Name: Génération de Recombinant Human IgG anticorps monoclonaux à partir de cellules immortalisées Classé B (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Découvrez la production d'anticorps monoclonaux IgG humains à partir de cellules B immortalisées par le virus Epstein-Barr. Cette méthode permet d'étudier les réponses immunitaires et les mécanismes auto-immuns.

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Contrat de recherche Miguel Servet (ISCIII CD14 / 00032) à (GN-G.). Bourse de l&#39;Organisation néerlandaise pour la recherche &quot;Graduate School of Neuroscience Program translationnelle&quot; scientifique (022005019) à (CH). Les subventions du Fonds Prinses Beatrix (Projet WAR08-12) et l&#39;Association Française contre les Myopathies à (PM-M.); ainsi que par un Veni Communauté de l&#39;Organisation néerlandaise pour la recherche scientifique (916.10.148) une bourse de la Fondation du cerveau des Pays-Bas (FS2008 (1) -28) et le Prinses Beatrix Fonds (Projet WAR08-12) (à ML ). Nous remercions Jozien Jaspers pour son aide dans le B-tri cellulaire par cytométrie de flux.

<ol><li>Vrolix, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+heterogeneity+of+thymic+B+cells+from+early-onset+myasthenia+gravis+patients+with+antibodies+against+the+acetylcholine+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Clonal heterogeneity of thymic B cells from early-onset myasthenia gravis patients with antibodies against the acetylcholine receptor.</a> J Autoimmun. 52, 101-112 (2014).</li>
<li>Yamashita, M., Katakura, Y., Shirahata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+generation+of+human+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the generation of human monoclonal antibody.</a> Cytotechnology. 55 (2-3), 55-60 (2007).</li>
<li>Pereira, K. M., Dellavance, A., Andrade, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenge+of+identification+of+autoantibodies+specific+to+systemic+autoimmune+rheumatic+diseases+in+high+throughput+operation%3A+Proposal+of+reliable+and+feasible+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">The challenge of identification of autoantibodies specific to systemic autoimmune rheumatic diseases in high throughput operation: Proposal of reliable and feasible strategies.</a> Clin Chim Acta. 437, 403-410 (2014).</li>
<li>Losen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+myasthenia+gravis+by+preventing+acetylcholine+receptor+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Treatment of myasthenia gravis by preventing acetylcholine receptor modulation.</a> Ann N Y Acad Sci. 1132, 174-179 (2008).</li>
<li>Smith, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+generation+of+fully+human+monoclonal+antibodies+specific+to+a+vaccinating+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Rapid generation of fully human monoclonal antibodies specific to a vaccinating antigen.</a> Nat Protoc. 4 (3), 372-384 (2009).</li>
<li>Fraussen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+making+human+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">A novel method for making human monoclonal antibodies.</a> J Autoimmun. 35 (2), 130-134 (2010).</li>
<li>Traggiai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+method+to+make+human+monoclonal+antibodies+from+memory+B+cells%3A+potent+neutralization+of+SARS+coronavirus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus.</a> Nat Med. 10 (8), 871-875 (2004).</li>
<li>Fraussen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantigen+induced+clonal+expansion+in+immortalized+B+cells+from+the+peripheral+blood+of+multiple+sclerosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Autoantigen induced clonal expansion in immortalized B cells from the peripheral blood of multiple sclerosis patients.</a> J Neuroimmunol. 261 (1-2), 98-107 (2013).</li>
<li>Yamashita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+individual+immune+responses+elicited+by+in+vitro+immunization%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Different individual immune responses elicited by in vitro immunization.</a> Cytotechnology. 40 (1-3), 161-165 (2002).</li>
<li>Hui-Yuen, J., Koganti, S., Bhaduri-McIntosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+B+cell+immortalization+for+monoclonal+antibody+production%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human B cell immortalization for monoclonal antibody production.</a> Methods Mol Biol. 1131, 183-189 (2014).</li>
<li>Tiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+monoclonal+antibodies+from+single+human+B+cells+by+single+cell+RT-PCR+and+expression+vector+cloning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of monoclonal antibodies from single human B cells by single cell RT-PCR and expression vector cloning.</a> J Immunol Methods. 329 (1-2), 112-124 (2008).</li>
<li>Lanzavecchia, A., Corti, D., Sallusto, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+monoclonal+antibodies+by+immortalization+of+memory+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Human monoclonal antibodies by immortalization of memory B cells.</a> Curr Opin Biotechnol. 18 (6), 523-528 (2007).</li>
<li>Traggiai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immortalization+of+human+B+cells%3A+analysis+of+B+cell+repertoire+and+production+of+human+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immortalization of human B cells: analysis of B cell repertoire and production of human monoclonal antibodies.</a> Methods Mol Biol. 901, 161-170 (2012).</li>
<li>Strober, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+cell+growth.+Curr+Protoc+Immunol+%2F+edited+by%5BTitle%5D)+AND+%22John+E.+Coligan+...+%5Bet+al.%5D%22%5BJournal%5D)">Monitoring cell growth. Curr Protoc Immunol / edited by.</a> John E. Coligan ... [et al.]. Appendix 3, Appendix 3A(2001).</li>
<li>Ibrahim, S. F., van den Engh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+and+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry and cell sorting.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 106, 19-39 (2007).</li>
<li>Leith, J. T., Padfield, G., Faulkner, L. E., Quinn, P., Michelson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+feeder+cells+on+the+X-ray+sensitivity+of+human+colon+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother+Oncol%22%5BJournal%5D)">Effects of feeder cells on the X-ray sensitivity of human colon cancer cells.</a> Radiother Oncol. 21 (1), 53-59 (1991).</li>
<li>Hui-Yuen, J., McAllister, S., Koganti, S., Hill, E., Bhaduri-McIntosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+Epstein-Barr+virus+growth-transformed+lymphoblastoid+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishment of Epstein-Barr virus growth-transformed lymphoblastoid cell lines.</a> J Vis Exp. (57), 3321(2011).</li>
<li>Smith, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+detection+in+automated+DNA+sequence+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fluorescence detection in automated DNA sequence analysis.</a> Nature. 321 (6071), 674-679 (1986).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu&#39;ils ont aucun intérêt financier concurrentes.

Dans ce manuscrit, toutes les étapes de la production d&#39;anticorps IgG à partir de PBMC humaines sont présentés en détail. Ce protocole comprend certains avantages par rapport aux techniques déjà publiés. L&#39;un des avantages est que l&#39;anticorps produit conserve les chaînes lourdes et légères correspondant à la paire initiale dans le clone de cellule B. L&#39;identification des anticorps IgG peut être effectué dans tout type de donneur humain, et il n&#39;y a pas besoin d&#39;exacerbation de la réponse immunita...

Le but de cet article est de décrire en détail une méthodologie pour générer et caractériser des anticorps monoclonaux IgG humaines obtenues à partir de cellules mononucléées du sang périphérique (CMSP) humaines. L&#39;intérêt d&#39;étudier des anticorps humains a augmenté dans de nombreux domaines de recherche. En particulier, de nombreux groupes de recherche sont intéressés à la pathologie causée par des auto-anticorps 1-3. Nous avons cloné et caractérisé pathogènes auto-anticorps 1. L&#39;étude d&#39;auto-anticorps peut aider à identifier leurs objectifs et d&#39;élaborer des stratégies thérapeutiques, par exemple, en utilisant des anticorps concurrents 4. En outre, l&#39;étude d&#39;anticorps humains peut aussi être d&#39;intérêt dans d&#39;autres domaines de la recherche, à savoir, pour évaluer la réponse immunitaire après la vaccination 5, pour caractériser le profil d&#39;anticorps d&#39;individus qui ont été exposés et qui sont devenus résistants aux pathogènes spécifiques 6 ou pour étudier ce qui anticorps sont enle répertoire naturel 7,12. Plusieurs techniques ont été développées pour produire des anticorps monoclonaux humains recombinants 12/08; la plupart d&#39;entre eux utilisent phage display et l&#39;immortalisation des cellules B. L&#39;utilisation de la présentation par des phages a été largement appliquée pour la découverte de nouveaux anticorps 13. Cependant, il présente un inconvénient majeur, à savoir que les paires de chaînes lourdes et légères de l&#39;immunoglobuline humaine devenue dissociés dans le processus. Production d&#39;hybridomes à cellules B humaines ou de transformation EBV remédie à cet inconvénient. Nous utilisons l&#39;infection des cellules thymiques B par l&#39;EBV en combinaison avec une stimulation cellulaire polyclonale B par l&#39;intermédiaire des récepteurs Toll-like 9 (TLR-9) 6,12. Dans cet article, nous décrivons en détail la technologie que nous utilisons pour le développement d&#39;anticorps humains IgG, avec un aperçu complet de toutes les étapes de l&#39;isolement de la CMSP vitro génération d&#39;anticorps. Cetteprotocole peut être utilisé pour l&#39;analyse de tout type de profil IgG humaine. Dans notre laboratoire, les cellules B produisant des anticorps IgG ont été séparés avec succès à partir du reste de PBMC après triage. Cinquante cellules B trié 8 peuvent ensuite être étalées dans des plaques multi-puits et immortalisées par EBV et TLR-9 activation, de l&#39;expansion clonale de cellules B individuelles. Comme cellules nourricières, les fibroblastes provenant de tissu de poumon embryonnaire humain ont été utilisées, WI38 de lignées cellulaires, ce qui facilite la visualisation des cellules B immortalisées. A partir de ces cellules B, les séquences des chaînes lourdes et légères de l&#39;immunoglobuline peuvent être obtenues par PCR, et les gènes d&#39;anticorps clones dans immunoglobuline G vecteurs d&#39;expression et produites in vitro. Grâce à cette technique, les anticorps simples avec exactement la même séquence anticorps trouvés chez le donneur peuvent être étudiés.

<table><tbody><tr><td>Histopaque-1077&nbsp ;</td>Solution de <td>Sigma-Aldrich</td><td>10771</td><td>contenant du polysaccharose et du diatrizoate de sodium</td></tr><tr><td>Trieur de cellules FACSAria II&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 plaques micro puits à fond en U&nbsp ;</td><td>Costar</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>Advanced Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 moyen&nbsp ;</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>12633-020</td><td></td></tr><tr><td>Surnageant contenant 30 % v/v d’EBV de la lignée cellulaire B95-8 &nbsp ;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1612</td><td>3,4 x 108 exemplaires/ml</td></tr><tr><td>CpG2006&nbsp ;</td><td>Invivogen</td><td>ODN 7909</td><td></td></tr><tr><td>Wi38 cellules&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>90020107</td><td></td></tr><tr><td>Interleukine-2</td><td>Roche&nbsp ;</td><td></td><td></td>10799068001</tr><tr><td>plaques ELISA</td><td>Greiner Bio-One, Microlon</td><td>655092</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure F(ab')2 Fragment de chèvre Anti-IgG humaines, Fc&gamma ; Spécifique à un fragment (non conjugué)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>109-006-008</td><td></td></tr><tr><td>Lait écrémé en poudre à 4 % (bloqueur de qualité buvard)&nbsp ;</td><td>Biorad</td><td>170-6404</td><td></td></tr><tr><td>IgG humaines&nbsp ;</td><td>Sigma</td><td>I 2511</td><td>Immunoglobuline purifiée IgG HUMAINE, 5,6 mg/ml</td></tr> F<tr><td>(ab)2 IgG Fc&gamma de chèvre ; (conjugué à la peroxydase (PO))</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>109-036-008</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur ELISA (Perkin Elmer 2030)&nbsp ;</td><td>Perkin Elmer&nbsp ;</td><td>2030-0050</td><td></td></tr><tr><td>AffiniPure Rabbit anti-Human IgM conjugué à la peroxydase, Fc5&micro ; &nbsp ; </td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>309-035-095</td><td></td></tr><tr><td>Système de synthèse directe de l’ADNc pour cellules SuperScript&nbsp ;</td><td>Invitrogen&nbsp ;</td><td>18080-200</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems (ABI) GeneAm PCR System 2700</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit d’isolement d’ARN hautement pur&nbsp ;</td><td>Roche</td><td>11828665001</td><td></td></tr><tr><td>Kit système de transcription inverse</td><td>Promega</td><td>A3500</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Taq DNA polymérase</td><td>TAKARA</td><td>R001A</td><td></td></tr><tr><td>Amorces (2 &mu ; l)</td><td>Agarose ultrapure Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>100 bp échelle</td><td>Invitrogen</td><td>15628-019</td><td></td></tr><tr><td>Quantité One 4.5.2 (Gel Doc 2000)</td><td>Biorad</td><td>170-8100</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR purification kit</td><td>QIAGEN</td><td>28106</td><td></td></tr><tr><td>BigDye Terminator v3.1 kit de séquençage de cycle&nbsp ;</td><td>Applied Biosystems</td><td>4337455</td><td></td></tr><tr><td>plaque réactionnelle de 0,1 ml (MicroAMP Optical 96 puits)</td><td>Applied Biosystems</td><td>4346906</td><td></td></tr><tr><td>Analyseur génétique ABI300&nbsp ;</td><td>Applied Biosystems</td><td>4346906</td><td></td></tr><tr><td>cellules compétentes DH5&alpha ; (E. coli)</td><td>Invitrogen</td><td>18263-012</td><td></td></tr><tr><td>pFUSEss-CHIg-hG1 (4,493 bp)</td><td>Invivogen</td><td>pfusess-hchg1</td><td></td></tr><tr><td>pFUSEss-CHIg-hG4 (4,484 bp)&nbsp ;</td><td>Invivogen</td><td>pfusess-hchg4</td><td></td></tr><tr><td>pFUSE2ss-CLIg-hk (3 875 pb)</td><td>Invivogen</td><td>pfuse2ss-hclk</td><td></td></tr><tr><td>pFUSE2ss-CLIg-hl2 (3 883 pb)&nbsp ;</td><td>Invivogen</td><td>pfuse2ss-hcll2</td><td></td></tr><tr><td>Milieu SOC</td><td>Invitrogen</td><td>15544-034</td><td></td></tr><tr><td>Milieu gélosé à base de LB complété par Zeocin (Fast-Media Zeo Agar)</td>Milieu liquide à base de Terrific Broth (TB) <td>Invivogen</td><td>fas-zn-s</td><td></td></tr><tr><td>complété par Zeocin (Fast-Media Zeo TB)</td><td>Invivogen</td><td>fas-zn-l</td><td></td></tr><tr><td>DNA Miniprep kit&nbsp ;</td><td>Omega Bio Technology</td><td>D6942-02</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop (spectrophotomètre ND1000)</td><td>Milieu</td> gélosé à base de Nanodrop <td></td><td></td></tr><tr><td>LB complété par de la blasticidine (Fast-Media Blast Agar)</td>Milieu liquide <td>à base d’Invivogen</td><td>fas-bl-s</td><td></td></tr><tr><td>Terrific Broth (TB) complété par de la blasticidine (Fast-Media Blast TB)</td><td>Invivogen</td><td>fas-bl-l</td><td></td></tr><tr><td>EcoRI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0101S</td><td>20 000 U/ml, en 10x NEBuffer EcoRI</td></tr><tr><td>NheI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0131S</td><td>10 000 U/ml, en 10x NEBuffer 2.1</td></tr><tr><td>2-Log échelle d’ADN</td><td>New England Biolabs</td><td>N3200S</td><td>0.1-10.0 kb, 1 000 &mu ; g/ml</td></tr><tr><td>XmaI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0180S</td><td>10 000 U/ml, dans 10x CutSmart Buffer&nbsp ;</td></tr><tr><td>BsiWI</td><td>New England Biolabs</td><td>R0553S</td><td>10 000 U/ml, dans 10x NEBuffer 3.1</td></tr><tr><td>AvrII</td><td>New England Biolabs</td><td>R0174S</td><td>5 000 U/ml, dans 10x CutSmart Buffer&nbsp ;</td></tr><tr><td>FastAP Phosphatase alcaline thermosensible</td><td>Thermo Scientific</td><td>EF0651</td><td>1 U/&micro ; l, dans 10x FastAP Buffer</td></tr><tr><td>DH5&alpha ; cellules compétentes&nbsp ;</td><td>Invitrogen</td><td>18263-012</td><td></td></tr><tr><td>PE souris anti-IgG humaines</td><td>BD Pharmingen</td><td>555787</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD22, PerCP-Cy5.5, Clone : HIB22</td><td>Fisher scientific</td><td>BDB563942</td><td></td></tr><tr><td>QIAprep Spin Miniprep Kit&nbsp ;</td><td>QIAGEN</td><td>27106</td><td></td></tr><tr><td>BigDye Terminator v3.1</td><td>Applied Biosystems</td><td>4337455</td><td></td></tr></tbody></table>

génération de recombinant human igg anticorps monoclonaux à partir de cellules immortalisées classé b

Generation of Recombinant Human IgG Monoclonal Antibodies from Immortalized Sorted B Cells

La découverte de nouvelles méthodes pour générer des anticorps monoclonaux humains est un domaine de recherche actif qui est important pour les sciences fondamentales et appliquées, y compris le développement d’immunothérapies. Cependant, les techniques d’identification et de production de ces anticorps ont tendance à être ardues et parfois la paire de chaînes lourde et légère des anticorps est dissociée. Ici, nous décrivons un protocole relativement simple et direct pour produire des anticorps monoclonaux recombinants humains à partir de cellules mononucléées du sang périphérique humain en utilisant l’immortalisation avec le virus d’Epstein-Barr (EBV) et l’activation du récepteur 9 de type Toll. Avec une coloration adéquate, les lymphocytes B produisant des anticorps peuvent être isolés pour une immortalisation ultérieure et une expansion clonale. Les transcrits d’anticorps produits par les clones de lymphocytes B immortalisés peuvent être amplifiés par PCR, séquencés en paires de chaînes lourdes et légères correspondantes et clonés en vecteurs d’expression d’immunoglobulines. Les anticorps obtenus avec cette technique peuvent être des outils puissants pour étudier les réponses immunitaires humaines pertinentes, y compris l’auto-immunité, et créer la base de nouvelles thérapies.

Le déclenchement de tri après coloration des cellules positives CD22 et IgG est montré à la figure 1 Dans cette image le domaine des cellules doubles positives -. Lymphocytes B producteurs d&#39;anticorps IgG - est sélectionné pour trier tous ces cellules dans un tube séparé. Dans l&#39;analyse, environ 1% du total des CMSP correspondent à cette population positive double. Le nombre de cellules triées obtenus dépendra du nombre de cellules obtenues à l&#39;article 1. Les dif...

La synthèse d’anticorps monoclonaux humains est la première étape des études visant à démêler les mécanismes physiopathologiques des réponses immunitaires médiées par les auto-anticorps. Nous avons mis au point un protocole pour générer des anticorps monoclonaux d’immunoglobuline G (IgG) humaines recombinantes à partir de lymphocytes B triés dans le sang, y compris l’isolement de lymphocytes B, le clonage d’anticorps et la synthèse in vitro.

Génération de Recombinant Human IgG anticorps monoclonaux à partir de cellules immortalisées Classé B

Finding new methods for generating human monoclonal antibodies is an active research field that is important for both basic and applied sciences, ...

L'objectif général de cette procédure est de cloner et d'exprimer des anticorps produits par des cellules B. Cela est réalisé en isolant tout d'abord des cellules B à partir d'un tissu source pertinent, comme le sang ou le thymus. La deuxième étape consiste à effectuer des faits et à sélectionner la population de cellules B positive pour la production d'IgG.Ensuite, les cellules sont immortalisées par infection avec le virus d'Epstein-Barr, associée à l'activation du récepteur de type Toll 9 par le C-P-G-O-D-N 2006, puis maintenues en culture. Les étapes finales consistent à isoler l'ARN à partir de clones qui se révèlent positifs pour la production d'IgG par Eliza, puis à générer de l'ADN complémentaire à partir des chaînes lourde et légère de l'IgG. Enfin, les séquences d'IgG peuvent être clonées dans des vecteurs d'expression mammaliens afin de produire de grandes quantités d'IgG humaine monoclonale.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes, comme la technologie d'affichage sur phage, est que l'appariement original des chaînes lourde et légère des IgG n'est pas perdu. Cette méthode permet de répondre à des questions essentielles dans le domaine

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