Name: Rat Heterotopic abdominale Coeur / Transplantation pulmonaire simple dans une configuration de volume chargé (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: Apprenez la transplantation cardiopulmonaire abdominale hétérotopique chez le rat avec charge volumique dynamique. Cette technique permet l'évaluation fonctionnelle en temps réel du greffon grâce à un cathéter de conductance pression-volume.

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Mark J. Kearns reçoit l&#39;appui du Programme UBC cliniciens-chercheurs (décerné par le Collège royal des médecins et chirurgiens du Canada), et de l&#39;UBC 4YF bourse de doctorat. John H. Boyd est une association nationale Sanitorium et Fondation Michael Smith pour la recherche en santé Scholar. Le financement par les IRSC. Les auteurs tiennent à remercier le Dr M. Allard et Richard Wamboldt pour leur aide à l&#39;installation et l&#39;entretien du matériel de perfusion.

Tous les animaux ont été logés et soignés conformément aux directives institutionnelles pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire national et. L&#39;approbation éthique pour ce protocole a été accordée par l&#39;Université du Comité de protection des animaux de la Colombie-Britannique. Mâles, les rats Sprague-Dawley pesant entre 300 à 450 g ont été utilisés pour ce protocole. Opération 1. des donateurs <ol><li> Avoir environ 100 ml de cardioplégie (RT) dans un ballon cylindrique reliée à longue intraveineuse (IV) tube de cathéter par un robinet à 3 voies. Utilisez un support pour élever le ballon à environ 80 cm au-dessus de la surface active, permettant la livraison de cardioplégie par gravité. </li><li> Pour visualiser correctement les structures, utiliser une paire de loupes chirurgicales ou d&#39;un microscope à dissection. NOTE: Nous utilisons actuellement un microscope opératoire binoculaire avec 3.4 - 21.3X grossissement. </li><li> Placez le donateur dans une chambre d&#39;anesthésie et induire une anesthésie avec 4 - 5% d&#39;isoflurane. </li&gt; <li> Transférez le rat à une plate-forme d&#39;exploitation et maintenir une anesthésie par le nez cône avec 1 - 2% d&#39;isoflurane. Appliquer une pommade vétérinaire aux yeux de l&#39;animal pour prévenir la sécheresse. Administrer midazolam (2 mg / kg) par voie intrapéritonéale avec une aiguille 25 G. </li><li> L&#39;aide de tondeuses chirurgicales, de se raser le donneur de xiphisternum à la mandibule. Raser une petite région de l&#39;aine gauche (pour un accès ultérieur de IV). Appliquez un agent d&#39;épilation les surfaces actives, attendez environ 5 min, et enlever les poils avec un morceau de gaze. </li><li> Prep les sites chirurgicaux avec une solution à base de chlorhexidine povidone-iode ou (nous utilisons seulement la chlorhexidine). Infiltrez sites incisionnelles avec 0,1 à 0,5% de lidocaïne sous-cutanée. </li><li> Fixez les membres antérieurs et postérieurs gauche à la plate-forme d&#39;exploitation avec du ruban adhésif, laissant le droit postérieur gratuit pour le suivi de profondeur de l&#39;anesthésie et les signes vitaux. </li><li> Après avoir vérifié la profondeur de l&#39;anesthésie appropriée par la pédale pincée, faire une incision dans l&#39;aine pli gauche en utilisantun scalpel 22-lame. Par dissection, exposer la veine fémorale commune gauche et d&#39;obtenir un accès IV comme suit: <ol><li> Rétracter délicatement le tissu recouvrant la veine fémorale, et cathétériser la veine avec un 24 G IV. Connectez le IV à une courte longueur de tubulure IV rempli de solution saline, et fixer le tube en place avec du ruban adhésif. NOTE: La procédure de cathétérisme veineux fémoral chez le rat est décrit ailleurs par Jespersen et ses collègues 14. </li><li> Raccorder une seringue de 10 ml rempli de solution saline pour le tuyau IV, et aspirer le sang doucement pour assurer un positionnement correct de l&#39;IV. </li><li> Injecter 300 à 500 UI d&#39;héparine non fractionnée à travers le tuyau IV, et ensuite rincer le tube avec 3-5 ml d&#39;une solution saline. </li></ol></li><li> Ensuite, tracheotomize le donneur comme suit: <ol><li> Faire une incision médiane dans les tissus mous entre la veine jugulaire et la mandibule à l&#39;aide d&#39;un scalpel 22-lame. Pénétrer dans la capsule de la glande thyroïde dans la ligne médiane en utilisant Metzenciseaux Baum, et ses lobes distincts utilisant dissection. </li><li> Utilisation de dissection émoussé, séparer les muscles de la sangle du cou sur la ligne médiane pour exposer la surface antérieure de la trachée. </li><li> Utilisez une pince à disséquer courbes carrément un plan circonférentiel autour de la trachée. Entourez la trachée avec une cravate de soie 4-0. </li><li> Utilisation de ciseaux à iris, faire une incision transversale dans la trachée-artère antérieure, inférieure à environ 5 mm du cartilage thyroïde. Introduire doucement la canule trachéale (un 14 G IV) et le fixer en place à l&#39;aide de la cravate de soie 4-0. </li><li> Raccorder la canule trachéale à un ventilateur mécanique. Rediriger le flux d&#39;oxygène et de l&#39;isoflurane à travers le circuit de ventilation, et ventiler le donateur à un rythme et le volume de marée prédit par son poids 13. </li></ol></li><li> Faire une incision sur la ligne médiane de la poitrine (en utilisant un scalpel à lame 22), prolongeant l&#39;incision à l&#39;encoche jugulaire au-dessous de la xipisternum. </li><li> Rester dans la ligne médiane, Effectuez une sternotomie médiane à l&#39;aide d&#39;un coupe-os. Rétracter les bords du sternum avec un écarteur autostatique. Entrez le péricarde et cavités pleurales. </li><li> Effectuez une thymectomie. Il est plus facile de diviser premier carrément le thymus dans la ligne médiane, puis séparer de structures environnantes utilisant une combinaison de dissection et nette. NOTE: L&#39;origine des artères thoraciques internes peut être blessé en disséquant le thymus à partir des bords supérieurs du sternum. Pour prévenir les saignements, pinces hémostatiques peuvent être appliquées avant de retirer le thymus à ces points. </li><li> Avec des ciseaux de Metzenbaum et / ou une forte Lauer, disséquer péri-caval graisse loin de la veine cave inférieure (VCI). Assurez-vous que l&#39;IVC est relativement exempt de graisse et du tissu conjonctif de la jonction de cavo-auriculaire supérieurement, au diaphragme en bas. </li><li> Utiliser une forte Lauer, la circonférence gratuitement la veine cave supérieure (SVC) et l&#39;encercler avec une cravate de soie 4-0. </li><li> Ensuite, disséquer leveine cave laissé libre de structures environnantes, et ligaturer proximale et distale avec 4-0 cravates en soie. Réséquer la partie intermédiaire de cava pour exposer l&#39;artère sous-clavière gauche. </li><li> Circonférence gratuitement les vaisseaux de l&#39;arc aortique utilisant une forte Lauer. Appliquer agrafes chirurgicales proximale et distale de l&#39;artère iliaque, et de le diviser entre les clips. Laissez l&#39;artère carotide commune gauche et l&#39;artère sous-clavière gauche non coupée. </li><li> Ensuite, canuler SVC avec un cathéter 24 G IV. Fixez le cathéter avec le 4-0 cravate de soie placé précédemment. </li><li> Préparez-vous à une récolte de greffe expédient, mais en douceur. </li><li> Avec des ciseaux pointus, diviser la VCI juste supérieure à la surface diaphragmatique. Divisez la SVC supérieure à son site de canulation, veiller à ce que les structures des voies respiratoires à proximité ne sont pas blessés. </li><li> Éteignez le ventilateur et débranchez la canule trachéale. Transect la trachée proximale. </li><li> Saisir la trachée sectionnée avec une pince, et retirer le coeuret les poumons en bloc. Cela nécessitera une légère traction avec dissection fine que la greffe cœur-poumon est enlevée. Séparer la trachée de l&#39;oesophage sous-jacent. Éviter de blesser l&#39;aorte descendante, de sorte qu&#39;une longue portion de celui-ci reste intact après la récolte. </li></ol> 2. Préparation du Coeur-poumon Graft REMARQUE: tout en complétant cette partie de la procédure, un assistant devrait être anesthésier le rongeur bénéficiaire et préparer implantation du greffon. <ol><li> Passer la greffe cœur-poumon sur gaze chirurgicale avec la face antérieure du cœur vers le bas. Utilisation de dissection, enlever toute oesophage résiduelle, éviter les blessures aux voies aériennes postérieures. </li><li> Situer l&#39;aorte thoracique descendante et insérer un 16 G bout arrondi canule. Fixez la canule en place avec une cravate de soie 4-0. </li><li> Repérez les navires de l&#39;arc aortique, et appliquer une pince chirurgicale à l&#39;artère sous-clavière gauche. Laissez l&#39;artère carotide gauche non taillés pour la sousséquent de-diffusion. </li><li> Administrer la première dose de cardioplégie en raccordant la tubulure de cardioplégie à la canule aortique 16 G. L&#39;artère carotide doit être obturée temporairement avec une pince pour assurer la livraison adéquate de cardioplégie. NOTE: Un avantage d&#39;avoir la canule aortique attaché est que cardioplégie peut être administré en continu et / ou par intermittence comme souhaité. Pour le dosage intermittent, nous livrons généralement cardioplégie tous les 10 - 15 min dans 5 ml bolus sur 30 - 45 sec. </li><li> Avec des ciseaux de Metzenbaum et / ou une forte Lauer, disséquer la graisse péri-aortique loin de l&#39;aorte. Assurez-vous que l&#39;aorte est relativement exempt de graisse et de tissu conjonctif à partir de l&#39;artère sous-clavière gauche (arche distale) de son site de canulation. </li><li> Ensuite, exposer la bronche souche gauche en utilisant une forte Lauer et ligaturer proximale avec une cravate de soie 4-0. Transect la bronche distale gauche à la ligature en utilisant l&#39;iris ciseaux. Effectuez une pneumonectomie gauche en ligaturant pulmonaire gaucheartère et la veine avec 4-0 cravates en soie. Transect distale de la ligature et retirer le poumon gauche. </li><li> Comme ci-dessus, retirez tous les autres lobes pulmonaires à l&#39;exception des lobes supérieur et moyen droite. Éviter de blesser l&#39;IVC dans le processus d&#39;exécution lobectomies. </li><li> Connectez le tube de cardioplégie à la canule aortique et administrer cardioplégie continue alors que le destinataire est en cours de préparation. Placez la greffe cœur-poumon dans un récipient stérile (par exemple, un bécher). </li></ol> 3. bénéficiaire d&#39;exploitation <ol><li> Anesthésier le destinataire que par l&#39;opération de donateurs, ci-dessus. Utilisez vétérinaire pommade pour protéger les yeux de l&#39;animal de la sécheresse. Confirmez anesthésie fréquemment par la pédale pincée. </li><li> Placez l&#39;animal comme par l&#39;opération des donateurs, laissant cette fois le droit des membres antérieurs libre de surveiller les signes vitaux et profondeur de l&#39;anesthésie. </li><li> Raser l&#39;abdomen de xiphisternum à pénis. Raser une petite région de l&#39;aine gauche (pour un accès ultérieur de IV). Appliquer uneAgent d&#39;épilation les surfaces actives, attendez environ 5 min, et enlever les poils avec un morceau de gaze. </li><li> Prep les sites chirurgicaux avec une povidone-iode ou une solution à base de chlorhexidine. Infiltrez sites incisionnelles avec 0,1 à 0,5% de lidocaïne sous-cutanée. </li><li> Tracheotomize et ventiler le destinataire comme indiqué ci-dessus. Alternativement, de maintenir le destinataire sous le nez cône anesthésie. </li><li> L&#39;introduction d&#39;un cathéter dans la veine fémorale comme décrit ci-dessus. Injecter 300 à 500 UI d&#39;héparine non fractionnée à travers le tuyau IV, et ensuite rincer le tube avec 3-5 ml d&#39;une solution saline. </li><li> Effectuez une laparotomie en faisant une incision abdominale médiane avec un scalpel 22-lame xiphisternum à pénis. Rétracter la paroi abdominale à l&#39;aide d&#39;un écarteur autostatique. Ensuite, retirer les entrailles en haut et à gauche du rat. Enveloppez-les dans un endroit chaud, de la gaze imbibée de solution saline. </li><li> Exposer l&#39;aorte abdominale IVC et en disséquant fortement à travers la re sus-jacentetro-péritonéale graisse. </li><li> Avoir une pince de vaisseau courbe disponible et prêt. </li><li> Circonférence libérer la VCI et l&#39;aorte proximale et distale et les encercler avec 4-0 cravates en soie. Il devrait y avoir environ 2 - 3 cm d&#39;espace entre ces sites. </li><li> Appliquer soigneusement la pince de vaisseau courbe, veiller à ce qu&#39;une part suffisante des deux IVC et l&#39;aorte sont exposés ci-dessus les mâchoires de la pince. </li><li> Faire une incision dans la paroi antérieure de la veine cave inférieure avec une aiguille 25 G raccordée à une seringue de 1 ml rempli de solution saline. Elargir l&#39;incision avec des ciseaux de Potts pour correspondre à la longueur du donneur IVC orifice. </li><li> Retirer la greffe cœur-poumon de son récipient et débrancher de cardioplégie. Placer le greffon dans l&#39;abdomen du destinataire dans une position optimale pour effectuer l&#39;anastomose veineuse. NOTE: La greffe cœur-poumon sera finalement orienté légèrement en oblique, avec le sommet pointant vers l&#39;abdomen de quadrant inférieur gauche. </li><li> Fixez le talonet bouts de chaussures de l&#39;anastomose avec 9-0 suture en nylon. Faire un nœud sécurisé à chaque extrémité, laissant l&#39;aiguille fixée à un long bras de suture, et une courte fin de suture d&#39;être lié à plus tard. Administrer une dose de cardioplégie. </li><li> En exécutant la mode, complète la moitié de la ligne de suture et une cravate au bras opposées de suture courte. Administrer une dose de cardioplégie. </li><li> Remplissez l&#39;autre moitié de la ligne de suture et l&#39;attacher vers le bas. L&#39;anastomose veineuse est terminée. Administrer une dose de cardioplégie </li><li> Orientez la greffe cœur-poumon avec sommet pointant du cœur vers l&#39;abdomen de quadrant inférieur gauche. Assurez-vous que l&#39;anastomose veineuse ne soit pas plié ou tordu. </li><li> Évaluer la longueur de l&#39;aorte des donateurs qui sera nécessaire pour atteindre l&#39;aorte bénéficiaire, le maintien à la fois IVC et anastomoses aortiques dans des configurations sans tension et non vrillées. </li><li> Diviser l&#39;aorte descendante (distal par rapport au artère sous-clavière gauche) avec une paire de ciseaux à iris. </li><li> Faire une incision, dans la paroi antérieure de l&#39;aorte de destinataire avec une aiguille 25 G raccordée à une seringue de 1 ml rempli de solution saline. Elargir l&#39;incision avec des ciseaux de Potts pour correspondre à la longueur de l&#39;orifice aortique de donneur. </li><li> Ancrer la pointe (de face supérieure) de l&#39;aorte donneur au receveur aorte en utilisant une suture 9-0 en nylon. Ensuite, passer l&#39;aiguille à la face médiale de l&#39;aorte et remplir la moitié de l&#39;anastomose dans la gestion de la mode. </li><li> Au talon de l&#39;anastomose aortique, inverser l&#39;orientation de la ligne de suture (une transition dans le sens de la couture), et compléter la moitié latérale de l&#39;anastomose dans la gestion de la mode. </li><li> Lentement retirer le cathéter IV dans le SVC, et ligaturer le SVC avec une pince chirurgicale. </li><li> De l&#39;air de l&#39;aorte en localisant l&#39;artère carotide commune non écrêté gauche. Maintenez l&#39;artère ouverte, dans une position verticale qui permet à l&#39;air d&#39;être évacué librement. </li><li> Brièvement ouvrir les mâchoires de la pince du vaisseau courbé et permettre à l&#39;artère carotide à saigner (de-air) pour les 2 - 3 sec. Re-appliquer la pince de navire. </li><li> Appliquer une pince chirurgicale à l&#39;artère carotide. Retirer la pince de vaisseau courbe. </li><li> Vérifiez saignements au niveau des lignes de suture. Le cas échéant, appliquer une compression douce avec de la gaze chirurgicale ou la réparation d&#39;une longueur de 9-0 suture en nylon (selon la gravité de l&#39;hémorragie). </li><li> Le cœur d&#39;un donneur devrait reprendre en battant en quelques minutes. </li><li> Portez une attention particulière aux signes vitaux du destinataire, la profondeur de l&#39;anesthésie, de réanimation et administrer le volume au besoin. </li><li> Selon les paramètres expérimentaux, soit fermer l&#39;abdomen de l&#39;animal et laissez-le se remettre de l&#39;anesthésie, ou de préparer l&#39;animal pour l&#39;évaluation cardiovasculaire. NOTE: Exemples d&#39;évaluation de greffe comprennent des mesures in vivo de l&#39;hémodynamique fonction de la charge et indépendant de la charge, des mesures in vitro de la fonction dans Langendorff et les modes de travail, et cardiaques (en chirurgie de survie) ou échocardiographiques enquêtes IRM. </li><li> Aufin des expériences terminaux aiguës, les animaux sont euthanasiés par exsanguination. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs ont rien à révéler.

Le succès de la technique décrite ici est fondée sur plusieurs facteurs. Clé d&#39;entre eux sera d&#39;assurer la stabilité des deux animaux donateurs et bénéficiaires, en adoptant la technique opératoire méticuleuse qui est sûr et associé avec un minimum de perte de sang, assurant un arrêt cardioplégique complète avec refroidissement de greffe uniforme, minimisant le temps ischémique totale, et suffisamment dé-aérer la greffe. Comme l&#39;a reconnu ci-dessus, la complexité technique de la technique est sa limitation e...

Le premier modèle de transplantation cardiaque abdominale hétérotopique (HAHT) chez le rongeur a été décrit par Abbott et ses collègues en 19641. Cette technique et les modifications ultérieures ont été largement appliquées pour caractériser la fonction du greffon et l’état immunologique. La majorité des techniques HAHT décrites impliquent un cœur non chargé en volume2,3. Des modèles de HAHT impliquant des ventricules chargés de volume ont été décrits, mais ils sont souvent limités à un ou plusieurs égards.
La transplantation cœur-poumon abdominale hétérotopique (HAHLT) avec un ventricule gauche (VG) chargé de volume a été décrite précédemment. Chen et ses collègues4, puis Ibrahim et ses collègues5 ont décrit HAHLT avec une seule anastomose aorto-aortique (donneur montant vers l’aorte abdominale receveuse). La seule charge volumique présentée au ventricule dans cette circulation est le retour veineux coronaire. Asfour et ses collègues ont décrit une technique HAHT dans laquelle le circuit pulmonaire a été éliminé par anastomosation de l’artère pulmonaire (PA) du donneur à l’oreillette gauche du donneur (LA)6. Dans cette circulation, l’afflux veineux vers le ventricule droit (VD) se produit via une anastomose SVC du donneur vers l’IVC du receveur, et la charge VG subséquente est éjectée dans l’anastomose aorto-aortique. La fonction cardiaque a été partiellement évaluée in vivo, ainsi qu’in vitro à l’aide d’un appareil de Langendorff. Figueiredo et ses collègues ont décrit un modèle HAHLT similaire à notre propremodèle 7, mais chez la souris. L’entrée veineuse vers le VD se produit par anastomose SVC du donneur vers le receveur. Le sang passe ensuite dans la circulation pulmonaire unique et la charge VG est éjectée dans l’anastomose aorto-aortique. La fonction cardiaque dans leur étude a été évaluée par imagerie par résonance magnétique (IRM). Wen et ses collègues ont décrit une technique HAHT unique dans laquelle le VG est chargé au moyen d’une aorte receveuse vers l’anastomose LA8 du donneur. Le LV se remplit donc à des pressions systémiques. La fonction cardiaque et la question de savoir si le volume systolique VG est éjecté avant la fin dans leur modèle n’ont pas été évaluées.
De nombreuses techniques référencées ci-dessus impliquent des conditions de charge VG non physiologiques, y compris les techniques dont la charge partielle LV n’est représentée que par un retour veineux coronaire. D’autre part, de nombreuses techniques s’approchent de la charge physiologique du VG. La majorité de ces techniques, comme la technique d’Asfour et de ses collègues, omettent la circulation pulmonaire et utilisent une anastomose AP du donneur avec le donneurLA 6,9. La circulation décrite par Galinanes et ses collègues10 utilise une anastomose cave receveuse directe vers le donneur LA, omettant la circulation pulmonaire et le cœur droit. Yokoyama et ses collègues obtiennent le même effet en ligaturant l’AP du donneur et en créant une communication interauriculaire dans le cœur du donneur (en omettant les circulations du poumon du donneur et du cœur droit)11. La circulation de Maruyama et de ses collègues12 implique une anastomose entre l’AP gauche du donneur et le receveur Ao, ce qui permet le remplissage du VG via la circulation pulmonaire comme conduit, mais exclut effectivement le cœur droit.
Dans les cas où des conditions de charge quasi physiologiques étaient remplies, nous faisons progresser la technique de HAHLT sur 2 points majeurs. Tout d’abord, à notre connaissance, la configuration exacte que nous rapportons n’a pas été décrite chez les rats. C’est peut-être la circulation la plus polyvalente pour les chercheurs souhaitant étudier la physiologie, la structure et l’immunologie de la greffe cœur-poumon transplantée. Deuxièmement, nous décrivons comment la fonction du greffon de greffe peut être directement caractérisée in vivo. Pour cette application, des cathéters à conductance pression-volume peuvent être introduits directement dans l’apex VG du greffon de greffe, ce qui permet une caractérisation complète de la fonction cardiaque. 
La technique décrite ici peut être appliquée à la fois aux études aiguës et chroniques de la fonction du greffon de greffe, tandis que l’évaluation fonctionnelle peut être réalisée soit in vivo, soit in vitro. Nous présentons un modèle dans lequel les conditions de charge peuvent être proches de la physiologie, mais le degré de charge ventriculaire peut être manipulé à la fois de manière aiguë et chronique en détournant le retour veineux vers ou loin du greffon. Les conditions de postcharge peuvent également être manipulées. Parce que le poumon et ses voies respiratoires sont conservés dans cette configuration de greffe, les chercheurs peuvent réaérer le poumon du donneur de manière aiguë. De manière unique, la reventilation pulmonaire modifie la composition du sang perfusant les artères coronaires de la greffe. Dans des conditions non ventilées, le sang éjecté de l’aorte du donneur est désoxygéné et se mélange au sang oxygéné dans l’aorte du receveur. Dans des conditions de ventilation aiguë, le sang éjecté devient oxygéné. Ainsi, la fonction du greffon de transplantation peut être comparée dans des conditions ventilées et non ventilées, ainsi que dans des conditions de charge variable.
Le protocole ci-dessous décrit les modifications importantes apportées aux opérations du donneur et du receveur de HAHLT précédemment décrites. Il décrit également une technique optimale pour protéger le greffon transplanté tout au long de la période d’ischémie (temps entre l’explant du donneur et l’implant receveur). Les avantages de cette technique comprennent des conditions physiologiques potentiellement proches de celles d’un greffon transplanté orthotopique, et un large éventail d’applications d’investigation. Une limitation importante est sa complexité technique. Avec un mentorat et une pratique adéquats, les avantages de cette technique l’emporteront probablement sur les défis liés à son adoption.

<table><tbody><tr><td>Celsior Cardioplegic Soution</td><td>Genzyme</td><td></td><td>La solution est conservée sur de la glace tout au long de la procédure. Nous préparons notre propre solution, avec de légères modifications.</td></tr><tr><td>Ventilateur de rongeur</td><td>Appareil Harvard</td><td>Modèle 683</td><td></td></tr><tr><td>Moniteur de signes vitaux</td><td>Nonin</td><td>Modèle 9847V</td><td>Affiche SpO2 et fréquence cardiaque.</td></tr><tr><td>Canules IV</td><td>Jelco</td><td>3063</td><td>24 - 26 G x 3/4" canules.</td></tr><tr><td>Tube IV</td><td>CareFusion</td><td>MP9259-C</td><td>Tube de raccordement de courte longueur (18 cm).</td></tr><tr><td>Pinces chirurgicales</td><td>Teleflex Medical</td><td>001204</td><td>Clips de ligature en titane Horizon.</td></tr><tr><td>Sutures</td><td>Ethicon, Sharpoint</td><td>LA54G, moulinet en soie AK-0107</td><td>3-0 et suture prolène 9-0 (à un bras, aiguille DR5).</td></tr><tr><td></td><td></td><td>Les instruments utilisés</td><td>sont génériques et peuvent être achetés auprès de n’importe quelle entreprise de fournitures chirurgicales.</td></tr></tbody></table>

rat heterotopic abdominale coeur / transplantation pulmonaire simple dans une configuration de volume chargé

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Dans ce document, nous décrivons une nouvelle technique de transplantation cœur-poumon abdominale hétérotopique (HAHLT) chez le rat. La configuration de la greffe implique une anastomose de la veine cave inférieure du donneur (VCI) à la VCI receveuse, et de l’aorte ascendante du donneur (Ao) à l’Ao abdominal du receveur. Les lobes pulmonaires supérieurs et moyens droits sont préservés et fonctionnent comme des conduits pour le flux sanguin du cœur droit au cœur gauche.
Il y a plusieurs avantages à utiliser cette technique, et elle se prête à un large éventail d’applications. Parce que le greffon est transplanté dans une configuration qui permet une charge volumique dyamique, la fonction cardiaque peut être directement évaluée in vivo. L’utilisation de cathéters à conductance pression-volume permet de caractériser les paramètres hémodynamiques dépendants et indépendants de la charge. Le greffon peut être converti en une configuration chargée en appliquant une pince sur la VCI infra-hépatique du receveur. Nous décrivons des techniques chirurgicales modifiées pour les opérations du donneur et du receveur, ainsi qu’une stratégie idéale de protection du myocarde. Selon l’objectif de l’expérience, ce modèle peut être adapté pour être utilisé dans des études aiguës et chroniques de la fonction du greffon, de l’état immunologique et des conditions de charge ventriculaire variables. Les voies respiratoires conductrices vers le poumon transplanté sont préservées et permettent une reventilation pulmonaire aiguë. Cela facilite l’analyse des effets du mélange de sang veineux et artériel fournissant une perfusion coronaire au greffon.
Une limitation de ce modèle est sa complexité technique. Il y a une courbe d’apprentissage importante pour les nouveaux opérateurs, qui devraient idéalement être encadrés dans la technique. Une formation en chirurgie est avantageuse pour ceux qui souhaitent appliquer ce modèle. Malgré sa complexité, nous visons à présenter le modèle dans un format clair et facilement applicable. En raison de la similitude physiologique de ce modèle avec la transplantation orthotopique et de son large éventail d’applications d’étude, l’effort investi dans l’apprentissage de la technique est susceptible d’en valoir la peine.

La technique de HAHLT décrit ci-dessus est très technique et nécessite une attention particulière aux détails. Tableau 1 met en évidence certains des principaux facteurs associés à la réussite par rapport procédures infructueuses, et peuvent être utilisées comme un guide pour le dépannage de difficultés techniques. Après l&#39;aorte du destinataire est desserré, les artères coronaires greffés doivent être considérées à se remplir de sang oxygéné. En conséquence, le myocarde ...

Nous décrivons une nouvelle technique de transplantation cœur-poumon abdominale hétérotopique (HAHLT) chez le rat. La configuration de la greffe entraîne une circulation du greffon partiellement chargée, ce qui permet une évaluation fonctionnelle directe. Ce modèle peut être utilisé pour des études aiguës ou chroniques de la fonction et de l’état immunologique du greffon transplanté.

Rat Heterotopic abdominale Coeur / Transplantation pulmonaire simple dans une configuration de volume chargé

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

L'objectif général de cette procédure est de réaliser une transplantation hétérotopique d'une greffe cardiaque et pulmonaire unique dans une configuration permettant une surcharge volumétrique. Cela est réalisé en prélevant d'abord la greffe cœur-poumon du donneur. Ensuite, le receveur est préparé, puis le tissu du donneur est implanté.Enfin, le tissu greffé du donneur est débarrassé de l'air et reperfusé. En définitive, un cathéter conductif de pression et de volume peut être utilisé pour évaluer en temps réel la fonction du greffon. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme la transplantation cardiaque hétérotopique abdominale, est que l'ajout du greffon pulmonaire permet un flux sanguin antérograde à travers un circuit natif, facilitant ainsi la charge volumique dynamique du greffon cœur-poumon, ainsi que l'évaluation cardiovasculaire post-greffe.Pour préparer la veine cave inférieure, ou VCI, en vue d'une anastomose ultérieure, commencez par disséquer la graisse péricave de l'animal donneur, en partant de la jonction cave-auriculaire et en progressant vers le bas jusqu'au diaphragme. Ensuite, à l’aide d’un bistouri, sectionnez de manière circulaire vers le bas, libérez la veine cave supérieure, ou VCS, et entourez-la avec un ligature en soie 4-0. Disséquez la veine cave gauche pour la libérer des structures environnantes et ligaturez-la proximalement et distalement.Ensuite, résectionner la portion intermédiaire de la veine cave, exposer circulairement l'artère subclavière gauche, libérer les artères innominée et carotide commune gauche, puis appliquer des pinces proximale et distale sur l'artère innominée. Puis diviser le segment de l'artère situé entre les pinces à l'aide d'un cathéter intraveineux de calibre 26, canuler la VCS et la fixer en place à l'aide d'un ligature en soie préexistante de calibre 4-0. Ensuite, pour prélever la greffe cœur-poumon, sectionner la VCI immédiatement au-dessus du diaphragme et la VCS au-dessus du site de canulation, en prenant soin d'éviter toute lésion de la trachée.Ensuite, sectionner la trachée de façon proximale. Saisir la trachée avec une pince et exercer une traction douce tout en pratiquant une dissection tranchante pour séparer la trachée de l'œsophage sous-jacent. Retirer l'ensemble cardiaque et pulmonaire en bloc.Ensuite, placer la surface antérieure du cœur face vers le bas. Canuler l'aorte descendante à l'aide d'une canule obtuse de calibre 16 et perfuser le tissu avec cinq à 10 millilitres de cardioplégie à l'aide d'une seringue aiguë. Puis, exposer la bronche principale gauche, la ligaturer avec un fil de soie 4-0 et sectionner la bronche au-delà de la ligature.Ensuite, retirer tout sauf les lobes supérieur et moyen droits du poumon et placer la greffe dans un récipient approprié jusqu'à l'implantation du tissu donneur. Libérer circulairement la VCI et l'aorte du receveur de façon proximale et distale. Ensuite, entourer chaque site avec quatre ligatures en soie zéro, en laissant environ deux à trois centimètres d'espace entre les sites de pince.Lorsque les vaisseaux sont dégagés, appliquer une pince courbe unique à la VCI et à l'aorte, en veillant à laisser suffisamment de chaque vaisseau libre pour l'anastomose. Ensuite, à l’aide d’une aiguille de 25 gauge fixée à une seringue d’un millilitre remplie de sérum physiologique, pratiquer une venotomie dans la paroi antérieure de la VCI. Puis utiliser des ciseaux à pointes courbes pour allonger l’incision afin qu’elle corresponde à la longueur de l’orifice de la VCI du donneur, et fixer les extrémités de l’anastomose avec un fil de nylon 9-0, en laissant une courte extrémité de fil libre à chaque point d’ancrage ou en nouant l’anastomose en mode continu.Complétez une moitié de la ligne de suture et nouez-la au bras de suture court opposé. Ensuite, terminez et nouez l'autre moitié de la suture. Commencez l'anastomose aortique en fixant la partie supérieure de l'autotomie de l'AOR à l'aide d'une suture en nylon de calibre neuf zéro.Ensuite, de manière continue, commencez la suture sur le côté médial et terminez par le côté latéral de l'anastomose. Nœuddez la suture à l'extrémité restante du bras court de fil puis ligaturez la VCS à l'aide d'un clip chirurgical. Maintenant, relâchez lentement et soigneusement la pince vasculaire courbe et laissez l'aorte saigner par l'artère carotide.Après quelques secondes, ligaturez l'artère carotide à l'aide d'un clip chirurgical et observez la greffe afin de vérifier l'hémostase, une reperfusion réussie et la reprise d'une activité cardiaque spontanée. Ici, des données représentatives in vitro de référence de pression et de volume, obtenues lors d'une évaluation in vitro de la fonction cardiaque en mode cœur fonctionnel après une transplantation hétérotopique abdominale de cœur et de poumon, sont présentées comme illustré dans la figure d'occlusion de la précharge. Les données de pression-volume peuvent également être obtenues de manière aiguë avec cette méthode, fournissant aux chercheurs une variété de données sur le débit cardiaque. Après cette procédure, d'autres analyses peuvent être réalisées, telles que l'étude des effets de modifications aiguës et chroniques.Des conditions de chargement sur la fonction du greffon in vivo peuvent être réalisées.

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