Name: Heterotopic col de lutérus chez la souris Transplantation cardiaque (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Apprenez la transplantation cardiaque cervicale chez la souris pour étudier les mécanismes de reperfusion ischémique et le rejet de greffe. Cette technique par manchon simplifie l'anastomose vasculaire et améliore la reproductibilité des résultats expérimentaux.

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M.-A. Deutsch est soutenu par Dr. Rusche Forschungsprojekt (2014), Deutsche Stiftung für Herzforschung et Deutsche Gesellschaft für Thorax- Herz- und Gefäßchirurgie. M. Krane est soutenu par Deutsche Stiftung für Herzforschung (F/37/11), Deutsches Zentrum für Herz Kreislauf Forschung (DZHK B 13-050A ; DZHK B 14-013SE) et Deutsche Forschungsgemeinschaft (KR3770/7-1 ; KR3770/9-1)

Toutes les expériences ont été approuvés par l&#39;Allemand Coeur Centre de Munich et le gouvernement de Bavière, Allemagne (Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13). Les animaux ont été logés dans un établissement exempt d&#39;organismes pathogènes spécifiques et ont reçu des soins humaine en conformité avec les «Principes de laboratoire Animal Care&quot; formulées par la Société nationale pour la recherche médicale et le «Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire&quot; fournies par la National Academy des sciences et publié par les National Institutes of Health (NIH Publication no. 86-23, révisé 1985). REMARQUE: Un ensemble complet d&#39;instruments de microchirurgie stériles, y compris les deux pinces courbes et dilatateurs des vaisseaux, est nécessaire pour la procédure (Figure 2a). Antibioprophylaxie péri-opératoires ne sont pas systématiquement nécessaire mais peut être indiqué chez les animaux immunodéprimés. Les animaux ont été sacrifiés en utilisant l&#39;inhalation isoflurane terminal. Préparation des donateurs et des greffons récolte &lt;ol&gt; <li> Anesthésier l&#39;animal par voie intrapéritonéale (ip) injection de midazolam (5,0 mg / kg), de médétomidine (0,5 mg / kg) et de fentanyl (0,05 mg / kg de poids corporel). Placez la souris dans une position couchée sur le champ opératoire et de confirmer la tolérance chirurgicale par le réflexe de retrait de la pédale. </li><li> Désinfectez la peau trois fois avec de la chlorhexidine et effectuer une incision abdominale médiane. Rentrer les intestins avec gaze humide vers la gauche pour exposer la veine cave inférieure. </li><li> Injecter 50 UI d&#39;héparine dilué dans 0,4 ml de solution saline à travers la veine cave inférieure pour l&#39;anticoagulation. Inciser la cuve 1 min après héparinisation. </li><li> Ouvrez le diaphragme et effectuer une thoracotomie bilatérale pour exposer le coeur. La paroi thoracique antérieure se reflète supérieurement et maintenu en place avec une pince. </li><li> Retirez le thymus et carrément disséquer le tissu conjonctif entre l&#39;aorte et l&#39;artère pulmonaire. Inciser le droit veine cave supérieure. </li><li> Piquer l&#39;aorte ascendante mobilisées au niveau de latronc brachiocéphalique avec une aiguille 30 G monté sur une seringue de 5 ml et perfuser lentement le coeur retrogradually sans pression excessive avec 3 ml de 4 ° C à froid solution cardioplégique. Éviter l&#39;entrée d&#39;air dans la circulation coronaire. Déposez une solution saline glacée sur la greffe pour améliorer encore un arrêt cardiaque. </li><li> Transect l&#39;aorte proximale à l&#39;origine du tronc brachiocéphalique. </li><li> Ligaturer les veines caves inférieure et supérieure à la fois à proximité du cœur avec 8-0 soie et sectionner les distale pour les ligatures. </li><li> Disséquer gratuitement le tronc pulmonaire distale que possible. Ligaturer les artères pulmonaires à proximité de la bifurcation avec 8-0 soie et sectionner les distale. </li><li> Ligaturer les veines pulmonaires tous ensemble avec une seule ligature 8-0 de soie et transect eux. </li><li> Retirer le cœur du donneur et de le stocker dans une solution cardioplégique glacée jusqu&#39;à l&#39;implantation. </li></ol> 2. Bénéficiaire Préparation <ol><li> Préparerles poignets pour anastomoses en coupant le tube de polyimide avec un scalpel n ° 11 ou une paire de ciseaux au microscope. La coiffe est constituée d&#39;un corps cylindrique et un prolongement (1/3 de la circonférence) pour la mise en place de la pince vasculaire, chacune d&#39;une longueur de 1 mm (figure 2b). </li><li> Anesthésier l&#39;animal et confirmer la tolérance chirurgical comme décrit ci-dessus. Injecter 0,25 ml solution saline chaude voie sous-cutanée (sc) pour le remplacement des liquides. </li><li> Enlever les poils de la région cervicale droite en utilisant un rasoir électrique et placer l&#39;animal dans une position couchée sur un bloc chaud. Fixez les pieds avec des brins de bande tout en évitant surexploiter les membres antérieurs, car cela peut compromettre la respiration. Couvrir les yeux à l&#39;aide pommade ophtalmique pour prévenir la sécheresse. Désinfecter le site chirurgical à trois reprises avec de la chlorhexidine. </li><li> Faire une incision de la peau transversale de l&#39;angle mandibulaire droit à la veine jugulaire. </li><li> Carrément mobiliser la posteveine jugulaire ernal. Cauterize branches latérales avec une pince bipolaire et transect eux. </li><li> Divisez la veine jugulaire externe entre ligatures au niveau de la confluence avec la veine de la glande sous-maxillaire. </li><li> Tirer la veine jugulaire externe par l&#39;intermédiaire du manchon et de manière proximale occlure le vaisseau en plaçant une pince vasculaire sur le prolongement de la manchette. Retirer la ligature et irriguer la lumière du vaisseau avec une solution saline héparinée 01h10. </li><li> Evert la paroi du vaisseau sur la manchette et le fixer avec un préréglage circonférentielle 8-0 ligature de soie. </li><li> Retirer la partie superficielle du muscle sterno. </li><li> Mobiliser le droit artère carotide commune et sectionner le navire entre ligatures en dessous de la bifurcation carotidienne. </li><li> Tirer la carotide par l&#39;intermédiaire du manchon et de manière proximale occlure le vaisseau en plaçant une pince Yasargil sur le prolongement de la manchette. Retirer la ligature et irriguer la lumière du vaisseau avec une solution saline héparinée 01h10. </li><li> Doucement Dilate la lumière artérielle avec un dilatateur des vaisseaux, Evert la paroi du vaisseau sur la manchette et le fixer avec un préréglage circonférentielle 8-0 ligature de soie. </li><li> Pour gagner assez d&#39;espace pour implantation du greffon, enlever le lobe droit de la glande sous-maxillaire. </li><li> Gardez le champ opératoire humide jusqu&#39;à l&#39;implantation. </li></ol> 3. implantation du greffon <ol><li> Placez la greffe chez le receveur région cervicale à l&#39;envers avec l&#39;aorte orienté médiane et l&#39;artère pulmonaire latéralement. </li><li> Tirez l&#39;aorte de la greffe sur le brassard avec l&#39;artère carotide et sécuriser l&#39;anastomose avec un périphérique 8-0 ligature de soie. </li><li> Inciser le tronc pulmonaire sur sa face antérieure et le tirer sur le brassard avec la veine jugulaire externe. Encore une fois sécuriser l&#39;anastomose avec un périphérique 8-0 ligature de soie. </li><li> Retirer la pince sur la veine jugulaire externe, à la suite par le desserrage de l&#39;artère carotide. Les cœurs se remplit immédiatement avec du sang. Pour améliorer reperfusion baisse de 37 ° C une solution saline chaude sur la greffe. Normalement, le coeur se développe rythme sinusal en une minute. Retirez l&#39;extension du brassard sur le site veineux. </li><li> Veiller à la position correcte de la greffe, anastomoses doit être exempte de tensions et de navires sans torsion. Ne pas les navires cautérisées de la peau, car cela pourrait nuire à la cicatrisation des plaies. Habituellement, l&#39;hémorragie arrête spontanément. Fermez la peau avec un seul 8-0 suture continue. </li></ol> 4. Soins postopératoires <ol><li> Injecter 0,25 ml chaude sc de solution saline pour le remplacement des liquides. </li><li> Pour contrer les stupéfiants injectent naloxone (1,2 mg / kg), le flumazénil (0,5 mg / kg) et atipamezol (2,5 mg / kg de poids corporel) sc laissé les animaux sur le pavé chaud jusqu&#39;à ce qu&#39;il ait repris conscience suffisante pour maintenir décubitus sternal. Observez l&#39;animal pendant au moins une heure supplémentaire pour enregistrer tout comportement anormal. Ne retournez pas un animal qui a subi une intervention chirurgicale à la compagnie d&#39;autres animaux jusqu&#39;à leur entière Recoverouge. </li><li> Fournir l&#39;analgésie préventive de la buprénorphine (0,05 mg / kg sc trois fois par jour) ou une analgésie alternatif selon un protocole institutionnel local pour une durée minimale de 72 heures après l&#39;intervention. </li><li> Le chirurgien et un vétérinaire devraient voir des animaux régulièrement. En cas de perte de poids&gt; 15%, de l&#39;apathie, de l&#39;enflure ou chirurgicales animaux d&#39;infection de côté sont euthanasiés en utilisant l&#39;inhalation isoflurane terminal. </li></ol>

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5, 733-735 (1973).</li>
<li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).</li>
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<li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> Am J Pathol. 153, 1301-1310 (1998).</li>
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<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20, 1123-1128 (2001).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Nous avons réalisé plus de 200 greffes cardiaques avec un taux de réussite de plus de 90% dans divers paramètres expérimentaux. Avec la technique décrite ici, la procédure complète peut être effectuée dans les 60 minutes par un chirurgien expérimenté. En préparant les vaisseaux cervicaux avant le prélèvement d&#39;organes, le temps total greffon ischémie peut être limité à 20 min. Le temps d&#39;implantation (temps d&#39;ischémie chaude) est significativement plus courte en utilisant la technique de la coiffe par rappor...

Le modèle de la transplantation cardiaque est fréquemment utilisé pour enquêter sur I / R-blessure, le rejet d&#39;allogreffe, la vasculopathie post-transplantation et l&#39;efficacité des agents immunomodulateurs. Des modèles de souris combinent de nombreux avantages comme le immunologique connu et origines génétiques, la disponibilité de nombreuses souches consanguines et transgéniques expérimentales et les coûts relativement faibles. En 1973, une technique de abdominale transplantation cardiaque chez la souris a été décrite par Corry et al 1. Dans ce modèle greffons sont revascularisés par anastomoses de l&#39;aorte ascendante à l&#39;aorte abdominale du destinataire et de l&#39;artère pulmonaire principale à la veine cave inférieure end-to-côté. En 1991, une technique de suture du col pour une transplantation cardiaque chez la souris a été décrit par Chen et al deux. Dans ce modèle, une perfusion de l&#39;artère coronaire rétrograde est établie par anastomose de l&#39;artère carotide du bénéficiaire de l&#39;aorte ascendante du grarrière. Les drains veineux via le sinus coronaire de sang dans l&#39;oreillette droite, le ventricule droit et est éjecté par l&#39;artère pulmonaire dans le receveur veine jugulaire externe (Figure 1). Par rapport à la greffe implantation abdominale le modèle col de l&#39;utérus est moins invasive et l&#39;emplacement superficiel de la greffe permet une accessibilité très facile pour les examens de suivi supplémentaires (par exemple, la palpation, l&#39;échocardiographie, la microscopie à fluorescence intravitale) 3,4. Malgré les améliorations techniques 5,6, une utilisation plus généralisée de ce modèle a été limitée en raison de difficultés techniques pour réaliser des anastomoses suturées de petits navires avec une incidence élevée de fuite de l&#39;anastomose et la thrombose. En 1991, Matsuura et al. introduit la technique de manchon dans lequel la paroi du vaisseau est éversée sur un cylindre synthétique, ce qui facilite grandement le modèle de transplantation cardiaque du col 7. La technique était fucomplémen adopté pour différents modèles de transplantation expérimentales dont 8 rénale, pancréatique 9, branche 10, 11,12 hépatique, du poumon et de la transplantation 13,14 vasculaire 15. Par rapport à la technique de suture de la durée requise pour anastomoses et, par conséquent, le temps d&#39;ischémie chaude est plus courte et il ya des complications vasculaires beaucoup moins en utilisant la technique de la coiffe 16. En outre, il permet aux chirurgiens avec peu de formation en microchirurgie pour effectuer l&#39;opération avec un taux de réussite élevé. Un inconvénient de la technique du brassard est la ligature préalable de l&#39;artère carotide commune, ce qui peut modifier la perfusion cérébrale. Dans ce papier, nous présentons une vidéo technique de brassard améliorée et simplifiée pour cervicale transplantation cardiaque chez la souris.

<table><tbody><tr><td>Pince JFC-7.2</td><td>S& T</td><td>P-00036</td><td>Embout incurvé 0,20 mm</td></tr><tr><td>Dilatateur de cuve D-5a</td><td>S& T</td><td>S-00124</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux Adventita</td><td>S& T</td><td>S-00102</td><td></td></tr><tr><td>Pince vasculaire B-1V</td><td>S& T</td><td>S-00396</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil Clip</td><td>Peter Lazic</td><td>65,097</td><td>3,5 mm de longueur</td></tr><tr><td>Pince bipolaire</td><td>Micromed</td><td>148-100-011</td><td>pointe 0,25 mm</td></tr><tr><td>Tubes en polyimide</td><td>River Tech Medical</td><td></td><td>19-24 calibre</td></tr><tr><td>8.0 ligatures en soie</td><td>Catgut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK solution</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

heterotopic col de l&#39;utérus chez la souris transplantation cardiaque

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

La transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris est un outil précieux dans la transplantation et la recherche cardiovasculaire. La technique du brassard simplifie considérablement ce modèle en évitant les anastomoses de suture difficiles des petits vaisseaux, réduisant ainsi le temps d’ischémie à chaud. Par rapport à l’implantation d’une greffe abdominale, le modèle cervical est moins invasif et le greffon implanté est facilement accessible pour des examens de suivi ultérieurs. Les anastomoses sont réalisées en tirant l’aorte ascendante du greffon sur le ballonnet avec l’artère carotide commune du receveur et en tirant l’artère pulmonaire principale sur le ballonnet avec la veine jugulaire externe. Le choix de la taille de brassard appropriée et la mobilisation complète des vaisseaux sont importants pour une revascularisation réussie. Les lésions d’ischémie-reperfusion (I/R) peuvent être minimisées en perfusant le greffon avec une solution cardioplégique et par hypothermie. Dans cet article, nous fournissons les détails techniques d’une technique de brassard simplifiée et améliorée, qui devrait permettre aux chirurgiens ayant des compétences microchirurgicales de base d’effectuer l’intervention avec un taux de réussite élevé.

Notre équipe pourrait effectuer avec succès la technique décrite après environ 20 chirurgies de formation. La partie la plus difficile est de retourner la paroi de la cuve de l&#39;artère carotide sur le brassard, parce qu&#39;il retourne facilement en arrière et de multiples tentatives peut conduire à la déchirure de la paroi. Après la période de formation, le temps opératoire total moyen était de 60 ± 8 min. Environ 20 minutes sont nécessaires pour la récolte des donateurs, 25 min pour la préparation des vaisseaux cer...

La technique du brassard raccourcit et facilite le modèle de transplantation cardiaque cervicale hétérotopique chez la souris en évitant les anastomoses de suture techniquement difficiles des petits vaisseaux. Les détails techniques présentés dans cet article vidéo devraient permettre aux chercheurs d’établir ce modèle dans leurs laboratoires.

Heterotopic col de l&#39;utérus chez la souris Transplantation cardiaque

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Ce vidéo présente un modèle expérimental de transplantation cardiaque cervicale afin d'étudier les lésions par ischémie-reperfusion chez des souris syngéniques, ou le rejet de greffe chez des animaux allogéniques. La première étape de la procédure consiste à prélever le cœur de la souris donneuse. Le greffon est conservé dans une solution cardioplégique sur glace pendant un maximum de quatre heures, selon les conditions expérimentales.L'étape suivante consiste à préparer les vaisseaux cervicaux droits de la souris receveuse, en dirigeant la paroi vasculaire de la veine jugulaire externe sectionnée et de l'artère carotide vers un manchon et en la fixant à l'aide d'un ligature. La dernière étape de la procédure est l'implantation du greffon dans la souris receveuse. L'aorte ascendante du greffon est tirée par-dessus le manchon avec l'artère carotide, et le tronc pulmonaire est anastomosé à la veine jugulaire externe.En fin de compte, les pinces sont retirées et la reperfusion commence. Normalement, le cœur développe un rythme sinusal en moins d'une minute. Par rapport à la greffe abdominale implantée lors d'une transplantation cardiaque cervicale, la méthode est moins invasive et les animaux se rétablissent plus rapidement.En outre, en utilisant des cals pour l'anastomose, la suture des petits vaisseaux peut être totalement évitée, ce qui rend ce modèle techniquement plus réalisable. Après avoir pré-sédé le souris avec de l'isoflurane, anesthésiez-la par injection intrapéritonéale d'anesthésique, puis confirmez la tolérance chirurgicale en vérifiant le réflexe de retrait podal. Ensuite, fixez le souris en position supine sur le champ opératoire.Ensuite, désinfectez la peau trois fois avec de la chlorhexidine. Réalisez maintenant une incision abdominale médiane et déplacez les intestins vers la gauche à l’aide d’un champ de gaze humide afin d’exposer la veine cave inférieure. Puis, injectez dans la VCI 50 unités d’héparine diluées dans 0,4 millilitre de sérum physiologique afin de prévenir la coagulation.Une minute plus tard, incisez le vaisseau, ouvrez le diaphragme et pratiquez une thoracotomie bilatérale pour exposer le cœur, rabattez la paroi thoracique antérieure vers le haut et maintenez-la en place à l’aide d’une pince. Ensuite, retirez le thymus et disséquez par émoussage le tissu conjonctif entre l’aorte et le tronc pulmonaire, puis incisez la veine azygos supérieure droite. Utilisez ensuite une aiguille de calibre 30 pour percer l’aorte descendante mobilisée au niveau du tronc brachio-céphalique et perfusez lentement le cœur de manière rétrograde à l’aide de trois millilitres de solution cardioplégique glacée.Ne pas appliquer une pression excessive. Ne pas injecter d'air. Pour renforcer davantage l'arrêt cardiaque, laissez tomber du sérum physiologique glacé sur la greffe.Ensuite, sectionner l'aorte en amont de l'origine du tronc brachio-céphalique et ligaturer la veine cave inférieure et les deux veines caves supérieures près du cœur. À l'aide d'un fil de soie ATO, après avoir mis en place les ligatures, sectionner chaque vaisseau en aval des ligatures. Ensuite, dégager le tronc pulmonaire aussi en aval que possible et ligaturer les artères pulmonaires près de la bifurcation.Avec du fil de soie ose, sectionner également ces vaisseaux au niveau distal par rapport aux ligatures. Les derniers vaisseaux à ligaturer sont les veines pulmonaires, qui peuvent être ligaturées ensemble à l’aide d’une seule ligature en fil de soie ose. Ensuite, sectionner ces veines et retirer le cœur du donneur.Conserver le cœur dans une solution cardioplégique glacée jusqu'à ce qu'il soit nécessaire de commencer sous le microscope. Préparer les manchons pour l'anastomose en coupant le tube en polyamide avec des ciseaux ou une lame de bistouri n°11. Après avoir préparé le receveur pour l'intervention comme pour le donneur, administrer une injection sous-cutanée de 0,25 millilitre de solution saline tiède pour le remplacement hydrique.Ensuite, rasez les poils de la région cervicale droite et placez la souris en position dorsale sur un tapis chauffant, fixez les pattes avec du ruban adhésif, mais n'étirez pas excessivement les membres antérieurs, ce qui pourrait compromettre la respiration. Appliquez ensuite une pommade ophtalmique et désinfectez le site chirurgical trois fois à l’aide de plusieurs frictions au chlorhexidine. Commencez maintenant la chirurgie en pratiquant une incision cutanée transversale allant de l’angle mandibulaire droit jusqu’au sillon jugulaire.Ensuite, mobiliser brutalement la veine jugulaire externe et cautériser les branches latérales à l’aide d’une pince bipolaire, puis les sectionner. Sectionner la veine jugulaire externe entre les ligatures au niveau de la confluence avec la veine provenant de la glande sous-maxillaire. Une fois isolée, tirer la veine jugulaire externe à travers la gaine.Ensuite, obstruez le vaisseau proximalement en plaçant un clamp vasculaire sur l'extension du manchon. Retirez maintenant le ligature et irriguez la lumière du vaisseau avec une à 10 solutions salines héparinées. Terminez la fixation au manchon en rabattant la paroi du vaisseau dessus et en fixant le vaisseau à l’aide d’un ligature en soie ose préréglé de manière circulaire.Retirez maintenant la partie superficielle du muscle sterno-cléido-mastoïdien. Ensuite, mobilisez l'artère carotide commune droite. Puis, en dessous de la bifurcation carotidienne, placez deux ligatures et sectionnez le vaisseau entre celles-ci.Maintenant, tirez l'artère carotide à travers la gaine et placez un clamp en aluminium sur l'extension proximale à la gaine. Pour oblitérer le vaisseau, retirez le ligature et irriguez la lumière du vaisseau avec une solution saline héparinisée à 10. Ensuite, dilatez délicatement la lumière à l’aide d’un dilatateur de vaisseau.Et comme précédemment, fixez complètement le vaisseau au manchon. La partie la plus délicate de la procédure consiste à retourner le volume du vaisseau de l'artère prélevée par-dessus le manchon, car celui-ci a tendance à facilement se replier en arrière. Il est donc important de mobiliser complètement l'artère afin de choisir la taille appropriée de manchon et de dilater délicatement la lumière du vaisseau avant le retournement.En prévision de la greffe, retirer le lobe droit de la glande sous-maxillaire et maintenir le champ opératoire humide. Placer la greffe dans la région cervicale du receveur à l’envers, l’aorte étant orientée vers le milieu et l’artère pulmonaire vers l’extérieur. Ensuite, tirer l’aorte de la greffe par-dessus la manchette avec l’artère carotide et fixer l’anastomose à l’aide d’un ligature en soie 8-0 circulaire en forme de huit.Ensuite, inciser le tronc pulmonaire sur son aspect antérieur et le tirer par-dessus le manchon avec la veine jugulaire externe. Utiliser une autre ligature pour fixer cette anastomose. Retirer maintenant le clamp de la veine jugulaire externe, puis celui de l'artère carotide ; le cœur doit rapidement se remplir de sang afin de favoriser la perfusion. Appliquer une goutte à goutte de sérum physiologique réchauffé sur la greffe.Normalement, le cœur reprendra un rythme sinusal en moins d'une minute. Retirez maintenant le raccord de la canule au site veineux et examinez le greffon. L'anastomose doit être sans tension et les vaisseaux ne doivent présenter aucune torsion.Ne pas cautériser les vaisseaux de la peau. Cela pourrait nuire à la cicatrisation de la plaie ; l'hémorragie doit donc cesser spontanément. Fermer la peau à l’aide d’un point d’incision continu unique. Après l’intervention, injecter à l’animal un quart de millilitre de solution saline tiède par voie sous-cutanée.Ensuite, injecter un cocktail de drogues par voie sous-cutanée afin d'antagoniser les effets des narcotiques. Laisser l'animal se rétablir sur un coussin chauffant jusqu'à ce qu'il puisse maintenir une position couchée sterno-abdominale. Observer l'animal pendant au moins une heure avant de considérer qu'il est complètement rétabli.Une fois remis, la souris doit être logée seule pendant au moins trois jours. Administrez une analgésie pendant un minimum de 72 heures. Pesez également l'animal quotidiennement afin de détecter une perte de poids sévère et surveillez l'état de santé général de l'animal.À l'aide du protocole décrit, des souris syngéniques Black six ont été transplantées pour analyse histopathologique. Les greffons prélevés ont été colorés à l'hématéine-éosine et au rouge Sirius. Des coupes d'animaux non transplantés ont été utilisées comme témoins, comparées aux contrôles.Ischémie prolongée. La reperfusion a entraîné une réaction inflammatoire intense accompagnée d’un œdème tissulaire. Hyperhémie avec infiltration de leucocytes, indiquée par des astérisques, et occlusion microvasculaire.Une coloration rouge intense a révélé un dépôt marqué de collagène interstitiel, indiqué par les flèches. De tels dépôts de collagène n'ont pas été observés chez les témoins. Ce modèle de transplantation constitue un outil intéressant en recherche cardiovasculaire et en transplantation.Il est particulièrement utile d'étudier la lésion myocardique par ischémie-reperfusion avant de commencer les expériences. Assurez-vous que vous êtes en mesure d'exécuter cette technique avec des résultats opératoires reproductibles, car cela pourrait sinon constituer un biais majeur ; l'anastomose, et donc la durée d'ischémie chaude, doit être limitée à moins de 20 minutes.

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