Name: Évaluation non invasive de lefficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant limagerie endoscopique de série de souris vivantes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Découvrez une méthode d'endoscopie rigide pour évaluer l'efficacité thérapeutique dans les modèles de colite et de cancer colique chez la souris. Ce protocole permet le suivi longitudinal individuel des réponses tumorales et de la rechute.

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Nous tenons à remercier CSL Ltd. pour son soutien à l’achat de l’équipement d’endoscopie. La recherche dans le laboratoire de l’EM est soutenue par l’Institut Ludwig pour la recherche sur le cancer, et les laboratoires de l’EM sont soutenus par le soutien à l’infrastructure opérationnelle du gouvernement de l’État de Victoria et le Conseil national de la santé et de la recherche médicale d’Australie. ME est chercheur principal au NHMRC.

L&#39;Institut Walter et Eliza Hall of Medical Research comité d&#39;éthique des animaux a approuvé chacune des procédures décrites dans ces protocoles. 1. Préparation des souris expérimentales <ol><li> Composez cohortes expérimentales d&#39;au moins 4 semaines entre les sexes appariés 6-8 vieilles souris C57BL / 6 (M. musculus) qui sont élevés et logés dans le même agent pathogène spécifique (SPF) animalerie / chambre et fournis avec de la nourriture et de l&#39;eau autoclave. L&#39;utilisation de souris femelles permettra co-logement de souris à partir de différentes lignes, numéros de case limite, et réduire la variation cage à cage. </li><li> Veiller à ce que les souris sont au moins 6 semaines d&#39;âge pour permettre des procédures d&#39;endoscopie utilisant la gaine diamètre de 3,0 mm endoscopie. </li><li> Utilisation des souris de la même origine génétique et, si possible, de cages stockés sur le même rack pour réduire les variations associées à la microflore intestinale. Variations de la microflore entre les installations d&#39;animaux devraient être prises en considération when déterminer les souris et les génotypes de contrôle appropriées pour chaque expérience 22. </li><li> Mark souris par des coupures oreille / d&#39;orteil, tatouages, ou similaires pour permettre une identification facile. </li><li> Peser souris au jour 0, pour déterminer les poids de référence expérimentaux. </li><li> Effectuer endoscopie (voir la section 5) de souris au jour 0 pour enregistrer phénotypes coliques base. </li></ol> 2. instance pré-clinique dans une altération de l&#39;épithélium et la colite aiguë Modèle <ol><li> Préparer une solution de l&#39;agent thérapeutique à tester. Pour thérapeutiques délivrés par gavage oral (po), préparer des solutions à un volume maximal de 100 ul. Pour thérapeutiques délivrés par voie intrapéritonéale (ip) injection, préparer des solutions à un volume maximal de 200 ul. REMARQUE: répétée ip ou po administration du médicament sur des périodes de temps prolongées peut entraîner un comportement de la souris modifiée. Alternez le site d&#39;injection ip pour éviter le malaise prolongée. Pour l&#39;administration orale, fournir les souris avec Autocbaigné graines de tournesol en tant que «traiter» pour minimiser l&#39;association indésirable avec la procédure de gavage. </li><li> Le Jour 1, administrer le thérapeutique d&#39;intérêt (préparé à l&#39;étape 2.1) et les contrôles de véhicules appropriés. Dans l&#39;exemple fourni (figure 6A), 5 ug de recombinant humain (rh) iInterleukin (IL) -11 protéine a été dissous dans 200 ul de tampon phosphate salin (PBS) et administré ip </li><li> Déterminer le moment et la fréquence des administrations, qui sera dépendant du profil pharmacocinétique établi pour le réactif thérapeutique qui est testée. Figure 1 illustre un traitement prophylactique en utilisant des injections deux fois par jour ip au cours de l&#39;expérience. </li><li> Surveiller, notamment la consistance des selles et la présence de sang, et peser chaque souris quotidienne. Sur les jours de traitement, d&#39;un poids devrait coïncider avec l&#39;administration du médicament thérapeutique pour minimiser le stress aux souris provoquées par des manipulations répétées. </li&gt; <li> Le jour 3, préparer 2,5% (2,5 g / 100 ml) de solution DSS dans l&#39;eau de boisson fournie régulièrement à la souris par l&#39;animalerie. Environ 5 ml / souris / jour de solution DSS est requis pour l&#39;expérience. La consommation de l&#39;eau DSS peut changer si la température ambiante de l&#39;animalerie fluctue. REMARQUE: DSS est un irritant et doit être manipulé conformément aux instructions des fiches signalétiques. </li><li> Fournir DSS frais aux souris ad libitum dans des bouteilles d&#39;eau potable pour cinq jours consécutifs. Dans la soirée du Jour 5, fournir de l&#39;eau potable normale, en plus de boulettes de nourriture en purée et un supplément de protéines fournie dans les petites boîtes de Pétri (100 g granulés alimentaires / 10 g de protéines de bougé / 10 ml d&#39;eau). Cela empêche la déshydratation et aide à réduire au minimum la perte de poids sévère. </li><li> Euthanasier les souris par l&#39;intoxication CO 2 et de recueillir des tissus pour l&#39;analyse histologique ultérieure le matin du Jour 8, ou lorsque les souris vivent ≥15% de perte de poids de plus de trois consecutive jours, selon la première éventualité. REMARQUE: Réglez la dose DSS entre 1-4% (p / v) en fonction de la microflore de l&#39;animalerie et le lot de DSS. Effectuer, les tests de routine des lots pour établir la dose appropriée de DSS et la variation contourner lot à lot. Le dosage approprié doit être basée sur la perte de poids (pas plus de 15% du poids initial) et confirmé la colite histopathologie. </li></ol> 3. instance pré-clinique dans une colite chronique ou modèle de cancer colite associée <ol><li> Pour le modèle de colite chronique commencer à l&#39;étape 3.7. </li><li> Pour le modèle cancer de la colite associée (CAC), le Jour 1, injecter chaque souris avec 10 mg / kg (p / p) azoxyméthane (AOM, 250 pi, ip). REMARQUE: AOM est un cancérogène et doit être manipulé conformément aux instructions des fiches signalétiques. </li><li> Les solutions mères d&#39;OMA sont préparés comme 10 mg / ml aliquotes et stockés à -20 ° C. Le jour de l&#39;injection, la solution mère de l&#39;OMA est décongelé et dilué à 1 mg / ml dans du PBS. Congélation et la décongélation de la solution mère AOM répétée doivent être évités. </li><li> La dose peut être ajustée AOM entre 8-12 mg / kg. Les tests de routine des lots est nécessaire pour établir la dose appropriée AOM afin de contourner la toxicité à des souris dues aux variations de lot à lot. </li><li> Lors des Journées 1-7 suivants poids de l&#39;administration de l&#39;OMA seront stables et pour cette raison la surveillance de poids peut être omis lors des Journées 1-7 pour éviter la manutention des animaux qui excréter métabolites cytotoxiques dans leurs excréments. </li><li> Le jour 7 toute la literie doit être changée suivant les procédures cytotoxiques. Une fois le changement de literie est complète, les animaux ne ont plus besoin des procédures de manipulation cytotoxiques, car ils ne seront plus excréter métabolites cytotoxiques. </li><li> Au jour 8, préparer 2,5% (2,5 g / 100 ml) solution DSS (comme décrit à l&#39;étape 2.5) et fournir à la souris ad libitum. </li><li> Peser souris quotidiennement tout au long de l&#39;expérience et de surveiller les signes de la maladie, y compris fu volantsr, se courber, selles sanglantes et le mouvement réduite. </li><li> Le Jour 13, retirez la solution DSS et fournir les souris avec de l&#39;eau potable normale jusqu&#39;au jour 28. Jours 8-28 constituent l&#39;un «cycle» du protocole colite / CAC chronique. </li><li> Les jours de 13 à 28, lorsque les souris reçoivent de l&#39;eau potable normale, fournir les souris avec des boulettes de nourriture en purée et un supplément de protéines fournie dans les petites boîtes de Pétri (100 g boulettes de nourriture / 10 g Protein Shake / 10 ml d&#39;eau). Cela empêche la déshydratation et aide à réduire au minimum la perte de poids sévère. REMARQUE: Les suppléments de protéines dans la purée ne doivent pas être fournis lorsque les souris reçoivent DSS-contenant de l&#39;eau potable afin d&#39;assurer la cohérence de la consommation DSS. </li><li> Le Jour 20 effectuer le second examen endoscopique pour surveiller la santé individuelle de la souris (voir la section 5). </li><li> Le jour 29 répéter le cycle DSS (Cycle 2: 2,5% (p / v) du SSD lors des Journées 29-33 et de l&#39;eau potable normale lors des Journées 34-50). </li><li> Le jour 40 effectuer la third examen endoscopique pour surveiller la santé individuelle de la souris et de déterminer la charge tumorale (voir la section 5). </li><li> Si aucune tumeurs sont visibles par endoscopie le jour 40, commencer un troisième cycle de DSS Days 50-72 (Cycle 3: 2,5% (p / v) du SSD lors des Journées 50-55 et de l&#39;eau potable normale lors des Journées 56-72). En général, les tumeurs peuvent être consultées par jour 40 et par conséquent le troisième cycle de DSS peut être omis. </li><li> Une fois les tumeurs deviennent visibles par l&#39;examen endoscopique, attribuer à chaque souris un score endoscopique de la tumeur (voir la section 5) et attribuer souris individuelles à des cohortes avec charges similaires tumorales base. </li><li> Le jour 42 (ou lorsque les tumeurs sont visibles), administrer le composé thérapeutique ou le contrôle du véhicule concerné (voir section 2.2). Le calendrier des doses dépendra le profil pharmacocinétique de l&#39;agent thérapeutique. Un exemple d&#39;un traitement d&#39;intervention injecté ip trois fois par semaine chez des souris avec des tumeurs établies est prévu (figure 2). </li><li> Effectuer eexamens ndoscopic une fois par semaine pendant la durée du traitement thérapeutique pour surveiller la charge tumorale. Généralement, quatre semaines d&#39;un traitement thérapeutique est suffisante pour observer une réponse au traitement objectif. Après l&#39;arrêt du traitement, une cohorte de souris peut également être contrôlé par endoscopie de rechute de la tumeur. </li><li> Euthanasier les souris par l&#39;intoxication CO 2 et de recueillir des tissus pour l&#39;analyse biochimique et / ou histologique le matin du jour 72 ou lorsque les souris vivent ≥15% de perte de poids de plus de trois jours consécutifs, selon la première éventualité. </li></ol> 4. instance pré-clinique dans un cancer colorectal sporadique Modèle <ol><li> Le Jour 1, injecter chaque ip de la souris avec 10 mg / kg AOM (voir l&#39;étape 3.2). La dose peut être ajustée AOM entre 8-12 mg / kg. Les tests de routine des lots est nécessaire pour établir la dose appropriée AOM afin de contourner la toxicité à des souris dues aux variations de lot à lot. </li><li> Répéter l&#39;injection, le premier jour de chaque semainepour les cinq semaines suivantes (figure 3). Les souris doivent être traités conformément à des procédures de sécurité cytotoxique pour l&#39;ensemble des 6 semaines. </li><li> Peser chaque souris sur le jour de l&#39;injection d&#39;AOM minimiser la détresse des souris provoquées par des manipulations répétées. REMARQUE: AOM est un cancérogène et doit être manipulé conformément aux instructions des fiches signalétiques. </li><li> Tous les animaux doivent être traités conformément aux procédures de sécurité cytotoxiques pour les six semaines de AOM injections ip requises pour ce protocole. </li><li> Pendant huit semaines effectuer un examen endoscopique pour surveiller les tumeurs émergents (voir la section 5). L&#39;examen endoscopique doit être effectuée toutes les deux semaines jusqu&#39;à ce que les tumeurs deviennent visibles. Généralement, de type sauvage C57BL / 6 animaux commencent à développer des tumeurs d&#39;environ 40 semaines après l&#39;administration initiale de l&#39;OMA. </li><li> Une fois les tumeurs deviennent visibles par l&#39;examen endoscopique, assigner chaque souris un score endoscopique de la tumeur (voir la section 5) et attribuer souris individuelles à une cohorte similaire<html> charges tumorales avant le début du traitement thérapeutique. </li><li> Cours de la semaine 40 (ou lorsque les tumeurs sont d&#39;abord visibles), administrer le composé thérapeutique ou le contrôle du véhicule concerné. </li><li> Le calendrier des doses dépendra le profil pharmacocinétique de l&#39;agent thérapeutique (voir étape 2.1). Un exemple d&#39;un traitement d&#39;intervention injecté ip 3 fois par semaine chez des souris avec des tumeurs établies est prévu (figure 3). </li><li> Effectuer hebdomadaire d&#39;examen endoscopique de la durée des périodes de traitement thérapeutique pour contrôler la charge tumorale. Généralement, quatre semaines d&#39;un traitement thérapeutique est suffisante pour une réponse au traitement objectif. Après l&#39;arrêt du traitement, une cohorte de souris peut également être contrôlé par endoscopie de rechute de la tumeur. </li><li> Euthanasier les souris par l&#39;intoxication CO 2 et de recueillir des tissus pour l&#39;analyse biochimique et / ou histologique du colon et de tumeurs au cours de la semaine 45, ou après 4 semaines de traitement. </li></ol>ve_title &quot;&gt; 5. Les examens endoscopiques <ol><li> Le matériel d&#39;endoscopie doit être assemblé selon des procédures standard 16. </li><li> Stériliser et nettoyer la sonde de l&#39;endoscope avec 70% d&#39;éthanol ou un lubrifiant anti-bactérienne. </li><li> Les vidéos peuvent être enregistrées en utilisant un ordinateur portable ou de bureau et des logiciels de support standard, comme iMovie. Un moniteur d&#39;ordinateur standard, plutôt que d&#39;un moniteur de qualité médicale, est suffisante pour visualiser le côlon au cours de la procédure d&#39;endoscopie (figure 4). </li><li> Anesthésier des groupes de 5-6 souris simultanément dans une chambre avec 3% d&#39;isoflurane dans 100% de O 2 à un débit de 0,2 à 0,4 L / min. Une fois que la souris sont anesthésiés, ce qui est confirmé par pincement de l&#39;orteil; les niveaux de l&#39;isoflurane devraient être modifiés pour 0,5 à 2% pour l&#39;entretien. </li><li> Supprimer une souris individuelle de la chambre, et le placer face ventrale avec sa tête fixée dans un embout conique. Anesthésie complets doivent être surveillés et les pattes de derrière doivent être ajustés de sorte qu&#39;ils sont stretched derrière la souris. </li><li> Placez une pommade vétérinaire sur les yeux des souris pour prévenir la sécheresse. </li><li> Maintenir la queue de la souris où il rencontre la colonne vertébrale inférieure de révéler clairement l&#39;anus. Insérer la gaine de l&#39;endoscope rigide dans un bécher d&#39;eau et ajuster le débit d&#39;air pour permettre la libération d&#39;une petite bulle à la fois. </li><li> Le flux d&#39;air permettra de gonfler le côlon. Si le flux d&#39;air est trop fort, l&#39;air est pompé dans l&#39;estomac de la souris. Aucune lubrification supplémentaire ne est nécessaire. </li><li> Insérez délicatement la gaine de l&#39;endoscope rigide dans le rectum. Généralement, l&#39;endoscope peut être inséré jusqu&#39;à 3 cm, à quel point le côlon dans les courbes de souris et ne est pas accessible à l&#39;endoscope rigide. </li><li> Une difficulté commune au cours des procédures d&#39;endoscopie est le blocage de l&#39;accès à la lumière du côlon du fait de la matière fécale. Évitez cela en massant doucement du ventre des souris avant la procédure d&#39;encourager la défécation ou attentivement la manœuvre de l&#39;endoscope dans le fecal question au cours de la procédure. Péristaltisme peut également se produire, au cours de laquelle l&#39;endoscope doit être maintenu en position jusqu&#39;à ce que la musculature du côlon détend. </li><li> Lancer l&#39;enregistrement vidéo à ne importe quel stade de la procédure d&#39;endoscopie. Maladie notation peut être enregistrée par un assistant expérimenté lors de la procédure, ou à un moment ultérieur à partir des fichiers vidéo. </li><li> Suite à l&#39;examen endoscopique, retourner les souris de leur cage et les surveiller lors de la récupération de l&#39;anesthésie. Les animaux sont généralement éveillé et mobile à l&#39;intérieur 2 min après le retrait de l&#39;isoflurane administration cône de nez. </li><li> Veiller à ce que ces procédures sont effectuées par un scientifique expérimenté. Chaque procédure d&#39;endoscopie prendra environ 2 min par souris. </li></ol> 6. Maladie de notation <ol><li> Pour surveiller la colite, marquer vidéos pour l&#39;indice murin endoscopique de sévérité de la colite (MEICS) 16, qui documente les changements dans (i) l&#39;épaisseur de la paroi du côlon indiqué par la transparence, (Ii) la consistance des selles, (iii) l&#39;intégrité du vaisseau sanguin et de la présence, (iv) les ulcères et les zones de régénération qui présentent de façon granulaire, (v) le saignement indiqués par des dépôts de fibrine (figure 5a). </li><li> Pour surveiller la charge tumorale, marquer vidéos pour l&#39;incidence des tumeurs et la taille. La taille des tumeurs est déterminée par le diamètre de la lumière colique occupées par la tumeur 16 (figure 5b). Il est courant d&#39;utiliser les deux paramètres de colite et de notation de la tumeur pour une seule souris. Par endoscopie, tumeurs individuelles et la santé de la muqueuse du côlon peut être suivie dans le temps, offrant une lecture-out pour le succès de nouveaux traitements chez un seul animal. </li><li> (Facultatif) Les images fixes peuvent être extraites des vidéos pour la génération de figures représentatives (figure 6). </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les trois protocoles qui sont décrits méthodes d&#39;induction fiable et reproductible de la pathologie de la maladie du côlon chez les souris contour. Lorsqu&#39;il est combiné avec la surveillance endoscopique de routine et les stratégies d&#39;intervention décrites ici, ces protocoles fourniront puissante aperçu pré-clinique sur l&#39;efficacité de la thérapeutique. Nos laboratoires utilisent couramment toutes ces protocoles pour surveiller le succès de nouveaux produits thérapeutiques 10,23,24. Il ya un certain nombre de considérations lors du choix d&#39;un modèle animal pré-clinique pour tester de nouvelles thérapies. Il se agit notamment pertinence du modèle à la maladie humaine, et la contribution du microenvironnement de la tumeur à l&#39;action proposée de l&#39;objectif thérapeutique. Ici nous fournissons trois protocoles d&#39;intervention thérapeutique dans des modèles de maladies intestinales établies. Ces modèles sont reproductibles et la livraison de réactifs pour provoquer la maladie est facile à gérer. Surtout, les modèles sont très pertinentsà multiples facettes et étapes de la colite apparition, et de l&#39;initiation et la progression tumorale. Les chercheurs devraient prendre en considération le contexte génétique des souches de souris utilisées lors de la conception des expériences, que la susceptibilité à la maladie induite par DSS et / ou AOM 25 peuvent varier considérablement. En outre, les communautés microbiennes différentes peuvent avoir différentes capacités métaboliques dans le cadre de l&#39;OMA, qui est métabolisé par les bactéries. Nous avertissons contre l&#39;utilisation de différentes cohortes de souris qui sont nés en différentes installations pour les animaux (y compris les fournisseurs commerciaux) en une seule expérience. De même, les différents microflore souris utilisées de différentes installations peut susciter différentes réactions de l&#39;hôte au MAS-dégâts de barrière épithéliale 11. En outre, l&#39;analyse appropriée de tissu (par exemple pour la purification d&#39;ARN) devrait également être envisagée, étant donné que la capacité de DSS pour inhiber la transcriptase inverse aura une incidence sur l&#39;analyse moléculaire ultérieur 26,27. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Souris endoscopie est une technique de pointe pour surveiller plusieurs reprises apparition et la progression des maladies dans une souris individuelle. La capacité d&#39;enregistrer des vidéos et extraire des images fixes permet un contrôle facile de plusieurs paramètres et les tumeurs maladie. En plus d&#39;améliorer le bien-être des animaux, la surveillance endoscopique réduit également le besoin de plusieurs cohortes de souris expérimentales, qui étaient traditionnellement abattus à différents points de temps pour suivre les résultats de la maladie. Le système de notation MEICS est pas un substitut pour l&#39;analyse histopathologique, mais fournit un autre moyen de surveiller les dommages de la santé et de la muqueuse animale dans des souris vivantes. Souris endoscopie est une technique de laboratoire spécialisé, et toutes les procédures devrait être effectué par du personnel qualifié pour assurer la manipulation et le traitement approprié de la souris, ainsi que de fournir une qualité constante dans les images utilisées pour la maladie de notation. Dans les mains d&#39;un personnel compétent, nous avons constaté que l&#39;endoscopie induit peu ou pas de dommages à l&#39;toumors qui pourraient causer un saignement intra-tumorale. Pour les protocoles thérapeutiques décrites, nous considérons endoscopie très avantageux, car il fournit un moyen de déterminer la charge initiale de la tumeur, et nous permet de cohortes de groupes d&#39;animaux avec des charges tumorales similaires avant l&#39;administration d&#39;un médicament thérapeutique. Surveillance séquentielle de la souris permet aux chercheurs de déterminer l&#39;efficacité de nouvelles thérapies dès le début, avec l&#39;option de mettre fin à des expériences infructueuses en temps opportun. Comme notre compréhension de la maladie inflammatoire de l&#39;intestin et le cancer colorectal avance, de nouvelles cibles pour la thérapie seront identifiés. Des modèles animaux appropriés feront partie intégrante de veiller à ce que les nouvelles thérapies plus prometteuses sont déplacés vers les essais cliniques.

Le cancer colorectal (CRC) est le 4 ème cause la plus fréquente de tumeur maligne dans le monde entier 1. Malgré les progrès significatifs dans notre compréhension de la base familiale de cette maladie, la prédisposition génétique ne contribue à ~ 20% des cas de CCR 2. Le reste est attribuable à de nombreux facteurs extrinsèques et environnementaux, y compris l&#39;inflammation chronique. Chez les humains, le lien entre l&#39;inflammation chronique et le cancer du côlon est évident dans la colite ulcéreuse (CU) patients, qui ont un plus grand risque de développer un cancer du côlon de la colite associée (CAC), en fonction de la durée, l&#39;étendue et la gravité de la maladie inflammatoire 3 -5. Par conséquent, de nouvelles thérapies sont en développement pour contrôler la réponse immunitaire et la production associée de facteurs de croissance par la promotion de la micro-environnement de la tumeur inflammatoire 6-8. Il existe une demande croissante pour des modèles animaux précliniques appropriées pour caractériser l&#39;efficacité thérapeutique deces médicaments contre le développement et la progression de la maladie. Des modèles murins ont démontré sans équivoque que le microenvironnement inflammatoire contribue à la progression CRC, même en l&#39;absence d&#39;inflammation manifeste 9,10. Ces modèles comprennent l&#39;utilisation du sulfate de polysaccharide dextrane sodique (DSS), prévue dans l&#39;eau de boisson des souris, pour modéliser des blessures épithéliales de l&#39;intestin et des maladies inflammatoires aiguës et chroniques (IBD) 11,12. Bien que le mécanisme par lequel DSS induit des lésions de la muqueuse et colite est pas complètement compris, certaines études suggèrent que le MAS inhibe les activités de la transcriptase et ribonucléase inverse cellulaires dans les cellules, ou favorise la formation de complexes de nano-lipide qui fusionnent avec la membrane du colon conduisant à dommages épithéliaux 13,14. Les modifications apportées au modèle de la norme DSS ont également permis de mieux comprendre les mécanismes par lesquels les cellules épithéliales du côlon maintien de l&#39;homéostasie tissulaire et réglefin muqueuses réponses immunitaires 15. L&#39;administration intrapéritonéale de azoxyméthane (AOM) seul ou en combinaison avec le DSS, fournit un modèle pour examiner l&#39;interaction entre les mutations somatiques dans la muqueuse épithéliale et le microenvironnement inflammatoire et stromale 16,17. AOM est un métabolite de l&#39;agent cancérigène 1,2-diméthylhydrazine (DMH) qui ne entraîne pas directement mutations de l&#39;ADN. Au lieu de cela, AOM est hydrolysé pour méthylazoxyméthanol (MAM) par le cytochrome isoforme CYP2E1 dans le foie, où MAM est conjugué avec l&#39;acide glucuronique et ensuite transporté à travers l&#39;intestin 18 sécrétions biliaires. On pense que la β-glucuronidase bactérienne contribue à la dégradation de l&#39;ADN résultant en MAM alkylation et l&#39;accumulation de mutations dans les cellules epitheliales 19. La plupart des tumeurs du côlon induite AOM-hébergent des mutations faux-sens dans le gène codant la β-caténine, ce qui rend la protéine résistante à la degradati de protéasomesur, ce qui entraîne une activation aberrante de la voie Wnt canonique de signalisation 20. Lorsque l&#39;activité de l&#39;OMA est combiné avec lésions de la muqueuse induite par DSS, la plaie qui a suivi la guérison réponse crée un micro-environnement qui soit propice à la croissance et à l&#39;expansion de l&#39;épithélium mutagénisé. Dans une variante de ce modèle, l&#39;administration répétitive de AOM seul sur une période de plusieurs semaines peut être utilisé pour modéliser le cancer colorectal sporadique, en l&#39;absence de la colite induite par DSS-10,17. Ces deux modèles gratuits fournissent des paramètres expérimentaux pour étudier CAC et sporadique CRC, respectivement, qui sont tous deux associés à un microenvironnement tumoral pro-inflammatoire 10. L&#39;utilisation d&#39;endoscopie en série chez des souris a été lancée par Becker et al 21, et permet de surveiller longitudinal de la colite et la progression tumorale. Ici nous fournissons trois protocoles pré-cliniques sur la base de lésions de la muqueuse induite DSS et / ou AOM-tu médiationmor induction pour induire de manière reproductible pathologies du côlon spécifiques. Le premier protocole décrit induire lésions de la muqueuse aiguë en réponse à l&#39;administration DSS pour susciter de nombreuses caractéristiques histopathologiques associés aux MII. Le deuxième protocole est basé sur trois cycles consécutifs d&#39;administration DSS pour imiter les fusées de l&#39;inflammation fréquemment observée chez les patients atteints de MII et peut être réalisé en collaboration avec des mutations induites AOM. Le protocole final est basé sur les mutations épithéliales sporadiques induite AOM. Pour chacun de ces protocoles, nous étendons sur les procédures standard en matière d&#39;inclure les méthodes d&#39;intervention prophylactiques et thérapeutiques que nous avons développés pour contrôler l&#39;efficacité de nouveaux médicaments.

<table><tbody><tr><td>Sulfate de dextran sodique (MW 36 000-50 000)</td><td>MP Biochemicals</td><td>160110</td><td>Nécessite des tests par lots.</td></tr><tr><td>Azoxyméthane</td><td>Sigma</td><td>A5486-100MG</td><td>Nécessite des tests par lots.</td></tr><tr><td>Shake protéiné à la vanille</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Disponible dans les pharmacies hospitalières.</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>PPC</td><td>M60303</td><td>Il s’agit d’un réactif restreint, qui doit être stocké sous clé.</td></tr><tr><td>70 % éthanol</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Réactif de laboratoire standard.</td></tr><tr>Système <td></td><td></td><td></td><td>miniendoscopique Coloview</td></tr><tr><td>Endovision Tricam</td><td>Karl Storz</td><td>20212001-020</td><td></td></tr><tr><td>Source lumineuse au xénon 175 avec pompe anti-buée</td><td>Karl Storz</td><td>20134001</td><td></td></tr><tr><td>HOPKINS Télescope droit devant</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>Gaine endoscopique (diamètre total 3 mm)</td><td>Kalr Stroz</td><td>61029C</td><td></td></tr><tr><td>Câble d’éclairage à fibre optique</td><td>Kalr Stroz</td><td>69495ND</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel d’ordinateur et de lecteur multimédia</td><td>Apple</td><td></td><td>iMovie</td></tr><tr><td>Balance</td><td>N’importe quelle</td><td></td><td>balance adaptée pour peser les souris.</td></tr></tbody></table>

Évaluation non invasive de l&#39;efficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant l&#39;imagerie endoscopique de série de souris vivantes

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Des modèles animaux de maladies inflammatoires de l’intestin (MICI) et de cancer colorectal (CCR) ont fourni des informations significatives sur les mécanismes cellulaires intrinsèques et extrinsèques qui contribuent à l’apparition et à la progression des maladies intestinales. L’identification de nouvelles molécules qui favorisent ces pathologies a conduit à une vague d’activité axée sur le développement de nouvelles thérapies potentielles pour inhiber leur fonction. En conséquence, divers modèles de souris précliniques avec un système immunitaire intact et un microenvironnement stromal sont maintenant fortement utilisés. Nous décrivons ici trois protocoles expérimentaux pour tester l’efficacité de nouveaux traitements dans des modèles précliniques de (1) lésions aiguës de la muqueuse, (2) colite chronique et/ou cancer du côlon associé à la colite, et (3) cancer colorectal sporadique. Nous décrivons également des procédures d’examen endoscopique en série qui peuvent être utilisées pour documenter la réponse thérapeutique d’une tumeur individuelle et pour surveiller la santé de souris individuelles. Ces protocoles fournissent des plateformes expérimentales complémentaires pour tester l’efficacité de composés thérapeutiques bien tolérés par la souris.

Perte de poids est utilisé comme paramètre standard pour surveiller une maladie associée à la colite, qui est couramment utilisé pour surveiller l&#39;état de santé général des souris. Animaux conservent en général leur poids tandis DSS-contenant de l&#39;eau est administré, et ne commencent à perdre du poids quand ils sont retournés à l&#39;eau potable normale. Paramètres de perte de poids acceptables devraient être établis en conformité avec le comité d&#39;éthique des animaux de l&#39;institution. Afin d&#39;éviter la déshydratation associée à la diarrhée prolongée, utilisez la fourniture de routine de purée (boulettes de nourriture en purée et mélangé avec de l&#39;eau potable) supplémenté avec un shake de protéines, en plus de l&#39;eau potable normale. Comme solution de rechange l&#39;anesthésie, la kétamine / xylazine ou des agents similaires peuvent être utilisés, si l&#39;équipement isoflurane ne est pas disponible. En raison de la nature rigide de l&#39;endoscope, ces procédés permettent uniquement de visualisation les plus distales 3 cm du côlon de la souris. Endoscopes récents avec<html> capacités complémentaires (y compris la flexibilité et la fluorescence) sont disponibles en fonction des besoins de l&#39;expérience. Toutefois, étant donné les effets délétères du DSS sont principalement limités à le côlon distal de souris, avec une pathologie bénigne observée dans le côlon milieu, l&#39;endoscope rigide ne entrave pas le suivi de la santé de la muqueuse des souris individuelles. Bien que nous décrivons un protocole pour le traitement prophylactique de la colite induite par DSS-aiguë, ce protocole peut être facilement modifié pour tester les stratégies d&#39;intervention de traitement. L&#39;efficacité d&#39;un médicament destiné à soulager les lésions épithéliales et la colite peut être surveillée chez les souris individuelles longitudinalement et quantifiée sur la base des paramètres de cotation décrites (figure 5). Ceci est avantageux par rapport aux modèles expérimentaux classiques, qui nécessitent l&#39;abattage des souris à des moments spécifiques au cours du protocole expérimental, et ne permet pas de caractérisation de la réponse de la maladie à un traitement au cours du temps. <html> t &quot;&gt; Les études cliniques chez l&#39;homme ont mis en évidence une variabilité considérable dans la façon dont différentes tumeurs chez un patient de répondre aux traitements. Les procédures décrites ici fournissent un moyen de surveiller la charge tumorale globale, ainsi que la réponse au traitement de tumeurs individuelles au cours d&#39;une expérience. Il est important de considérer que les protocoles d&#39;intervention qui sont décrites pour les modèles de cancer ne prennent pas en compte les effets d&#39;une thérapie sur l&#39;initiation de la tumeur. protocoles prophylactiques, avec le traitement prévu avant lorsque les tumeurs deviennent visibles par endoscopie, sont nécessaires pour obtenir ces informations. Les protocoles décrits ici fournissent des informations sur les effets thérapeutiques sur le sur la progression (mesurées par la taille de la tumeur) des tumeurs individuelles. La régression tumorale peut également être indiquée par une réduction du nombre de tumeurs visibles. g &quot;/&gt; Figure 1:. Suivi de l&#39;efficacité d&#39;une thérapie de traitement prophylactique dans un modèle de dommages colique aiguë Le protocole expérimental (a) nécessite huit jours du début à la fin. Therapeutics sont administrés (b) de 1 jour pour des traitements prophylactiques. DSS est fourni dans l&#39;eau de boisson (c) à partir de 3 jours du protocole expérimental. L&#39;endoscopie est réalisée (d) surveiller la progression de la maladie chez les animaux. Timepoints suggérées comprennent Jour 0 (non traité) et Jour 2 (surveillance de la santé), Jour 5 et 8 (pour déterminer la charge de morbidité). L&#39;expérience est terminé (e) le matin du Jour 8. Dans une souris de type sauvage (f) la progression de la maladie augmente au fil du temps. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig2highres.jpg" /> Figure 2: Suivi de l&#39;efficacité de la thérapie d&#39;intervention dans un modèle of colite associée cancer. Le protocole expérimental (a) nécessite 72 jours du début à la fin. Therapeutics (b) sont administrés à des souris avec des tumeurs établies à partir de 46 jours pour les traitements d&#39;intervention. AOM (c) est injecté le jour 1, et SSD est assuré dans l&#39;eau potable au cours des trois cycles du protocole expérimental, commençant le Jour 8. endoscopie (d) est effectuée pour surveiller la progression de la maladie chez les animaux. Timepoints suggérées comprennent Jour 0 (non traité), Jour 20 (surveillance de la santé), et la Journée 40 (pour les animaux du groupe selon la charge tumorale). L&#39;endoscopie est effectuée chaque semaine au cours du traitement thérapeutique pour surveiller les résultats de la maladie. L&#39;expérience (e) se termine le matin du Jour 72. Dans une charge tumorale-souris de type sauvage (f) augmente de jour 40 partir. <img alt="Figure 3"src = &quot;/ files / ftp_upload / 52383 / 52383fig3highres.jpg&quot; /&gt; Figure 3:. Suivi de l&#39;efficacité de la thérapie d&#39;intervention dans un modèle de cancer colorectal spontanée Le protocole expérimental (a) nécessite&gt; 50 semaines du début à la fin. Therapeutics (b) sont administrés à des souris avec des tumeurs établies pour les traitements d&#39;intervention. AOM (c) est injecté le jour 1, et toutes les semaines par la suite pour six injections consécutives au cours du protocole expérimental. L&#39;endoscopie (d) est réalisée pour surveiller la progression de la maladie chez les animaux. Timepoints suggérées comprennent Jour 0 (non traité) et la semaine 8 (surveillance de la tumeur) et toutes les deux semaines là-bas après (pour établir la charge tumorale). Endoscopie est réalisée toutes les semaines au cours du traitement pour surveiller les résultats thérapeutiques. L&#39;expérience (e) est mis fin à la semaine 50. Dans une charge tumorale-souris de type sauvage (f) augmente partir de la semaine 40 partir. </<html> p&gt; <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" width="650" /> Figure 4:. Équipement set-up Le dispositif expérimental (a) pour l&#39;unité endoscopique, avec des morceaux individuels de l&#39;équipement indiqué. Endoscope rigide (B), avec différents composants indiqués. Barre d&#39;échelle = 2,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig5highres.jpg" width="650" /> Figure 5:. Maladies notation paramètres par endoscopie Un aperçu (a) de l&#39;indice endoscopique murin de sévérité de la colite (MEICS). Un aperçu (b) des paramètres individuels de notation de la tumeur.es / ftp_upload / 52383 / 52383fig5highres.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure. <img alt="Figure 6" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" width="650" /> Figure 6: traitements thérapeutiques représentatifs Représentant de perte de poids, des images endoscopiques et scores pour:. (A) aiguë induite par DSS lésions des muqueuses (b) Tumeurs qui se sont développées suite à l&#39;AOM protocole / DSS (c) Les tumeurs qui se sont développées après la séquentiel.. AOM protocole. N = 3 souris par groupe. * P &lt;0,05, *** P &lt;0,001 (T-test de Student). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" target="_blank">Se il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>

Nous décrivons des méthodes de surveillance longitudinale de l’efficacité des traitements pour le traitement des pathologies du côlon chez la souris à l’aide d’un endoscope rigide. Ce protocole peut être facilement utilisé pour la caractérisation de la réponse thérapeutique d’une tumeur individuelle chez des souris vivantes et également pour le suivi d’une rechute potentielle de la maladie.

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

L'objectif général de l'expérience suivante est de tester l'efficacité de nouveaux traitements dans des modèles de colite et de cancer en induisant la maladie chez des souris afin d'étudier des thérapies capables d'inhiber la pathologie induite. Le traitement est administré de manière prophylactique. Dans cette vidéo, une protéine recombinante humaine d'interleukine 11 est utilisée ; du sulfate de dextrane sodique, ou DSS, est ensuite administré dans l'eau de boisson afin de provoquer des lésions muqueuses aiguës ainsi que plusieurs des caractéristiques histopathologiques associées aux maladies inflammatoires de l'intestin.Ensuite, les modifications de la maladie sont surveillées par endoscopie afin de déterminer l'efficacité du traitement. En fin de compte, les résultats montrent une réduction de la charge pathologique sur la base du suivi et du score endoscopiques après traitement thérapeutique de souris présentant une pathologie induite. Le principal avantage de cette technique réside dans la possibilité de surveiller une souris individuelle tout au long de l'expérience, par opposition aux techniques standard d'histologie.L'examen de plusieurs cohortes d'animaux est requis. Cette méthodologie peut nous aider à poser et à répondre à des questions essentielles concernant l'inflammation et le cancer du côlon, et en particulier à tenter d'établir comment une meilleure manipulation de la signalisation des cytokines pourrait influencer la progression de la maladie. Il est important d'utiliser ces modèles précliniques pour évaluer l'efficacité de médicaments et de composés, ce qui permet réellement de tester le même souris à plusieurs reprises et d'observer si ces composés présentent une activité. Je vais démontrer cette procédure avec Giovanni CI Ciano, technicien animalier de notre institut. Le premier jour, administrer le traitement d'intérêt ainsi que les contrôles appropriés de véhicule. Dans cette démonstration, cinq microgrammes de protéine d'interleukine 11 humaine recombinante ont été dissous dans 200 microlitres de solution saline tamponnée au phosphate et administrés par voie intrapéritonéale. Déterminer le moment et la fréquence des administrations, qui dépendront du profil pharmacocinétique établi pour le réactif thérapeutique testé. On voit ici un aperçu d'un traitement prophylactique utilisant des injections intrapéritonéales deux fois par jour tout au long de l'expérience.Surveillez la consistance des selles et la présence de sang, et pesez chaque souris quotidiennement. Les jours de traitement, la pesée doit coïncider avec l'administration du médicament thérapeutique afin de minimiser le stress causé aux souris par la manipulation répétée. Au troisième jour, préparez une solution de sulfate de dextran à 2,5 %, ou solution DSS, dans l'eau de boisson habituellement fournie aux souris par l'élevage animal.Environ cinq millilitres par souris et par jour de solution DSS sont nécessaires pour l'expérience. La consommation d'eau DSS peut varier si la température ambiante du laboratoire animalier fluctue. Fournir une solution DSS fraîche aux souris.Ajouter Liam dans des bouteilles d'eau propre pendant cinq jours consécutifs, le soir du cinquième jour. Fournir de l'eau de boisson ordinaire en plus de granulés écrasés et d'un complément protéique fourni dans de petites boîtes de Pétri. Le matin du huitième jour.Procéder à l’euthanasie de la souris comme décrit dans le protocole écrit afin de prélever les tissus destinés à une analyse histologique ultérieure. Effectuer des tests systématiques par lots pour déterminer la dose appropriée de DSS et éviter les variations d’un lot à l’autre. La dose appropriée doit être basée sur la perte de poids et confirmée par l’histopathologie de la colite.Ajustez la dose de DSS entre 1 et 4 % poids par volume. Cette concentration peut varier selon la microflore de l'animalerie et selon le lot de DSS utilisé. L'équipement d'endoscopie doit être assemblé conformément aux procédures standard.Stérilisez et nettoyez la sonde de l'endoscope avec de l'éthanol à 70 % ou un lubrifiant antibactérien. Les vidéos peuvent être enregistrées à l'aide d'un ordinateur portable ou de bureau et d'un logiciel média standard tel qu'iMovie. Un moniteur d'ordinateur standard, plutôt qu'un moniteur médical, suffit pour visualiser le côlon pendant la procédure d'endoscopie.Anesthésiez simultanément des groupes de cinq à six souris dans une chambre contenant 3 % d'isoflurane dans 100 % d'oxygène à un débit de 0,2 à 0,4 litre par minute. Une fois les souris anesthésiées, ce qui est confirmé par une pincée de l'orteil, les niveaux d'isoflurane doivent être ajustés entre 0,5 et 2 % pour le maintien. Retirez une souris individuelle de la chambre et placez-la en décubitus dorsal, la tête fixée dans un cône nasal ; l'anesthésie complète doit être surveillée et les pattes arrière doivent être positionnées de manière à être étendues vers l'arrière de la souris. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux des souris afin d'éviter le dessèchement.Tenez la queue de la souris à l'endroit où elle rejoint la colonne vertébrale inférieure afin de bien faire apparaître l'anus. Le flux d'air permettra au côlon de se gonfler si le flux d'air est trop fort. De l'air sera injecté dans l'estomac de la souris.Insérez soigneusement la gaine de l'endoscope rigide dans le rectum. Généralement, l'endoscope peut être inséré jusqu'à trois centimètres, au-delà duquel le côlon des souris présente une courbure et n'est plus accessible à l'endoscope rigide. Une difficulté courante lors des procédures d'endoscopie est l'obstruction de l'accès à la lumière du côlon due aux matières fécales.Évitez cela en massant doucement l'abdomen des souris avant la procédure afin de favoriser la défécation. Démarrez l'enregistrement vidéo à n'importe quelle étape de la procédure d'endoscopie. La notation de la maladie peut être effectuée par un assistant expérimenté pendant la procédure ou à un moment ultérieur à partir des fichiers vidéo ; assurez-vous que ces procédures sont réalisées par un scientifique expérimenté.Chaque procédure d'endoscopie prendra environ deux minutes par souris après l'examen endoscopique. Remettez les souris dans leur cage et surveillez-les pendant leur réveil de l'anesthésie. Les animaux reprennent généralement une activité motrice dans les deux minutes suivant l'arrêt de l'isoflurane. Le nez conique administrant l'isoflurane illustré ici montre des résultats représentatifs obtenus chez des souris exposées au DSS afin de modéliser une maladie inflammatoire intestinale aiguë.À J8 du protocole non traité. Les souris de type sauvage présentent une colite avec perte de poids attendue, images d'endoscopie et scores d'endoscopie de colite des souris témoins et de celles ayant reçu un traitement avec la protéine recombinante humaine interleukine 11 sont présentées. La perte de poids est utilisée comme paramètre standard pour surveiller la maladie associée à la colite, ce qui est couramment utilisé pour suivre l'état général de santé des souris, comme visualisé par la diminution du score d'endoscopie de colite.Une diminution de la maladie est apparente après un traitement thérapeutique de souris présentant une pathologie induite. Ainsi, une fois que vous maîtriserez cette technique, vous devriez être en mesure d'évaluer la souris en environ deux minutes. De manière générale, cela vous permet surtout de tester très efficacement si ces traitements ont un effet sur l'inflammation et le cancer dans un modèle préclinique pertinent.

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Iléus postopératoire (POI) est une complication de la chirurgie abdominale conduisant à une morbidité accrue et un séjour prolongé à l'hôpital. Parce que les stratégies prophylactiques ou thérapeutiques font défaut intensification de la recherche est nécessaire. Par conséquent, nous avons établi un modèle de souris standard et possible d'étudier la physiopathologie de POI et d'étudier les options possibles thérapeutiques.

D&#39;évaluation fonctionnelle de la motilité intestinale et inflammation de la paroi intestinale chez les rongeurs: analyses dans un modèle standardisé de la manipulation intestinale

Au cours des dernières années, de nouveaux endoscopes génération ont émergé comme aides à la recherche de diagnostic importants pour évaluer la colite murine et les tumeurs colorectales. Nous présentons ici un protocole détaillé pour l'évaluation endoscopique de tumeurs colorectales et inflammation chez des souris, ainsi que d'un système de pointage roman qui utilise des identificateurs décimaux pour documenter la sévérité de la colite endoscopique et tumeurs colorectales.

La coloscopie flexible chez la souris pour évaluer la sévérité de la colite et de tumeurs colorectales l&#39;aide d&#39;un système validé endoscopique de notation

Techniques d'imagerie de petits animaux permettent examens diagnostiques de série et les interventions thérapeutiques in vivo. Récemment, le champ des applications a considérablement élargi et comprend actuellement évaluation du développement de la tumeur du côlon, la cicatrisation des plaies et la surveillance de l'inflammation. Ce protocole illustre ces diverses applications potentielles de l'endoscopie murin.

Murin endoscopie pour In Vivo Guérison multimodale d'imagerie de la cancérogenèse et de l'évaluation de la plaie intestinale et l'inflammation

En utilisant des souris rapporteures transgéniques et des marqueurs fluorescents injectables, la microscopie confocale à disque rotatif intravital à long terme permet de visualiser directement le comportement des cellules myéloïdes dans l’adénome intestinal dans le modèle de cancer colorectal ApcMin/+.

Imagerie en temps réel des cellules myéloïdes Dynamique Apc Min / + Intestinale tumeurs par Spinning Disk microscopie confocale

Cet article décrit une technique d’imagerie vidéo et de cartographie spatio-temporelle à haute résolution pour identifier les changements dans la régulation neuronale de la motilité colique chez les souris adultes. Des effets subtils sur la fonction gastro-intestinale (GI) peuvent être détectés à l’aide de cette approche dans des préparations de tissus isolés pour faire progresser notre compréhension de la maladie gastro-intestinale.

Imagerie de la vidéo et cartes spatiotemporelles d&#39;analyser motilité gastro-intestinale chez la souris

Nous présentons ici un protocole qui décrit l’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques et permet répétitives évaluations mini-endoscopique du côlon distal in situ pour la présence, les caractéristiques et gravité de l’inflammation du côlon dans live souris souffrant d’intestinal graft - versus - host disease.

Induction of Intestinal Graft - versus - host Disease and son évaluation endoscopique Mini souris vivantes

Ici, nous présentons un protocole pour établir les points de terminaison importants et les marqueurs proliérants des petites lésions intestinales et de l'hyperprolifération compensatoire utilisant un modèle de muqueuse chimiothérapie-induite. Nous démontrons la détection des cellules proliférantes utilisant un marqueur spécifique de cycle cellulaire et utilisant le petit poids intestinal, la profondeur de crypte, et la taille de villus comme points de terminaison.

Points de terminaison et marqueurs proliférants importants pour évaluer les petites blessures intestinales et l'adaptation à l'aide d'un modèle de souris de mucosite induite par la chimiothérapie

Nous décrivons une méthode pour visualiser gFP-étiquetée IELs utilisant l'imagerie intravitale de l'intestin grêle murine par microscopie confocale de disque de rotation inversée. Cette technique permet le suivi des cellules vivantes dans la muqueuse jusqu'à 4 h et peut être utilisée pour étudier une variété d'interactions intestinales immunisées-épithéliales.

Imagerie intravitale des lymphocytes intraépithéliales dans l'intestin grêle de Murine

Profitant de la microscopie intravitale, la méthode présentée ici permet la visualisation en temps réel de l’excrétion cellulaire épithéliale intestinale chez les animaux vivants. Par conséquent, la muqueuse intestinale topiquement tachée (acriflavine et rhodamineB-dextran) des souris anesthésiées est image jusqu’à la résolution d’une seule cellule utilisant la microscopie confoccale.

Une approche à base de microscopie intravitale pour évaluer la perméabilité intestinale et la performance épithéliale de l’excrétion cellulaire

Ici, nous fournissons une description détaillée de la procédure pour induire des biopsies de pincement colonoscopique-guidées chez les souris et suivre la fermeture de blessure en temps réel. En outre, des méthodes pour la préparation des tissus pour des analyses histologiques, immunohistochimiques et moléculaires du lit de blessure sont fournies.

Effectuer des biopsies de pincement guidées par colonoscopique chez la souris et évaluer les changements ultérieurs des tissus

La fonction épithéliale intestinale dérégulée de barrière et les immuno-réactions sont des cachets de la maladie d’entrailles inflammatoire qui restent mal étudiées en raison d’un manque de modèles physiologiques. Ici, nous décrivons un modèle intestinal de boucle de souris qui emploie un segment bien-vascularisé et extériorisé d’entrailles pour étudier la perméabilité muqueuse et le recrutement de leucocyte in vivo.

Évaluation fonctionnelle de la perméabilité intestinale et de la migration transépithéliale des neutrophiles chez la souris à l’aide d’un modèle normalisé de boucle intestinale

Découvrez une méthode d'endoscopie rigide pour évaluer l'efficacité thérapeutique dans les modèles de colite et de cancer colique chez la souris. Ce protocole permet le suivi longitudinal individuel des réponses tumorales et de la rechute.

Évaluation non invasive de lefficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant limagerie endoscopique de série de souris vivantes (Vidéo) | JoVE Journal

Évaluation non invasive de l'efficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant l'imagerie endoscopique de série de souris vivantes

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