Un modèle murin d'irréversible et réversible unilatérale obstruction urétérale

Ce vidéo présente un modèle murin de neuropathie obstructive induite par une obstruction unilatérale de l'uretère, pouvant entraîner des lésions histologiques irréversibles ou réversibles. Des données histologiques mettant en évidence les lésions structurelles résultantes ainsi que leur rétablissement après la libération de l'obstruction sont présentées. Ce schéma cartoon illustre les principales étapes de ce modèle. Ici, nous observons le rein gauche, l'uretère et la vessie.

Une obstruction urétérale unilatérale standard est induite par la ligature de l'uretère. L'uretère devient dilaté et le rein devient hydro-néphrotique au fil du temps. Pour réaliser une obstruction urétérale unilatérale réversible, l'uretère est ligaturé près de la vessie et un tube en plastique à paroi souple, représenté en gris, est placé autour de l'uretère au niveau du point d'obstruction.

Afin de limiter une dilatation urétérale excessive, le rein devient hydro-néphrotique au fil du temps, puis est désobstrué à un moment approprié pour l'étude. Sept jours après cette expérience, le tube à paroi souple est retiré et l'uretère est sectionné juste au-dessus du niveau de la ligature. L'uretère non obstrué est anastomosé à la vessie pour permettre l'écoulement de l'urine, et le rein se décompresse généralement en plusieurs jours.

Le modèle d'obstruction unilatérale de l'uretère, appelé UUO, peut être utilisé pour étudier le développement des lésions tissulaires et de la fibrose suite à une néphropathie obstructive. Le modèle d'obstruction réversible de l'uretère, abrégé en RUUO, permet d'obtenir des informations sur le remodelage tissulaire pouvant suivre une lésion. Voici la représentation d'une expérience typique intégrant à la fois nos procédures UUL et RUUO.

Les souris subissent une ULU le jour zéro et sept jours plus tard. Les souris sont ensuite sacrifiées pour évaluer le degré de lésion, ou bien les uretères sont désobstrués afin d'effectuer une RUUR. Les reins sont alors laissés en décompression pendant sept jours avant que les tissus soient prélevés.

Le tissu peut être évalué pour détecter des lésions structurelles, une infiltration de macrophages, une accumulation de myofibroblastes et une fibrose. Voici un exemple de configuration chirurgicale typique. L'intervention est réalisée à l'aide d'instruments et de consommables stérilisés au moyen d'un autoclave, placés dans un champ chirurgical stérile.

Si plusieurs animaux sont opérés, les instruments doivent être stérilisés entre chaque intervention à l’aide d’un stérilisateur à billes, ou un nouvel ensemble d’instruments doit être utilisé pour chaque procédure. Les opérateurs portent une blouse stérile, un masque, une coiffe et des gants. Cette souris mâle C57BL/6 âgée de huit semaines a été anesthésiée par une injection intrapéritonéale de chlorure de kétamine et de mémine.

La profondeur de l'anesthésie a été confirmée par la perte de réaction à une pincée du orteil. La zone chirurgicale a été rasée et désinfectée à l'aide d'une solution diluée de chlorhexidine. Un lubrifiant oculaire a été appliqué pour prévenir le dessèchement cornéen.

La buprénorphine hydrochlorure analgésique a été administrée par injection sous-cutanée. La bouche a été placée sur un champ opératoire stérile chauffant recouvert d'un drap stérile, et les membres ont été immobilisés à l'aide de ciseaux séparateurs de tissus ; une laparotomie médiane est ensuite réalisée, ainsi qu'une incision le long de l'aponévrose linéaire avasculaire du coude. Ce prochain chapitre détaillera comment réaliser une UUOA irréversible : un rétracteur calibra est inséré dans l'incision et la souris est recouverte de champs opératoires stériles.

Les intestins sont déplacés et recouverts avec un gaz stérile humide afin d'exposer l'uretère gauche. L'uretère est mis à nu et isolé à l'aide d'une pince angulée pour induire une obstruction. L'uretère est ligaturé deux fois à l'aide d'un fil de soie noir tressé 6/0.

L'uretère peut être obstrué n'importe où entre la vessie et le bassinet rénal. L'uretère est alors sectionné entre les points de suture. Ce prochain chapitre détaillera comment réaliser une obstruction urétérale réversible.

Il s'agit de la première étape d'un RUUL. L'uretère est mis à nu et isolé à l'aide de pinces angulées afin d'induire une obstruction. L'uretère est ligaturé deux fois à l'aide d'un fil de soie noir tissé 6,0.

On doit obstruer l'uretère près de la vessie afin de préserver une longueur adéquate d'uretère pour l'anastomose à la vessie. Lors de la procédure de renversement, les fils de suture sont coupés, mais l'un d'entre eux est laissé long pour un usage ultérieur, et un tube en plastique souple d'environ cinq millimètres de longueur est sectionné. Une fente longitudinale est ensuite pratiquée de manière à pouvoir l'ouvrir en éventail afin de la placer autour de l'uretère.

Le tube en plastique à paroi souple doit avoir un diamètre interne d'un millimètre et un diamètre externe de deux millimètres. Le tube en plastique à paroi souple est ensuite placé soigneusement autour de l'uretère en veillant à ce que, une fois refermé, le long fil de suture émerge du centre de la fente. Ensuite, un morceau de suture en soie noire tressée de six oh est passé autour du tube et noué.

Une fois que le long point de suture émergeant du centre du tube est ensuite intégré dans le nœud suivant. Cette étape est réalisée afin d'ancrer solidement l'uretère et le tube en place. Le tube entourant l'uretère préviendra une dilatation excessive de l'uretère à la fin des procédures UUO et RUUO.

Les intestins sont replacés et le péritoine est suturé, puis la peau est fermée à l’aide de clips métalliques. De l’iode est également appliqué sur la zone chirurgicale. L’anesthésie est partiellement inversée par une injection sous-cutanée d’aamaz.

Des solutions de chlorure et de fluides sont administrées par injection sous-cutanée d'un millilitre de sérum physiologique réchauffé. Les souris sont surveillées jusqu'à ce qu'elles aient recouvré conscience, puis sont laissées se remettre dans une boîte chauffante maintenue à 29 degrés pendant 24 heures. Les reins deviennent hydronéphrotiques dans les jours suivant l'obstruction urinaire.

Les souris peuvent être sacrifiées à différents moments au cours de la phase de lésion ou après la libération de l'obstruction. Ce chapitre décrit comment effectuer une libération, qui constitue la deuxième étape de la procédure d'UUR. La souris est anesthésiée et préparée comme décrit précédemment.

Les pinces cutanées métalliques sont retirées et une laparotomie est réalisée. Les sutures péritonéales sont enlevées et le péritoine peut être ouvert délicatement à l’aide d’une pince dentée. La souris est ensuite préparée et l’uretère gauche est exposé comme décrit précédemment, en utilisant des pinces angulées.

L'uretère et le tube en plastique à paroi souple sont isolés du tissu environnant. Les sutures maintenant en place le tube à paroi souple sont coupées au scalpel, puis retirées. Le tube en plastique à paroi souple est ensuite soigneusement enlevé et un uretère dilaté devient visible.

L'uretère est fragile au niveau du point d'obstruction et peut facilement se rompre au-dessus de l'obstruction, comme cela s'est produit dans cet extrait. Toutefois, les sutures précédemment posées près de la vessie lors de la première étape de l'OUU resteront intactes, ce qui garantira qu'aucune urine ne s'écoulera de la vessie dans la cavité péritonéale. Un morceau de gaze stérile est placé sous l'uretère afin de recueillir tout sédiment urinaire qui pourrait s'écouler de l'uretère précédemment obstrué.

La longueur restante de l'uretère débloqué doit être laissée en drainage jusqu'à l'obtention d'urine claire afin de s'assurer que la lumière de l'uretère est débarrassée de tout débris. Une fois l'uretère et le bassinet rénal vidés, un long fil de soie noir tressé de calibre six est appliqué à l'extrémité de l'uretère. Ce fil sert à faciliter l'anastomose ultérieure entre l'uretère et la vessie.

L'uretère est ensuite retourné de manière à se retrouver en position antérieure par rapport à sa position initiale et à recouvrir le rein. Un seul point de suture monofilament en nano polyamide TAing est placé à l'extrémité de l'uretère. Il convient de veiller à ce que le point de suture reste dans la couche musculaire et n'entre pas dans la lumière urétérale.

Le point de suture sert à fixer l'uretère dans la vessie afin de préparer ultérieurement la vessie à l'anastomose. Un canal est créé à travers la vessie en introduisant obliquement une aiguille de calibre 21 à travers la paroi vésicale. Cette aiguille de calibre 21 est ensuite utilisée pour guider une aiguille à chas à travers la vessie. Le point de suture Nino précédemment placé sur l'uretère est alors passé par la première incision dans la vessie et ressort à travers la paroi vésicale à proximité du point d'entrée, permettant ainsi de faire passer l'uretère à l'intérieur de la vessie.

Le fil long six oh placé à l'extrémité de l'uretère est passé à travers l'œil de l'aiguille. Ensuite, l'aiguille à œil est lentement retirée à travers la vessie tout en veillant à ce que l'uretère soit également tiré à l'intérieur de la vessie. Une fois l'uretère positionné dans la vessie, les nano-sutures placées dans la paroi de l'uretère et de la vessie sont nouées afin d'ancrer solidement l'uretère en place.

Un deuxième point otax est placé. Celui-ci traverse de nouveau l'uretère, en veillant à rester dans la tunique musculaire, puis l'incision vésicale et ressort à travers la paroi vésicale. Il est ensuite noué de manière similaire.

Un troisième point de suture nano tax est également placé à l’arrière de la vessie. Ensuite, les parties dorsales de ciseaux ouverts sont utilisées pour repousser légèrement la paroi vésicale afin d’exposer la longueur de l’uretère. L’uretère est alors sectionné au-dessus du point de suture pulmonaire.

L'uretère peint se rétractera alors dans la vessie selon un angle. Quatre pointes sont utilisées pour s'assurer que l'uretère s'est complètement rétracté dans la vessie. Enfin, l'orifice de sortie dans la vessie est fermé par un point de suture monofilament en polyamide 9/0 avant la fermeture ; veillez à ce que l'uretère soit solidement ancré à l'intérieur de la vessie.

Le péritoine et la peau, comme décrit précédemment, sont refermés et les soins postopératoires sont prodigués comme décrit précédemment. Dans cette étude, tous les souris UUO ont un temps de récupération de sept jours afin de permettre au rein déobstrué de se décomprimer, bien que des points temporels plus précoces ou plus tardifs puissent être analysés. On présente ensuite des données illustrant l'aspect des reins obstrués et déobstrués ainsi que les lésions résultantes.

Cette figure illustre l'aspect des reins U-U-L-U-U-O, du bassinet rénal et des uretères par rapport au rein natif. Le rein UUO obstrué pendant sept jours apparaît hydronéphrotique et de couleur pâle. Après sept jours de désobstruction, le rein RUO s'est décomprimé, le bassinet rénal et l'uretère reprenant une taille et une couleur similaires à celles du rein natif.

Remarquez que l'uretère IUO est plus court que les uretères des reins UUO et natifs en raison de la technique de déstructuration et de l'anastomose dans la vessie. Cette figure montre des images représentatives de coupes rénales colorées à l'hématoxyline et à l'éosine provenant de reins natifs, UUO et RUUO. L'interstitium sain du rein normal est composé de sections transversales de tubules sains compacts.

Un certain nombre de tubules indiqués par les flèches noires présentent une dilatation spectaculaire au septième jour. Après la ligature unilatérale de l'uretère (QUL), en comparaison avec le tube témoin, la dilatation est nettement réduite sept jours après l'inversion de l'obstruction unilatérale de l'uretère (UUL). Le modèle murin de néphropathie obstructive présenté ici est induit par une obstruction unilatérale de l'uretère, qui peut être soit irréversible, soit réversible.

Le modèle réversible décrit ici permet la suppression de l'obstruction urétérale et l'anastomose de l'urètre à la vessie afin de rétablir complètement le flux urinaire. La décompression rénale qui en résulte permet d'étudier le remodelage tissulaire dans les expériences post-lésion. L'association de modèles de néphropathie obstructive irréversible et réversible offre aux chercheurs une vision approfondie des processus pathologiques ainsi que de la manière dont les interventions thérapeutiques modulent à la fois le développement de la lésion et le remodelage tissulaire ultérieur.