Transfecter des cellules RAW264.7 avec un gène rapporteur de la luciférase

L’objectif global de cette procédure est de transfecter les constructions de rapports de luciférase dans des cellules brutes de 2, 6, 4, 0,7 sans activer les cellules. Ceci est accompli en récoltant d’abord 2 6 4 0,7 cellules brutes d’une plaque mère par pipetage doux et en ensemencement de cellules dans une plaque traitée pour culture tissulaire à 24 puits. La deuxième étape consiste à transfecter le rapport luciférase Firefly du plasmide et le plasmide luciférase du contrôle a pénétré dans les cellules.

Ces plasmides doivent être exempts d’endotoxines. Ensuite, les cellules sont stimulées avec les traitements souhaités, suivies d’une lyse cellulaire et d’un transfert dans une plaque blanche à 96 puits à fond clair. La dernière étape consiste à tester l’activité de la luciférase des lucioles, puis à exécuter l’activité de la luciférase pour calculer le rapport luciole/rapport.