Name: De cellules souches Basé Immunité Engineered contre linfection à VIH dans le modèle humanisé Souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: Découvrez la construction d'un modèle souris humanisé BLT avec immunité génie-cellulaire contre le VIH. Cette méthode permet les tests précliniques de thérapies géniques ciblant les infections chroniques.

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Nous tenons à remercier Mme Jessica Selander d’avoir fourni une assistante artistique dans la fabrication de nos figurines. Ce travail a été financé par des subventions du NIAID/NIH, subvention no. RO1AI078806, le Centre de recherche sur le sida de l’UCLA (CFAR), subvention n°. P30AI28697, l’Institut californien de médecine régénérative, subvention n°. TR4-06845, Fédération américaine pour la recherche sur le sida (amfAR), subvention n° #108929-54-RGRL, et le programme et initiatives de recherche multi-campus de l’UC, California Center for Antiviral Drug discovery (CCADD)

<ol><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+virology%22%5BJournal%5D)">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li>
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<li>Shimizu, S., Hong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li>
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<li>Zhou, J., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryoid+bodies+formation+and+differentiation+from+mouse+embryonic+stem+cells+in+collagen%2FMatrigel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Genetics+and+Genomics%22%5BJournal%5D)">Embryoid bodies formation and differentiation from mouse embryonic stem cells in collagen/Matrigel scaffolds.</a> Journal of Genetics and Genomics. 37 (7), 451-460 (2010).</li>
<li>Vatakis, D. N., Arumugam, B., Kim, S. G., Bristol, G., Yang, O., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+Exogenous+T-cell+Receptors+Into+Human+Hematopoietic+Progenitors+Results+in+Exclusion+of+Endogenous+T-cell+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Introduction of Exogenous T-cell Receptors Into Human Hematopoietic Progenitors Results in Exclusion of Endogenous T-cell Receptor Expression.</a> Molecular Therapy. 21 (5), 1055-1063 (2013).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Avec la RCA et à base HSC immunité ingénierie gagne du terrain vers les études cliniques, il est important d&#39;avoir un modèle animal approprié d&#39;examiner de près la différenciation et la fonction de ces cellules modifiées. Dans ce protocole, nous avons décrit les méthodes pour construire et tester des souris humanisées avec des cellules souches génétiquement modifiées génétiquement contre le VIH. Il est important d&#39;avoir une transduction efficace de cellules souches avant la transplantation. Toutefois, en rai...

Malgré le succès de la thérapie anti-rétrovirale combinée, l&#39;infection au VIH est encore une maladie chronique. La réponse immunitaire cellulaire contre le VIH joue un rôle très important dans le contrôle de la réplication du VIH. Les progrès récents dans la manipulation de cellules souches a permis le développement rapide de la thérapie génique approches pour le traitement du VIH 1-3. Par conséquent, il est important de disposer d&#39; un modèle animal approprié qui permet étude in vivo de l&#39;efficacité des thérapies basées sur les cellules contre le VIH. En travaillant avec le VIH dans des modèles animaux est compliquée par le fait que le virus infecte uniquement les cellules humaines. Pour contourner cette limitation, les scientifiques ont eu recours à l&#39; aide de modèles de maladies comme le virus de l&#39; immunodéficience simienne (SIV) chez le macaque rhésus 4,5. Malheureusement, il y a des limites importantes sur ce modèle en raison des différences inhérentes entre les espèces et les différences entre les SIV et le VIH. En outre, seuls les établissements hautement spécialisés sont capable de soutenir le travail avec des primates non humains et chaque macaque nécessite un investissement important. Par conséquent, il existe un besoin urgent pour un modèle qui utilise le système immunitaire humain, qui est sensible à l&#39;infection par le VIH / pathogenèse, et il est moins prohibitif. Le non-obèses diabétiques (NOD) -severe immunodéficientes combinée (SCID) gamma -common chaîne knockout (c γ - / -) (ou NSG) Sang / Foie / Thymus (BLT) modèle de souris humanisé est de plus en plus avéré être un outil important pour étudier l&#39;infection à VIH. Par l&#39; implantation de cellules souches hématopoïétiques (CSH) et thymus foetal, les souris sont capables de développer et de récapituler un système immunitaire humain 1-3. Un type de thérapie génique à base de cellules souches implique &#39;&#39; rediriger les cellules T périphériques pour cibler le VIH en reprogrammant cellules souches hématopoïétiques (CSH) de se différencier en lymphocytes T spécifiques de l&#39;antigène. Nous avons montré précédemment que les CSH d&#39;ingénierie avec un anti-VIH spécifique re T cellulaire et moléculaire clonéceptor (TCR) contre l&#39;épitope SL9 (acides aminés 77-85; SLYNTVATL) du VIH-1 Gag peut rediriger les cellules souches en cellules formant T matures qui suppriment la réplication du VIH dans le modèle de la souris NSG-BLT humanisé 6. La mise en garde d&#39;utiliser un clone moléculaire de TCR est qu&#39;elle est limitée à un antigène de leucocyte humain (HLA) de sous-type spécifique qui limite l&#39;application de cette thérapie. récepteurs d&#39;antigènes chimériques (CAR), d&#39;autre part, peuvent être universellement appliquées à tous les sous-types HLA. Les premières études ont été effectuées en utilisant un CAR construit avec les domaines extracellulaire et transmembranaire de CD4 humaine fusionné au ζ domaine intracellulaire de CD3 de signalisation (appelé le CD4ζCAR). CD4ζCAR exprimé sur les lymphocytes T CD8 peuvent reconnaître l&#39; enveloppe du VIH et de déclencher une réponse des lymphocytes T cytotoxiques qui est similaire à celle médiée par un récepteur de lymphocyte T 7. Nous avons récemment démontré que les CSH humaines peuvent être modifiés avec CD4ζCAR, qui peut alors se différencier en plusieurs hématopoïétique lineages, y compris les lymphocytes T fonctionnels capables de supprimer la réplication du VIH dans le modèle de souris humanisée 8. Avec les progrès rapides dans les thérapies du récepteur de l&#39; antigène chimérique pour le cancer 9, ainsi que la caractérisation continue des grands anticorps neutralisants puissants 10-12 contre le VIH qui permettent à la construction d&#39; une seule chaîne RAC d&#39;anticorps, il est perceptible que de nombreuses nouvelles constructions candidates, en plus CD4ζCAR seront générés et testés pour la thérapie génique à base de cellules souches de maladies associées au VIH et d&#39;autres maladies. En outre, le modèle de la souris NSG-BLT humanisé contenant ces RAC spécifiques de l&#39; antigène peut également fournir un outil utile pour examiner de près les réponses des lymphocytes T humains in vivo. Surtout, notre protocole diffère des procédés précédemment décrits pour la construction de humanisé de souris BLT 13-15 en ce que les cellules souches hématopoïétiques dans un mélange de protéines gélatineux est utilisé à la place du tronc de foie foetal 16. Ce protocole décrit: 1) la construction de humanisouris BLT zed ingénierie avec CD4ζCAR; et 2) la caractérisation de la différenciation des cellules génétiquement modifiées; et 3) Caractérisation de la fonctionnalité des cellules génétiquement modifiées.

<table><tbody><tr><td>Kit de microbilles CD34</td><td>Miltenyi</td><td>130-046-702</td><td>Pour le tri des cellules progénitrices humaines CD34+</td></tr><tr><td>Bambanker</td><td>Wako</td><td>302-14681</td><td>Pour la congélation de cellules</td></tr><tr><td>QIAamp Kit d’ARN viral&nbsp ;</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td>Pour la mesure de la charge virale dans le sérum</td></tr><tr><td>MACSQuant Cytomètre en flux</td><td>Miltenyi</td><td></td><td>Pour l’analyse en flux</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa&trade ;</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Pour l’analyse en flux</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H6254-500MG&nbsp ;</td><td>Pour la digestion des tissus</td></tr><tr><td>Désoxyribonucléase &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Worthington</td><td>LS002006</td><td>pour la digestion des tissus</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Life technology</td><td>17104-019&nbsp ;</td><td>pour la digestion des tissus</td></tr><tr><td>CFX Système de détection PCR en temps réel</td><td>Biorad</td><td></td><td>Pour mesurer la charge virale et l’expression génique</td></tr><tr><td>des souris, souche NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Pour la construction des souris humanisées</td></tr><tr><td>Pénicilline Streptomycine (Pen Streptomycin (Pen Strep)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10378016</td><td>Pour la culture de cellules</td></tr><tr><td>Pipéracilline/tazobactam</td><td>Pfizer</td><td>Zosyn</td><td>Antifongique</td></tr><tr><td>Amphotéricine B (Fungizone antimycosique)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15290-018</td><td>Antifongique</td></tr><tr><td>Pinces à enroulement Autoclip, 9 mm - 1 000 unités</td><td>Becton Dickinson</td><td>427631&nbsp ;</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Blouses chirurgicales stériles poly-renforcées Aurora, 30 par cas. &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Medline</td><td>DYNJP2707</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Sutures, 4-0, vicryl&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Owens et Minor</td><td>23000J304H&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Tampons de préparation à l’alcool&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Owens et Minor</td><td>3583006818</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Gants, chirurgicaux, 6 1/2</td><td>Owens et Minor</td><td>4075711102</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Yssel' s Sérum sans sérum T-Cell Medium</td><td>Gemini Bio-products</td><td>400-102</td><td>Pour la transduction cellulaire CD34+</td></tr><tr><td>Albumine sérique humaine&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9511</td><td>pour la transduction de cellules CD34+</td></tr></tbody></table>

de cellules souches basé immunité engineered contre l&#39;infection à vih dans le modèle humanisé souris

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

Avec le développement rapide de la thérapie génique à base de cellules souches contre le VIH, il est urgent besoin d&#39;un modèle animal pour étudier la différenciation hématopoïétique et la fonction immunitaire des cellules génétiquement modifiées. La moelle osseuse humanisé / Foie / Thymus (BLT) modèle de souris permet une reconstitution complète d&#39;un système immunitaire humain à la périphérie, qui comprend les lymphocytes T, les lymphocytes B, les cellules NK et des monocytes. L&#39;implant thymique humain permet également la sélection thymique des cellules T dans le tissu thymique autologue. En plus de l&#39;étude de l&#39;infection par le VIH, le modèle se présente comme un outil puissant pour étudier la différenciation, le développement et la fonctionnalité des cellules dérivées de cellules souches hématopoïétiques (CSH). Nous exposons ici la construction de humanisé non obèse diabétique (NOD) -severe immunodéficientes combinée (SCID) gamma -common chaîne knockout (c γ - / -) -Bone-moelle / Foie / Thymus (NSG-BLT) souris avec CSH transduites avec CD4 récepteur d&#39;antigène chimérique (CD4CAR)vecteur lentivirus. Nous montrons que la CD4CAR CSH peut réussir à se différencier en plusieurs lignées et ont une activité anti-VIH. Le but de l&#39;étude est de démontrer l&#39;utilisation du modèle de la souris NSG-BLT comme modèle in vivo de l&#39; immunité d&#39; ingénierie contre le VIH. Il est intéressant de noter que, parce lentivirus et les tissus humains sont utilisés, les expériences et les chirurgies doivent être effectuées dans une enceinte de sécurité biologique de classe II dans un niveau de biosécurité 2 (NSB2) avec des précautions particulières installation (NSB2 de +).

La figure 1 montre un schéma de construction de souris BLT humanisés avec une cellule souche modifiée. 10 semaines après l&#39;intervention chirurgicale d&#39;implant, les souris ont été sacrifiées pour évaluer la différenciation et le développement des cellules à gène modifié. Comme on le voit sur ​​la figure 2, de multiples tissus lymphoïdes (sang, la rate, le thymus et la moelle osseuse) ont été récoltées à partir d&#39; une souris qui a été modifié a...

Ce protocole décrit les méthodes de construction d’un modèle murin humanisé de moelle osseuse, de foie et de thymus avec une immunité artificielle à base de cellules souches contre l’infection par le VIH.

De cellules souches Basé Immunité Engineered contre l&#39;infection à VIH dans le modèle humanisé Souris

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

L'objectif général de cette procédure est de créer une souris humanisée modifiée avec un récepteur d'antigène chimérique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines du VIH et de l'immunologie concernant l'évaluation de l'efficacité d'une immunité ingénierisée basée sur les cellules souches contre l'infection par le VIH ainsi que contre d'autres infections chroniques et malignités, telles que les mécanismes d'échec immunitaire et les moyens de renforcer le système immunitaire afin de développer une thérapie permettant d'obtenir une immunité antivirale ou anti-tumorale améliorée.Le principal avantage de cette technique est sa capacité à permettre un grand nombre de manipulations expérimentales. Le modèle de souris BLT humanisées reproduit l'immunité humaine et permet, dans ce cas, des tests précliniques de thérapies géniques cellulaires contre l'infection par le VIH. La procédure sera démontrée par Valerie Rezek et Brianna Lam, techniciennes de mon laboratoire.Commencez par utiliser des lames de scalpel pour découper le thymus en petits morceaux d’environ un millimètre cube dans une boîte contenant du milieu RPMI supplémenté. Puis, utilisez des pinces courbes effilées pour placer chaque morceau de thymus individuellement dans un puits d’une plaque de 96 puits. Ajoutez 100 à 200 microlitres de milieu dans tous les puits afin que le tissu ne s’assèche pas.Visualisez le tissu au microscope afin d'éliminer tout élément qui ne serait pas du thymus ou qui serait associé à du tissu conjonctif. Ensuite, retirez les fragments de thymus confirmés et regroupez-les dans un flacon de culture cellulaire T25. Ajoutez sept millilitres de milieu RPMI complété par des antibiotiques dans le flacon et agitez doucement pour homogénéiser.Ensuite, placer le flacon dans l’incubateur de culture tissulaire. Cette étape empêche la contamination bactérienne du tissu. Commencer l’isolement des cellules souches hématopoïétiques (HSC) positives pour le CD34 à partir du foie fœtal en utilisant deux scalpels pour découper le foie en petits morceaux d’environ trois millimètres cubes dans une boîte contenant du IMDM.Retirez et jetez tout tissu conjonctif blanc. Ensuite, utilisez une seringue de 10 millilitres équipée d'une aiguille émoussée de calibre 16 pour prélever les morceaux de foie et le milieu, puis transférez-les dans un tube conique de 50 millilitres. Aspirez et expulsez doucement cinq à sept fois supplémentaires afin d'homogénéiser complètement le tissu.Après avoir préparé 10 millilitres de milieu IMDM, ajoutez-y du collagénase, de l'hyaluronidase, des antibiotiques, de la DNase et un agent antifongique. Faites passer le milieu à travers un filtre de 0,22 micron. Ensuite, ajoutez le milieu filtré à la suspension hépatique.Après avoir mis le bouchon sur le tube conique de 50 millilitres contenant la suspension hépatique, sceller hermétiquement avec un film auto-adhésif tel que du parafilm afin d'éviter les fuites. Faire tourner dans un agitateur rotatif à tube dans l'incubateur à 37 degrés Celsius pendant 90 minutes. À l'issue de l'incubation, filtrer la suspension cellulaire digérée à travers un tamis cellulaire de 100 microns dans un nouveau tube de 50 millilitres.Ajouter du PBS à la suspension afin d'amener le volume total à 50 millilitres. Répartir ce volume dans deux tubes de 50 millilitres, chacun contenant 25 millilitres de suspension cellulaire. Sous-couche lentement et délicatement les cellules dans chaque tube avec 10 millilitres d'un milieu de centrifugation par gradient de densité, tel que le Ficoll.Faire tourner à 1200 ×g pendant 20 minutes sans interruption. Après la centrifugation, retirer soigneusement l'interface de chaque tube et la transférer dans deux tubes séparés de 50 millilitres. Compléter le volume de chaque tube d'interface jusqu'à 50 millilitres avec du PBS.Ensuite, centrifuger à 300 × g pendant sept à 10 minutes. Réunir et laver les culots cellulaires trois fois avec 50 millilitres de PBS contenant 2 % de FBS, en centrifugeant à 300 × g pendant sept à 10 minutes à chaque fois. Après la dernière centrifugation, reprendre le culot dans 50 millilitres de milieu RPMI complété avec 10 % de FBS.Compter les cellules à l'aide d'un hémocytomètre. Ensuite, trier immédiatement les cellules positives pour CD34 à l'aide d'un kit de tri pour CD34 selon le protocole du fabricant, et conserver à la fois la fraction positive et négative pour CD34. Verser les fragments de thymus et le milieu du flacon dans une boîte de Pétri de 60 millimètres.Refroidissez quelques embouts de pipette à déplacement positif en les plaçant dans des tubes stériles de 1,5 millilitre à bouchon vissé, ouverts, sur de la glace. Placez également les culots cellulaires et un volume de mélange protéique gélatineux, tel que Matrigel, sur de la glace. Anesthésiez les souris receveuses à l’aide d’un anesthésique injectable, conformément à un protocole animal approuvé.Vérifiez le niveau d'anesthésie de la souris en pinçant une patte. L'absence de réaction au pincement indique un stade chirurgical d'anesthésie. Rasez le côté gauche de chaque souris, de la hanche à l'épaule, entre le milieu du dos et l'abdomen.Injecter par voie sous-cutanée six milligrammes par kilogramme de Carprofen dilué dans le triangle scapulaire ou inguinal de l'animal. Rincer la canule du trocart avec du PBS dans une boîte de 60 millimètres. À l’aide d’une paire de forceps courbes émoussés, placer un morceau de thymus provenant de la boîte de 60 millimètres juste à l’entrée de la canule, puis tirer légèrement sur le trocart pour aspirer le tissu à l’intérieur de la canule.Ensuite, utilisez une pipette à déplacement positif et une pointe refroidie pour ajouter cinq microlitres de mélange protéique gélatineux froid dans le tube contenant le culot cellulaire. Mélangez délicatement pour obtenir une suspension cellulaire. Pipetez la suspension cellulaire dans l'ouverture de la canule et retirez lentement le trocart pour charger l'aiguille.Prélevez par frottis la zone rasée de la souris avec de l'iodure de povidone, suivi de l'isopropényl, trois fois. Déterminez le point le plus foncé sous la peau, qui indique l'emplacement de la rate. Le rein se situe à environ cinq millimètres en position dorsale par rapport à la rate.Après avoir vérifié un niveau approprié d'anesthésie par l'absence de réaction au pincement de la patte, utilisez une pince courbe pour soulever la peau et des ciseaux chirurgicaux pour pratiquer une incision de 15 millimètres dans la peau, parallèlement à la rate. Ensuite, effectuez une incision similaire dans la couche péritonéale située en dessous. Chez les mâles, le rein est facilement visible et peut être extrudé simplement en appuyant sur l'abdomen.Stabiliser le rein avec un hémostat ou une paire de pinces courbes effilées. Chez les femelles, les ovaires ont tendance à bloquer l'extraction facile du rein. À l'aide d'un hémostat, saisir l'ovaire et exposer soigneusement le rein.Utilisez une pince à pointe aiguille pour percer un petit trou à l'extrémité postérieure de la capsule rénale. Faites glisser le trocart dans ce trou et le long du rein jusqu'à ce que l'ouverture de la canule soit entièrement recouverte par la capsule rénale. Extrudez délicatement le tissu situé sous la capsule rénale, puis retirez le trocart.Utilisez la pince courbe pour vous assurer que le morceau de thymus ne ressorte pas avec l'aiguille. Ensuite, soulevez le péritoine avec la pince et utilisez délicatement le clamp hémostatique pour repousser le rein en place. Faites un point de suture chirurgical noué en double dans le péritoine.Placez également deux clips Autoclips pour fermer la peau. Mélangez maintenant les cellules positives pour CD34 transduites et aspirez 0,5 fois 10 à la puissance six cellules dans un volume de 100 microlitres dans une seringue à insuline. Injectez ces cellules dans la souris par injection par voie rétro-orbitaire.Après l'injection, appliquer une petite goutte de lubrifiant oculaire sur chaque œil, puis placer la souris sur le côté dans une cage. Après avoir implanté toutes les souris, vérifier que les animaux ont retrouvé conscience et sont capables de se déplacer avant de les ramener en salle d'élevage. Les souris ont été sacrifiées 10 semaines après la chirurgie et le sang, la rate, le thymus et la moelle osseuse ont été prélevés.Les cellules obtenues ont été marquées avec des anticorps anti-CD45 humain et anti-CD4 humain, puis analysées par cytométrie en flux. Comme on le voit ici, les cellules modifiées par le récepteur chimérique d'antigène CD4 peuvent être détectées dans plusieurs tissus lymphoïdes par cytométrie en flux. Les cellules modifiées par le récepteur chimérique d'antigène CD4 peuvent se différencier en plusieurs lignées.Ici, des splénocytes provenant de souris chimériques modifiées pour le récepteur de l'antigène CD4 ont été prélevés et marqués avec des marqueurs spécifiques des cellules T et des cellules B. Les cellules négatives pour les marqueurs des cellules T et B étaient positives pour les marqueurs des monocytes et des macrophages ainsi que pour ceux des cellules natural killer. Les splénocytes provenant de souris infectées par le VIH et exprimant un récepteur chimerique de l'antigène CD4 ont été stimulés soit par des cellules T infectées par le VIH, soit par des cellules T non infectées, et leur production intracellulaire de cytokine est présentée.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière de construire des souris BLT humanisées modifiées avec des récepteurs d'antigènes chimériques. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 48 heures si elle est effectuée correctement. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de garder un rythme constant et de prêter une attention particulière à l'état de la souris opérée.Pour les débutants, il est important de s'entraîner à la chirurgie et aux injections oculaires avant de travailler avec des tissus et des cellules souches plus précieux. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine du VIH et d'autres maladies infectieuses pour explorer la pathogenèse des maladies et les thérapies basées sur le système immunitaire dans le modèle de souris humanisée.

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