Une méthode d'évaluation des propriétés de renforcement de l'éthanol chez les rats sans eau Privation, saccharine fading ou formation d'accès étendu

L’objectif global de ce protocole est d’initier rapidement une réponse opérante pour l’alcool chez les rats avec une méthode qui convient aux expérimentés et, contrairement aux méthodes standard, ne nécessite pas de privation d’eau ou de décoloration de la saccharine saccharose. Cette méthode est donc un outil très utile pour répondre à des questions clés sur la neurobiologie et la neuropharmacologie de la récompense de l’alcool chez le rat. Le principal avantage de cette technique est qu’elle ne nécessite pas de décoloration de la saccharine saccharose pour initier une réponse alcoolique chez le rat.

Tout d’abord, éliminer l’inconvénient potentiel de l’utilisation d’édulcorants dans la procédure d’auto-administration d’éthanol. Pour cette expérience, obtenez des rats pesant de 200 à 225 grammes. Les mâles Wistar sont utilisés ici.

Hébergez-les par paires ou individuellement, selon la raison d’être de l’expérience. Gardez la colonie sur un cycle inversé 12-12 lumière-obscurité avec une température et une humidité contrôlées et menez les expériences pendant la phase d’obscurité. Pesez les animaux chaque semaine et laissez-les s’acclimater pendant au moins une semaine avant de commencer l’expérience.

Ne limitez pas l’accès du rat à la nourriture et à l’eau. Ce n’est pas nécessaire pour le conditionnement. Effectuez toute l’entraînement comportementale dans la même chambre opérante avec une grille d’inondation et un bac à déchets.

La chambre doit être équipée d’une cabine ventilée et insonorisante. Chaque chambre doit être équipée de lampes de stimulation, de pousse-seringues et de deux leviers rétractables. Les niveaux doivent être positionnés latéralement par rapport à un récipient à liquide.

Chaque chambre doit être sous contrôle automatisé avec une interface informatique. Utilisez ce logiciel pour préparer le programme de conditionnement opérant au besoin. Par exemple, exécutez les commandes suivantes.

Déployez deux leviers pour marquer le début de la séance et signaler la disponibilité de l’alcool. Faites en sorte que le levier de l’éthanol, lorsqu’il est enfoncé, délivre 100 microlitres d’éthanol à 20 % dans le puits d’eau potable adjacent, et que le temps mort dure cinq secondes. Signalez le délai d’expiration en allumant un voyant de repère au-dessus du levier.

L’autre levier, lorsqu’il est enfoncé, n’a aucune conséquence programmée et sert de contrôle pour un comportement non spécifique. Même pendant les temps morts, notez comment les rats utilisent les leviers, bien qu’il n’y ait aucune conséquence pour le rat. Au bout de 30 minutes, rétractez les deux leviers pour signaler la fin de la séance.

Chargez une solution d’éthanol, composée à 95 % d’éthanol et d’eau du robinet, dans une seringue. Éjectez la solution sans introduire de bulles d’air dans les conduites de robinetterie. Confirmez manuellement le flux de la solution.

Testez toujours manuellement les appareils. De plus, séchez toujours le récipient de solution avant de commencer une session. Avant de commencer une session, chargez les commandes du logiciel et assurez-vous que tout est opérationnel.

Déplacez les rats dans la salle d’essai dans une cage de transport et attribuez un rat à chaque chambre. Maintenez la salle d’essai à la même température et à la même humidité que le vivarium. Chargez les rats dans leurs chambres de manière cohérente et au même moment de la journée pour chaque session.

Démarrez ensuite le logiciel pour lancer la session. Une fois la séance terminée, retournez les rats dans le vivarium et utilisez un désinfectant pour nettoyer les cages de conditionnement opérantes. Animez les séances quotidiennement, cinq à six fois par semaine.

Après chaque session, calculez le nombre moyen d’appuis sur le levier actifs, d’appuis sur le levier inactifs et de récompenses en alcool. Les performances se seront stabilisées lorsque, sur trois sessions consécutives, les récompenses ne varient pas de plus de 15 %. Une manipulation possible pour les rats sur la base stabilisée est d’évaluer leur motivation pour les récompenses à l’éthanol.

Pour ce faire, soumettez-les à un barème de ratios progressifs. Programmez les chambres pour qu’elles délivrent initialement un seul volume d’alcool avec une seule pression à levier, mais augmentez le nombre de pressions à levier requises après chaque renforçateur d’alcool. Chaque animal atteindra un point de rupture, correspondant au nombre de pressions effectuées pour le dernier renforçateur gagné.

Ce modèle a été évalué pour sa validité prédictive à l’aide d’un médicament antialcoolique approuvé, la naltrexone. En effet, la validité prédictive a été établie, et le modèle peut donc être utilisé pour évaluer de nouveaux candidats médicaments. Dans un premier temps, injectez une solution saline aux rats 30 minutes avant chaque séance pour les habituer à l’injection.

Analysez les résultats des sessions et procédez lorsque le nombre de récompenses entre les deux dernières sessions varie de 15 % ou moins. Ensuite, administrez la naltrexone dans une solution saline avec un pH ajusté à neutre. Répartissez aléatoirement l’ordre des tests entre les différents groupes de traitement et les témoins non traités.

Entre les injections de médicaments, laissez chaque rat passer par deux séances normales sans traitement, exposé uniquement à une solution saline. Cela fonctionne comme la période de lavage et réinitialise le rat. Répétez les tests jusqu’à ce que chaque rat conditionné reçoive chaque niveau de traitement une fois, et le traitement de contrôle une fois.

Après avoir analysé les données, la dose la plus efficace peut être sélectionnée pour être utilisée sur les animaux lors des tests de rapport progressif. À l’aide du protocole décrit, 239 rats de huit cohortes différentes ont été entraînés à s’auto-administrer la récompense alcoolique sans privation d’eau ni décoloration de la saccharine-saccharose. Les rats ont rapidement commencé à appuyer sur le levier, obtenant plus de 10 récompenses lors de la première session.

Finalement, les rats ont obtenu des taux de réponse stables, gagnant environ 24 récompenses au cours de chaque session d’une demi-heure. Un médicament approuvé par la FDA, la naltrexone, a été testé à trois concentrations. Comme prévu, le traitement à la naltrexone a entraîné une diminution dose-dépendante de l’auto-administration d’alcool, fournissant une validation pharmacologique importante pour ce protocole.

De plus, comme prévu, la naltrexone a réduit la motivation du rat pour l’alcool selon un calendrier de rapport progressif, comme le montre la baisse de la mesure du point de rupture. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’initier rapidement la réponse opérante de l’éthanol chez les rats sans utiliser la procédure de privation d’eau ou de décoloration du saccharine saccharose. Avec ce protocole, les rats acquièrent des taux d’auto-administration stables en deux semaines environ, ce qui se traduit par des concentrations d’alcool dans le sang pharmacologiquement pertinentes.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important de garder l’état quotidien aussi cohérent que possible. Il est également essentiel que l’éthanol soit correctement délivré dans le récipient dès la première réponse renforcée, car tout dysfonctionnement peut modifier ou retarder l’acquisition de l’éthanol par auto-administration. Après cette procédure, d’autres expériences peuvent être menées pour étudier la base neurale de la recherche et de la consommation d’alcool.