Mesure de la fonction musculaire lisse dans les tissus isolés Bath-applications à la pharmacologie de recherche

L’objectif global de cette procédure est de mesurer le tonus musculaire lisse. Ceci est accompli en disséquant et en préparant d’abord les tissus. La deuxième étape consiste à monter le tissu dans un bain de tissu isolé.

Ensuite, la viabilité du tissu est testée et des mesures de contraction isométriques sont prises. En fin de compte, la préparation du bain de tissu isolé est utilisée pour tester la fonction des récepteurs, la signalisation des récepteurs et la réactivité des muscles lisses. En général, les principaux avantages de cette technique sont la flexibilité du système, la rapidité d’obtention des résultats et le maintien de l’ensemble du tissu intact.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés Dans tout domaine qui utilise des médicaments pour interférer avec la signalisation des récepteurs ou l’âme des muscles lisses, il y a quelques préparations qui doivent être soulignées. Il est essentiel de préchauffer le système de bain de tissu à 37 degrés Celsius en allumant le bain-marie chauffé à recirculation. L’eau doit s’écouler dans chaque composant au niveau du raccord barbelé le plus bas et s’écouler au niveau du raccord barbelé le plus élevé.

Chaque composant doit être connecté. Les capteurs de force doivent être calibrés et doivent également être mis sous tension au moins 15 minutes avant l’expérience pour amener leur température à un équilibre. Ensuite, lors de la connexion du gaz, vérifiez qu’il n’y a pas de fuites, puis mettez le système sous pression.

Après avoir rempli le système de solution, assurez-vous de l’amorcer et d’éliminer les bulles d’air. Il est également justifié de tester les aérateurs à bain de tissus. Une bonne aération distribuera efficacement les médicaments, mais ne déstabilisera pas les tissus immédiatement avant l’expérience.

Disséquez le tissu. Après avoir anesthésié le rat, créez un pneumothorax à l’aide de ciseaux. Jurez le long du diaphragme au bas de la cage thoracique.

Ensuite, coupez du bas de la cage thoracique jusqu’au sternum et coupez le tissu en deux. Nettoyez les organes de la colonne vertébrale pour localiser l’aorte, qui se trouve directement le long de la colonne vertébrale. Maintenant, coupez toutes les connexions à l’aorte et coupez l’aorte perpendiculairement à la colonne vertébrale au niveau du diaphragme.

Ensuite, tenez doucement l’aorte et disséquez l’aorte de la colonne vertébrale. Commencez par la zone inférieure du diaphragme adjacente à la colonne vertébrale et progressez vers le cœur. Faites simplement attention de ne pas tirer ou tirer sur le tissu aortique, car cela peut l’endommager immédiatement.

Placez l’aorte dans une boîte de dissection contenant du PSS. Maintenant, prenez un fil et faites un petit angle de 90 degrés. À une extrémité, ancrez l’extrémité inclinée du fil dans la fondation de la parabole de dissection.

Ensuite, enfilez soigneusement le fil de guidage dans la lumière de l’aorte et faites glisser l’aorte sur le fil. Lorsque l’extrémité libre du fil devient visible, pliez-le doucement et enfoncez-le dans le fondement, stabilisant ainsi le tissu. Maintenant, à l’aide de petits ciseaux et de pinces Vénus, retirez le tissu adipeux périvasculaire et d’autres tissus étrangers jusqu’à ce que l’aorte thoracique apparaisse blanche et quelque peu fibreuse.

Une fois débarrassé de l’excès de tissus, retirez soigneusement l’aorte propre du fil. Terminez cette section en coupant l’aorte en anneaux de trois à cinq millimètres de large. Un anneau aortique de portée.

Préparez deux crochets à tissus avec des sutures pour le fixer dans la chambre du bain. Un crochet doit avoir une suture avec une petite boucle nouée pour la fixation à une tige. L’autre crochet a besoin d’un morceau de suture de 10 à 14 centimètres de long.

Pour faire un nœud, attachez soigneusement une paire de ces crochets en tissu à chaque anneau aortique. Attention à ne pas emmêler les crochets. Ensuite, transférez chaque morceau de tissu dans un plat de PSS à température ambiante avec un porte-mouchoir fixé à un support d’anneau.

Ensuite, glissez la boucle nouée sur la cheville de la tige et utilisez le long morceau de suture pour maintenir le tissu vers le haut. Ensuite, placez la tige dans la chambre et assurez-vous que la tige est bien fixée. Maintenant, attachez la suture du crochet restant au transducteur de force.

Laissez suffisamment de mou dans la suture pour que la tension entre le capteur de force et le tissu puisse être ajustée au micromètre. Répétez ce processus pour chaque anneau dans chaque chambre. Maintenant, réglez la tension passive.

Utilisez le micromètre pour augmenter la tension à deux grammes et attendez que la tension sur le tissu cesse d’augmenter. Augmentez ensuite la tension de deux grammes supplémentaires, et encore une fois, attendez le changement de tension. Pour finir.

La tension devrait maintenant être d’environ 3,2 grammes. Répétez ce processus sur chaque anneau de chaque chambre. Après avoir réglé toutes les tensions passives, laissez les tissus s’équilibrer pendant une heure.

Pendant ce temps, remplacez le PSS toutes les 15 minutes et faites d’autres préparations pour l’expérience, comme la préparation des médicaments à la fin de la période d’équilibre. Lavez le mouchoir une dernière fois, enregistrez les données et rétablissez toutes les entrées. Ensuite, en suivant les détails dans le protocole texte, faites le défi initial.

Assurez-vous de documenter ces actions dans le logiciel. Après le défi initial, le changement de tension va plafonner. Ensuite, lavez le médicament de provocation pour que le ton du tissu atteigne une ligne de base.

Laissez le tissu reposer à ce ton de base pendant environ 10 minutes maintenant à un bain au véhicule dans ce cas, de l’eau à l’autre. Ajoutez suffisamment de prazocine pour une concentration de cinq nanomolaires dans le bain. Laissez les bains de tissus incuber pendant une heure sans lavage.

Pendant ce temps, réparer le phénolrine à une large gamme de concentrations le long d’une courbe logarithmique. Après une heure, ajoutez l’agoniste de la phénylrine en augmentant les concentrations dans le bain pour générer une réponse de concentration cumulative. Après chaque ajout, attendez que la réponse tissulaire se stabilise avant d’ajouter la concentration suivante.

Continuez à faire des ajouts jusqu’à ce qu’ils ne changent plus le tonus du tissu ou jusqu’à ce que toute la courbe de réponse ait atteint un plateau. Au lieu de cela, l’aorte thoracique a été incubée dans l’antagoniste des récepteurs adrénergiques alpha un POZ sim pendant une heure avant d’ajouter l’agoniste adrénergique alpha un phénylrine au bain tissulaire et de générer des courbes de réponse de contraction cumulatives les contractions maximales et demi-maximales de la phényrine. Sur le véhicule seul, les tissus de contrôle sont marqués en vert.

Le demi-maximum identifie la concentration efficace du médicament. Les mêmes mesures pour le tissu traité au razin sont visibles en noir. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de mesurer la fonction des muscles lisses dans un bain de tissus isolé.