Name: De cellules souches Basé Immunité Engineered contre linfection à VIH dans le modèle humanisé Souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: Découvrez la construction d'un modèle souris humanisé BLT avec immunité génie-cellulaire contre le VIH. Cette méthode permet les tests précliniques de thérapies géniques ciblant les infections chroniques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Nous tenons à remercier Mme Jessica Selander d’avoir fourni une assistante artistique dans la fabrication de nos figurines. Ce travail a été financé par des subventions du NIAID/NIH, subvention no. RO1AI078806, le Centre de recherche sur le sida de l’UCLA (CFAR), subvention n°. P30AI28697, l’Institut californien de médecine régénérative, subvention n°. TR4-06845, Fédération américaine pour la recherche sur le sida (amfAR), subvention n° #108929-54-RGRL, et le programme et initiatives de recherche multi-campus de l’UC, California Center for Antiviral Drug discovery (CCADD)

<ol><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+virology%22%5BJournal%5D)">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li>
<li>Zhen, A., Kitchen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem-cell-based+gene+therapy+for+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Stem-cell-based gene therapy for HIV infection.</a> Viruses. 6 (1), 1-12 (2014).</li>
<li>Goulder, P. J. R., Watkins, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+SIV+CTL+escape%3A+implications+for+vaccine+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">HIV and SIV CTL escape: implications for vaccine design.</a> Nature Reviews: Immunology. 4 (8), 630-640 (2004).</li>
<li>Kitchen, S. G., Bennett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+Antigen-Specific+T+Cells+from+Genetically+Modified+Human+Hematopoietic+Stem+Cells+in+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Engineering Antigen-Specific T Cells from Genetically Modified Human Hematopoietic Stem Cells in Immunodeficient Mice.</a> PloS one. 4 (12), e8208(2009).</li>
<li>Goulder, P. J. R., Watkins, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+SIV+CTL+escape%3A+implications+for+vaccine+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">HIV and SIV CTL escape: implications for vaccine design.</a> Nature Reviews: Immunology. 4 (8), 630-640 (2004).</li>
<li>Kitchen, S. G. S., Levin, B. R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+suppression+of+HIV+by+antigen+specific+T+cells+derived+from+engineered+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">In vivo suppression of HIV by antigen specific T cells derived from engineered hematopoietic stem cells.</a> PLoS Pathogens. 8 (4), e1002649(2012).</li>
<li>Yang, O. O., Tran, A. C., Kalams, S. A., Johnson, R. P., Roberts, M. R., Walker, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+of+HIV-1-infected+cells+and+inhibition+of+viral+replication+by+universal+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Lysis of HIV-1-infected cells and inhibition of viral replication by universal receptor T cells.</a> PNAS. 94 (21), 11478-11483 (1997).</li>
<li>Zhen, A., Kamata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-specific+Immunity+Derived+From+Chimeric+Antigen+Receptor-engineered+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">HIV-specific Immunity Derived From Chimeric Antigen Receptor-engineered Stem Cells.</a> Molecular Therapy. 23 (8), 1358-1367 (2015).</li>
<li>Barrett, D. M., Singh, N., Porter, D. L., Grupp, S. A., June, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Antigen+Receptor+Therapy+for+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer.</a> Annual Review of Medicine. 65 (1), 333-347 (2014).</li>
<li>Pejchal, R., Doores, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Potent+and+Broad+Neutralizing+Antibody+Recognizes+and+Penetrates+the+HIV+Glycan+Shield%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Potent and Broad Neutralizing Antibody Recognizes and Penetrates the HIV Glycan Shield.</a> Science. 334 (6059), 1097-1103 (2011).</li>
<li>Caskey, M., Klein, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viraemia+suppressed+in+HIV-1-infected+humans+by+broadly+neutralizing+antibody+3BNC117%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Viraemia suppressed in HIV-1-infected humans by broadly neutralizing antibody 3BNC117.</a> Nature. 522 (7557), 487-491 (2015).</li>
<li>West, A. P., Scharf, L., Scheid, J. F., Klein, F., Bjorkman, P. J., Nussenzweig, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+insights+on+the+role+of+antibodies+in+HIV-1+vaccine+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Structural insights on the role of antibodies in HIV-1 vaccine and therapy.</a> Cell. 156 (4), 633-648 (2014).</li>
<li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. -G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus%2Fliver+and+CD34%2B+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li>
<li>Melkus, M. W., Estes, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nature medicine. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li>
<li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+for+immune+system+investigation%3A+progress%2C+promise+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews: Immunology. 12 (11), 786-798 (2012).</li>
<li>Vatakis, D. N., Bristol, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+BLT+humanized+mouse+as+a+stem+cell+based+gene+therapy+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Using the BLT humanized mouse as a stem cell based gene therapy tumor model.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (70), e4181(2012).</li>
<li>De Rosa, S. C., Brenchley, J. M., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+six+colors%3A+a+new+era+in+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Beyond six colors: a new era in flow cytometry.</a> Nature medicine. 9 (1), 112-117 (2003).</li>
<li>Shimizu, S., Hong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li>
<li>Denton, P. W., Olesen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+HIV+latency+in+humanized+BLT+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+virology%22%5BJournal%5D)">Generation of HIV latency in humanized BLT mice.</a> Journal of virology. 86 (1), 630-634 (2012).</li>
<li>Zhou, J., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryoid+bodies+formation+and+differentiation+from+mouse+embryonic+stem+cells+in+collagen%2FMatrigel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Genetics+and+Genomics%22%5BJournal%5D)">Embryoid bodies formation and differentiation from mouse embryonic stem cells in collagen/Matrigel scaffolds.</a> Journal of Genetics and Genomics. 37 (7), 451-460 (2010).</li>
<li>Vatakis, D. N., Arumugam, B., Kim, S. G., Bristol, G., Yang, O., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+Exogenous+T-cell+Receptors+Into+Human+Hematopoietic+Progenitors+Results+in+Exclusion+of+Endogenous+T-cell+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Introduction of Exogenous T-cell Receptors Into Human Hematopoietic Progenitors Results in Exclusion of Endogenous T-cell Receptor Expression.</a> Molecular Therapy. 21 (5), 1055-1063 (2013).</li>
<li>Ito, R., Takahashi, T., Katano, I., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+advances+in+humanized+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+%26+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Current advances in humanized mouse models.</a> Cellular & Molecular Immunology. 9 (3), 208-214 (2012).</li>
<li>Martinez-Torres, F., Nochi, T., Wahl, A., Garcia, J. V., Denton, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypogammaglobulinemia+in+BLT+humanized+mice--an+animal+model+of+primary+antibody+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypogammaglobulinemia in BLT humanized mice--an animal model of primary antibody deficiency.</a> PloS one. 9 (10), e108663(2014).</li>
<li>McCune, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+the+SCID-hu+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development and applications of the SCID-hu mouse model.</a> Seminars in Immunology. 8 (4), 187-196 (1996).</li>
<li>Srivastava, S., Riddell, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+CAR-T+Cells%3A+Design+Concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Engineering CAR-T Cells: Design Concepts.</a> Trends in immunology. 36 (8), (2015).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Avec la RCA et à base HSC immunité ingénierie gagne du terrain vers les études cliniques, il est important d&#39;avoir un modèle animal approprié d&#39;examiner de près la différenciation et la fonction de ces cellules modifiées. Dans ce protocole, nous avons décrit les méthodes pour construire et tester des souris humanisées avec des cellules souches génétiquement modifiées génétiquement contre le VIH. Il est important d&#39;avoir une transduction efficace de cellules souches avant la transplantation. Toutefois, en rai...

Malgré le succès de la thérapie anti-rétrovirale combinée, l&#39;infection au VIH est encore une maladie chronique. La réponse immunitaire cellulaire contre le VIH joue un rôle très important dans le contrôle de la réplication du VIH. Les progrès récents dans la manipulation de cellules souches a permis le développement rapide de la thérapie génique approches pour le traitement du VIH 1-3. Par conséquent, il est important de disposer d&#39; un modèle animal approprié qui permet étude in vivo de l&#39;efficacité des thérapies basées sur les cellules contre le VIH. En travaillant avec le VIH dans des modèles animaux est compliquée par le fait que le virus infecte uniquement les cellules humaines. Pour contourner cette limitation, les scientifiques ont eu recours à l&#39; aide de modèles de maladies comme le virus de l&#39; immunodéficience simienne (SIV) chez le macaque rhésus 4,5. Malheureusement, il y a des limites importantes sur ce modèle en raison des différences inhérentes entre les espèces et les différences entre les SIV et le VIH. En outre, seuls les établissements hautement spécialisés sont capable de soutenir le travail avec des primates non humains et chaque macaque nécessite un investissement important. Par conséquent, il existe un besoin urgent pour un modèle qui utilise le système immunitaire humain, qui est sensible à l&#39;infection par le VIH / pathogenèse, et il est moins prohibitif. Le non-obèses diabétiques (NOD) -severe immunodéficientes combinée (SCID) gamma -common chaîne knockout (c γ - / -) (ou NSG) Sang / Foie / Thymus (BLT) modèle de souris humanisé est de plus en plus avéré être un outil important pour étudier l&#39;infection à VIH. Par l&#39; implantation de cellules souches hématopoïétiques (CSH) et thymus foetal, les souris sont capables de développer et de récapituler un système immunitaire humain 1-3. Un type de thérapie génique à base de cellules souches implique &#39;&#39; rediriger les cellules T périphériques pour cibler le VIH en reprogrammant cellules souches hématopoïétiques (CSH) de se différencier en lymphocytes T spécifiques de l&#39;antigène. Nous avons montré précédemment que les CSH d&#39;ingénierie avec un anti-VIH spécifique re T cellulaire et moléculaire clonéceptor (TCR) contre l&#39;épitope SL9 (acides aminés 77-85; SLYNTVATL) du VIH-1 Gag peut rediriger les cellules souches en cellules formant T matures qui suppriment la réplication du VIH dans le modèle de la souris NSG-BLT humanisé 6. La mise en garde d&#39;utiliser un clone moléculaire de TCR est qu&#39;elle est limitée à un antigène de leucocyte humain (HLA) de sous-type spécifique qui limite l&#39;application de cette thérapie. récepteurs d&#39;antigènes chimériques (CAR), d&#39;autre part, peuvent être universellement appliquées à tous les sous-types HLA. Les premières études ont été effectuées en utilisant un CAR construit avec les domaines extracellulaire et transmembranaire de CD4 humaine fusionné au ζ domaine intracellulaire de CD3 de signalisation (appelé le CD4ζCAR). CD4ζCAR exprimé sur les lymphocytes T CD8 peuvent reconnaître l&#39; enveloppe du VIH et de déclencher une réponse des lymphocytes T cytotoxiques qui est similaire à celle médiée par un récepteur de lymphocyte T 7. Nous avons récemment démontré que les CSH humaines peuvent être modifiés avec CD4ζCAR, qui peut alors se différencier en plusieurs hématopoïétique lineages, y compris les lymphocytes T fonctionnels capables de supprimer la réplication du VIH dans le modèle de souris humanisée 8. Avec les progrès rapides dans les thérapies du récepteur de l&#39; antigène chimérique pour le cancer 9, ainsi que la caractérisation continue des grands anticorps neutralisants puissants 10-12 contre le VIH qui permettent à la construction d&#39; une seule chaîne RAC d&#39;anticorps, il est perceptible que de nombreuses nouvelles constructions candidates, en plus CD4ζCAR seront générés et testés pour la thérapie génique à base de cellules souches de maladies associées au VIH et d&#39;autres maladies. En outre, le modèle de la souris NSG-BLT humanisé contenant ces RAC spécifiques de l&#39; antigène peut également fournir un outil utile pour examiner de près les réponses des lymphocytes T humains in vivo. Surtout, notre protocole diffère des procédés précédemment décrits pour la construction de humanisé de souris BLT 13-15 en ce que les cellules souches hématopoïétiques dans un mélange de protéines gélatineux est utilisé à la place du tronc de foie foetal 16. Ce protocole décrit: 1) la construction de humanisouris BLT zed ingénierie avec CD4ζCAR; et 2) la caractérisation de la différenciation des cellules génétiquement modifiées; et 3) Caractérisation de la fonctionnalité des cellules génétiquement modifiées.

<table><tbody><tr><td>Kit de microbilles CD34</td><td>Miltenyi</td><td>130-046-702</td><td>Pour le tri des cellules progénitrices humaines CD34+</td></tr><tr><td>Bambanker</td><td>Wako</td><td>302-14681</td><td>Pour la congélation de cellules</td></tr><tr><td>QIAamp Kit d’ARN viral&nbsp ;</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td>Pour la mesure de la charge virale dans le sérum</td></tr><tr><td>MACSQuant Cytomètre en flux</td><td>Miltenyi</td><td></td><td>Pour l’analyse en flux</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa&trade ;</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>Pour l’analyse en flux</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H6254-500MG&nbsp ;</td><td>Pour la digestion des tissus</td></tr><tr><td>Désoxyribonucléase &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Worthington</td><td>LS002006</td><td>pour la digestion des tissus</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Life technology</td><td>17104-019&nbsp ;</td><td>pour la digestion des tissus</td></tr><tr><td>CFX Système de détection PCR en temps réel</td><td>Biorad</td><td></td><td>Pour mesurer la charge virale et l’expression génique</td></tr><tr><td>des souris, souche NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Pour la construction des souris humanisées</td></tr><tr><td>Pénicilline Streptomycine (Pen Streptomycin (Pen Strep)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10378016</td><td>Pour la culture de cellules</td></tr><tr><td>Pipéracilline/tazobactam</td><td>Pfizer</td><td>Zosyn</td><td>Antifongique</td></tr><tr><td>Amphotéricine B (Fungizone antimycosique)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15290-018</td><td>Antifongique</td></tr><tr><td>Pinces à enroulement Autoclip, 9 mm - 1 000 unités</td><td>Becton Dickinson</td><td>427631&nbsp ;</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Blouses chirurgicales stériles poly-renforcées Aurora, 30 par cas. &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Medline</td><td>DYNJP2707</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Sutures, 4-0, vicryl&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Owens et Minor</td><td>23000J304H&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Tampons de préparation à l’alcool&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td>Owens et Minor</td><td>3583006818</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Gants, chirurgicaux, 6 1/2</td><td>Owens et Minor</td><td>4075711102</td><td>Pour la chirurgie</td></tr><tr><td>Yssel' s Sérum sans sérum T-Cell Medium</td><td>Gemini Bio-products</td><td>400-102</td><td>Pour la transduction cellulaire CD34+</td></tr><tr><td>Albumine sérique humaine&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9511</td><td>pour la transduction de cellules CD34+</td></tr></tbody></table>

de cellules souches basé immunité engineered contre l&#39;infection à vih dans le modèle humanisé souris

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

Avec le développement rapide de la thérapie génique à base de cellules souches contre le VIH, il est urgent besoin d&#39;un modèle animal pour étudier la différenciation hématopoïétique et la fonction immunitaire des cellules génétiquement modifiées. La moelle osseuse humanisé / Foie / Thymus (BLT) modèle de souris permet une reconstitution complète d&#39;un système immunitaire humain à la périphérie, qui comprend les lymphocytes T, les lymphocytes B, les cellules NK et des monocytes. L&#39;implant thymique humain permet également la sélection thymique des cellules T dans le tissu thymique autologue. En plus de l&#39;étude de l&#39;infection par le VIH, le modèle se présente comme un outil puissant pour étudier la différenciation, le développement et la fonctionnalité des cellules dérivées de cellules souches hématopoïétiques (CSH). Nous exposons ici la construction de humanisé non obèse diabétique (NOD) -severe immunodéficientes combinée (SCID) gamma -common chaîne knockout (c γ - / -) -Bone-moelle / Foie / Thymus (NSG-BLT) souris avec CSH transduites avec CD4 récepteur d&#39;antigène chimérique (CD4CAR)vecteur lentivirus. Nous montrons que la CD4CAR CSH peut réussir à se différencier en plusieurs lignées et ont une activité anti-VIH. Le but de l&#39;étude est de démontrer l&#39;utilisation du modèle de la souris NSG-BLT comme modèle in vivo de l&#39; immunité d&#39; ingénierie contre le VIH. Il est intéressant de noter que, parce lentivirus et les tissus humains sont utilisés, les expériences et les chirurgies doivent être effectuées dans une enceinte de sécurité biologique de classe II dans un niveau de biosécurité 2 (NSB2) avec des précautions particulières installation (NSB2 de +).

La figure 1 montre un schéma de construction de souris BLT humanisés avec une cellule souche modifiée. 10 semaines après l&#39;intervention chirurgicale d&#39;implant, les souris ont été sacrifiées pour évaluer la différenciation et le développement des cellules à gène modifié. Comme on le voit sur ​​la figure 2, de multiples tissus lymphoïdes (sang, la rate, le thymus et la moelle osseuse) ont été récoltées à partir d&#39; une souris qui a été modifié a...

Ce protocole décrit les méthodes de construction d’un modèle murin humanisé de moelle osseuse, de foie et de thymus avec une immunité artificielle à base de cellules souches contre l’infection par le VIH.

De cellules souches Basé Immunité Engineered contre l&#39;infection à VIH dans le modèle humanisé Souris

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

L'objectif général de cette procédure est de créer une souris humanisée modifiée avec un récepteur d'antigène chimérique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans les domaines du VIH et de l'immunologie concernant l'évaluation de l'efficacité d'une immunité ingénierisée basée sur les cellules souches contre l'infection par le VIH ainsi que contre d'autres infections chroniques et malignités, telles que les mécanismes d'échec immunitaire et les moyens de renforcer le système immunitaire afin de développer une thérapie permettant d'obtenir une immunité antivirale ou anti-tumorale améliorée.Le principal avantage de cette technique est sa capacité à permettre un grand nombre de manipulations expérimentales. Le modèle de souris BLT humanisées reproduit l'immunité humaine et permet, dans ce cas, des tests précliniques de thérapies géniques cellulaires contre l'infection par le VIH. La procédure sera démontrée par Valerie Rezek et Brianna Lam, techniciennes de mon laboratoire.Commencez par utiliser des lames de scalpel pour découper le thymus en petits morceaux d’environ un millimètre cube dans une boîte contenant du milieu RPMI supplémenté. Puis, utilisez des pinces

stem-cell-based-engineered-immunity-against-hiv-infection-humanized

Research

Recherche

JoVE Journal

Medicine

Médecine

La génération et la caractérisation des tumeurs des cellules T spécifiques en utilisant des souris humanisés est décrit ici. Human tissu thymique et génétiquement modifiés cellules souches hématopoïétiques humaines sont transplantées dans des souris immunodéprimées. Cela se traduit par la reconstitution d'un système immunitaire humain ingénierie permettant l'examen in vivo des réponses anti-tumorales immunitaires.

Utilisation de la souris BLT humanisé comme une tumeur de cellules souches Gene Therapy modèle basé sur

Cette vidéo présente une technique de génération de souris du système immunitaire humain (HIS). Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) CD34+ sont isolées à partir de cellules leucocytaires du sang de cordon ombilical humain à l’aide de billes magnétiques recouvertes d’anticorps. Les CSH CD34+ sont développées dans un milieu de croissance enrichi en cytokines et cryoconservées. Enfin, les CSH décongelées sont injectées dans un chiot de souris immunodéficient pour établir le modèle de souris...

Isolement de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon ombilical pour générer des souris du système immunitaire humain

Cette vidéo montre une méthode de génération d’un modèle de souris humanisée double avec un système immunitaire humain et des cellules hépatiques. Il s’agit de transplanter des cellules hépatiques humaines et des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques dans une souris immunodéficiente transgénique par injection intrasplénique, conduisant à la greffe de cellules hépatiques et au développement de cellules immunitaires humaines.

Développement d’un modèle de souris humanisé avec des cellules hépatiques humaines et des cellules immunitaires

La vidéo présente une technique permettant de générer un modèle de souris humanisée avec une immunité artificielle à base de cellules souches contre le virus de l’immunodéficience humaine (VIH). Du tissu thymus fœtal humain et des cellules souches hématopoïétiques (CSH) modifiées sont implantés dans la capsule rénale d’une souris gravement immunodéprimée. Les CSH, qui expriment des récepteurs antigéniques chimériques (CAR) contre le VIH, sont mélangées dans un mélange de protéines gélatineuses...

Construire un modèle de souris humanisé avec une immunité artificielle contre le VIH

Ce protocole fournit une méthode pour établir des souris humanisées (hu-NSG) via intrahépatique injection de cellules souches hématopoïétiques humaines à des souris NSG néonatales conditionné par rayonnement. La souris de l’hu-NSG est sensible à l’infection par le VIH et combinatoire antirétrovirales (cART) et sert de modèle physiopathologique adapté pour les enquêtes de réplication et latence du VIH.

(Hu-NSG) souris humanisée NOD/SCID/IL2rγnull modèle d’études de latence et de réplication du VIH

Ce protocole fournit une méthode fiable pour établir des souris humanisées avec le système immunitaire humain et les cellules hépatiques. Les souris immunodéficientes doublement reconstituées réalisées par injection intrasplégique d'hépatocytes humains et de CD34- cellules souches hématopoïétiques sont sensibles à l'infection par le virus de l'immunodéficience humaine-1 et récapitulent les lésions hépatiques observées dans patients infectés par le VIH.

Création du modèle de souris TK-NOG humanisé double pour la pathogénie du foie associée au VIH

On décrit ici trois approches expérimentales pour étudier la dynamique de l'infection par le VIH chez les souris humanisées. Le premier permet l'étude des événements d'infection chronique, tandis que les deux derniers permettent l'étude des événements aigus après l'infection primaire ou la réactivation virale.

Infection chronique, aigue et réactivée du VIH dans des modèles de souris immunodéficientes humanisés

Nous avons développé un protocole pour la génération et l'évaluation d'un modèle de souris NOG humanisé et infecté par le virus de l'immunodéficience humaine basé sur la greffe de cellules souches, l'exposition intravaginale au virus de l'immunodéficience humaine et l'ARN PCR numérique de gouttelettes Quantification.

Souris NOG humanisées pour l'exposition intravaginale au VIH et le traitement de l'infection par le VIH

Ce protocole décrit une nouvelle méthode pour administrer des médicaments antirétroviraux combinés oraux qui suppriment avec succès la réplication de l’ARN du VIH-1 chez des souris humanisées.

Traitement antirétroviral combiné oral chez des souris humanisées infectées par le VIH-1

Ce protocole décrit la génération de souris du système immunitaire humain (SIH) pour les études d’immuno-oncologie. Les instructions et les considérations relatives à l’utilisation de ce modèle pour tester les immunothérapies humaines sur les tumeurs humaines implantées dans ce modèle sont présentées en mettant l’accent sur la caractérisation de la réponse du système immunitaire humain à la tumeur.

Test d’immunothérapies anticancéreuses dans un modèle murin humanisé portant des tumeurs humaines

Découvrez la construction d'un modèle souris humanisé BLT avec immunité génie-cellulaire contre le VIH. Cette méthode permet les tests précliniques de thérapies géniques ciblant les infections chroniques.

De cellules souches Basé Immunité Engineered contre l'infection à VIH dans le modèle humanisé Souris

Explorer plus de vidéos