expérimentation. Cette technique repose sur la capacité du chercheur à garder son calme pendant la manipulation et à effectuer les procédures en temps opportun. Enfin, nous décrivons comment préparer les cellules tumorales mammaires du rat de coton pour une formation tumorale sous-cutanée cohérente, et comment effectuer des injections intratumorales et intrapéritonéales. Ces méthodes peuvent être appliquées à un large éventail d’études, favorisant le développement du rat cotonnier en tant que modèle préclinique pertinent pour étudier la thérapie antitumorale.

En raison de la nature extrêmement excitable de rats de coton, être familier avec et en utilisant des procédures optimisées pour réduire le stress des animaux facilitera leur utilisation comme un modèle animal pré-clinique. Utilisation de techniques de manipulation appropriées également minimiser les risques pour le chercheur. Lors de l'utilisation des rats de coton, il est impératif de rester calme. Les rats sont très excités et vont tenter d'échapper à leur cage. Utilisation d'un tube d'en...

Les rats cotonniers sont extrêmement excitables et ont une forte réaction de fuite ou de combat. Une méthode de manipulation optimisée pour réduire le stress des animaux est décrite, qui rendra les rats cotonniers plus accessibles en tant que modèle préclinique.

Manipulation du Rat coton en études pour l&#39;évaluation pré-clinique de virus oncolytiques

Oncolytic viruses are a novel anticancer therapy with the ability to target tumor cells, while leaving healthy cells intact.  For this strategy to be ...

L’objectif général de cette procédure est de démontrer la manipulation et la capture en toute sécurité des rats de coton à l’aide d’une méthode spécifique visant à réduire le stress subi par l’animal. Pour ce faire, il suffit de placer d’abord un tube d’enrichissement contre l’extrémité d’une cage à rats et un panier en acier sécurisable sur le dessus. Dans la deuxième étape, l’équipement de protection individuelle approprié est mis en place et le gosse de coton est autorisé à ramper dans le tube d’enrichissement.Le tube est ensuite maintenu contre le côté de la cage et l’animal piégé est rapidement transféré dans un récipient en plastique avec des trous d’aération pour le transport vers la chambre d’induction de l’anesthésie. Dans la dernière étape, un cône nasal spécial spécialement adapté au museau du gosse de coton est placé sur l’animal pour faciliter la sédation complète. En fin de compte, cette procédure de capture peut être utilisée pour manipuler en toute sécurité les gosses de coton d’une manière qui diminue leur stress et augmente leur sécurité.Lors de l’utilisation de ces rongeurs très excitables dans des études précliniques, les individus novices dans cette méthode auront généralement des difficultés en raison des divergences dans la littérature concernant la manipulation, le logement et le comportement du rat cotonnier. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle pour compléter les comptes rendus écrits afin de préparer les chercheurs aux défis comportementaux liés au travail avec des rats cotonniers. Brianne Cuttington, une étudiante diplômée, et Meganer, une boursière postdoctorale de mon laboratoire, ont fait la démonstration de la procédure. Pour diminuer les combats, a logé les rats de coton individuellement dans des cages en polycarbonate contenant une litière d’épis de maïs de huit pouces, une section de tube en PVC ne dépassant pas huit pouces et des nids pour l’enrichissement afin de permettre la capture sûre et facile des animaux.Placez le tube d’enrichissement contre l’extrémité de la cage, puis placez un panier rassis sécurisable sur le dessus de la cage contenant de la nourriture pour rongeurs et une bouteille d’eau. Rassemblez maintenant un grand récipient en plastique transparent avec des trous pour l’air, un couvercle et une chambre d’induction anesthésique, suffisamment grand pour s’adapter au récipient et un cône nasal fixé au tuyau de sortie de gaz. Notez que le gosse de coton a un museau allongé nécessitant une forme différente pour délivrer le gaz anesthésique, comme le montre cette image d’un cône de nez, conçu pour s’adapter correctement à un rat de coton travaillant par paires.Les chercheurs doivent mettre des gants en cuir épais pour se protéger pendant toutes les étapes de la procédure. Lorsque les deux chercheurs sont prêts, placez la cage de l’animal sur une surface plane et retirez le couvercle extérieur. Ensuite, lorsque l’animal est à l’intérieur du tube d’enrichissement, soulevez légèrement le plateau d’alimentation en acier et manœuvrez lentement le tube jusqu’à ce qu’il soit parallèle aux côtés de la cage et contre le dos.Ensuite, soulevez lentement et délibérément le bord du couvercle en acier le plus éloigné du tube d’enrichissement, en gardant l’autre extrémité en contact avec la cage. Demandez au deuxième chercheur de faire un espace suffisamment grand pour le contenant en plastique. Ensuite, d’un mouvement fluide et rapide, poussez le plastique et le récipient sur le dessus du tube d’enrichissement.Maintenez le contact du récipient avec le côté de la cage qui emprisonne l’animal dans le tube. Lors de la manipulation des rats cotonniers, il est important d’être patient et d’utiliser une main ferme car les animaux ont une forte réaction de fuite ou de combat, et ils essaieront d’éviter la capture en courant et en sautant hors de la cage. Si un animal s’échappe, évitez de le manipuler par la queue.Comme le dégantage peut se produire, retirez le plateau d’alimentation en acier et donnez le couvercle du récipient en plastique à l’autre chercheur. Faites ensuite glisser le couvercle en plastique entre le côté de la cage et le récipient. Être conscient des appendices de l’animal piégé dans le processus et fermer, mais ne pas sceller le récipient, s’assurer que le récipient reste fermé.Transportez l’animal jusqu’à la chambre d’induction. Ensuite, demandez à un chercheur de placer rapidement l’animal dans la chambre et de retirer le couvercle du récipient d’un seul mouvement fluide pendant que l’autre ouvre et remet immédiatement en place le couvercle de la chambre d’induction. Enfin, après l’administration de l’anesthésie, retournez le rat dans sa cage avec surveillance jusqu’à ce que l’animal retrouve sa pleine mobilité et sa recomposition sternale.L’injection de cellules tumorales viables est importante pour la bonne formation des tumeurs. Dans cette image, une monocouche saine de cellules LCRT qui peut être préparée pour être injectée dans des gosses de coton est montrée. En revanche, ces cellules LCRT ont une faible viabilité et ne doivent pas être utilisées pour des injections.Les tumeurs formées à partir de cellules LCRT se développent rapidement et, par conséquent, des centres nécrotiques se forment souvent en tant que tels, la formation de tumeurs doit être surveillée attentivement pour éviter l’ulcération. En cas d’ulcération, l’animal doit être sacrifié pour éviter l’infection et la mort éventuelle par septicémie. Le maintien de l’intégrité du tissu tumoral après l’excision permettra d’obtenir un échantillon qui est une représentation plus précise de la tumeur in vivo.Par exemple, ici, une technique d’excision par laquelle la tumeur est soigneusement séparée des tissus environnants à l’aide d’un scalpel et d’une pince à épiler est montrée comme le montre cette image finale. La structure dense et hautement vascularisée de la tumeur est maintenue par cette technique d’excision, qui est importante pour l’analyse des traitements qui affectent le système vasculaire tumoral. Comme c’est le cas avec de nombreux virus oncolytiques Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler de rester calme et d’effectuer chaque étape lentement et délibérément pour éviter d’agiter les rats cotonniers.Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de capturer et de manipuler en toute sécurité les rats cotonniers.

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