Name: Le bm12 inductible modèle du lupus érythémateux disséminé (SLE) dans C57BL / 6 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Découvrez la caractérisation des cellules T folliculaires auxiliaires, des cellules B du centre germinatif et des plasmocytes par cytométrie en flux dans le modèle bm12 de lupus érythémateux disséminé chez la souris C57BL/6.

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Ce travail a été soutenu en partie par l’Institut de recherche sur le lupus, la subvention CA138617 du NCI, la subvention NIDDK DK090978, le prix Charlotte Schmidlapp (à E.M.J.) et la bourse Albert J. Ryan (à J.K.). Nous sommes reconnaissants du soutien et de l’instrumentation fournis par le Research Flow Cytometry Core de la division de rhumatologie du Cincinnati Children’s Hospital Medical Center, soutenu en partie par NIH AR-47363, NIH DK78392 et NIH DK90971.

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le modèle inductible de BM12 est un moyen relativement simple et efficace pour étudier les processus cellulaires et moléculaires de SLE. L&#39;activation chronique des cellules T CD4 par transfert adoptif dirigés contre les antigènes du soi conduit à l&#39;accumulation de Tfh, GC cellules B, les cellules plasmatiques et qui peut être mesurée par cytométrie en flux, comme décrit ici. Les futures études utilisant ce modèle peut rapidement et facilement interroger le rôle des gènes candidats et de nouvelles thérapies dans ...

Le lupus érythémateux disséminé (SLE) est une maladie auto-immune complexe caractérisé prototypiquement par l&#39;anticorps anti-nucléaire (ANA) et de la production glomérulonéphrite. De nombreux autres séquelles, y compris dermique, cardio-pulmonaire, et des lésions hépatiques sont associés à la maladie chez certains individus. Les estimations de prévalence aux États-Unis varient considérablement, de 1,2 150,000-1,500,000, avec incidence particulièrement élevée chez les femmes et les minorités 3. Bien que l&#39;étiologie de la SLE a été difficile à discerner, il est pensé pour résulter de l&#39;interaction de divers facteurs génétiques et environnementaux, qui culminent dans l&#39;auto-immunité systémique. De nombreux modèles animaux ont été utilisés pour étudier les facteurs menant à l&#39;apparition et la progression de la maladie. Des modèles de souris classiques de SLE comprennent des souches de souris génétiquement prédisposées, y compris le modèle NZB x NZW F1 et ses dérivés NZM, la souche / lpr MLR, et la souche BXSB / Yaa et systèmes inductibles, tels que le pristane et la maladie chronique du greffon contre l&#39;hôte (cGVHD) 4 modèles. Les premiers rapports de la production d&#39;auto-anticorps dans des modèles de GVHD utilisés souches de souris différentes souches ou de hamster pour parent dans les transferts de F1 5 - 8; méthodes les plus courantes utilisées pour étudier la maladie lupique comprennent actuellement les DBA / 2 → parent (C57BL / 6 x DBA / 2) F1, et le modèle de transfert de bm12 décrit ici. Chaque modèle a ses propres mises en garde, mais ils partagent en général un ensemble commun de caractéristiques qui sont en corrélation avec des caractéristiques cliniques de la maladie humaine. Les paramètres les plus souvent rapportés chez les souris modèles comprennent une splénomégalie, lymphadénopathie, la néphrite, la production ANA, et au niveau cellulaire, l&#39;expansion des cellules T folliculaires auxiliaires (TFH), germinales cellules centre (GC) de B et les cellules plasmatiques. Le modèle BM12 inductible est réalisé par le transfert adoptif de lymphocytes à partir de IA BM12 B6 (C) - H2 - Ab1 BM12 / KhEgJ (BM12) chez la souris, une souche identical de souris C57BL / 6 à l&#39;exception de 3 substitutions d&#39;acides aminés sur le CMH de classe II, en IA b / 6 (B6) des souris C57BL. Alloactivation des donateurs cellules T CD4 par bénéficiaire APC conduit à cGVHD avec des symptômes ressemblant étroitement SLE. Plus précisément, ils comprennent l&#39;expansion de Tfh donateurs dérivés, l&#39;expansion des cellules B GC bénéficiaires dérivés et les cellules plasmatiques, et la production d&#39;Anas y compris les anti-ADN double brin, anti-ADNsb, anti-chromatine, et des anticorps anti-RBC 9. Au fil du temps, les souris receveuses développent glomérulonéphrite associée à des dépôts d&#39;IgG dans le glomérulaire, interstitielle, et les régions vasculaires des reins 10. Nous avons récemment montré que, comme dans la maladie humaine, il y a également un rôle critique pour les IFN de type I dans 11 ce modèle. Notamment, les critères de définition des SLE humaine incluent le développement de la néphrite compatible avec SLE en présence d&#39;anticorps anti-ADN anticorps 12, qui sont tous deux traits saillants de ce modèle de souris. Il n&#39;y a en soisieurs avantages du modèle de bm12 sur les modèles spontanés. Modèles classiques qui développent des signes SLE spontanément reposent sur soit des souches de souris hybrides, des souches de souris consanguines pas sur le fond de B6, ou grande loci génétiques sur le fond de B6, qui font traversant au coup de grâce ou de souris autrement génétiquement modifié difficile et fastidieux. Avec le modèle inductible de bm12, des souris génétiquement modifiées peuvent servir soit donneur ou du receveur, qui permet une identification plus rapide du compartiment cellulaire dans lequel des gènes particuliers peuvent être importants pour la maladie. En outre, le développement de la maladie dans le modèle de bm12 est beaucoup plus rapide, ne nécessitant que deux semaines jusqu&#39;à l&#39;apparition d&#39;Anas, contre plusieurs mois pour les modèles les plus spontanées. En outre, à la différence des modèles spontanés qui développent la maladie à différents points dans le temps, le début et la progression de la maladie dans le modèle d&#39;→ B6 BM12 est fortement synchronisés. Cela permet la génération de cohortes de taille appropriée qui peut Be utilisé pour les stratégies d&#39;intervention ou thérapeutiques à tout stade de développement de la maladie. Ce qui suit est un protocole détaillé pour initier SLE auto-immunité par le transfert adoptif de lymphocytes BM12 dans souris C57BL / 6, ou des variantes génétiques sur le fond de B6. En outre, nous décrivons un protocole de coloration par cytométrie de flux pour dénombrer Tfh, GC cellules B, les cellules plasmatiques et les types de cellules associées à la maladie humaine. Fait important, ces protocoles peuvent également être utilisés pour caractériser la plupart des maladies dans les modèles murins de lupus et identifier Tfh, les cellules B GC et les cellules plasmatiques dans d&#39;autres modèles de maladie.

<table><tbody><tr><td>N° B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>CD45.1+ BoyJ souris souche</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>Bm12 souche de souris</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Restriction digest enzyme pour le génotypage</td></tr><tr><td>1X RBC Lysis Buffer</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Tube de séparation du plasma (PST)</td><td>Tube</td><td>de</td><td>prélèvement sanguin BD 365974 avec EDTA dipotassique</td></tr><tr><td>Tube de séparation du sérum (SST)</td><td>Tube</td><td>de</td><td>prélèvement sanguin BD 365967 avec activateur de caillot / Gel SST</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp ;</td><td>Solution de séparation de cellules à haute densité</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>Solution de séparation cellulaire haute densité</td></tr><tr><td>GL-7-biotine</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta ;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>inserts de tube FACS de 1,2 ml, rack</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&trade ; Tubes à fond rond</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

le bm12 inductible modèle du lupus érythémateux disséminé (sle) dans c57bl / 6

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Le lupus érythémateux disséminé (LED) est une maladie auto-immune aux manifestations cliniques et immunologiques diverses. Plusieurs modèles animaux spontanés et inductibles reflètent des composantes communes de la maladie humaine, y compris le modèle de transfert bm12. Lors du transfert de splénocytes bm12 ou de lymphocytes T CD4 purifiés, les souris C57BL/6 développent rapidement de grandes fréquences de cellules T auxiliaires folliculaires (Tfh), de lymphocytes B du centre germinatif (GC) et de plasmocytes suivis de niveaux élevés d’anticorps antinucléaires circulants. Étant donné que ce modèle utilise des souris sur un fond C57BL/6 pur, les chercheurs peuvent rapidement et facilement étudier la progression de la maladie chez les souches de souris transgéniques ou knock-out dans un laps de temps relativement court. Nous décrivons ici des protocoles pour l’induction du modèle et la quantification des cellules Tfh, des cellules B GC et des cellules plasmatiques par cytométrie en flux multicolore. Il est important de noter que ces protocoles peuvent également être utilisés pour caractériser la maladie dans la plupart des modèles murins de LED et identifier les lymphocytes Tfh, les lymphocytes B GC et les plasmocytes dans d’autres modèles de maladies.

Souris malades développent une splénomégalie en aussi peu que 14 jours, présentant les rates 2-3 fois la taille de souris saines en termes de masse et de la cellularité (Figure 2). Les splénocytes sont séquentiellement débloqué diffusion de la lumière (FSC-A par SSC-A), l&#39;élimination des doublets (FSC-W ou -H par le FSC-A), les cellules viables (faible coloration de la viabilité colorant) et CD4 + TCRβ + (Figure 3A). Les cellules do...

Le transfert de lymphocytes bm12 chez un receveur C57BL/6 est un modèle établi de lupus érythémateux disséminé. Nous décrivons ici comment initier une maladie à l’aide de ce modèle et comment caractériser les cellules auxiliaires folliculaires T, les cellules B du centre germinatif et les plasmocytes par cytométrie en flux.

Le bm12 inductible modèle du lupus érythémateux disséminé (SLE) dans C57BL / 6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

L'objectif général de cette procédure est de caractériser, par cytométrie en flux, l'expansion des cellules T folliculaires auxiliaires, des cellules du centre germinatif, des cellules B et des plasmocytes dans le modèle BM 12 de lupus érythémateux systémique, ou SLE. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine du lupus, notamment à savoir si le ciblage de voies moléculaires spécifiques par des traitements thérapeutiques pourrait arrêter ou ralentir la progression de la maladie. Le principal avantage de ce modèle de SLE est qu'il utilise des souris sur un fond génétique pur CPD sept black six, ce qui permet aux chercheurs d'étudier rapidement et facilement la progression de la maladie chez des souches de souris transgéniques ou knock-out en une période relativement courte.Après avoir isolé et injecté les cellules donneuses BM 12 chez des souris, déterminé l'efficacité de la greffe et euthanasié les souris conformément au protocole décrit, vaporisez légèrement de l'éthanol à 70 % pour humidifier l'abdomen de la souris à l’aide de ciseaux chirurgicaux. Effectuez une petite incision superficielle d’environ un centimètre au-dessus des organes génitaux, puis

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Cette vidéo montre comment provoquer hypophysite auto-immunes chez la souris SJL et comment évaluer sa gravité par histopathologie.

L&#39;induction de hypophysite auto-immune expérimentale chez la souris SJL

La vidéo démontre l’induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin en injectant une combinaison de glycoprotéines oligodendrocytaires de myéline et de Mycobacterium tuberculosis inactivé. Le modèle permet aux chercheurs d’étudier les mécanismes de la maladie et de tester des interventions thérapeutiques.

Induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin

Dans cette vidéo, un modèle murin de sclérose en plaques est établi à l’aide d’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). On injecte à la souris une émulsion contenant un peptide neuronal et un adjuvant, déclenchant une réponse immunitaire qui active les lymphocytes T autoréactifs. Ceci est suivi d’une injection de toxine coquelucheuse (PTX) pour augmenter la perméabilité de la barrière hémato-encéphalique, permettant aux lymphocytes T autoréactifs d’infiltrer le cerveau. Cette...

Encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle animal établi de la sclérose en plaques. Souris C57BL / 6 sont immunisées avec la myéline oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), entraînant une paralysie flasque ascendante causée par des cellules immunitaires auto-réactifs dans le système nerveux central. Protocoles pour l'induction et la surveillance des maladies seront discutés.

Myéline Oligodendrocyte glycoprotéine (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induit encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) dans C57BL / 6

Ce manuscrit décrit les méthodes d’induction et de notation du modèle expérimental d’encéphalomyélite auto-immune (EAE), ainsi que l’évaluation de la distribution des cellules immunitaires et des niveaux de cytokines à ARNm dans les ganglions lymphatiques, la rate, le sang et la moelle épinière à l’aide de la cytométrie en flux et de la PCR quantitative, respectivement, à diverses phases de la maladie.

Induction of Experimental encéphalomyélite allergique chez la souris et l&#39;évaluation de la distribution des maladies dépendant des cellules immunitaires dans divers tissus

Ce protocole décrit comment déterminer si les traitements pharmacologiques de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale présentent une protection du SNC à la suite de la suppression de l’infiltration des cellules immunitaires ou s’ils sont neuroprotecteurs lors de l’assaut de l’infiltration des cellules immunitaires.

Détermination Suppression du système immunitaire contre la protection du système nerveux central pour les interventions pharmacologiques dans démyélinisation autoimmune

Ici nous présentons une méthode efficace pour étudier l'activité antifibrotique des cellules stromal humaines infusées par voie intraveineuse injectées obtenues du cordon ombilical entier suivant l'induction des dommages de poumon par une injection endotracheal de bleomycin dans C57BL /6 souris. Ce protocole peut être facilement étendu aux tests précliniques d'autres traitements.

Induction de blessure pulmonaire de souris par injection endotrachéale de bleomycine

Le présent protocole décrit une méthode pour suivre la progression du lupus chez la souris. Deux procédures supplémentaires sont présentées pour caractériser la néphrite lupique basée sur l’infiltration cellulaire et le dépôt de protéines dans les reins.

Analyses de la protéinurie, de l’infiltration rénale des leucocytes et du dépôt rénal de protéines chez les souris LMR/LPR sujettes au lupus

Le présent protocole décrit l’induction d’une encéphalomyélite auto-immune expérimentale dans un modèle murin utilisant la glycoprotéine oligodendrocytaire de myéline et la surveillance du processus de la maladie à l’aide d’un système de notation clinique. Les symptômes expérimentaux liés à l’encéphalomyélite auto-immune sont analysés à l’aide d’une micro-tomodensitométrie du fémur de souris et d’un test en plein champ pour évaluer le processus de la maladie de manière exhaustive.

Induction et divers indicateurs d’évaluation de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale

L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale est l’un des modèles murins les plus utilisés de la sclérose en plaques. Dans le protocole actuel, les souris C57BL/6J des deux sexes sont immunisées avec le peptide glycoprotéique oligodendrocytaire de myéline, ce qui entraîne principalement une parésie ascendante de la queue et des membres. Nous discutons ici du protocole d’induction et d’évaluation de l’EAE.

Modélisation de la sclérose en plaques chez les deux sexes : encéphalomyélite auto-immune expérimentale induite par MOG35-55

Ici, nous rapportons un protocole établissant un modèle murin de polyarthrite rhumatoïde (PR) par transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ de souris SKG, fournissant un outil expérimental rapide et fiable pour étudier les mécanismes immunologiques, la progression pathologique et le développement de nouveaux traitements pour la PR.

Un modèle de transfert adoptif de la polyarthrite rhumatoïde chez la souris

Découvrez la caractérisation des cellules T folliculaires auxiliaires, des cellules B du centre germinatif et des plasmocytes par cytométrie en flux dans le modèle bm12 de lupus érythémateux disséminé chez la souris C57BL/6.

Le bm12 inductible modèle du lupus érythémateux disséminé (SLE) dans C57BL / 6

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