Name: La différenciation de la SH-SY5Y neuroblastome humain Cell Line (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Apprenez à différencier les cellules SH-SY5Y en neurones fonctionnels pour la neurobiologie et la neurovirologie. Cette méthode fiable produit des cultures homogènes de neurones humains différenciés pour diverses applications in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Nous sommes reconnaissants de la contribution de Yolanda Tafuri à l’optimisation des conditions de différenciation de SH-SY5Y, et du soutien de la Dre Lynn Enquist, dans le laboratoire de laquelle ce travail a été initié. Y. Tafuri a contribué aux images présentées à la figure 3. Ce travail a été soutenu par le NIH-NIAID Virus Pathogens Resource (ViPR), le Bioinformatics Resource Center (MLS et L. Enquist) et le K22 AI095384 (MLS).

1. Considérations générales <ol><li> Voir la Table des Matières / Équipement pour la liste des réactifs nécessaires. Effectuez toutes les étapes dans des conditions aseptiques strictes. </li><li> Utiliser du sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur (hiFBS) pour toutes les préparations de médias qui incluent FBS. Pour chauffer inactiver, chauffer 50 ml aliquote de FBS à 56 ° C pendant 30 min, en inversant toutes les 10 min (voir également le tableau 1). Remarque: Lors de FBS est utilisé sans inactivation par la chaleur, le phénotype de type epithelial progresse plus rapidement dans des cultures de cellules SH-SY5Y. </li><li> Avant utilisation, laisser le matériau chaleureux et équilibrent dans un incubateur à établir un bon équilibre du pH avant chaque étape. Par exemple, 50 ml de milieu prend environ une heure pour équilibrer complètement (pH 7, 37 ° C, 5% CO 2). Remarque: Ce protocole utilise un mode opératoire de séparation en deux étapes qui nécessite SH-SY5Y différenciées partiellement être trypsinisées et re-plaquées. Ceci est un stressprocessus pour ces cellules exceptionnellement fragiles. Par conséquent, il est important de faire incuber les cellules à la trypsine pour un minimum de temps. Cela permettra à l&#39;envol préférentiel de neurones, en laissant les cellules épithéliales comme encore attachés à l&#39;antenne. </li><li> Effectuer une trituration de cellules différenciées lentement avec une pipette en matière plastique de 10 ml avec la pointe contre le fond du tube conique contenant les cellules. Effectuer trituration à une vitesse lente, de haut en bas pas plus de cinq fois. </li></ol> 2. Passage des cultures de maintenance SH-SY5Y <ol><li> cultures de maintenance cassés lorsque les cellules ont atteint 70-80% de confluence, et ne pas dépasser 10 à 15 passages. Cultures doivent généralement être passées tous les 3-5 jours (en supposant cultures ne sont pas dilués plus de 5 fois pendant le fendage). </li><li> Pour les cellules de passage à partir d&#39;un flacon T-75, aspirer hors médias, puis rincer avec environ 10 ml de PBS 1X. Remarque: Nous ne recommandons pas diviser le SH-SY5Y cultures de maintenance fucomplémen taires de 1: 5 au cours des passages, car cela peut provoquer la mort des cellules en raison du faible confluence. </li><li> Aspirer PBS, puis ajouter 2,5 ml de 0,05% de trypsine-EDTA (1x). </li><li> Incuber dans un incubateur 2-3 min et doucement basculer pour libérer les cellules de la surface du ballon. </li><li> Ajouter 10 ml de croissance de base des médias (voir le tableau 2) et triturer 1-2 fois. </li><li> Isoler pendant 2 min à 1000 xg, les médias aspirer, puis remettre le culot dans 5 ml de base de croissance des médias. </li><li> Diluer les cellules de 1: 3 à 1: 5 dans un volume total de 20 ml pour le placage normal dans flacon T-75, ou de compter et de la plaque de différenciation (section 5). </li></ol> 3. congélation de cellules SH-SY5Y <ol><li> Congeler premiers passages des cellules de neuroblastome SH-SY5Y de croissance multimédia de base supplémenté avec 5% (v / v) de DMSO. </li><li> Initialement, geler aliquotes à -80 ° C pendant 24 heures, puis transfert à l&#39;azote liquide pour le stockage à long terme. Remarque: Pour référence, une confluence (75-85%) flacon T-75 donnera cinqAliquotes de 1 ml de cellules SH-SY5Y de gel. Chacun de ces aliquotes devraient contenir de 2-5 millions de cellules totales. </li></ol> 4. Les cellules Décongeler et Culture indifférencié SH-SY5Y neuroblastome <ol><li> Préparer la croissance multimédia de base. </li><li> Décongeler rapidement les cellules congelées dans un bain d&#39;eau à 37 C ° à (environ 2 minutes). </li><li> Resuspendre les cellules dans 9 ml de base de croissance des médias dans un tube conique de 15 ml et centrifuger ensuite pendant 2 min à 1000 x g. </li><li> Aspirer le surnageant tout en faisant attention à ne pas perturber le culot cellulaire et les cellules doucement remettre en suspension dans 10 ml de base de croissance des médias. </li><li> Cellules de plaque sur un flacon T-25 ou un plat de 60 mm 2. </li><li> Le lendemain, remplacer médias pour éliminer les cellules mortes. </li></ol> 5. Jour 0: étalement des cellules de différenciation <ol><li> Voir Figure 1 pour le calendrier de la différenciation. </li><li> Rincer cellules indifférenciées avec 1x PBS, aspirer, puis trypsiniser avec 1-2 ml réchauffé1x 0,05% de trypsine-EDTA. </li><li> Lorsque les cellules sont la trypsine, incuber pendant environ 3 min dans un incubateur. </li><li> Étancher la trypsine en ajoutant 10 ml de croissance avec les médias de base, rincer les parois du ballon ou un plat, et triturer doucement 1-3 fois. Transférer le contenu dans un tube conique de 15 ml. </li><li> Centrifuger 2 min à 1000 x g, et aspirer les médias, tout en faisant attention de ne pas perturber le culot. </li><li> Remettre le culot dans 5 ml de base de croissance des médias et triturer 1-3 fois. </li><li> Compter les cellules à l&#39;aide d&#39;un hémocytomètre, puis diluer en utilisant croissance multimédia de base de 50.000 cellules / ml. </li><li> Plate 2 ml de cellules par 35 mm 2 plat pour un total de 100.000 cellules par boîte et placer de nouveau dans l&#39;incubateur. </li></ol> 6. Jour 1: Changer le média (différenciation des médias n ° 1) <ol><li> Aliquotes de 50 ml de différenciation média N ° 1 (voir le tableau 2) et incuber dans un bain-marie à 37 °. </li><li> Lorsque le média est réchauffé, le laisser se stabiliser dans un incubateur (37° C, 5% CO 2) pendant au moins une heure d&#39;établir un bon équilibre du pH avant de l&#39;utiliser. </li><li> Ajouter de l&#39;acide rétinoïque (AR) (voir tableau 1) pour réchauffer et médiatique équilibrée immédiatement avant ajout de médias aux plats. Remarque: L&#39;acide rétinoïque est sensible à la lumière et doit être stocké dans des bouteilles foncées à 4 ° C </li><li> aspirer délicatement les anciens médias et le jeter. </li><li> Ajouter 2 ml différenciation médias n ° 1 à la PR par 35 mm 2 plat et revenir à l&#39;incubateur. </li></ol> 7. Jour 3: Changer le média (différenciation des médias n ° 1) <ol><li> Répétez la section 6 (étapes 1-5) </li></ol> 8. Jour 5: Changer le média (différenciation des médias n ° 1) <ol><li> Répétez la section 6 (étapes 1-5) </li></ol> 9. Jour 7: diviser les cellules 1: 1 <ol><li> Ajouter à RA réchauffé et équilibré différenciation médias n ° 1 juste avant ajout de médias aux plats. </li><li> aspirer délicatement les anciens médias et le jeter. </li><li> Ajouter 200 ulréchauffé 0,05% 1x trypsine EDTA par 35 mm 2 plat et chaud dans l&#39;incubateur d&#39;environ 2-3 min ou jusqu&#39;à ce que les cellules sont visiblement soulevé de la plaque, comme observé au microscope. </li><li> Étancher la trypsine en ajoutant 2 ml différenciation médias n ° 1 à la PR par 35 mm 2 plat et utiliser les médias pour rincer restant cellules neuronales de la plaque. Puis transférer le contenu dans un tube conique de 50 ml. Remarque: Au cours de trypsinisation étapes, ne trypsiniser trop de plats à la fois. Cela permet d&#39;assurer des cultures de neurones ne sont pas mises en incubation dans de la trypsine pendant trop longtemps, ce qui peut être cytotoxique. </li><li> Mélanger le contenu d&#39;un maximum de 10 petits plats dans les 50 ml tube conique et triturer doucement lentement de haut en bas pas plus de cinq fois avec une pipette de 10 ml en plastique. </li><li> Aliquote de 2 ml de suspension cellulaire en frais 35 mm 2 plats et revenir à l&#39;incubateur. </li></ol> 10. Jour 8: Changer le média (différenciation des médias n ° 2) <ol><li> Ajouter RA (voir &lt;strong&gt; Tableau 1) réchauffé et les médias équilibrée immédiatement avant ajout de médias aux plats. </li><li> aspirer délicatement les anciens médias et le jeter. </li><li> Lentement, ajouter 2 mL différenciation médias n ° 2 (voir le tableau 2) avec RA par 35 mm 2 plat et retour à l&#39;incubateur. Ne laissez pas les neurones d&#39;être exposés à l&#39;air pendant une longue période de temps, car ils peuvent sécher rapidement. </li></ol> 11. Jour 9: Préparer la matrice extracellulaire (ECM) boîtes recouvertes <ol><li> Décongeler un flacon de solution ECM sur la glace et dilué 1: 100 dans DMEM froid. </li><li> Distribuer 2 ml de mélange dans chaque 35 mm 2 plat et d&#39;assurer la totalité de la base de la boîte est recouverte. </li><li> Placer dans un incubateur (37 ° C, 5% CO 2) pendant 1 heure ou pendant une nuit. </li><li> mélange Aspirer et laisser sécher à l&#39;air pendant environ 1 h dans une hotte. Stocker à température ambiante pendant jusqu&#39;à 2 mois. </li></ol> 12. Jour 10: Les cellules de transfert surECM plaques revêtues 1: 1 <ol><li> Ajouter RA (voir le tableau 1) réchauffé et les médias équilibrée immédiatement avant ajout de médias aux plats. </li><li> aspirer délicatement les médias et le jeter. </li><li> Ajouter 200 pi de trypsine chauffées à chaque 35 mm 2 plat et laisser incuber à la température ambiante pendant environ 1-2 minutes, ou jusqu&#39;à ce que les neurones sont visiblement levée de l&#39;antenne comme on l&#39;observe sous un microscope. Remarque: Exécutez cette étape de traitement à la trypsine à la température ambiante de manière à ne pas trop incuber neurones avec de la trypsine et de causer des dommages. Neurones libèrent des plaques beaucoup plus rapidement que les cellules épithéliales de type à ce stade. </li><li> Étancher la trypsine en ajoutant 2 ml différenciation médias n ° 2 par 35 mm 2 plat et d&#39;utiliser les médias pour rincer restant cellules neuronales de la plaque. Puis transférer le contenu dans un tube conique de 50 ml. </li><li> Mélanger le contenu d&#39;un maximum de 10 petits plats dans les 50 ml tube conique et triturer doucement lentement de haut en bas pas plus de cinq fois avecune pipette en matière plastique de 10 ml. </li><li> Distribuer 2 ml de suspension cellulaire en 35 mm 2 plats ECM-enduit et revenir à l&#39;incubateur. </li></ol> 13. Jour 11: Changer le média (différenciation des médias n ° 3) <ol><li> Ajouter RA (voir le tableau 1) réchauffé et les médias équilibrée immédiatement avant ajout de médias aux plats. </li><li> aspirer délicatement les anciens médias et le jeter. </li><li> Lentement, ajouter 2 ml différenciation médias n ° 3 (voir le tableau 2) avec RA par 35 mm 2 plat et revenir à l&#39;incubateur. Ne pas permettre neurones d&#39;être exposés à l&#39;air pendant une période de temps prolongée. </li></ol> 14. Jour 14: Changer le média (différenciation des médias n ° 3) <ol><li> Répétez l&#39;article 13 (étapes 1-3) </li></ol> 15. Jour 17: Dernier médias Change (différenciation des médias n ° 3) <ol><li> Répétez l&#39;article 13 (étapes 1-3) </li></ol> 16. Jour 18: cultures de neurones prêt à l&#39;emploi <ol><li> Changer de support pour frais Différentiation médias n ° 3 avec RA tous les 3 jours pour maintenir la santé des neurones. Remarque: Les cellules doivent être différenciées en neurones et présentent un phénotype neuronal. Les cultures sont généralement stables pendant jusqu&#39;à 14 jours après la différenciation terminale, mais la durée de la viabilité neuronale est fonction du nombre de passage de cellules indifférenciées au début de la différenciation. Un plus grand nombre de passage donnent neurones différenciés avec une durée de vie utile plus courte. </li></ol>

<ol><li>Christensen, J., Steain, M., Slobedman, B., Abendroth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiated+Neuroblastoma+Cells+Provide+a+Highly+Efficient+Model+for+Studies+of+Productive+Varicella-Zoster+Virus+Infection+of+Neuronal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Differentiated Neuroblastoma Cells Provide a Highly Efficient Model for Studies of Productive Varicella-Zoster Virus Infection of Neuronal Cells.</a> Journal of Virology. 85 (16), 8436-8442 (2011).</li>
<li>Gimenez-Cassina, A., Lim, F., Diaz-Nido, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+a+human+neuroblastoma+into+neuron-like+cells+increases+their+susceptibility+to+transduction+by+herpesviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Differentiation of a human neuroblastoma into neuron-like cells increases their susceptibility to transduction by herpesviral vectors.</a> Journal of Neuroscience Research. 84 (4), 755-767 (2006).</li>
<li>Biedler, J. L., Roffler-Tarlov, S., Schachner, M., Freedman, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Neurotransmitter+Synthesis+by+Human+Neuroblastoma+Cell+Lines+and+Clones%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Multiple Neurotransmitter Synthesis by Human Neuroblastoma Cell Lines and Clones.</a> Cancer Research. 38 (11 Pt 1), 3751-3757 (1978).</li>
<li>Encinas, M., Iglesias, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+Treatment+of+SH-SY5Y+Cells+with+Retinoic+Acid+and+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor+Gives+Rise+to+Fully+Differentiated%2C+Neurotrophic+Factor-Dependent%2C+Human+Neuron-Like+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Sequential Treatment of SH-SY5Y Cells with Retinoic Acid and Brain-Derived Neurotrophic Factor Gives Rise to Fully Differentiated, Neurotrophic Factor-Dependent, Human Neuron-Like Cells.</a> Journal of Neurochemistry. 75 (3), 991-1003 (2000).</li>
<li>Otey, C. A., Boukhelifa, M., Maness, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B35+neuroblastoma+cells%3A+an+easily+transfected%2C+cultured+cell+model+of+central+nervous+system+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">B35 neuroblastoma cells: an easily transfected, cultured cell model of central nervous system neurons.</a> Methods in Cell Biology. 71, 287-304 (2003).</li>
<li>LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+use+of+neuro-2a+neuroblastoma+cells+versus+intact+neurons+in+primary+culture+for+neurotoxicity+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies.</a> Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).</li>
<li>Shafer, T. J., Atchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmitter%2C+ion+channel+and+receptor+properties+of+pheochromocytoma+%28PC12%29+cells%3A+a+model+for+neurotoxicological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Transmitter, ion channel and receptor properties of pheochromocytoma (PC12) cells: a model for neurotoxicological studies.</a> Neurotoxicology. 12 (3), 473-492 (1991).</li>
<li>Yue, F., Cheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+encyclopedia+of+DNA+elements+in+the+mouse+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A comparative encyclopedia of DNA elements in the mouse genome.</a> Nature. 515 (7527), 355-364 (2014).</li>
<li>Cheng, Y., Ma, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+regulatory+information+conservation+between+mouse+and+conservation+between+mouse+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Principles of regulatory information conservation between mouse and conservation between mouse and human.</a> Nature. 515 (7527), 371-375 (2014).</li>
<li>Stergachis, A. B., Neph, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conservation+of+trans-acting+circuitry+during+mammalian+regulatory+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Conservation of trans-acting circuitry during mammalian regulatory evolution.</a> Nature. 515 (7527), 365-370 (2014).</li>
<li>Lin, S., Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+transcriptional+landscapes+between+human+and+mouse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Comparison of the transcriptional landscapes between human and mouse tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (48), 17224-17229 (2014).</li>
<li>Coyle, D. E., Li, J., Baccei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+Differentiation+of+Retinoic+Acid-Induced+Human+Pluripotent+Embryonic+Carcinoma+Stem+Cell+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Regional Differentiation of Retinoic Acid-Induced Human Pluripotent Embryonic Carcinoma Stem Cell Neurons.</a> PLoS ONE. 6 (1), e16174(2011).</li>
<li>Mostert, M. M., van de Pol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+in+situ+hybridization-based+approaches+for+detection+of+12p+overrepresentation%2C+in+particular+i%2812p%29%2C+in+cell+lines+of+human+testicular+germ+cell+tumors+of+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Genetics+and+Cytogenetics%22%5BJournal%5D)">Fluorescence in situ hybridization-based approaches for detection of 12p overrepresentation, in particular i(12p), in cell lines of human testicular germ cell tumors of adults.</a> Cancer Genetics and Cytogenetics. 87 (2), 95-102 (1996).</li>
<li>Hu, B. -Y., Weick, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+follows+developmental+principles+but+with+variable+potency%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neural differentiation of human induced pluripotent stem cells follows developmental principles but with variable potency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (9), 4335-4340 (2010).</li>
<li>Biedler, J. L., Helson, L., Spengler, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+growth%2C+tumorigenicity%2C+and+cytogenetics+of+human+neuroblastoma+cells+in+continuous+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Morphology and growth, tumorigenicity, and cytogenetics of human neuroblastoma cells in continuous culture.</a> Cancer Research. 33 (11), 2643-2652 (1973).</li>
<li>Påhlman, S., Ruusala, A. I., Abrahamsson, L., Mattsson, M. E., Esscher, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid-induced+differentiation+of+cultured+human+neuroblastoma+cells%3A+a+comparison+with+phorbolester-induced+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid-induced differentiation of cultured human neuroblastoma cells: a comparison with phorbolester-induced differentiation.</a> Cell Differentiation. 14 (2), 135-144 (1984).</li>
<li>Xie, H., Hu, L., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SH-SY5Y+human+neuroblastoma+cell+line%3A+in+vitro+cell+model+of+dopaminergic+neurons+in+Parkinson%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">SH-SY5Y human neuroblastoma cell line: in vitro cell model of dopaminergic neurons in Parkinson’s disease.</a> Chinese Medical Journal. 123 (8), 1086-1092 (2010).</li>
<li>Kovalevich, J., Langford, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+the+use+of+SH-SY5Y+neuroblastoma+cells+in+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology.</a> Methods in Molecular Biology. 1078, Clifton, N.J. 9-21 (2013).</li>
<li>Påhlman, S., Hoehner, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+survival+influences+of+growth+factors+in+human+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Differentiation and survival influences of growth factors in human neuroblastoma.</a> European Journal of Cancer. 31 (4), 453-458 (1995).</li>
<li>Cheung, Y. -T., Lau, W. K. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+all-trans-retinoic+acid+on+human+SH-SY5Y+neuroblastoma+as+in+vitro+model+in+neurotoxicity+research%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Effects of all-trans-retinoic acid on human SH-SY5Y neuroblastoma as in vitro model in neurotoxicity research.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 127-135 (2009).</li>
<li>Agholme, L., Lindström, T., Kågedal, K., Marcusson, J., Hallbeck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+for+neuroscience%3A+differentiation+of+SH-SY5Y+cells+into+cells+with+morphological+and+biochemical+characteristics+of+mature+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimer%27s+disease%3A+JAD%22%5BJournal%5D)">An in vitro model for neuroscience: differentiation of SH-SY5Y cells into cells with morphological and biochemical characteristics of mature neurons.</a> Journal of Alzheimer's disease: JAD. 20 (4), 1069-1082 (2010).</li>
<li>La Monica, N., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+replication+of+attenuated+and+neurovirulent+polioviruses+in+human+neuroblastoma+cell+line+SH-SY5Y%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Differences in replication of attenuated and neurovirulent polioviruses in human neuroblastoma cell line SH-SY5Y.</a> Journal of Virology. 63 (5), 2357-2360 (1989).</li>
<li>Cordey, S., Petty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Site-Specific+Adaptations+Conferring+Increased+Neural+Cell+Tropism+during+Human+Enterovirus+71+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Identification of Site-Specific Adaptations Conferring Increased Neural Cell Tropism during Human Enterovirus 71 Infection.</a> PLoS Pathog. 8 (7), e1002826(2012).</li>
<li>Xu, L. -J., Jiang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Transcriptomic+Analysis+of+Human+Neuroblastoma+Cells+in+Response+to+Enterovirus+Type+71+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Global Transcriptomic Analysis of Human Neuroblastoma Cells in Response to Enterovirus Type 71 Infection.</a> PLoS ONE. 8 (7), e65948(2013).</li>
<li>Luo, M. H., Fortunato, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+infection+and+shedding+of+human+cytomegalovirus+in+T98G+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Long-term infection and shedding of human cytomegalovirus in T98G glioblastoma cells.</a> Journal of Virology. 81 (19), 10424-10436 (2007).</li>
<li>Sun, Z., Yang, H., Shi, Y., Wei, M., Xian, J., Hu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+cell+model+system+of+herpes+simplex+virus+type+II+latent+infection+and+reactivation+in+SH-SY5Y+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Wei+Sheng+Wu+Xue+Bao+%3D+Acta+Microbiologica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Establishment of a cell model system of herpes simplex virus type II latent infection and reactivation in SH-SY5Y cells.</a> Wei Sheng Wu Xue Bao = Acta Microbiologica Sinica. 50 (1), 98-106 (2010).</li>
<li>Yun, S. -I., Song, B. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecularly+cloned%2C+live-attenuated+japanese+encephalitis+vaccine+SA14-14-2+virus%3A+a+conserved+single+amino+acid+in+the+ij+Hairpin+of+the+Viral+E+glycoprotein+determines+neurovirulence+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">A molecularly cloned, live-attenuated japanese encephalitis vaccine SA14-14-2 virus: a conserved single amino acid in the ij Hairpin of the Viral E glycoprotein determines neurovirulence in mice.</a> PLoS pathogens. 10 (7), e1004290(2014).</li>
<li>Garrity-Moses, M. E., Teng, Q., Liu, J., Tanase, D., Boulis, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+adeno-associated+virus+Bcl-xL+gene+transfer+in+models+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+%26+Nerve%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective adeno-associated virus Bcl-xL gene transfer in models of motor neuron disease.</a> Muscle & Nerve. 32 (6), 734-744 (2005).</li>
<li>Kalia, M., Khasa, R., Sharma, M., Nain, M., Vrati, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Japanese+Encephalitis+Virus+Infects+Neuronal+Cells+through+a+Clathrin-Independent+Endocytic+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Japanese Encephalitis Virus Infects Neuronal Cells through a Clathrin-Independent Endocytic Mechanism.</a> Journal of Virology. 87 (1), 148-162 (2013).</li>
<li>Haedicke, J., Brown, C., Naghavi, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain-specific+factor+FEZ1+is+a+determinant+of+neuronal+susceptibility+to+HIV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The brain-specific factor FEZ1 is a determinant of neuronal susceptibility to HIV-1 infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (33), 14040-14045 (2009).</li>
<li>Xu, K., Liu, X. -N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication-defective+HSV-1+effectively+targets+trigeminal+ganglion+and+inhibits+viral+pathopoiesis+by+mediating+interferon+gamma+expression+in+SH-SY5Y+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+molecular+neuroscience%3A+MN%22%5BJournal%5D)">Replication-defective HSV-1 effectively targets trigeminal ganglion and inhibits viral pathopoiesis by mediating interferon gamma expression in SH-SY5Y cells.</a> Journal of molecular neuroscience: MN. 53 (1), 78-86 (2014).</li>
<li>Oh, J., Fraser, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+association+of+the+herpes+simplex+virus+genome+with+histone+proteins+during+a+lytic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Temporal association of the herpes simplex virus genome with histone proteins during a lytic infection.</a> Journal of Virology. 82 (7), 3530-3537 (2008).</li>
<li>Stiles, K. M., Milne, R. S. B., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J., Krummenacher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+herpes+simplex+virus+receptor+nectin-1+is+down-regulated+after+trans-interaction+with+glycoprotein+D%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">The herpes simplex virus receptor nectin-1 is down-regulated after trans-interaction with glycoprotein D.</a> Virology. 373 (1), 98-111 (2008).</li>
<li>Thomas, D. L., Lock, M., Zabolotny, J. M., Mohan, B. R., Fraser, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2-kilobase+intron+of+the+herpes+simplex+virus+type+1+latency-associated+transcript+has+a+half-life+of+approximately+24+hours+in+SY5Y+and+COS-1+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">The 2-kilobase intron of the herpes simplex virus type 1 latency-associated transcript has a half-life of approximately 24 hours in SY5Y and COS-1 cells.</a> Journal of Virology. 76 (2), 532-540 (2002).</li>
<li>Handler, C. G., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-linking+of+glycoprotein+oligomers+during+herpes+simplex+virus+type+1+entry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Cross-linking of glycoprotein oligomers during herpes simplex virus type 1 entry.</a> Journal of Virology. 70 (9), 6076-6082 (1996).</li>
<li>Nicola, A. V., Hou, J., Major, E. O., Straus, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+Simplex+Virus+Type+1+Enters+Human+Epidermal+Keratinocytes%2C+but+Not+Neurons%2C+via+a+pH-Dependent+Endocytic+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Herpes Simplex Virus Type 1 Enters Human Epidermal Keratinocytes, but Not Neurons, via a pH-Dependent Endocytic Pathway.</a> Journal of Virology. 79 (12), 7609-7616 (2005).</li>
<li>Korecka, J. A., van Kesteren, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+of+retinoic+acid+differentiated+SH-SY5Y+cells+by+transcriptional+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization of retinoic acid differentiated SH-SY5Y cells by transcriptional profiling.</a> PloS One. 8 (5), e63862(2013).</li>
<li>Presgraves, S. P., Ahmed, T., Borwege, S., Joyce, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminally+differentiated+SH-SY5Y+cells+provide+a+model+system+for+studying+neuroprotective+effects+of+dopamine+agonists%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicity+Research%22%5BJournal%5D)">Terminally differentiated SH-SY5Y cells provide a model system for studying neuroprotective effects of dopamine agonists.</a> Neurotoxicity Research. 5 (8), 579-598 (2004).</li>
<li>Qiao, J., Paul, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI3K%2FAKT+and+ERK+regulate+retinoic+acid-induced+neuroblastoma+cellular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">PI3K/AKT and ERK regulate retinoic acid-induced neuroblastoma cellular differentiation.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 424 (3), 421-426 (2012).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le protocole ci-dessus fournit une méthode simple et reproductible pour produire des cultures de neurones humains homogènes et viables. Ce protocole utilise des techniques et des pratiques qui intègrent plusieurs méthodes publiées antérieurement 1-4 et a pour objectif de définir les meilleures pratiques de chacun. La différenciation des cellules SH-SY5Y repose sur la privation de sérum progressive; l&#39;addition de l&#39;acide rétinoïque, les facteurs neurotrophiques et les protéines de la matrice extracellu...

La possibilité d&#39;utiliser dans des systèmes modèles in vitro a grandement amélioré les domaines de la neurobiologie et les neurosciences. Cellules en culture constituent une plate-forme efficace pour caractériser la fonctionnalité des protéines et des mécanismes moléculaires spécifiques phénomènes sous-jacents, de comprendre la pathologie de la maladie et l&#39;infection, et d&#39;effectuer des évaluations préliminaires de dépistage de drogues. En neurobiologie, les principaux types de modèles de culture de cellules comprennent des cultures de neurones primaires dérivées de rat et la souris, et des lignées cellulaires de neuroblastome comme les cellules B35 de rat 5, des cellules de souris Neuro-2A 6, et les cellules PC12 de rat 7. Bien que l&#39;utilisation de telles lignées cellulaires a progressé de façon significative le champ, il existe plusieurs facteurs de confusion liés à la manipulation des cellules non humaines et des tissus. Ceux-ci comprennent la compréhension spécifiques aux espèces différences dans les processus métaboliques, les phénotypes de la manifestation de la maladie, et la pathogenèse par rapport à l&#39;homme. Il est également important de noter que lere des différences significatives entre la souris et l&#39;expression de gènes humains et de la signalisation du facteur de transcription, en soulignant les limites des modèles de rongeurs et l&#39;importance de comprendre quelles voies sont conservées entre les rongeurs et les humains 8-11. D&#39;autres ont eu recours à l&#39;utilisation de lignées de cellules neuronales humaines, y compris la N-Tera-2 (NT2) de lignée humaine de cellules de tératocarcinome et cellules souches pluripotentes inductibles (CSPi). Ces lignées cellulaires sont de bons modèles pour systèmes humains in vitro. Toutefois, la différenciation des cellules NT2 avec de l&#39;acide rétinoïque (RA) a pour résultat la génération d&#39;une population mixte de neurones, les astrocytes et les cellules gliales radiales 12, ce qui nécessite une étape de purification supplémentaire afin d&#39;obtenir des populations pures de neurones. En outre, les cellules NT2 montrent un caryotype très variable 13, avec plus de 60% ​​en 72 chromosomes des cellules. iPSCs montrent la variabilité dans la différenciation entre les différentes lignées cellulaires et de modification de l&#39;efficacité de la différenciation<html> 14. Il est donc souhaitable de disposer d&#39;un modèle cellulaire neuronale humaine constante et reproductible pour compléter ces alternatives. cellules neuroblastes comme SH-SY5Y sont un sous-clone de la lignée de cellules de neuroblastome parentale SK-N-SH. La lignée cellulaire parentale a été généré en 1970 à partir d&#39;une biopsie de la moelle osseuse qui contient à la fois neuroblastes-like et les cellules épithéliales de type 15. SH-SY5Y ont un caryotype stable constitué de 47 chromosomes, et peuvent être différenciés d&#39;un état dans les neurones humains matures neuroblastes comme à travers une variété de mécanismes, y compris l&#39;utilisation de la PR, les esters de phorbol et neurotrophines spécifiques tels que les brain-derived facteur neurotrophique (BDNF). Avant preuve suggère que l&#39;utilisation de différentes méthodes peut sélectionner des sous-types spécifiques de neurones adrénergiques tels que, cholinergiques et des neurones dopaminergiques 16,17. Ce dernier aspect fait SH-SY5Y utiles pour une multitude d&#39;expériences de la neurobiologie. ontenu &quot;&gt; Plusieurs études ont noté des différences importantes entre les cellules SH-SY5Y dans leurs états indifférenciées et différenciées. Lorsque les cellules SH-SY5Y sont indifférenciées, elles prolifèrent rapidement et semblent être non polarisée, avec très peu, des processus courts. Ils poussent souvent en touffes et d&#39;exprimer des marqueurs indicatifs de neurones immatures 18,19. Lorsque différencié, ces cellules étendent longs processus ramifié, diminution de la prolifération et, dans certains cas polarisent 2,18. SH-SY5Y différenciées ont été entièrement précédemment démontré pour exprimer une variété de différents marqueurs de neurones matures, y compris des protéines de croissance associé (GAP-43), les noyaux neuronaux (NeuN), la synaptophysine (SYN), synaptique protéine vésiculaire II (SV2), neurone énolase spécifique (NSE) et la protéine associée aux microtubules (MAP) 2,16,17,20 et à l&#39;absence d&#39;expression de marqueurs gliales telles que protéine acide fibrillaire gliale (GFAP) 4. En outre soutien qui différencient SH-SY5Y represent une population neuronale homogène, l&#39;enlèvement de BDNF se traduit par l&#39;apoptose cellulaire 4. Ceci suggère que la survie des cellules SH-SY5Y différenciées dépend de facteurs trophiques, semblables à des neurones matures. L&#39;utilisation de cellules SH-SY5Y a augmenté depuis le sous-clone a été créé en 1978 3. Quelques exemples de leur utilisation comprennent l&#39;investigation de la maladie de Parkinson 17, la maladie d&#39;Alzheimer 21, et la pathogenèse de l&#39;infection virale dont poliovirus 22, l&#39;entérovirus 71 (EV71) 23,24 , le virus varicelle-zona (VZV), 1, 25 cytomégalovirus humain et le virus de l&#39;herpès simplex (HSV) 2,26. Il est important de noter que plusieurs études utilisant des cellules SH-SY5Y ont utilisé ces cellules dans leur forme indifférenciée, en particulier dans le domaine de la neurovirologie 27-36. La différence dans le phénotype observé des indifférenciée par rapport aux cellules SH-SY5Y différenciées soulève la question de whether la progression observée de l&#39;infection serait différent dans les neurones différenciés matures. Par exemple, des cellules SH-SY5Y différenciées ont une plus grande efficacité de HSV-1 absorption en fonction, la prolifération des cellules SH-SY5Y indifférenciées, qui peuvent être dus à un manque de récepteurs de surface qui se lient HSV et modulent entrée sur les cellules SH-SY5Y indifférenciées 2. Il est donc essentiel que lors de la conception d&#39;une expérience axé sur les essais neurones in vitro, les cellules SH-SY5Y devraient être différenciés afin d&#39;obtenir les résultats les plus précis pour la traduction et la comparaison avec des modèles in vivo. Le développement d&#39;une méthode fiable pour générer des cultures de neurones humains est impératif de permettre aux chercheurs de réaliser des expériences traductionnelles modéliser avec précision le système nerveux humain. Le protocole présenté ici est une procédure qui définit les meilleures pratiques issues de méthodes précédentes 1-4 pour enrichir les neurones humains qui se différencientavec de l&#39;acide rétinoïque.

<table><tbody><tr><td>B-27</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17504-044</td><td>Voir Tableau 1 pour la préparation</td></tr><tr><td>Facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF)</td><td>Sigma</td><td>SRP3014 (10 &mu ; g)/B3795 (5 &mu ; g)</td><td>Voir Tableau 1 pour la préparation</td></tr><tr><td>dibutyryl cyclique AMP (db-cAMP)</td><td>Sigma</td><td>D0627</td><td>Voir Tableau 1 pour la préparation</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ATCC</td><td>4-X-Minimum</td><td></td></tr> <tr><td>Essential Medium Eagle (EMEM)</td><td>Sigma</td><td>M5650-Fetal</td><td></td></tr> <tr><td>Bovin Serum (FBS)&nbsp ;</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td>Voir Tableau 1 pour la préparation</td></tr><tr><td>GlutamaxI</td><td>Life Technologies</td><td>35050-061-Glutamine</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Hyclone</td><td>SH30034.01-Chlorure</td> <td>de</td></tr> <tr><td>potassium (KCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td>Voir Tableau 1 pour la préparation</td></tr> de <tr><td>la solution de matrice extracellulaire (ECM) MaxGel</td><td>Sigma</td><td>E0282</td><td>Voir l’étape 11 du protocole</td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>Life Technologies</td><td>21103-049-Pénicilline</td><td></td></tr><tr><td>/Streptomycine (Pen/Strep)</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122-Acide</td><td></td></tr> <tr><td>rétinoïque (RA)</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td>Doit être stocké dans l’obscurité à 4 &deg ; C parce que ce réactif est sensible à la lumière</td></tr><tr><td>SH-SY5Y Cellules</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266-0,5</td><td></td></tr><tr><td> % Trypsine + EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054-Falcon</td><td></td></tr> <tr><td>35 mm TC Dishes</td><td>Falcon (A Corning Brand)</td><td>353001</td><td>-</td></tr></tbody></table>

la différenciation de la sh-sy5y neuroblastome humain cell line

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

Disposer de systèmes in vivo et in vitro appropriés qui fournissent des modèles translationnels pour les maladies humaines fait partie intégrante de la recherche en neurobiologie et en neurosciences. Les modèles expérimentaux in vitro traditionnels utilisés en neurobiologie comprennent des cultures neuronales primaires de rats et de souris, des lignées cellulaires de neuroblastome comprenant des cellules B35 de rat et des cellules Neuro-2A de souris, des cellules PC12 de rat et des cultures de tranches à court terme. Bien que de nombreux chercheurs s’appuient sur ces modèles, ils n’ont pas de composante humaine et les effets expérimentaux observés pourraient être exclusifs aux espèces respectives et ne pas se produire de manière identique chez l’homme. De plus, bien que ces cellules soient des neurones, elles peuvent avoir des caryotypes instables, ce qui rend leur utilisation problématique pour les études de l’expression des gènes et les études reproductibles de la signalisation cellulaire. Il est donc important de développer des modèles plus cohérents de maladies neurologiques humaines. 
La procédure suivante décrit une méthode facile à suivre et reproductible pour obtenir des cultures neuronales humaines homogènes et viables, en différenciant la lignée cellulaire de neuroblastome humain chromosomiquement stable, SH-SY5Y. Cette méthode intègre plusieurs méthodes1 à 4 décrites précédemment et est basée sur l’élimination séquentielle du sérum du milieu. La chronologie comprend une famine sérique progressive, avec l’introduction de protéines de matrice extracellulaire et de facteurs neurotrophiques. Cela permet aux neurones de se différencier, tandis que les cellules épithéliales sont sélectionnées, ce qui donne une culture neuronale homogène. Les résultats représentatifs démontrent la différenciation réussie des cellules de neuroblastome SH-SY5Y d’un phénotype cellulaire initial de type épithélial en un phénotype neuronal plus expansif et ramifié. Ce protocole offre un moyen fiable de générer des populations homogènes de cultures neuronales qui peuvent être utilisées pour des analyses biochimiques et moléculaires ultérieures, ce qui fournit aux chercheurs un modèle translationnel plus précis de l’infection et de la maladie humaines.

À l&#39;heure actuelle, il existe de nombreux cas dans le domaine de la neurobiologie et neurovirologie où SH-SY5Y indifférenciées sont utilisés comme un modèle fonctionnel pour les neurones humains 27-36, et surtout, des cellules indifférenciées peuvent manquer phénotypes tels que optimale absorption virale 2 qui sont nécessaire pour une interprétation précise. Il est essentiel que l&#39;utilisation de cellules SH-SY5Y ou tout autre système neuronale in vitro, les cellules se différencien...

Il est essentiel en neurobiologie et en neurovirologie de disposer d’un système in vitro fiable et reproductible qui serve de modèle translationnel pour ce qui se passe in vivo dans les neurones humains. Ce protocole décrit comment cultiver et différencier les cellules de neuroblastome humain SH-SY5Y en neurones viables pour une utilisation dans des applications in vitro.

La différenciation de la SH-SY5Y neuroblastome humain Cell Line

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

L'objectif général de ce protocole est de fournir aux neurobiologistes et neurovirologistes une méthode simple et reproductible pour générer des neurones humains différenciés destinés à être utilisés dans des tests in vitro ultérieurs. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans la recherche sur les maladies infectieuses, comme la détermination des réponses neuronales à une infection ou à un traitement médicamenteux. Elle peut également être utilisée pour évaluer les changements protéomiques ou génomiques associés à des conditions expérimentales spécifiques.L'avantage principal de cette technique est qu'elle fournit un protocole facile à suivre permettant d'obtenir de façon reproductible des cultures homogènes de neurones humains complètement différenciés. En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés en raison de la sensibilité de ces cellules aux perturbations, telles que la trypsination, la trituration ou l'exposition à des conditions environnementales sous-optimales. Pour commencer cette procédure, laissez le milieu se réchauffer et s'équilibrer dans l'incubateur afin d'établir un pH approprié avant utilisation.Ensuite, divis

differentiation-of-the-sh-sy5y-human-neuroblastoma-cell-line

Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Ce protocole décrit l'isolement, l'enrichissement et l'entretien des cellules tumorales médulloblastome souches dérivées de souris mutantes avec ectopique Sonic activité de la voie Hedgehog.

L&#39;isolement, l&#39;enrichissement et l&#39;entretien des cellules souches Médulloblastome

Nous avons établi un protocole pour l'induction de neuroblastes direct pluripotentes cellules souches embryonnaires humaines maintenues dans des conditions définies avec de petites molécules, qui permet la dérivation d'une offre importante de progéniteurs neuronaux humains et neuronale types de cellules dans le développement du SNC pour les neurones de réparation.

Dérivation efficace des ressources humaines progéniteurs neuronaux et des neurones à partir pluripotentes cellules souches embryonnaires humaines à l&#39;induction de petites molécules

Ce protocole vidéo démontre une nouvelle méthode pour la génération et la purification ultérieure des cellules progénitrices neuronales à partir d'une source renouvelable de cellules souches neurales (CSN) en fonction de leur physique (taille et granularité interne) et les propriétés fluorescentes en utilisant la technologie de cytométrie en flux.

Le test neuroblaste: Un test pour la génération et l&#39;enrichissement des cellules souches neuronales à partir de différenciation des cellules souches neurales Progeny Par cytométrie en flux

Dans cette vidéo, nous effectuons le test de phagocytose microgliale pour le neuroblastome en utilisant des cellules souches pluripotentes induites. Le test permet d’évaluer l’altération de la fonction microgliale dans les maladies neurodégénératives.

Dosage de la phagocytose microgliale : un test in vitro pour établir un modèle de phagocytose microgliale pour les cellules de neuroblastome à l’aide de macrophages iPSC

Cette vidéo présente une technique permettant de transformer des cellules de neuroblastome SH-SY5Y indifférenciées en neurones matures entièrement différenciés à l’aide d’une technique de passage systématique. Cela implique de cultiver les cellules dans une série de milieux avec des taux sériques décroissants pour inhiber la prolifération des cellules épithéliales tout en favorisant la différenciation et la prolifération des cellules neuronales. De plus, le milieu est complété par de l’acide...

Différenciation d’une lignée cellulaire de neuroblastome humain en neurones matures

Cet article propose une méthode pour étudier la dynamique des vésicules de neurotransmetteurs dans les cellules de neuroblastome, à l’aide d’une construction synaptobrevin2-pHluorin et de la microscopie à fluorescence à réflexion interne totale. La stratégie développée pour le traitement d’images et l’analyse des données est également rapportée.

TIRFM et GFP-sondes sensibles au pH pour l&#39;évaluation des vésicules de neurotransmetteur Dynamics dans les cellules SH-SY5Y neuroblastome: imagerie cellulaire et analyse des données

Dans le but de caractériser les changements dans les miARN sur les cellules souches neurales humaines différenciées (hNSCs), nous décrivons la différenciation des hNSC sur un système tridimensionnel, l’évaluation des changements dans l’expression des microARN par puce PCR miRNA, et l’analyse computationnelle pour la prédiction de la cible miARN et sa validation par double test de luciférase.

Différenciation d&#39;un Neural Stem Cell humaine ligne sur Trois Cultures dimensionnelles, les gènes Analyse des microARN et Putative cibles

Cette étude introduit et décrit des protocoles pour dériver deux organoïdes neuronaux humains spécifiques comme modèle pertinent et précis pour étudier 1) le développement humain de glioblastoma dans les organoïdes neuronaux humains exclusivement chez l'homme et 2) dopaminergique neuronal différenciation générant un organoïde tridimensionnel.

Organoïdes neuronaux humains pour étudier le cancer du cerveau et les maladies neurodégénératives

Présenté ici est un protocole pour la génération d'une culture unicellulaire des cellules souches embryonnaires humaines et leur différenciation ultérieure en cellules progénitrices neurales. Le protocole est simple, robuste, évolutif et adapté aux applications de dépistage des médicaments et de médecine régénérative.

Différenciation neuronale efficace à l'aide de la culture monocellulaire des cellules souches embryonnaires humaines

Dans ce protocole, nous décrivons une stratégie de différenciation stable et très efficace pour la génération de neurones sympathiques postganglioniques à partir de cellules souches pluripotentes humaines. Ce modèle rendra les neurones disponibles pour l’utilisation d’études sur de multiples troubles autonomes.

Différenciation efficace des neurones sympathiques postganglioniques utilisant des cellules souches pluripotentes humaines dans des conditions de culture sans alimentation et définies chimiquement

Les maladies neurodégénératives sont associées à des fonctions microgliales dérégulées. Cet article décrit un test in vitro de phagocytose des cellules de neuroblastome par les macrophages iPSC. Les lectures de microscopie quantitative sont décrites à la fois pour l’imagerie time-lapse sur cellules vivantes et l’imagerie à haut contenu à cellules fixes.

Essai d’imagerie quantitative in vitro pour la phagocytose des cellules mortes du neuroblastome par iPSC-Macrophages

Apprenez à différencier les cellules SH-SY5Y en neurones fonctionnels pour la neurobiologie et la neurovirologie. Cette méthode fiable produit des cultures homogènes de neurones humains différenciés pour diverses applications in vitro.

La différenciation de la SH-SY5Y neuroblastome humain Cell Line

Explorer plus de vidéos