Évaluation non invasive de l'efficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant l'imagerie endoscopique de série de souris vivantes

L’objectif global de l’expérience suivante est de tester l’efficacité de nouvelles thérapies dans des modèles de colite et de cancer en induisant la maladie chez la souris afin d’étudier des thérapies qui inhibent la pathologie induite. Le traitement est administré à titre prophylactique. Dans cette vidéo, la protéine recombinante de l’interleukine humaine 11 est utilisée et le sulfate de dextran sodique ou DSS est ensuite administré dans l’eau potable pour provoquer des lésions aiguës de la muqueuse et de nombreuses caractéristiques histopathologiques associées aux maladies inflammatoires de l’intestin.

Ensuite, les changements de la maladie sont surveillés par endoscopie afin de déterminer l’efficacité thérapeutique. En fin de compte, les résultats montrent une réduction du fardeau de la maladie sur la base de la surveillance endoscopique et du scoring après le traitement thérapeutique de souris atteintes d’une pathologie induite par la maladie. Le principal avantage de cette technique est la possibilité de surveiller une souris individuelle au cours de l’expérience par rapport aux techniques standard pour l’histologie.

L’examen de plusieurs cohortes d’animaux est nécessaire. Cette méthodologie peut nous aider à poser et à répondre à des questions clés en termes d’inflammation et de cancer du côlon, et en particulier à essayer d’établir une meilleure manipulation de la signalisation des cytokines pouvant influencer la progression de la maladie. Il est important d’utiliser ces modèles précliniques pour évaluer l’efficacité des médicaments et des composés, ce qui nous permet vraiment de tester la même souris à plusieurs reprises et de voir si ces composés ont une activité.

Je vais faire une démonstration de cette procédure avec Giovanni CI Ciano, un technicien animalier de notre institut. Le premier jour, administrer la thérapie d’intérêt et les contrôles appropriés du véhicule. Dans cette démonstration, cinq microgrammes de protéine interleukine 11 humaine recombinante ont été dissous dans 200 microlitres de solution saline tamponnée au phosphate et administrés par voie intrapéritonéale pour déterminer le moment et la fréquence des administrations, qui dépendront du profil pharmacocinétique établi pour le réactif thérapeutique testé. Voici un aperçu du traitement prophylactique utilisant des injections intrapéritonéales deux fois par jour au cours de l’expérience.

Surveillez la consistance des selles et la présence de sang et pesez chaque souris quotidiennement. Les jours de traitement, la pesée doit coïncider avec le médicament thérapeutique afin de minimiser le stress des souris causé par des manipulations répétées. Le troisième jour, préparer une solution de sulfate de sodium de dextran à 2,5 % ou de DSS dans l’eau de boisson fournie régulièrement aux souris par l’animalerie.

Environ cinq millilitres par souris et par jour de solution de DSS sont nécessaires pour l’expérience. La consommation d’eau du SSD peut changer si la température ambiante de l’animalerie fluctue. Fournir du DSS frais aux souris.

Ajoutez Liam dans des bouteilles d’eau propre pendant cinq jours consécutifs le soir du cinquième jour. Fournissez de l’eau potable normale en plus de la purée de granulés alimentaires et d’un supplément de protéines fourni dans de petites boîtes de Pétri. Le matin du huitième jour.

Procéder à l’euthanasie de la souris comme décrit dans le protocole textuel afin de prélever des tissus pour une analyse histologique ultérieure. Effectuez des tests de routine pour établir la dose appropriée de DSS et éviter les variations de lot à lot. La posologie appropriée doit être basée sur la perte de poids et l’histopathologie confirmée de la colite.

Ajustez la dose de DSS entre un et 4 % en poids par volume. En fonction de la microflore de l’animalerie et du lot de DSS. L’équipement d’endoscopie doit être assemblé conformément aux procédures standard.

Stérilisez et nettoyez la sonde de l’endoscope avec de l’éthanol à 70 % ou un lubrifiant antibactérien. Les vidéos peuvent être enregistrées à l’aide d’un ordinateur portable ou de bureau et d’un logiciel multimédia standard tel qu’iMovie. Un écran d’ordinateur standard plutôt qu’un moniteur de qualité médicale est suffisant pour visualiser le côlon pendant la procédure d’endoscopie.

Anesthésie simultanément des groupes de cinq à six souris dans une chambre avec 3 % d’yeux de fluor dans 100 % d’oxygène à un débit de 0,2 à 0,4 litre par minute. Une fois que les souris sont anesthésiées, ce qui est confirmé par un pincement des orteils, les niveaux de fluor doivent être modifiés entre 0,5 et 2 %. Pour l’entretien, retirez une souris individuelle de la chambre et placez-la côté ventral vers le haut avec sa tête fixée dans un cône nasal, l’anesthésie complète doit être surveillée et les pattes arrière doivent être ajustées de manière à ce qu’elles soient étirées derrière la souris. Lieu. Pommade Veto sur les yeux des souris pour prévenir le dessèchement.

Tenez la queue de la souris là où elle rencontre la partie inférieure de la colonne vertébrale pour révéler clairement l’anus. Le flux d’air permettra au côlon de gonfler si le flux d’air est trop fort. L’air sera pompé dans l’estomac de la souris.

Insérez avec précaution la gaine rigide de l’endoscope dans le rectum. Généralement, l’endoscope peut être inséré jusqu’à trois centimètres, point auquel le côlon chez la souris se courbe et n’est pas accessible à l’endoscope rigide. Une difficulté courante lors des procédures d’endoscopie est le blocage de l’accès à la lumière du côlon en raison de matières fécales.

Évitez cela en massant doucement le ventre des souris avant la procédure pour favoriser la défécation. Lancez l’enregistrement vidéo à n’importe quelle étape de la procédure d’endoscopie. Le score de la maladie peut être enregistré par un assistant expérimenté pendant la procédure ou à un moment ultérieur à partir des fichiers vidéo, assurez-vous que ces procédures sont effectuées par un scientifique expérimenté.

Chaque procédure d’endoscopie prendra environ deux minutes par souris après l’examen endoscopique. Remettez les souris dans leur cage et surveillez-les pendant la récupération de l’anesthésie. Les animaux sont généralement réveillés mobiles dans les deux minutes suivant le retrait de l’isof Lorraine en administrant un cône nasal montré ici sont des résultats représentatifs de souris exposées au DSS pour modéliser une maladie inflammatoire aiguë de l’intestin.

Au huitième jour du protocole, non traité. Les souris de type sauvage ont une colite comme une perte de poids attendue, des images d’endoscopie et des scores de colite endoscopique des souris témoins et de celles qui ont subi un traitement avec la protéine interleukine 11 humaine recombinante sont montrées. La perte de poids est utilisée comme paramètre standard pour surveiller les maladies associées à la colite, qui est régulièrement utilisée pour surveiller la santé globale des souris, comme le montre la diminution du score de colite endoscopique.

Une réduction de la maladie est apparente après le traitement thérapeutique de souris atteintes d’une pathologie induite. Donc, une fois que vous maîtrisez cette technique, cela devrait être un, vous devriez être en mesure d’évaluer la souris en environ deux minutes. Et en général, ce qu’il vous permet vraiment, c’est de tester très efficacement si ces traitements ont ou non un effet sur l’inflammation et le cancer dans un modèle préclinique pertinent.