Analyse quantitative des défauts d'escalade dans un modèle drosophile de maladies neurodégénératives

L’objectif global de cette procédure est de quantifier la capacité de montée des mouches de type sauvage et des mouches mutantes pour les gènes impliqués dans la locomotion. Ceci est accompli en transférant d’abord les mouches dans un cylindre en verre gradué. La deuxième étape consiste à déplacer les mouches au fond du cylindre en tapotant légèrement le cylindre sur un rembourrage en mousse.

Ensuite, les mouches qui franchissent la ligne cible sont enregistrées à l’aide d’une caméra vidéo pendant une durée de deux minutes. La dernière étape consiste à analyser les vidéos et à tracer le nombre de mouches au-dessus de la ligne cible toutes les 10 secondes. En fin de compte, le test d’escalade est utilisé pour identifier les défauts de capacité d’escalade des lignées mutantes de mouches des fruits.

Le principal avantage de cette technique, ou des techniques existantes, comme la méthode sauvage, est qu’elle a la capacité de détecter des différences mineures dans la capacité d’escalade. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des troubles neurodégénératifs, telles que le rôle de gènes spécifiques sur la paraplégie spastique héréditaire sur les troubles progressifs de la marche. L’implication de cette technique tend vers le développement de la thérapie.

IP pour les troubles neurologiques, car il fournit un test quantitatif simple pour tester la réponse aux médicaments et les mutants pour les gènes neurodégénératifs candidats Commencez par anesthésier 20 mouches à l’aide de dioxyde de carbone et placez toutes les mouches dans un flacon de collecte de 25 millimètres sur 95 millimètres contenant de la nourriture. Rangez ensuite le flacon contenant les mouches à l’horizontale dans un plateau en carton pour éviter de les coincer dans tout liquide qui pourrait s’accumuler au fond du flacon. Placez les mouches dans un incubateur pendant au moins 21 heures sous un cycle d’obscurité légère de 12 heures le lendemain matin, mettez en place le test d’escalade en transférant les mouches du flacon dans un cylindre gradué en verre de 250 millilitres et scellez le dessus avec un film de cire pour empêcher les mouches de s’échapper.

Réalisez l’expérience dans une lumière ambiante à 22 degrés Celsius et 40 % d’humidité. Effectuez toujours des expériences au même moment de la journée pour éviter les confusions avec les cycles de sommeil. Marquez également l’emplacement du cylindre sur la paillasse pour le maintenir constant tous les jours.

Comptez le nombre de mouches mortes au fond du cylindre et dans les flacons de nourriture, notez ce nombre comme mortalité. Ensuite, installez la caméra vidéo sur un trépied. Concentrez très légèrement l’appareil photo sur la ligne de 190 millilitres du cylindre gradué de 250 millilitres.

Tapotez le cylindre cinq à 10 fois contre un tampon en mousse à cellules fermées avec suffisamment de force pour déplacer les mouches vers la surface inférieure intérieure. Utilisez ensuite l’autre main pour appuyer sur enregistrer sur l’appareil photo. Ensuite, tapotez le cylindre six fois selon un motif distinct et non rythmique pendant que la caméra enregistre.

Effectuez chaque essai pendant deux minutes à partir du moment où les mouches ont été tapotées pour la dernière fois. Enfin, jetez les mouches dans de l’éthanol à 95 %. Une fois l’essai terminé, répétez ce test d’escalade 10 fois en utilisant 20 mouches fraîches à chaque fois afin de détecter de petites différences de locomotion entre les groupes.

Lavez les cylindres dans un lave-vaisselle et séchez-les pendant la nuit pour les réutiliser une fois l’expérience terminée pour analyser les performances des mouches, commencez par regarder des vidéos de chaque enregistrement d’essai de mouche. Le nombre total de mouches qui passent la ligne cible toutes les 10 secondes. Si une mouche remonte ou tombe, notez cette mouche comme moins un et comptez la prochaine mouche à franchir la ligne cible comme le même nombre que la mouche qui est redescendue ou tombée.

Par exemple, si la 15e mouche tombe en dessous de la ligne cible, la prochaine mouche à franchir la ligne est considérée comme la 15e mouche et non la 16e. Soustrayez ensuite la mortalité du nombre total de mouches pour obtenir le nombre de mouches qui restent dans la parcelle d’essai. Le pourcentage de mouches au-dessus de la ligne cible à chaque point temporel lorsque l’on travaille avec des mutations sévères, différents degrés de défaut d’escalade peuvent être observés à l’aide de différents tests d’escalade.

Ici, le nombre de mouches âgées de huit jours qui ont grimpé au sommet d’un flacon de nourriture vide après 18 secondes a été enregistré, ne montrant aucune différence significative dans le comportement de montée entre les deux groupes. D’autre part, en utilisant le test d’escalade de ce protocole, les mouches mutantes Bastin 17 dash seven over TM three montrent un déficit de performance par rapport aux témoins. Comme de nombreux troubles locomoteurs sont progressifs, il est important d’observer l’évolution des mouches au fil du temps.

À l’âge de deux jours, il y a une différence significative dans le nombre de mouches qui montent au-dessus de la ligne cible. Par rapport aux témoins. Cette performance d’escalade continue de diminuer à mesure que les mouches mutantes vieillissent de deux à quelques jours.

Une fois maîtrisées, cette expérience et cette analyse peuvent être réalisées en trois heures. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de quantifier les défauts de locomotive dans les modèles mutants dola pour les troubles neurologiques.