Une méthode informatisée reproductible pour la quantification de la densité capillaire utilisant périunguéale capillaroscopie

L’objectif global de cette procédure est de quantifier le nombre de capillaires par millimètre carré dans la zone de la peau directement sous la cuticule de l’ongle. Pour ce faire, il faut d’abord prendre une photo monochrome du lit de l’ongle sous la cuticule. La deuxième étape consiste à importer l’image dans un programme d’imagerie informatique.

Ensuite, les images sont manipulées Afin de mieux visualiser les capillaires, la dernière étape consiste à identifier et à compter tous les capillaires à l’intérieur d’un millimètre carré. En fin de compte, la manipulation d’images est utilisée pour montrer la quantité et la morphologie des capillaires d’un individu. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine cardiovasculaire, telles que l’impact de l’hypertension, du diabète et d’autres maladies sur la microcirculation.

À l’aide d’un appareil photo numérique monochrome, obtenez des images capillaires comme décrit précédemment. Ensuite, prenez des images d’étalonnage d’un ridicule avec des marquages millimétriques en utilisant la même caméra et les mêmes conditions d’imagerie de grossissement que celles utilisées pour obtenir les images capillaires. Importez l’image du ridicule dans le programme d’imagerie informatique et mesurez le nombre de pixels sur une ligne d’un millimètre sur la photo de la règle.

Notez ce nombre et calculez le nombre de pixels qui se trouvent dans une région d’un millimètre sur un millimètre. Ensuite, ouvrez l’une des images capillaires, assombrissez les capillaires et éclaircissez l’arrière-plan en ajustant l’image à l’aide d’un histogramme du meilleur ajustement. Utilisez ensuite la commande create ROI dans le menu déroulant pour créer une région d’intérêt d’un millimètre sur un millimètre en haut de l’écran.

Faites glisser et positionnez la région d’intérêt à l’endroit où les boucles capillaires sont les plus claires. Assurez-vous que la région d’intérêt est placée de manière à ce que l’apex des boucles capillaires soit situé tout en haut de la région. La clé de la reproductibilité et de la standardisation de cette étape du protocole est le placement correct de la zone d’intérêt d’un millimètre carré

Une bonne règle de base pour maintenir la standardisation est de placer la boîte au sommet ou à l’extrémité des boucles capillaires de l’image. Une fois correctement positionné, cliquez sur le retour d’intérêt, puis cliquez sur recadrer dans le menu déroulant qui apparaît, puis aplatissez l’image afin que tous les ajustements futurs de l’image soient appliqués uniformément à l’image. Ensuite, augmentez le contraste de l’image à 75 afin que les capillaires soient visualisés au maximum.

De plus, déponcez le pointillé de l’image pour lisser les bords des capillaires. Finalisez le contraste de l’image en ajustant l’histogramme sur le modèle le mieux ajusté afin que les capillaires soient noirs et que l’arrière-plan soit blanc. Sur chaque image, sélectionnez manuellement une partie d’un capillaire bien défini à l’aide de la caractéristique de l’objet cible à reconnaître comme objets à compter par le programme.

Sélectionnez ensuite une petite partie de l’arrière-plan en utilisant la fonction d’arrière-plan comme référence aux zones qui doivent être ignorées par l’algorithme de comptage. Réglez le diamètre minimum des objets comptés à cinq pixels afin d’éviter de compter le bruit de fond comme des capillaires. Utilisez ensuite la fonction de comptage pour compter instantanément tous les capillaires de l’image pour chaque individu.

Comptez la moyenne de trois à quatre images afin d’obtenir une évaluation plus fiable. Pour gagner du temps, créez une macro pour effectuer automatiquement une séquence spécifique de processus sur une ou plusieurs images en sélectionnant d’abord Enregistrer la macro pour nommer la macro en fonction des étapes et des processus effectués et décrits dans cette vidéo. Effectuez ensuite les étapes de manipulation d’image pendant l’enregistrement de la macro.

Lorsque vous utilisez la macro sur de futures images, cliquez simplement sur exécuter la macro et le programme appliquera automatiquement les améliorations enregistrées aux images souhaitées. La seule étape qui nécessite une saisie de l’utilisateur consiste à choisir l’endroit où recadrer l’image. Une image traitée de manière optimale peut être comptée en 30 secondes et distingue clairement les capillaires de l’arrière-plan ainsi que les capillaires individuels les uns des autres.

L’image finale améliorée est présentée ici. Le décompte total déterminé pour cette image était de 54 capillaires par millimètre carré Une fois maîtrisé. Cette technique peut être utilisée pour quantifier et manipuler 12 images en 20 minutes.