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DOI: 10.3791/52550-v
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Nous présentons ici un protocole fournissant un outil pour examiner les mécanismes de régulation de gènes spécifiques au cours du développement de l’hippocampe. L’utilisation de l’électroporation ex utero et de la culture de coupes organotypiques permet la régulation à la hausse et à la baisse de l’expression des gènes d’intérêt dans les cellules individuelles et suit leur destin au cours du développement.
L’objectif global de cette procédure est d’étiqueter et de modifier les cellules uniques du gyrus denté et de suivre leur développement. Ceci est accompli en injectant d’abord de l’ADN dans un hémisphère du cerveau au jour embryonnaire, 15,5 ou 18,5. La deuxième étape consiste à électroporer l’ADN injecté dans la zone du gyrus denté en développement.
Ensuite, des coupes de cerveau sont préparées à l’aide d’un vibromasseur, et les tranches de cerveau sont conservées en culture jusqu’à 14 jours. La dernière étape est la coloration immunofluorescente des tranches de cerveau à l’aide d’anticorps appropriés. En fin de compte, la microscopie confocale à immunofluorescence est utilisée pour montrer les changements des cellules granulaires modifiées du gyrus denté en développement.
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