Name: Bactérienne Feuille Infiltration Essai de caractérisation fine des réponses de défense des plantes à laide du Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystème (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 50 s
Description: Apprenez à quantifier la croissance de Pseudomonas syringae dans Arabidopsis thaliana par infiltration foliaire optimisée. Cette méthode permet d'évaluer précisément les réponses immunitaires des plantes.

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Nous remercions le Dr Shahid Mukhtar pour la critique du manuscrit et le Dr Xinnian Dong pour le fichier d’analyse des données de l’échantillon. Ce travail est soutenu par une bourse NSF-CAREER (IOS-1350244) à KPM et au département de biologie de l’UAB.

<ol><li>Glazebrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+mechanisms+of+defense+against+biotrophic+and+necrotrophic+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Phytopathol%22%5BJournal%5D)">Contrasting mechanisms of defense against biotrophic and necrotrophic pathogens.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 43, 205-227 (2005).</li>
<li>Hammond-Kosack, K. E., Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+disease+resistance+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Plant disease resistance genes.</a> Annual review of plant biolog. 48, 575-607 (1997).</li>
<li>Pontier, D., Balague, C., Roby, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypersensitive+response.+A+programmed+cell+death+associated+with+plant+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22C+R+Acad+Sci+II%22%5BJournal%5D)">The hypersensitive response. A programmed cell death associated with plant resistance.</a> C R Acad Sci II. 321, 721-734 (1998).</li>
<li>Ryals, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Acquired+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Systemic Acquired Resistance.</a> Plant Cel. 8, 1809-1819 (1996).</li>
<li>Jones, J. D., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">The plant immune system.</a> Natur. 444, 323-329 (2006).</li>
<li>Newman, M. A., Sundelin, T., Nielsen, J. T., Erbs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAMP+%28microbe-associated+molecular+pattern%29+triggered+immunity+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sc%22%5BJournal%5D)">MAMP (microbe-associated molecular pattern) triggered immunity in plants.</a> Front Plant Sc. 4, 139(2013).</li>
<li>Fritig, B., Heitz, T., Legrand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+proteins+in+induced+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial proteins in induced plant defense.</a> Curr Opin Immuno. 10, 16-22 (1998).</li>
<li>Nicaise, V., Roux, M., Zipfel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+PAMP-triggered+immunity+against+bacteria%3A+pattern+recognition+receptors+watch+over+and+raise+the+alarm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physio%22%5BJournal%5D)">Recent advances in PAMP-triggered immunity against bacteria: pattern recognition receptors watch over and raise the alarm.</a> Plant Physio. 150, 1638-1647 (2009).</li>
<li>Zipfel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+disease+resistance+in+Arabidopsis+through+flagellin+perception%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Bacterial disease resistance in Arabidopsis through flagellin perception.</a> Natur. 428, 764-767 (2004).</li>
<li>Kunze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+N+terminus+of+bacterial+elongation+factor+Tu+elicits+innate+immunity+in+Arabidopsis+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">The N terminus of bacterial elongation factor Tu elicits innate immunity in Arabidopsis plants.</a> Plant Cel. 16, 3496-3507 (2004).</li>
<li>Gust, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria-derived+peptidoglycans+constitute+pathogen-associated+molecular+patterns+triggering+innate+immunity+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Che%22%5BJournal%5D)">Bacteria-derived peptidoglycans constitute pathogen-associated molecular patterns triggering innate immunity in Arabidopsis.</a> J Biol Che. 282, 32338-32348 (2007).</li>
<li>Alfano, J. R., Collmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+III+secretion+system+effector+proteins%3A+double+agents+in+bacterial+disease+and+plant+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Type III secretion system effector proteins: double agents in bacterial disease and plant defense.</a> Annu Rev Phytopatho. 42, 385-414 (2004).</li>
<li>Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entering+and+breaking%3A+virulence+effector+proteins+of+oomycete+plant+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbio%22%5BJournal%5D)">Entering and breaking: virulence effector proteins of oomycete plant pathogens.</a> Cell Microbio. 11, 13-20 (2009).</li>
<li>He, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+bacterial+suppressors+of+MAMP+signaling+upstream+of+MAPKKK+in+Arabidopsis+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Specific bacterial suppressors of MAMP signaling upstream of MAPKKK in Arabidopsis innate immunity.</a> Cel. 125, 563-575 (2006).</li>
<li>Gimenez-Ibanez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AvrPtoB+targets+the+LysM+receptor+kinase+CERK1+to+promote+bacterial+virulence+on+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">AvrPtoB targets the LysM receptor kinase CERK1 to promote bacterial virulence on plants.</a> Curr Bio. 19, 423-429 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+PAMP-induced+MAP+kinase+cascade+by+a+Pseudomonas+syringae+effector+activates+plant+immunity+mediated+by+the+NB-LRR+protein+SUMM2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Disruption of PAMP-induced MAP kinase cascade by a Pseudomonas syringae effector activates plant immunity mediated by the NB-LRR protein SUMM2.</a> Cell Host Microb. 11, 253-263 (2012).</li>
<li>Chisholm, S. T., Coaker, G., Day, B., Staskawicz, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-microbe+interactions%3A+shaping+the+evolution+of+the+plant+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">Host-microbe interactions: shaping the evolution of the plant immune response.</a> Cel. 124, 803-814 (2006).</li>
<li>Jones, D. A., Takemoto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+innate+immunity+-+direct+and+indirect+recognition+of+general+and+specific+pathogen-associated+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immuno%22%5BJournal%5D)">Plant innate immunity - direct and indirect recognition of general and specific pathogen-associated molecules.</a> Curr Opin Immuno. 16, 48-62 (2004).</li>
<li>Elmore, J. M., Lin, Z. J., Coaker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+NB-LRR+signaling%3A+upstreams+and+downstreams%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Plant NB-LRR signaling: upstreams and downstreams.</a> Curr Opin Plant Bio. 14, 365-371 (2011).</li>
<li>Gassmann, W., Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector-triggered+immunity+signaling%3A+from+gene-for-gene+pathways+to+protein-protein+interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interac%22%5BJournal%5D)">Effector-triggered immunity signaling: from gene-for-gene pathways to protein-protein interaction networks.</a> Mol Plant Microbe Interac. 25, 862-868 (2012).</li>
<li>Wang, D., Weaver, N. D., Kesarwani, M., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+protein+secretory+pathway+is+required+for+systemic+acquired+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">Induction of protein secretory pathway is required for systemic acquired resistance.</a> Scienc. 308, 1036-1040 (2005).</li>
<li>Bednarek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+warfare+or+modulators+of+defence+responses+-+the+function+of+secondary+metabolites+in+plant+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Chemical warfare or modulators of defence responses - the function of secondary metabolites in plant immunity.</a> Curr Opin Plant Bio. 15, 407-414 (2012).</li>
<li>Heath, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+response-related+death%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol+Bio%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive response-related death.</a> Plant Mol Bio. 44, 321-334 (2000).</li>
<li>Fu, Z. Q., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+acquired+resistance%3A+turning+local+infection+into+global+defense%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Bio%22%5BJournal%5D)">Systemic acquired resistance: turning local infection into global defense.</a> Annu Rev Plant Bio. 64, 839-863 (2013).</li>
<li>Cao, H., Glazebrook, J., Clarke, J. D., Volko, S., Dong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+gene+that+controls+systemic+acquired+resistance+encodes+a+novel+protein+containing+ankyrin+repeats%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 gene that controls systemic acquired resistance encodes a novel protein containing ankyrin repeats.</a> Cel. 88, 57-63 (1997).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+NPR1+protein+is+a+receptor+for+the+plant+defense+hormone+salicylic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Re%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis NPR1 protein is a receptor for the plant defense hormone salicylic acid.</a> Cell Re. 1, 639-647 (2012).</li>
<li>Smith, J. M., Heese, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+bioassay+to+measure+early+reactive+oxygen+species+production+in+Arabidopsis+leave+tissue+in+response+to+living+Pseudomonas+syringae%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Rapid bioassay to measure early reactive oxygen species production in Arabidopsis leave tissue in response to living Pseudomonas syringae.</a> Plant Method. 10, 6(2014).</li>
<li>Nomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+bacterial+virulence+protein+suppresses+host+innate+immunity+to+cause+plant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Scienc%22%5BJournal%5D)">A bacterial virulence protein suppresses host innate immunity to cause plant disease.</a> Scienc. 313, 220-223 (2006).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+thaliana-Pseudomonas+syringae+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Arabidopsis+book%2FAmerican+Society+of+Plant+Biologist%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction.</a> The Arabidopsis book/American Society of Plant Biologist. 1, (2002).</li>
<li>Sawada, H., Suzuki, F., Matsuda, I., Saitou, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+analysis+of+Pseudomonas+syringae+pathovars+suggests+the+horizontal+gene+transfer+of+argK+and+the+evolutionary+stability+of+hrp+gene+cluster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Evo%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic analysis of Pseudomonas syringae pathovars suggests the horizontal gene transfer of argK and the evolutionary stability of hrp gene cluster.</a> J Mol Evo. 49, 627-644 (1999).</li>
<li>Xin, X. F., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%3A+a+model+pathogen+for+probing+disease+susceptibility+and+hormone+signaling+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phytopatho%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000: a model pathogen for probing disease susceptibility and hormone signaling in plants.</a> Annu Rev Phytopatho. 51, 473-498 (2013).</li>
<li>Dong, X., Mindrinos, M., Davis, K. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+Arabidopsis+defense+genes+by+virulent+and+avirulent+Pseudomonas+syringae+strains+and+by+a+cloned+avirulence+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cel%22%5BJournal%5D)">Induction of Arabidopsis defense genes by virulent and avirulent Pseudomonas syringae strains and by a cloned avirulence gene.</a> Plant Cel. 3, 61-72 (1991).</li>
<li>Mackey, D., Holt 3rd, B. F., Wiig, A., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RIN4+interacts+with+Pseudomonas+syringae+type+III+effector+molecules+and+is+required+for+RPM1-mediated+resistance+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cel%22%5BJournal%5D)">RIN4 interacts with Pseudomonas syringae type III effector molecules and is required for RPM1-mediated resistance in Arabidopsis.</a> Cel. 108, 743-754 (2002).</li>
<li>Tornero, P., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high%E2%80%90throughput+method+for+quantifying+growth+of+phytopathogenic+bacteria+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journa%22%5BJournal%5D)">A high‐throughput method for quantifying growth of phytopathogenic bacteria in Arabidopsis thaliana.</a> The Plant Journa. 28, 475-481 (2001).</li>
<li>Ishiga, Y., Ishiga, T., Uppalapati, S. R., Mysore, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+seedling+flood-inoculation+technique%3A+a+rapid+and+reliable+assay+for+studying+plant-bacterial+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Method%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis seedling flood-inoculation technique: a rapid and reliable assay for studying plant-bacterial interactions.</a> Plant Method. 7, 32(2011).</li>
<li>Zheng, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronatine+promotes+Pseudomonas+syringae+virulence+in+plants+by+activating+a+signaling+cascade+that+inhibits+salicylic+acid+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microb%22%5BJournal%5D)">Coronatine promotes Pseudomonas syringae virulence in plants by activating a signaling cascade that inhibits salicylic acid accumulation.</a> Cell Host Microb. 11, 587-596 (2012).</li>
<li>Pajerowska-Mukhtar, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HSF-like+transcription+factor+TBF1+is+a+major+molecular+switch+for+plant+growth-to-defense+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Bio%22%5BJournal%5D)">The HSF-like transcription factor TBF1 is a major molecular switch for plant growth-to-defense transition.</a> Curr Bio. 22, 103-112 (2012).</li>
<li>Rusterucci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+resistance+to+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+is+associated+with+the+transition+to+flowering+in+Arabidopsis+and+is+effective+against+Peronospora+parasitica%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+molecular+plant+patholog%22%5BJournal%5D)">Age-related resistance to Pseudomonas syringae pv. tomato is associated with the transition to flowering in Arabidopsis and is effective against Peronospora parasitica.</a> Physiological and molecular plant patholog. 66, 222-231 (2005).</li>
<li>Boyes, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+stage%E2%80%93based+phenotypic+analysis+of+Arabidopsis+a+model+for+high+throughput+functional+genomics+in+plants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Growth stage–based phenotypic analysis of Arabidopsis a model for high throughput functional genomics in plants.</a> The Plant Cell Onlin. 13, 1499-1510 (2001).</li>
<li>Regna, P. P., Wasselle, L. A., Solomons, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stability+of+streptomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistr%22%5BJournal%5D)">The stability of streptomycin.</a> Journal of Biological Chemistr. 165, 631-638 (1946).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+of+plant+immune+responses+by+a+central+circadian+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Natur%22%5BJournal%5D)">Timing of plant immune responses by a central circadian regulator.</a> Natur. 470, 110-114 (2011).</li>
<li>Hua, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+plant+immunity+by+light%2C+circadian+rhythm%2C+and+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+plant+biolog%22%5BJournal%5D)">Modulation of plant immunity by light, circadian rhythm, and temperature.</a> Current opinion in plant biolog. 16, 406-413 (2013).</li>
<li>Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbio%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Appl Environ Microbio. 54, 629-632 (1988).</li>
<li>Qutob, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phytotoxicity+and+innate+immune+responses+induced+by+Nep1-like+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell+Onlin%22%5BJournal%5D)">Phytotoxicity and innate immune responses induced by Nep1-like proteins.</a> The Plant Cell Onlin. 18, 3721-3744 (2006).</li>
<li>Pimentel, D., Lach, L., Zuniga, R., Morrison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+and+economic+costs+of+nonindigenous+species+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22BioScienc%22%5BJournal%5D)">Environmental and economic costs of nonindigenous species in the United States.</a> BioScienc. 50, 53-65 (2000).</li>
<li>Zeng, W., Melotto, M., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata%3A+a+checkpoint+of+host+immunity+and+pathogen+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+biotechnolog%22%5BJournal%5D)">Plant stomata: a checkpoint of host immunity and pathogen virulence.</a> Current opinion in biotechnolog. 21, 599-603 (2010).</li>
<li>Ton, J., Flors, V., Mauch-Mani, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+multifaceted+role+of+ABA+in+disease+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+plant+scienc%22%5BJournal%5D)">The multifaceted role of ABA in disease resistance.</a> Trends in plant scienc. 14, 310-317 (2009).</li>
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</ol>

Les auteurs ont rien à révéler.

Avec la diminution des terres agricoles disponibles et augmentation de la population, les chercheurs du monde entier sont mis au défi avec des besoins urgents pour l&#39;amélioration des cultures. Le rendement peut être grandement influencée par divers stress biotiques et abiotiques. Parmi eux, une infection pathogène est l&#39;une des principales causes de la baisse de rendement des cultures, responsable d&#39;environ 12% de pertes dans les États-Unis seuls 45. Pour résoudre ce problème, la recherche massive...

En raison de leur nature sessiles, les plantes sont constamment menacés par une pléthore d&#39;agents pathogènes présentant différents modes de vie et des stratégies nutritionnelles 1. En première approximation, les agents pathogènes biotrophes maintiennent leur hôte vivante pour récupérer les nutriments, tandis que les agents pathogènes et les toxines nécrotrophes enzymes activement secrets pour tuer le tissu hôte et se nourrissent sur ​​les cellules mortes 1. Un autre groupe d&#39;agents pathogènes, hemibiotrophs appelés, commence leur cours de l&#39;infection par le stade biotrophe et les changements à l&#39;étape nécrotrophe après avoir atteint un certain seuil de pathogène accumulation 2. Afin de se défendre efficacement contre ces micro-organismes, les plantes ont développé un système immunitaire inné compliquée équipé de mécanismes de surveillance multiples pour détecter l&#39;attaque d&#39;agents pathogènes et de déclencher localisée mort cellulaire programmée 3 ainsi que la résistance systémique acquise (SAR) 4. La recherche actuelle est axée sur la caractérisation de la sig essentielcomposants naling et croisées pourparlers dans le système immunitaire de la plante 5. Comme proposé dans le modèle &quot;Zig-Zag&quot; 5, la première couche de l&#39;usine de la réponse immunitaire innée nécessite la présence de plasma membrane localisée Motif Recognition Receptors (PRR) pour détecter l&#39;invasion d&#39;un microbe. PRR sont capables de reconnaître des modèles Microbe-Associated Molecular (MAMPS) et d&#39;établir l&#39;immunité MAMP-Triggered (MTI) 6. Outre induire une régulation positive de la transcription des gènes codant pour des protéines PR antimicrobiens 7, MTI conduit à une variété d&#39;événements qui arrête la croissance des pathogènes, y compris la production d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène (ROS) et de l&#39;azote réactif espèces (RNS), le dépôt de callose à la paroi cellulaire ainsi que l&#39;activation de la signalisation de la kinase de multiples voies 8. Jusqu&#39;à présent, plusieurs MAMPS ont été identifiés pour déclencher MTI chez Arabidopsis, y compris Flg22 bactérienne 9 </sup&gt; (Un fragment d&#39;acide 22 aminés dérivée de la flagelline), 10 (18 elf18 acides aminés de la traduction bactérienne facteur d&#39;élongation Tu) et une pièce de structure de la paroi cellulaire 11 peptidoglycanes. Pour établir une infection réussie, certains agents pathogènes spécialisés ont évolué la capacité de protéines secrets virulence effectrices dans les espaces intracellulaires ou intercellulaires, et par conséquent réprimer MTI et de déclencher sensibilité effecteur-Triggered (ETS) 12,13. Par exemple, les effecteurs de virulence peuvent inactiver mitogen-activated protein kinase (MAPK) phosphorylation cascades de MTI pour induire le développement de la maladie dans le tissu infecté 14-16. Lors de la co-évolution dynamique entre hôtes et pathogènes, les plantes ont également développé la stratégie de contre-attaque de reconnaître les protéines effectrices et atténuer la virulence des agents pathogènes 17 molécules. Cette reconnaissance directe ou indirecte effecteur est médiée par la résistance aux maladies (R) 18 protéines. La plupart des tourlet sont membres de NB-LRR (Nucleotide Binding et riche en leucine répétitions) famille 19. La perception d&#39;un effecteur avirulent par une protéine R provoque une réponse immunitaire plus forte et plus large que l&#39;immunité caractérisé effecteur-Triggered (ETI) 20. Outre induire l&#39;expression de gènes de défense 21 et la production de métabolites de la défense 22, ETI conduit souvent à une mort rapide localisée cellulaire programmée connu comme réponse hypersensible (HR) pour restreindre l&#39;agent pathogène de se propager dans le tissu adjacent 3. En plus de l&#39;localisé mort cellulaire programmée 23, les plantes sont capables d&#39;initier une longue durée et la réponse immunitaire systémique appelée résistance systémique acquise (SAR) 4. Lors de l&#39;épreuve avec un agent pathogène biotrophe, les cellules végétales déclenchent la biosynthèse et l&#39;accumulation d&#39;un acide salicylique de phytohormone endogène (SA) et des protéines PR dans les deux tissus locaux et systémiques 24. Grâce à tsa démarche, un état ​​de préparation est réalisée dans les feuilles non infectées qui permet de monter des réponses plus rapides de la défense au cours d&#39;une infection ultérieure par un large spectre d&#39;agents pathogènes 24. SA et ses analogues synthétiques tels que le benzo (1,2,3) -thiadiazole-7-carbothioïque ester de l&#39;acide S-méthyl (BTH) et l&#39;acide 2,6-dichloro-isonicotinique (INA) sont capables d&#39;induire chimiquement l&#39;acide salicylique (SA) Immunité -Triggered (IST) à la demande externe 24. Nonexpressor de la pathogenèse-Les gènes associés (1 NPR1) est proposé pour être l&#39;un des récepteurs et des fonctions SA en tant que régulateur transcriptionnel majeur au cours de la réaction de défense SA-médiation dans les deux tissus locaux et systémiques 21,25,26. Il a été démontré de façon concluante que NPR1 est nécessaire à l&#39;établissement SAR et la perte de NPR1 mène à susceptibilité dramatique vers Pseudomonas syringae 25. Pour caractériser largement la contribution moléculaire de l&#39;usinecomposants dans les interactions plante-pathogène, de multiples essais biologiques ont été développés pour mesurer des événements spécifiques de la défense, y compris ROS éclatement 27, dépôt de callose 28, l&#39;expression des gènes de défense et l&#39;accumulation de leurs produits protéiques 21. Bien que ces dosages individuels peuvent fournir des indications sur une forme spécifique de la réponse immunitaire de la plante, aucun d&#39;entre eux, cependant, sont en mesure de représenter la réponse complète de la défense au niveau de la plante entière. A l&#39;inverse, la quantification de l&#39;évolution de l&#39;infection par l&#39;agent pathogène après fournit une estimation globale de la réponse immunitaire au niveau des organismal. Par conséquent, le développement et l&#39;optimisation d&#39;un test pathogène inoculation précis et hautement normalisé est essentiel pour alimenter la recherche et les découvertes sur les réponses immunitaires Arabidopsis. Pseudomonas syringae, une bactérie à Gram-négatif, a été identifié comme un phytopathogène capable de provoquer une maladie chez une gamme de plantes hôtes y compris Arabidopsest 29. Comme le système plante-pathogène modèle, Arabidopsis - P. interaction syringae a été largement appliqué à comprendre les mécanismes moléculaires sous-jacents réponses végétales défense 29. Jusqu&#39;à maintenant, plus de 50 P. pathovars syringae ont été identifiés sur la base de leur capacité à infecter les 30 espèces végétales différentes . P. syringae pv. DC3000 de tomate (Pst DC3000) 31 et P. syringae pv. maculicola ES4326 (PSM ES4326) 32 sont les deux souches virulentes plus largement utilisés et largement caractérisés. En plus d&#39;être reconnu par la plante et le déclenchement de la réponse MTI, Pst DC3000 et PSM ES4326 sont capables de sécréter des protéines effectrices virulentes de supprimer MTI et de déclencher ETS de favoriser la croissance de 31,33 pathogène. Pour disséquer fonctionnellement l&#39;interaction entre Arabidopsis et P. syringae, multiple0; méthodes d&#39;infection des agents pathogènes ont été développés sur la base de l&#39;approche de prestation des agents pathogènes. Pour les plantes des sols cultivés, agent pathogène peut être délivré par la seringue infiltration, infiltration sous vide, dip inoculation et inoculation par pulvérisation 29,34. Récemment, des semis dosage inondations inoculation a été développé pour effectuer des écrans de grande envergure sur la culture de tissus plaques cultivés jeunes plants d&#39;Arabidopsis 35. Seringue infiltration, comme l&#39;un de l&#39;approche la plus couramment utilisée, délivre manuellement l&#39;agent pathogène dans le apoplaste à travers les ouvertures de la feuille naturelle appelés stomates 29. Grâce à cette approche, des quantités égales de P. syringae peut être infiltré dans la feuille infectée et la force de la réponse immunitaire de la plante est inversement corrélée aux niveaux de croissance des agents pathogènes. Par conséquent, la quantification de la croissance de l&#39;agent pathogène sert une approche optimale pour évaluer la fonction immunitaire au niveau de la plante entière. En outre, une seringue infiltration peut distinguer le tissu local et systémique, qui peut be applicable à caractériser les mécanismes moléculaires sous-jacents SAR 36. Dans le protocole suivant, nous décrivons une seringue infiltration dosage optimisé avec Psm ES4326 pour cribler des mutants d&#39;Arabidopsis pour une meilleure sensibilité à la maladie (EDS). Ce protocole consiste à employer deux génotypes d&#39;Arabidopsis: une de type sauvage écotype Columbia-0 (Col-0) plantes (contrôle) et des mutants npr1-1 perte de fonction (hypersensible) qui seront infectés avec la souche bactérienne virulente Psm ES4326 37. Le mutant npr1-1 porte une mutation ponctuelle dans la séquence consensus de répétition ankyrine-NPR1 de la molécule, ce qui modifie l&#39;histidine hautement conservé de tyrosine et rend la protéine non fonctionnelle 25. En outre, un certain nombre de modifications de la seringue de dosage infiltration sont décrits qui permettent la quantification des défauts dans les couches spécifiques de la réponse immunitaire, y compris MTI et IST.

<table><tbody><tr><td>MetroMix 360° ;</td><td>Grosouth</td><td>SNGMM360</td><td></td></tr><tr><td>Grands pots</td><td>Grosouth</td><td>TEKUVCC10TC</td><td></td></tr><tr><td>12 x 6 Inserts</td><td>Grosouth</td><td>LM1206</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 Appartements sans trous</td><td>Grosouth</td><td>LM1020</td><td></td></tr><tr><td>11x 21 Appartements avec trous</td><td>Grosouth</td><td>LM1020H</td><td></td></tr><tr><td>Dômes de propagation en vinyle</td><td>Grosouth</td><td>CW-221</td><td></td></tr><tr><td>Proteose Peptone</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0122-17-4</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium dibasique trihydraté</td><td>MP Biomedicals</td><td>151946</td><td></td></tr><tr><td>Agar&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A360-500</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de streptomycine</td><td>Bio Basic Inc</td><td>SB0494</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mm Boîtes de Pétri</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td></td></tr><tr><td>150 x 15 mm Boîtes de Pétri</td><td>Fisher Scientific</td><td>R80150</td><td></td></tr><tr><td>Plaque rectangulaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-450&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 Hexahydrate</td><td>Bio Basic Inc</td><td>MB0328</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Bio Basic Inc</td><td>GB0232</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp ; </td><td>Bio Basic Inc</td><td>MN1988</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 1 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9992493&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666-A</td><td></td></tr><tr><td>Tubes de broyage&nbsp ;</td><td>Denville Scientific</td><td>B1257</td><td></td></tr><tr><td>Capuchons pour tubes de broyage</td><td>Denville Scientific</td><td>B1254</td><td></td></tr><tr><td>Boule de broyage en acier inoxydable</td><td>Fisher Scientific</td><td>2150</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 96 puits&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-556-008</td><td></td></tr><tr><td>Salicylate</td><td>de sodium Sigma Aldrich</td><td>s3007-1kg</td><td></td></tr><tr><td>flg22 (QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA)</td><td>Genescript</td><td>Sur commande</td><td></td></tr><tr><td>elf18 (Ac-SKEKFERTKPHVNVGTIG)</td><td>Genescript</td><td>Sur commande</td><td></td></tr><tr><td>Perforatrice</td><td>Agrafes</td><td>146308</td><td></td></tr><tr><td>Biophotomètre plus</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td>952000006</tr><tr><td>Homogénéisateur à haut débit PowerGen</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-503</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugeuse à spin accu</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-100-675</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multicanaux (10-100 &micro ; l)</td><td>Eppendorf</td><td>3122 000.043</td><td></td></tr><tr><td>Pipette multicanaux (30-300 &micro ; l)</td><td>Eppendorf</td><td>3122 000.060</td><td></td></tr><tr><td>Pipette (20&micro ; l)</td><td>Eppendorf</td><td>3120 000.038</td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>3552-HR</td><td></td></tr><tr><td>Sharpie marqueur permanent</td><td>Agrafes</td><td>507130</td><td></td></tr><tr><td>Tube de 1,5 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>Pince</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-890</td><td></td></tr></tbody></table>

bactérienne feuille infiltration essai de caractérisation fine des réponses de défense des plantes à l&#39;aide du<em&gt; arabidopsis thaliana-pseudomonas syringae</em&gt; pathosystème

Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem

En l&#39;absence de cellules immunitaires mobiles spécialisées, les plantes utilisent leur mort cellulaire programmée localisée et systémique résistance acquise à se défendre contre les attaques de pathogènes. La contribution d&#39;un gène d&#39;Arabidopsis spécifique à la réponse immunitaire de l&#39;installation globale peut être spécifiquement et évalué quantitativement par dosage de la croissance de l&#39;agent pathogène dans le tissu infecté. Pendant plus de trois décennies, la bactérie hémibiotrophe Pseudomonas syringae pv. Maculicola ES4326 (PSM ES4326) a été largement appliquée comme le modèle pathogène pour étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents de la réponse immunitaire Arabidopsis. Afin de fournir des agents pathogènes dans les tissus foliaires, de multiples méthodes de vaccination ont été mis en place, par exemple, une seringue infiltration, dip inoculation, pulvérisation, infiltration sous vide, et l&#39;inoculation d&#39;inondation. Le protocole suivant décrit une méthode d&#39;infiltration seringue optimisé pour fournir virulente Psm ES4326 dans les feuilles de l&#39;adultesol cultivé des plants d&#39;Arabidopsis et l&#39;écran avec précision pour une meilleure sensibilité à la maladie (EDS) en direction de cet agent pathogène. En outre, ce protocole peut être complétée avec de multiples pré-traitements pour disséquer défauts immunitaires spécifiques au sein des différentes couches de défense de la plante, y compris l&#39;acide salicylique (SA) Immunité -Triggered (IST) et immunitaires MAMP-Triggered (MTI).

Le protocole que nous décrivons ici représente un P. optimisé syringae essai seringue d&#39;infiltration d&#39;évaluer quantitativement la réponse immunitaire dans des plantes Arabidopsis. Comme illustré sur la figure 1, l&#39;infiltration de la seringue de la MSP ES4326 est suivie par l&#39;extraction et la quantification de l&#39;agent pathogène par des dilutions en série et colonies énumération. Comme décrit dans l&#39;étape 3 dans le t...

La quantification de la croissance des agents pathogènes est un outil puissant pour caractériser diverses réponses immunitaires d’Arabidopsis thaliana (ci-après : Arabidopsis). La méthode décrite ici présente un test d’infiltration à la seringue optimisé pour quantifier le Pseudomonas syringae pv. maculicola Croissance d’ES4326 dans les feuilles adultes d’Arabidopsis.

Bactérienne Feuille Infiltration Essai de caractérisation fine des réponses de défense des plantes à l&#39;aide du<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystème

In the absence of specialized mobile immune cells, plants utilize their localized programmed cell death and Systemic Acquired Resistance to defend ...

L'objectif général de cette procédure est de caractériser quantitativement la réponse immunitaire d'Arabidopsis diliana au moyen d'un dosage d'infiltration à la seringue optimisé. Cela est réalisé en premier lieu par l'utilisation de l'infiltration à la seringue pour introduire manuellement des bactéries dans la feuille par les ouvertures naturelles appelées sada. La deuxième étape consiste à prélever des disques de tissu foliaire infecté après l'apparition des symptômes de la maladie.Ensuite, les bactéries sont extraites des disques foliaires par homogénéisation à haut débit. La dernière étape consiste en des dilutions sériées et en leur dépôt sur des plaques de dénombrement bactérien afin de comptabiliser les colonies. En définitive, la croissance bactérienne au sein de chaque disque foliaire peut être corrélée à l'intensité relative de la réponse immunitaire de la plante.Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l'immunité végétale, comme l'identification des gènes contribuant aux réponses de défense contre les stress biotiques. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes réside dans sa capacité à quantifier précisément la croissance du pathogène dans le tissu végétal infecté, tout en aidant à éviter les erreurs expérimentales dues à l'échantillonnage de feuilles présentant des stades de développement variés. Cette méthode permet d'obtenir des informations sur la réponse immunitaire de la plante face à une infection par un pathogène bactérien virulent, et elle peut également être appliquée à d'autres systèmes, tels que les réponses immunitaires induites par l'acide salicylique ou par des motifs moléculaires associés aux microbes.En général, les personnes novices dans cette méthode éprouveront des difficultés à introduire les bactéries dans la feuille sans endommager le tissu. La procédure suivante sera démontrée par le chercheur postdoctoral Hindu et les étudiants diplômés Shalu et Yali. Sous peu, depuis mon laboratoire, le test d'augmentation de la sensibilité aux maladies sera démontré dans cette vidéo.Avant l'expérience, préparez des boîtes de milieu King's B ou milieu KB ; préparez un litre de milieu solide KB comme décrit dans le texte du protocole et laissez-le refroidir sur un agitateur magnétique. Lorsque le milieu est refroidi au toucher, ajoutez du glycérol à 80 %, un sulfate de magnésium à une molaire et de la streptomycine au milieu, puis versez le milieu sur deux tailles différentes de boîtes de milieu KB. La boîte de Pétri plus petite sert de boîte de culture bactérienne primaire, tandis que la grande boîte de Pétri sert de boîte de dénombrement bactérien.Conserver les plaques à quatre degrés Celsius pendant deux jours avant la stérilisation pour le test. PSM ES 43 26. Prélever des bactéries à partir d'un stock glycérolé à moins 80 degrés Celsius sur une plaque de culture bactérienne KB strep et incuber à 28 degrés Celsius pendant 24 à 48 heures le jour suivant.Initier la culture liquide dans un tube à essai stérile avec quatre millilitres de milieu liquide KB contenant 50 microgrammes par millilitre de streptomycine. Agiter à 250 tr/min à 28 degrés Celsius pendant la nuit. Les plantes d'Arabidopsis destinées à l'expérience sont cultivées dans des conditions détaillées dans le texte du protocole le même jour où la culture bactérienne liquide est initiée.Marquez les pétales des feuilles numéro cinq et six avec un marqueur émoussé et imperméable pour faciliter l'identification du tissu infecté lors de l'échantillonnage. Pour favoriser l'ouverture des STA et faciliter l'entrée de la solution pathogène dans l'eau foliaire, arrosez bien les plantes en imbibant le plateau par le bas pendant 20 minutes.Au bout de 20 minutes, éliminer l'excès d'eau. L'infection des plantes d'arabidopsis est réalisée le jour suivant le début de la culture liquide.Transférez la culture bactérienne dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre et centrifugez à 9 600 g pendant deux minutes. À température ambiante, jetez le surnageant et resuspendez le culot bactérien avec un millilitre de chlorure de magnésium stérile à 10 millimolaire. Diluez la suspension bactérienne avec neuf millilitres de chlorure de magnésium à 10 millimolaire dans un tube de centrifugeuse de 50 millilitres. Après avoir mesuré la densité optique des bactéries, diluez-les avec du chlorure de magnésium à 10 millimolaire jusqu’à une densité optique finale à 600 nm de 0,0002.Pour le test d'infection EDS. Une seringue de un millilitre à embout émoussé sans aiguille, couramment appelée seringue à insuline, est utilisée pour l'infiltration. Remplir la seringue avec 0,5 à 0,6 millilitre de la solution bactérienne diluée afin d'obtenir un meilleur contrôle durant le processus d'infiltration ; ne pas remplir la seringue à sa capacité maximale.Exposer la surface inférieure de la feuille sur le dessus du doigt index, puis, à l'aide du pouce, ajuster délicatement la position de la feuille. Placer la seringue verticalement contre la surface de la feuille afin d'assurer une répartition uniforme de la pression et réduire ainsi les dommages foliaires. Éviter autant que possible la zone de la nervure médiane lors de l'infiltration.Poussez lentement le piston pour infiltrer la solution bactérienne. L'entrée du liquide dans le mésophylle foliaire sera visualisée par l'assombrissement de la couleur de la feuille ; assurez-vous d'infiltrer toute la surface de la feuille, même si plusieurs tentatives sont nécessaires. Une fois l'infiltration terminée, tamponnez délicatement la feuille avec du papier absorbant afin d'éliminer l'excès de solution pathogène.Inspecter visuellement le tissu foliaire infecté pour détecter les dommages. Laisser les plantes infiltrées sécher pendant une à deux heures, puis replacer les plantes dans leurs conditions de croissance initiales. Pulvériser de l'eau sur un dôme transparent et couvrir les plantes infectées pendant deux heures.Ensuite, fendez le dôme pour créer une ouverture de deux à trois pouces et laissez-le en place pendant le reste de l'expérience d'infection, qui dure généralement trois jours. Un jour avant de quantifier la croissance du pathogène, prédesséchez les plaques de milieu KB de 150 millimètres par 15 millimètres.Séchez les plaques en les maintenant à température ambiante pendant environ 24 heures. Traitez le tissu infecté après l'apparition de la sclérose, indiquée par le jaunissement du tissu infecté chez les génotypes sensibles, mais avant le développement de lésions nécrotiques. Pour chaque génotype, préparez six tubes de broyage.Placer une bille de broyage en acier inoxydable et ajouter 500 microlitres de chlorure de magnésium stérile à 10 millimolaire dans chaque tube. Ensuite, détacher la feuille infectée de la plante et prélever un disque foliaire à l’aide d’un perforateur à un trou et de pinces de manière aléatoire, puis placer deux disques foliaires provenant de deux plantes différentes dans chaque tube de broyage. Fermer hermétiquement les tubes et homogénéiser les tissus à l’aide d’un homogénéisateur à haut débit à vitesse maximale pendant 10 minutes.Répétez ce processus si nécessaire jusqu'à ce que le tissu soit bien homogénéisé et que les solutions deviennent vertes en raison du relargage de la chlorophylle provenant des feuilles infectées pendant l'attente. Pour l'homogénéisation, remplissez chaque puits des six premières rangées d'une plaque de culture à 96 puits avec 180 microlitres de chlorure de magnésium à 10 millimolaire. Transférez 20 microlitres de la suspension de tissu broyé dans chaque puits de la première rangée de la plaque à 96 puits et mélangez en aspirant et en expulsant le liquide plusieurs fois à l’aide d’une pipette.Si de petits fragments de tissu obstruent l'embout, coupez-en deux à trois millimètres afin de faciliter la prise du volume correct de solution, ce qui permettra de disposer d'un espace suffisant pour la goutte en haut de la plaque. Répartissez les tissus provenant de génotypes différents en alternant les rangées. Pour préparer une dilution sérielle dix fois, transférez 20 microlitres de la suspension tissulaire dans la deuxième rangée et répétez cette procédure jusqu'à la sixième dilution. À l'aide d'embouts de pipette divisés, transférez 20 microlitres de la solution depuis la plaque à 96 puits vers la plaque KB de 150 millimètres par 15 millimètres.Travaillez en commençant par la suspension la plus diluée jusqu'à la plus concentrée afin qu'il ne soit pas nécessaire de changer les embouts de pipette entre les dilutions. Séchez la plaque à température ambiante avec le couvercle entrouvert. Une fois qu'aucun liquide n'est plus visible à la surface de la plaque, fermez le couvercle, retournez la plaque et incubez-la à température ambiante.Incuber les boîtes pendant 40 à 60 heures jusqu'à ce que les colonies deviennent visibles. Vérifier que les bactéries sur les boîtes reflètent la diminution prévisible d'un facteur dix des unités formant des colonies.Compter les bactéries avant qu'elles ne surcroissent et que les colonies ne fusionnent. Déterminer le nombre de bactéries dans la dilution la plus faible ne présentant pas de colonies chevauchantes. Habituellement, la dilution privilégiée à compter contiendra entre 10 et 50 colonies, et peut varier selon les réplicats techniques.Pour calculer les niveaux de prolifération bactérienne, déterminez le nombre d'unités formant des colonies par disque foliaire à l'aide de cette formule, où R correspond au nombre de la rangée et T au nombre de bactéries dans chaque réplicat technique. Les données sont ensuite utilisées pour produire un graphique. Chaque point de données est représenté comme la moyenne de six réplicats techniques sur une échelle logarithmique.Les barres représentent l'intervalle de confiance à 95 % de la moyenne de la maladie aggravée. La susceptibilité au P-S-M-E-S 43 26 a été évaluée par infection avec un inoculum ayant une DO à 600 de 0,0002. Les résultats montrent que les mutants NPR un trait d'union un hautement sensibles présentent une croissance du pathogène d'environ 2,5 log, soit 300 fois plus importante, par rapport aux plantes de type sauvage Columbia zéro.Le test d'infiltration par seringue peut être modifié pour évaluer différentes couches de la réponse immunitaire. Pour analyser l'immunité induite par l'acide salicylique, une application externe de salicylate de sodium est utilisée afin de déclencher la réponse immunitaire, laquelle est quantifiée par la croissance du pathogène. La perte de NPR1, qui fonctionne comme récepteur de l'acide salicylique et comme co-régulateur transcriptionnel majeur des gènes cibles dépendants de l'acide salicylique, conduit à une insensibilité à l'application exogène du dérivé de l'acide salicylique.Pour caractériser l'immunité induite par les motifs moléculaires associés aux microorganismes, les plantes ont été prétraitées avec deux inducteurs connus. Les plantes sauvages de type Columbia zéro traitées au FLAG 22 ont montré une réduction d'un facteur logarithmique, soit 10 fois, de la population bactérienne, tandis que les plantes mutantes FLS deux n'ont pas réussi à induire l'effet de restriction de la croissance bactérienne. De même, les plantes mutantes EFR se sont révélées insensibles au prétraitement par le L 18.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de quantifier la réponse immunitaire d'Arabic opsys par le biais du test d'infiltration à la seringue. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de se rappeler de surveiller le développement de la maladie et de prélever les tissus après l'apparition des corsis. Le pathogène Pseudomona pather cul cola S phos 3, 2 6 est un hémiatrophe.Ainsi, l'échantillonnage doit être effectué avant la transition vers la phase neurotrophique. Après cette procédure, d'autres méthodes telles que la PCR quantitative en temps réel et l'analyse sanguine par immunobuvardage peuvent être réalisées afin de répondre à des questions supplémentaires, comme par exemple quelle voie spécifique de signalisation immunitaire est perturbée. N'oubliez pas que vous travaillez avec des bactéries vivantes.Bien que Pseudomona Senge ne soit pas pathogène pour l'homme, veuillez vous assurer de bien éliminer les consommables contaminés et les plantes infectées lors de la réalisation de cette procédure.

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