Réalisé Evolution Méthode Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Création et dépistage

L’objectif général de ce protocole est de montrer comment construire et cribler des banques de mutants chez Saccharomyces Cerevisiae pour des expériences d’évolution dirigée. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans la création en laboratoire, l’utilisation pour des expériences d’évolution dirigée ciblées, telles que l’attribution de zones de chevauchement dans l’assemblage et le clonage. Le principal avantage de cette technique est sa simplicité et sa robustesse puisqu’en une seule étape de transformation, il est possible d’attribuer des niveaux de bonne qualité.

Ce protocole de création et de criblage de banques mutantes sera démontré pour une aryl-alcool oxydase fongique ou AAO. Les régions pour l’évolution dirigée ciblée sont d’abord choisies à l’aide d’algorithmes de calcul basés sur la structure cristalline disponible ou les modèles d’homologie de l’enzyme. Deux régions d’AAO seront ciblées pour la mutagenèse et la recombinaison aléatoires : la région M1 et la région M2.