Suivi à long terme de l'EEG continu dans les modèles petit rongeur de la maladie humaine à l'aide du système de communication sans fil Epoch

L’objectif global de cette procédure est d’implanter efficacement l’émetteur epic pour enregistrer un EEG de haute qualité chez les rongeurs, tels que les rats et les souris. Ceci est accompli en exposant et en séchant d’abord la surface du crâne. La deuxième étape consiste à percer des trous dans le crâne pour l’insertion de l’émetteur, des électrodes et des vis à os nécessaires.

Ensuite, les vis à os sont insérées et les électrodes de l’émetteur sont alignées. La dernière étape consiste à insérer les électrodes et à fixer l’émetteur au crâne avec des adhésifs acryliques. En fin de compte, des logiciels d’acquisition de données, de vidéo et d’examen sont utilisés pour surveiller l’activité EEG 24 heures sur 24, 7 jours sur 7, afin de capturer tous les événements EEG tels que les convulsions et les pics interictals.

La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle car les étapes d’implantation sont difficiles à apprendre. La taille du crâne du rongeur entraîne une intervention chirurgicale complexe mais entraînable. L’objectif principal de cette présentation est de simplifier cette procédure d’implantation et de la rendre facilement reproductible.

Nous avons d’abord eu l’idée de cette méthode lorsque nous avions de la difficulté à faire des enregistrements électrographiques à long terme à partir de modèles animaux d’épilepsie. Pendant les crises convulsives, les enregistrements filaires sont sujets à des artefacts électriques et à des contraintes fâcheuses sur l’interface du crâne de l’électrode. Les systèmes d’enregistrement câblés peuvent tomber en panne en raison de la mastication de l’attache et du grattage de l’implant.

Ce système sans fil résout tous ces problèmes tout en fournissant jusqu’à six mois d’enregistrements EEG continus et ininterrompus. En préparation de l’opération, assurez-vous de stériliser complètement l’émetteur, de le tremper dans de l’éthanol à 70 %, de le rincer dans une solution saline stérile et de l’immerger dans une solution saline stérile. Laissez-le là jusqu’à ce qu’il soit nécessaire.

La dernière préparation consiste à s’assurer que tout ce qui se trouve sur le site chirurgical est stérilisé. Vaporisez et essuyez la zone environnante et l’équipement avec de l’éthanol à 70 %. Après avoir anesthésié l’animal, assurez-vous de confirmer l’absence de réponse à un pincement de l’orteil avant de commencer l’opération pendant que l’animal est anesthésié.

Faites-le toutes les 15 minutes. L’animal anesthésié doit d’abord être fixé en position dans un cadre stéréotaxique. Utilisez des barres d’oreille, mais ne les serrez pas trop car la peau des jeunes chiots est très douce.

Une fois fixé, appliquez un cône nasal pour fournir 3 % de fluor iso. Pour garder l’animal au chaud, gardez un coussin chauffant en dessous à 37 degrés Celsius. Pour les animaux adultes Lubrifiez également les yeux.

Maintenant, stérilisez le site d’incision Tout d’abord, nettoyez le cuir chevelu avec de l’éthanol à 70 %, puis avec de la bétadine, frottez la peau dans un mouvement circulaire. Ensuite, drapez l’animal. Commencez par faire très prudemment une incision dans le cuir chevelu, légèrement derrière les oreilles, le long de la ligne médiane.

Étendez l’incision d’environ deux centimètres. Les jeunes chiots ont un crâne très mou. De plus, faites cette incision en une seule coupe afin qu’elle guérisse plus rapidement.

Exposez ainsi le crâne. Ensuite, à l’aide de pinces à anévrisme, saisissez le crâne et exposez et séchez une zone où l’émetteur sera attaché. Gardez à l’esprit que chez les jeunes chiots, les os du crâne ne sont pas fusionnés.

Séchez ensuite le crâne où l’émetteur se fixera Pour une liaison adhésive forte, utilisez un stylo électrocautérisé pour arrêter le saignement sur le crâne. À l’aide de repères anatomiques et d’un atlas cérébral, identifiez l’emplacement du crâne pour placer le trou de la fraise pour l’enregistrement. Ensuite, à l’aide d’un drépied et d’une fraise, créez deux trous en position d’enregistrement qui ne dépassent pas 300 microns de diamètre.

Ensuite, sur le cervelet et derrière le Lambda, placez un trou de fraise. Pour l’électrode de référence, vérifiez que les fils de l’émetteur sont alignés sur les trous de fraise. Si ce n’est pas le cas, vérifiez l’ajustement de l’émetteur et pliez doucement les électrodes pour les aligner avec les trous à l’aide d’une pince à pointe fine.

Maintenant, coupez-les à l’aide de ciseaux chirurgicaux à la longueur souhaitée. Ils doivent s’étendre au-dessus de la dure-mère pour les enregistrements EEG ou pénétrer jusqu’aux structures cérébrales définies. Maintenant, sans revêtir les électrodes, appliquez suffisamment de cyanoacrylate sur l’émetteur pour le couvrir complètement.

Il suffit de ne pas mettre de colle sur les électrodes. Si l’émetteur doit prendre des enregistrements en surface, abaissez-le dans les trous et maintenez-le en place pendant environ une minute en utilisant une légère pression. Si l’enregistrement doit être pris à partir de structures cérébrales profondes, montez l’émetteur sur un support de canule et placez-le sur un bras stéréotaxique.

Il est essentiel de positionner les électrodes de l’émetteur dans les trous de fraise sans contamination par la colle. La contamination entraînera une dégradation du signal. Ensuite, ajoutez plus de gel de cyanoacrylate pour renforcer la fixation de l’émetteur.

Appliquez la colle en cercles couvrant les parois de l’émetteur. Assurez-vous de ne pas couvrir l’antenne. Appliquez ensuite 100 microlitres d’un accélérateur chimique autour de la base de l’émetteur à l’aide d’une seringue.

Empêchez-le d’entrer en contact avec les tissus environnants. Pour éliminer l’accélérateur, lavez soigneusement la zone avec un demi-millilitre de solution saline stérile. Suturez maintenant la peau autour de l’émetteur sans la couvrir.

Le haut de l’émetteur doit être ex-extériorisé. Pour une bonne transmission du signal, utilisez du Vicryl ou des sutures en soie. Lorsque vous travaillez avec des chiots délicats, la peau doit être raisonnablement serrée autour de l’émetteur et de la colle environnante.

Transférez maintenant l’animal du cadre vers une couverture chaude Pour la récupération, les détails des soins postopératoires sont fournis dans le protocole textuel. Transférez un seul animal implanté dans une chambre d’enregistrement. Un seul animal implanté peut être surveillé à la fois, mais d’autres animaux non implantés peuvent être avec lui.

Pour configurer l’enregistreur, connectez l’alimentation à la base du récepteur. Ensuite, connectez la base à un système d’acquisition de données via des BNC. Placez maintenant la cage sur la base du récepteur de signaux.

Le voyant de signalisation doit s’allumer. Les données peuvent maintenant être enregistrées. Tout d’abord, connectez la base du récepteur à un convertisseur publicitaire et connectez le convertisseur à un ordinateur.

À l’aide des paramètres du logiciel, réglez la fréquence d’échantillonnage de l’enregistrement sur 500 par seconde. L’émetteur envoie des signaux EEG entre 0,1 et 100 hertz avec une atténuation de huit décibels par VE à chaque extrémité Il est essentiel de régler une fréquence d’échantillonnage appropriée supérieure à nyquist. Nous recommandons 500 échantillons par seconde pendant que les animaux sont enregistrés, surveillez les signes de stress et de déshydratation.

Les chiots ne doivent pas rester dans la chambre pendant plus de deux heures. L’émetteur a été conçu avec un facteur de forme peu dommageable et l’enregistrement de la longue durée de vie de la batterie a pu être effectué en continu pendant six mois en fonction de la capacité de la batterie. Les souris à P 12 et plus ont très bien toléré l’émetteur, tout comme les rats aussi jeunes que P six.

La fixation du cyanoacrylate sur le crâne n’a pas entravé le développement, permettant une collecte continue de données tout au long du développement de l’animal jusqu’à l’âge adulte Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en quelques minutes si elle est effectuée correctement. N’oubliez pas qu’il est important de garder les électrodes exemptes de contamination par la colle Suite à cette procédure. D’autres méthodes, telles que l’analyse quantitative de détection des crises, peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires telles que l’évolution dans le temps et la gravité de l’état de mal épileptique.

Cette technique ouvrira la voie aux chercheurs en épilepsie pour étudier les crises néonatales et les modèles d’AVC périnatal chez les rongeurs.