Name: Chlorure ferrique induite souris thrombose type sur lartère carotide et Mesentery navire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Découvrez une méthode d'induction de thrombose chez la souris par chlorure ferrique sur l'artère carotide et les vaisseaux mésentériques. La microscopie intravitale permet d'observer la formation du thrombus en temps réel et d'évaluer l'efficacité des médicaments antithrombotiques.

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Les auteurs tiennent à remercier le soutien technique de Joy Yao et le Dr Karen Alt, ainsi que le financement du NHMRC et NHF.

Toutes les expériences impliquant des animaux ont été approuvés par le Comité de l&#39;éducation Cité animale éthique (E / 1534/2015 / B) de la recherche médicale et Alfred. Toutes les manipulations chirurgicales ont été réalisées sous anesthésie générale et les animaux ne ressentent de la douleur à tout moment. Toutes les expériences décrites sont non-recouvrement. 1. Préparation <ol><li> Couper des bandes minces de papier filtre (1 mm x 2 mm). </li><li> Fraîchement préparer deux solutions de chlorure ferrique de 4% (p / v) et 6% (p / v) dilué dans de l&#39;eau désionisée. Préparer la solution de rhodamine 6G 0,3% en PBS, filtré à travers de 0,22 um. </li><li> Coupez un petit morceau (5 mm x 1 cm) à partir du plastique blanc de la seringue wrapper. </li></ol> 2. Formation Mesentery Artériole thrombus Observé par Microscopie intravitale <ol><li> Peser un 10-12 semaines C57BL / 6 souris de type sauvage et anesthésier en conséquence avec un mélange de kétamine (100 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg) si une injection intrapéritonéale. Surveiller la profondeur de l&#39;anesthésie par la réponse aux pieds, la queue et / ou pincement de la peau, la réactivité de pincement de la cornée et palpébrale, et l&#39;absence de mouvement des moustaches. Si nécessaire, injecter une seconde dose de kétamine (50 mg / kg) pour maintenir l&#39;anesthésie de l&#39;animal. Appliquer vétérinaire pommade sur les yeux pour prévenir la sécheresse tandis que sous anesthésie. Placez la souris dans une petite boîte de Pétri placée sur un coussin chauffant réglé à 37 ° C. NOTE: Bien que l&#39;injection IP peut entraîner des douleurs pour les animaux, la durée de ce malaise sera minime (moins de 3 secondes). La douleur et l&#39;inconfort associés aux injections seront minimisés grâce à l&#39;utilisation de personnel expérimenté et compétent et la taille de l&#39;aiguille appropriée (25 G). Après toutes les procédures, tous les euthanasier les animaux en utilisant une surdose de kétamine et de xylazine suivie par dislocation cervicale. </li><li> Effectuer une incision médiane abdominale d&#39;environ 3 cm dans la peau et découpez soigneusement le péritoine. </li><li> Placez la souris sur le côté de l&#39;animalplat ri, extérioriser doucement ses intestins et écartez avec précaution le mésentère avec 2 bourgeons de coton pour apporter un récipient approprié à la surface de la boîte de Pétri. Séchez correctement avec un essuie-glace délicate. Remarque: Afin de limiter le mouvement des vaisseaux mésentériques, la papaverine peut être utilisé pour inhiber le péristaltisme intestinal. </li><li> Faire tremper la queue de la souris dans l&#39;eau chaude pour dilater les vaisseaux et injecter 30 pi de la rhodamine 6G (0,3%) dans la veine de la queue de la souris avec une seringue de 29 G pour marquer les leucocytes et les plaquettes. </li><li> Placez la boîte de Pétri sous un microscope inversé et se concentrer sur l&#39;artériole choisie en utilisant le canal de champ lumineux. </li><li> Faire tremper une bande de papier filtre avec 6% (p / v) de fer (III) de chlorure et d&#39;appliquer le papier filtre sur l&#39;artériole avec deux pinces; le premier à tenir le papier filtre, le second d&#39;appuyer doucement sur la zone d&#39;intérêt. Observer la formation de thrombus dans la 10 première secondes après le dépôt du papier filtre. NOTE: Il est tout à fait commà blesser la microvascularisation entourée et la précision de la déposition du papier filtre et la pression en douceur est donc important de limiter ce problème. </li><li> Observer la formation de thrombus par microscopie à fluorescence (canal TRITC: excitation pic 557 nm, le pic d&#39;émission 576 nm), à travers le papier filtre. Respecter les leucocytes et les plaquettes circulantes qui ont pris la rhodamine 6G et leur agrégation dans le thrombus est donc facile à identifier. </li><li> Prenez le papier filtre au bout de 1 min d&#39;exposition au fer (III) et le chlorure de continuer à suivre la formation du thrombus. Lavez le récipient avec du PBS. </li><li> Observer et enregistrer la formation dynamique du thrombus mis en évidence avec l&#39;étiquetage des plaquettes et leucocytes avec la rhodamine 6G. Capturer les images et mesurer la taille du thrombus. Les images présentées ici ont été obtenues avec un microscope intravitale inversé, si un objectif 4X, dans le canal de fluorescence TRITC. </li><li> FA près toutes les procédures, l&#39;euthanasie de l&#39;animal en utilisant une surdose de kétamine et de xylazine, suivie par dislocation cervicale. </li></ol> 3. l&#39;artère carotide formation de thrombus évaluée par Circulation sanguine Mesure de vitesse <ol><li> Peser un homme âgé de 10 à 12 semaines C57BL / 6 et souris anesthésier en conséquence avec un mélange de kétamine (100 mg / kg) et de xylazine (10 mg / kg), même si l&#39;injection intrapéritonéale. Appliquer vétérinaire pommade sur les yeux pour prévenir la sécheresse tandis que sous anesthésie. </li><li> Fixer la souris sous un microscope opératoire en utilisant du ruban adhésif sur les jambes, sur un coussin chauffant réglé à 37 ° C. </li><li> Faire un petit oreiller sur un essuie-glace et du ruban adhésif sous la tête de la souris pour élever la tête légèrement. Utilisez une boucle de fil avec des pinces pour tirer le museau (utilisez dents supérieures). Cela permettra d&#39;exposer la région de l&#39;artère carotide pour un accès facile. </li><li> Effectuer un petit 5 mm incision profonde de la peau directement en dessous de la mâchoire, jusqu&#39;au sternum. </li><li> Disséquer la fascia et isoler un fragment soit de l&#39;artère carotide commune gauche ou à droite au dessus de la bifurcation. </li><li> Introduire délicatement pincettes en-entre l&#39;artère et le nerf de les séparer. Ne pas déranger le nerf courir près de l&#39;artère et éviter de toucher trop de l&#39;artère carotide en soit cause des dommages au navire. Isoler une section d&#39;un moins 5 mm de l&#39;artère. </li><li> Sécher la zone de l&#39;artère correctement avec essuie-glaces afin d&#39;éviter que tout liquide interfère avec le FeCl 3. </li><li> Mettez le petit morceau de plastique blanc dans la partie isolée de la carotide commune de sorte que le FeCl3 ne pas tremper dans les tissus environnants. A cet effet, utiliser une deuxième pince pour amener la pièce à la première puis, lentement, faites glisser le papier plastique sous l&#39;artère. </li><li> Faire tremper une feuille de papier-filtre avec 4% (p / v) ou 6% (p / v) de chlorure ferrique et le placer autour de l&#39;artère. </li><li> Après 3 min d&#39;exposition, enlever le papier filtre, rincer avec du PBS et sécher la zone wessuie vec. </li><li> Placer la sonde de débit Doppler autour de la cuve à la zone blessée et commencer à enregistrer les changements dans le flux. Dans la carotide commune de souris adultes en bonne santé, l&#39;écoulement est généralement autour de 1 ml / min. Attention! le contact de la sonde avec du chlorure ferrique endommager la sonde de façon tout contact doit être évitée. Les données présentées ici ont été obtenues avec un appareil de mesure de débit Transonic System Inc., TS420 Module périvasculaire équipé d&#39;une sonde de débit Doppler Nano 0,5 PBS. REMARQUE: La concentration du chlorure ferrique peut modifier la cinétique de formation d&#39;un thrombus résultant en différents temps d&#39;occlusion. Ainsi, une exposition à 6% (p / v) de chlorure ferrique donne une occlusion rapide que l&#39;exposition à 4% (p / v) de chlorure ferrique. </li><li> Après toutes les procédures, euthanasier tous les animaux en utilisant une surdose de kétamine et de xylazine suivie par dislocation cervicale et nettoyez soigneusement la sonde Doppler. </li></ol>

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le chlorure induite modèle de thrombose ferrique est un excellent outil de recherche. Comme le montre cette étude, il est extrêmement facile à mettre en œuvre et lorsqu&#39;il est utilisé en combinaison avec la microscopie intravitale ou Doppler débitmètre, il fournit une bonne surveillance en temps réel de la formation de thrombus. Réglage de la durée d&#39;exposition et la concentration de FeCl 3, il offre également la possibilité de produire soit thrombus occlusif ou non occlusif. <p class="jove_conten...

L&#39;étude des mécanismes impliqués dans le développement de la thrombose et de l&#39;évaluation de l&#39;efficacité des médicaments anti-thrombotiques nécessite bien établi des modèles animaux expérimentaux. Modèles animales importantes ont été les premiers à être utilisés car ils fournissent de grands navires plus semblable à l&#39;homme que les rongeurs 1. Cependant, le coût élevé, les grandes installations nécessaires et la difficulté à les manipuler génétiquement sont des inconvénients majeurs à leur utilisation et de grands animaux sont maintenant limités à des études précliniques fin une fois les tests préliminaires sur des rongeurs ont donné des résultats concluants 2. Avec une large disponibilité de souches transgéniques et knock-out et leur petite taille qui minimise la quantité de médicaments antithrombotiques requises pour les essais in vivo, les souris sont principalement utilisés pour la recherche sur la thrombose. Par conséquent, plusieurs modèles de troubles thrombotiques ont été développées chez des souris 3. Beaucoup de modèles de thrombose établies perturbent les intimune couche de la paroi du vaisseau, suivie par l&#39;exposition de la matrice extracellulaire sous endotheliales à l&#39;écoulement de sang induire la formation de caillots sanguins 4. Le thrombus peut résulter de l&#39;exposition du collagène qui déclenche l&#39;activation des plaquettes et / ou de l&#39;exposition du facteur tissulaire qui active la cascade de coagulation 5. Plusieurs techniques sont ensuite utilisées pour atteindre la blessure de cuve initial. Pierangeli et al. A développé un modèle de rupture mécanique avec un outil de microchirurgie sur la veine fémorale 6. Kikushi et al. Décrit un modèle qui consiste en l&#39;administration d&#39;un composé réactif de photo (rose Bengale) qui accumule dans la bicouche lipidique des cellules endothéliales, suivie par l&#39;excitation déterminée de la paroi du vaisseau d&#39;intérêt avec une lumière verte (540 nm) 7. La blessure peut également être induite par un court-éclairage à haute intensité de laser d&#39;impulsion 8. Une autre technique d&#39;abord mis en place sur l&#39;artère carotide de ratsconsiste en l&#39;application topique de chlorure ferrique (FeCl 3) 9. Dans ce cas, les résultats récipient de dénudation de radicaux libres générés par FeCl3 qui provoque la peroxydation lipidique et la destruction des 10 cellules endotheliales. La blessure induit l&#39;expression de plusieurs molécules d&#39;adhésion de déclenchement adhérence et l&#39;agrégation plaquettaire ainsi que le recrutement des leucocytes. Il a été démontré que les leucocytes, en particulier les neutrophiles jouent un rôle crucial dans l&#39;activation de la cascade de coagulation du sang conduisant à la thrombose 11. Cette méthode est bien adaptée à reproduire la cascade de coagulation; les enquêteurs doivent garder à l&#39;esprit que, dans ce modèle de souris, la thrombose est généralement induite dans vaisseaux sains alors que la thrombose chez les humains se produit principalement en ex malade. vaisseaux athérosclérotiques. Comme ce modèle est très simple à mettre en oeuvre et est également efficace chez les souris, il est maintenant le mode de thrombose principalement utilisél pour petit animal in vivo. En outre, cette technique offre la possibilité d&#39;induire la formation de thrombus dans une variété de vaisseaux. vaisseaux cibles peuvent être des artères ou des veines de grand diamètre (carotide, fémorale, la veine cave) ou de petit diamètre (mésentère, cremaster) 12-14. Plus récemment, il a également été utilisé sur l&#39;artère cérébrale moyenne proximale de développer un modèle d&#39;AVC 15. La formation de thrombose peut être directement observé par microscopie intravitale après marquage fluorescent de plaquettes et de leucocytes ou surveillé en mesurant la diminution du flux sanguin avec une sonde de température ou un 12,16,17 de la sonde Doppler. Plusieurs paramètres tels que le temps d&#39;occlusion, temps de formation de thrombus ou de la taille d&#39;un thrombus peuvent ensuite être étudiés. Les différences physiologiques entre les navires d&#39;une enquête suite à des variations importantes dans le thrombus obtenu. Par conséquent, les chercheurs sélectionner habituellement le vaisseau cible en fonction des paramètres qui les intéressent la pour mesurerre et / ou le réglage ils veulent enquêter sur la maladie. Typiquement, le modèle sur l&#39;artère carotide est plus pertinente pour la recherche sur l&#39;athérothrombose liée à l&#39;infarctus du myocarde ou accident vasculaire cérébral alors que les études sur la veine cave sont plus pertinentes pour la recherche sur la thrombose veineuse profonde. L&#39;accessibilité des différents vaisseaux détermine également la méthode utilisée pour mesurer la croissance de thrombus. Par exemple, les vaisseaux mésentériques sont faciles d&#39;accès qui rend ce modèle bien adapté pour l&#39;observation microscopique intravitale et l&#39;étude de la dynamique de la formation de thrombus. L&#39;artère carotide est moins accessible mais plus grand débit permettant des mesures de sang et de fournir un excellent modèle pour étudier la thrombose occlusive. Le modèle de thrombose induite de chlorure ferrique a fourni d&#39;énormes progrès dans la compréhension de cette pathologie. Il a été utilisé dans de nombreuses études portant sur ​​le rôle du facteur de von Willebrand à la formation de thrombose 18,19. Combiné avec les adaptations génétiquestechniques de fication, il a permis l&#39;identification de plusieurs gènes spécifiques impliqués dans les troubles thrombotiques. Lamrani et al. par exemple ont montré qu&#39;un knock-in du gène JAK2 V617F est associée à une formation accélérée de caillot instable 20. Zhang et al. Ont étudié l&#39;implication physiologique du récepteur P2Y12 plaquettaire et démontré que des souris transgéniques surexprimant spécifiquement ce récepteur dans les plaquettes seulement, ont montré une formation de thrombus plus rapide et plus stable dans l&#39;artère mésentérique blessé avec FeCl 3 21. Le rôle crucial de l&#39;activateur de type tissulaire du plasminogène (tPA) et l&#39;activateur du plasminogène de type urokinase (uPA) dans le processus de dégradation de la fibrine a également été étudié dans ce procédé 22. En outre, ce modèle fournit également un moyen simple et précis de tester les capacités fibrinolytiques de nombreux nouveaux médicaments in vivo. Par exemple, Wang et al. Ont utilisé ce modèle pour ee validation préclinique d&#39;un nouvel activateur du plasminogène recombinant dirigé contre les plaquettes activées 23. Cette méthode a également permis la validation de protéines thérapeutiques isolés de la salive des tiques, chauves-souris vampires, et les moustiques ou à partir du venin des serpents avec identification spécifique de la cible 24-27. Ces exemples montrent la souplesse du modèle de chlorure ferrique. Dans cet article, nous nous concentrons sur deux méthodes et étudions chlorure ferrique thrombose induite sur deux différents type de navire; vaisseau mésentérique et l&#39;artère carotide.

<table><tbody><tr><td>Papier de chromatographie Whatman</td><td>GE Healthcare</td><td>3030917</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de fer (III) 40 % (p/v)</td><td>VWR</td><td>24212.298</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine 6G</td><td>Sigma</td><td>R4127</td><td></td></tr><tr><td>Microscope inversé&nbsp ;</td><td>Olympus</td><td>IX81</td><td></td></tr><tr><td>Appareil photo numérique noir et blanc&nbsp ;</td><td>Olympus</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td>Débitmètre Doppler</td><td>Transonic</td><td>TS420</td><td></td></tr><tr><td>Sonde de débit nano-doppler</td><td>Transonic</td><td>0.5 PBS</td><td></td></tr><tr><td>Kétamine</td><td>Hospira&nbsp ;</td><td>0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (Rampun)</td><td>Bayer</td><td>75313&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>Seringue à insuline (29 G)</td><td>BD</td><td>Applicateurs</td> à embout en coton 326103 <td></td>ultra-fin</tr><tr><td></td><td>BSN medical</td><td>211827A</td><td></td></tr><tr><td>Sutures Dynek dysilk</td><td>Dynek Pty Ltd</td><td>CS30100</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de phosphate salin de Dulbecco (PBS)</td><td>Gibco life technologies</td><td>21600-069</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Kirchner</td><td>T60</td><td></td></tr></tbody></table>

chlorure ferrique induite souris thrombose type sur l&#39;artère carotide et mesentery navire

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

La thrombose sévère et ses conséquences ischémiques telles que l’infarctus du myocarde, l’embolie pulmonaire et l’accident vasculaire cérébral sont des problèmes de santé majeurs dans le monde. La lésion au chlorure ferrique est maintenant une technique bien établie pour induire rapidement et précisément la formation de thrombus dans les veines exposées ou les artères de petit et grand diamètre. Ce modèle a joué un rôle clé dans l’étude de la physiopathologie de la thrombose, dans la découverte et la validation de nouveaux médicaments antithrombotiques et dans la compréhension du mécanisme d’action de ces nouveaux agents. Ici, la mise en œuvre de cette technique sur un vaisseau mésentérique et une artère carotide chez la souris est présentée. La méthode décrit comment marquer les leucocytes et les plaquettes circulants avec un colorant fluorescent et observer, par microscopie intravitale sur le mésentère exposé, leur accumulation au niveau de la paroi vasculaire lésée qui conduit à la formation d’un thrombus. Sur l’artère carotide, l’occlusion causée par la formation du caillot est mesurée en surveillant le flux sanguin à l’aide d’une sonde Doppler.

La fluorescence intravitale observation au microscope du mésentère révélera l&#39;accumulation de Rhodamine 6G plaquettes et les leucocytes marqués le long de la paroi du vaisseau lésé par FeCl 3. La formation progressive d&#39;un thrombus partielle est surveillée dans un récipient de mésentère 200 um (figure 1). Un thrombus apparaît lentement et clairement identifiée après la première minute d&#39;exposition à FeCl 3 (figure 1, t = 60 s). 40 secondes après le retr...

Le modèle de thrombose induite par FeCl3 chez la souris est décrit ici. Une méthode de surveillance de la croissance d’un thrombus par observation par microscopie intravitale sur un vaisseau mésentérique et par mesure du débit sanguin dans l’artère carotide est présentée.

Chlorure ferrique induite souris thrombose type sur l&#39;artère carotide et Mesentery navire

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

L'objectif général de cette procédure est de surveiller la formation d'une thrombose induite dans un vaisseau sanguin exposé chez la souris. Cette opération s'effectue tout d'abord en exposant le vaisseau d'intérêt. Ensuite, un petit morceau de papier filtre imprégné de chlorure ferrique est placé sur le vaisseau afin d'induire un thrombus au niveau du vaisseau mésentérique.L'agrégation des cellules formant le thrombus est surveillée par microscopie en tube sur l'artère carotide. Les changements du débit sanguin induits par le thrombus sont mesurés à l'aide d'un débitmètre Doppler. L'utilisation du chlorure pour induire une thrombose dans l'artère CED des rats a été établie pour la première fois en 1990 par le professeur Coz et ses collègues.Depuis lors, cette méthode a été adaptée aux souris et utilisée pour étudier de nombreux vaisseaux différents. Elle est désormais le modèle de thrombose le plus couramment utilisé dans notre domaine de recherche et a permis de répondre à des questions clés, telles que la paroi du facteur vulnérable et l'application du récepteur plaquettaire P deux Y 12 dans la thromboformation. Avant de commencer la procédure, découpez des bandes de papier filtre de un par deux millimètres et un petit morceau de plastique blanc de trois par cinq millimètres provenant d’un emballage de seringue.Ensuite, après avoir confirmé l'absence de réaction à la pincée, appliquer une pommade vétérinaire sur les yeux de chaque animal. Puis, afin d'induire un thrombus artériel mésentérique, placer la souris dans une petite boîte de Pétri sur un coussin chauffant à 37 degrés Celsius et ouvrir l'abdomen à l'aide d'une incision de trois centimètres, suivie d'une incision soigneuse du péritoine. Positionner la souris sur le côté de la boîte de Pétri et extérioriser délicatement les intestins.Ensuite, à l’aide de deux cotons-tiges, étaler délicatement le mésentère afin de faire apparaître un vaisseau approprié à la surface de la boîte et sécher soigneusement le tissu avec un essuie-tout délicat. Puis, dilater les vaisseaux de la queue par une immersion dans de l’eau chaude, suivie d’une injection intraveineuse de 30 microlitres de Domine six G fraîchement préparé pour marquer les leucocytes et les plaquettes circulants. Ensuite, placer la boîte de Pétri sous un microscope inversé et utiliser le canal champ clair pour desserrer l’artère choisie.Imprégnez maintenant une bandelette de papier filtre avec une solution fraîchement préparée de chlorure ferrique à 6 %, puis utilisez une paire de pinces pour saisir le papier et l’appliquer délicatement uniquement sur l’artère d’intérêt. Observez la formation du thrombus par microscopie à fluorescence inversée intravitale à travers le papier filtre. Dans les 10 premières secondes suivant l’application, l’agrégation des leucocytes et des plaquettes marqués au domine six G en circulation permettra une identification facile du thrombus.Après une minute d'exposition, retirez le papier filtre. Ensuite, tout en surveillant la formation du thrombus, rincez le vaisseau avec du PBS et enregistrez la formation dynamique du thrombus mise en évidence par les cellules sanguines marquées. Des images fixes du thrombus peuvent également être capturées afin de faciliter la mesure de l'occlusion vasculaire au fil du temps.Pour évaluer la formation du thrombus de l'artère carotide, fixez les pattes d'une souris anesthésiée avec du ruban adhésif sur un tapis chauffant réglé à 37 degrés Celsius, positionné sous un microscope opératoire. Ensuite, fixez avec du ruban adhésif un petit coussin façonné à partir d'un essuie-tout sous la tête de l'animal, et utilisez une boucle de fil avec des pinces pour tirer le museau vers le bas par les dents supérieures. Lorsque la région de l'artère carotide est exposée, pratiquez une petite incision dans la peau juste en dessous de la mâchoire jusqu'au sternum.Ensuite, disséquer le fascia et isoler un fragment de l'artère carotide commune gauche ou droite au-dessus de la bifurcation. Puis, introduire délicatement une pince entre l'artère et le nerf afin de les séparer, en prenant soin de ne pas endommager le nerf. Utiliser ensuite une paire de pinces pour saisir le petit morceau de plastique blanc et une autre paire pour le faire glisser lentement sous la section isolée du vaisseau, de manière à ce que le chlorure de fer ne s'imbibe pas dans les tissus environnants.Asséchez soigneusement l'artère avec des essuie-tout. Imbibez ensuite une bande de papier filtre de chlorure ferrique à 4 ou 6 %, puis placez la bande autour de l'artère. Après trois minutes, retirez le papier filtre, rincez le vaisseau avec du PBS et séchez le tissu avec des essuie-tout.Ensuite, placez une sonde de flux Doppler autour du vaisseau au niveau de la zone lésée et enregistrez les modifications du débit. Ici, la formation progressive d'un thrombus partiel a été suivie dans un vaisseau mésentérique de 200 micromètres par microscopie fluorescente intravitale. Dans cette expérience, le thrombus est devenu clairement identifiable après la première minute d'exposition au chlorure ferrique.Quarante secondes après le retrait du papier filtre, la thrombose a rapidement progressé, le thrombus complet étant finalement observé sur la paroi de toute la section du vaisseau. Comme le montrent ces données, un débit sanguin constant global d'environ 1,1 millilitre par minute est typique dans une artère carotide non lésée. Après trois minutes d'exposition au chlorure ferrique à 4 %.Dans cette expérience, un thrombus occlusif a été obtenu avec un temps d'occlusion de 13 minutes et 30 secondes, avec une exposition à 6 % de chlorure ferrique. Le temps d'occlusion a diminué de quatre minutes complètes.L'observation par microscopie intravitale fournit un moyen simple et précis d'évaluer in vivo les capacités lytiques de nombreux nouveaux médicaments, grâce à la visualisation de la dégradation du thrombus. La surveillance du flux sanguin dans l'artère caté a constitué un outil utile pour étudier l'efficacité des médicaments antithrombotiques et pour évaluer leur capacité à prévenir ou à retarder l'occlusion.

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JoVE Journal

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Médecine

Nous rapportons une procédure raffinée du chlorure ferrique (FeCl 3) Les modèles de thrombose induites sur la carotide et l' artère mésentérique ainsi que la veine, caractérisé efficacement en utilisant la microscopie intravitale pour surveiller le temps de formation de thrombus occlusif.

Ferriques murin Thrombose modèles induits par Chlorure

Nous présentons ici les modifications nécessaires pour un bien caractérisé et couramment utilisé petit induite par le chlorure ferrique (FeCl3) artère carotide blessure modèle animal pour une utilisation dans un modèle de grandes lésions vasculaires chez les animaux. Le modèle résultant peut être utilisé pour une évaluation du procès préclinique d’interventions pharmacologiques et mécaniques, prophylactiques et thrombolytiques.

Thrombose de l’artère carotide Canine induite par le chlorure ferrique : Un grand modèle Animal de lésion vasculaire

Le présent protocole décrit comment utiliser une lésion médiée par FeCl3 pour induire une thrombose artérielle, et comment collecter et préparer des échantillons de lésions artérielles à différents stades de la thrombose pour l’analyse en microscopie électronique.

Thrombose artérielle induite par le chlorure ferrique et prélèvement d’échantillons pour analyse en microscopie électronique 3D

Cette étude présente un protocole pour établir un modèle de rat reproductible et mini-invasif de la thrombose du sinus sagittal supérieur induite par le chlorure ferrique, en utilisant une méthode de suture de soie combinée à l’imagerie laser par contraste de taches et à une échographie haute résolution pour l’évaluation.

Établissement d’une thrombose du sinus sagittal supérieur modifiée induite par le chlorure ferrique

Ceci décrit une ligature partielle carotide, ce qui provoque des conditions d'écoulement perturbé et développement de l'athérosclérose ultérieure (dans deux semaines) avec intraplaque néo-vascularisation (en quatre semaines) chez la souris l'artère carotide commune. Nous décrivons également une nouvelle méthode d'isolement d'ARN à partir de l'intima carotidienne, fournissant ARN haute pureté endothéliales.

Un modèle de Disturbed flux athérosclérose induite chez la souris artère carotide par ligature partielle et une méthode simple d&#39;isolement d&#39;ARN de l&#39;endothélium carotidienne

La souris modèle complet stase de la veine cave inférieure thromboses rendements quantités mesurables de tissu paroi veineuse et thrombose. Il s'est avéré utile pour évaluer les interactions entre la paroi de la veine et le thrombus occlusif et à évaluer la progression de l'aiguë de l'inflammation chronique.

Modèle de souris complète stase de la veine cave inférieure thrombose

Nous démontrons dans la vidéo un procédé pour produire une occlusion de l'artère cérébrale moyenne chez des souris adultes en utilisant un monofilament intraluminale. Nous montrons aussi comment évaluer l'étendue de l'infarctus cérébral par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (TTC) coloration.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Un modèle d'implantation d'une endoprothèse dans l'artère carotide souris est décrite. Comparé à d'autres méthodes similaires, cette procédure est très rapide, simple et accessible, offrant la possibilité d'étudier d'une manière pratique, la réaction de la paroi vasculaire à différents stents à élution médicamenteuse et les mécanismes moléculaires de la resténose.

Un modèle murin d&#39;implantation d&#39;une endoprothèse dans l&#39;artère carotide pour l&#39;étude de la resténose

Nous décrivons un procédé pour créer un modèle fiable de l'hypertension veineuse cérébrale chez la souris adulte. Ce modèle a été largement décrits et testés chez le rat. Ce nouvel homologue de la souris ouvre la possibilité d'utiliser des animaux génétiques modifiés et élargit ainsi les applications du modèle.

Adulte souris veineuse Modèle d&#39;hypertension: l&#39;artère carotide commune à externe Veine jugulaire anastomose.

Cette méthode a été développée dans le but de fournir une solution stable de médicament via l'artère carotide, pour évaluer la pharmacocinétique de nouveaux médicaments dans des modèles murins.

Infusions de l&#39;artère carotide pour pharmacocinétiques et pharmacodynamiques Analyse des taxanes chez la souris

Découvrez une méthode d'induction de thrombose chez la souris par chlorure ferrique sur l'artère carotide et les vaisseaux mésentériques. La microscopie intravitale permet d'observer la formation du thrombus en temps réel et d'évaluer l'efficacité des médicaments antithrombotiques.

Chlorure ferrique induite souris thrombose type sur l'artère carotide et Mesentery navire

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