Name: Éliminer et analyser les chansons de la vocalisation par ultrasons de souris masculine (USV) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Apprenez à enregistrer et analyser les vocalisations ultrasoniques de souris mâles dans divers contextes sociaux. Cette méthode permet d'étudier la communication vocale et les troubles neuropsychiatriques chez les modèles murins.

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Ce travail a été soutenu par les fonds de l&#39;Institut médical Howard Hughes à EDJ. Nous remercions le Pr. Sylvie Granon (NeuroPSI - Université Paris sud XI - FRANCE) pour nous fournir le matériel du haut-parleur. Nous remercions également les membres du laboratoire Jarvis pour leur soutien, discussions, corrections et commentaires sur ce travail, en particulier Joshua Jones Macopson pour l&#39;aide avec des chiffres et des tests. Nous remercions le Dr Gustavo Arriaga pour l&#39;aide du logiciel Mouse Song Analyzer, en le mettant à la V1.3 et d&#39;autres aspects de ce protocole. V1.0 du logiciel a été développé par Holy et Guo, et v1.1 et v1.3 par Arriaga.

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<li>Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+partial+from+whole+ultrasonic+vocalizations+using+a+go%2Fno-go+task+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acoust.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice.</a> J. Acoust. Soc. Am. 136, 3401(2014).</li>
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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à dévoiler.

Ce protocole fournit des approches pour recueillir, quantifier et étudier les vocalisations de la parade masculine dans le laboratoire à travers une variété de stimuli principalement liés à la femme. Comme présenté précédemment dans Chabout, et al. 23 et dans les résultats représentatifs, l&#39;utilisation de cette méthode nous a permis de découvrir des vocalisations et une syntaxe dépendantes du contexte qui importent les femelles réceptrices. La standardisation de ces stimuli fournira la collecte d&#39;un nombre fiable de USV et permettra des analyses détaillées des chansons et des répertoires de la parade masculine. Quand une femelle en direct est présente avec le mâle, le protocole ne nous permet pas d&#39;identifier clairement l&#39;émetteur des vocalisations. Cependant, des études antérieures ont montré que la majorité des vocalisations émises dans ce contexte étaient les hommes 26 , 29 . La plupart des études utilisant un conspécifique (masculin ou féminin)Comme stimulant pour les hommes, croient que la quantité de vocalisations féminines dans ces contextes est négligeable 4 , 5 , 22 , 30 . Cependant, un article récent a utilisé la triangulation pour localiser les vocalisations de l&#39;émetteur dans les conditions logées dans le groupe 31 et a montré que dans une dyade, la femelle contribue à ~ 10% des USV. Dans le présent protocole, l&#39;utilisation de la femme anesthésiée permet à l&#39;utilisateur d&#39;étudier les vocalisations masculines en présence d&#39;une femme sans son vocalisation. Contrairement aux attentes de cette étude récente 31 , nous n&#39;avons trouvé aucune différence dans le nombre de syllabes émis entre les conditions FE et AF 23 . Il est possible que les femelles vivantes ne contribuent pas de manière significative aux enregistrements ou que les mâles vocalisent moins en présence de femelles vivantes contre femelles anesthésiéesAles. Néanmoins, nous pensons que les expériences futures devraient considérer l&#39;utilisation de cette méthode de triangulation pour évaluer l&#39;effet potentiel de la contribution féminine. Il existe d&#39;autres logiciels disponibles qui peuvent faire quelques-unes des étapes que nous avons décrites, bien que nous ne croyions pas suffisamment aux questions que nous avons posées en utilisant une combinaison de trois programmes: le logiciel A, le script logiciel Mouse Song Analyzer C en utilisant le logiciel B, le Logiciel d&#39;analyse de syntaxe à l&#39;aide d&#39;un calcul de tableaux de calcul personnalisé calculs D + E et décoteur de syntaxe à l&#39;aide de R. Par exemple, un document récent proposait un logiciel appelé VoICE qui permet à l&#39;utilisateur d&#39;extraire les variables acoustiques automatiquement à partir des sonogrammes ou directement sur des unités qui avaient été manuellement Sélectionné par l&#39;utilisateur 32 . Mais, les analyses automatisées ou semi automatisées des séquences ne sont pas aussi détaillées que notre approche. Certains logiciels commerciaux peuvent analyser automatiquement les caractéristiques acoustiques, mais ne fournissent pas d&#39;automateClassification des syllabes; L&#39;utilisateur doit ensuite trier les différentes syllabes. Grimsley, Gadziola, et al. 33 ont développé un programme d&#39;organe vocal vocal virtuel basé sur une table qui regroupe des syllabes basées sur des caractéristiques acoustiques partagées, mais ne fournit pas une détection automatique des syllabes. Leur programme 34 est unique en ce sens qu&#39;il crée de nouvelles séquences à partir de chansons enregistrées à l&#39;aide de modèles Markov, et a donc des fonctionnalités plus avancées que l&#39;édition simple. La plupart des études de communication antérieures sur les souris se sont concentrées sur le côté de l&#39;émetteur 35 , 36 . Peu d&#39;études ont exploré le côté du récepteur 30 , 37 , 38 . Les protocoles de lecture et de discrimination fournissent un test simple pour étudier le côté du récepteur, tel que décrit récemment par Asaba, Kato, etAl. 39 . Dans cette étude, les auteurs ont utilisé une boîte de test à deux choix séparée avec de la mousse acoustique au lieu de la boîte de labyrinthe Y décrite ici. Les deux configurations de choix présentent des avantages et des inconvénients. Tout d&#39;abord, le labyrinthe Y isole le son d&#39;un bras à l&#39;autre, mais la boîte à deux choix le fait. Cependant, en utilisant le design Y-maze, l&#39;animal peut évaluer rapidement les deux chansons jouées simultanément et passer à l&#39;image préférée. Néanmoins, les expériences de lecture en général aident les expérimentateurs à déterminer la signification et donc les fonctions des vocalisations générées pour les animaux conspécifiques. En conclusion, après avoir maîtrisé les techniques de ce protocole et des analyses, les lecteurs devraient pouvoir répondre à de nombreuses questions qui influent sur le contexte, la génétique et la neurobiologie des USV de souris. À l&#39;aide de souris B6D2F1 / J, les stimuli associés à la femelle déclenchent presque toujours des USV chez les hommes que nous avons testés dans notre laboratoire. Il est essentiel pour le collègeCt assez de syllabes (&gt; 100 en 5 min) pour pouvoir obtenir une analyse statistique forte. Pour le dépannage, si aucun USV n&#39;est enregistré (ou pas assez), vérifiez la configuration pour vous assurer que les sons sont enregistrés. Faites une inspection en direct de ce qui se passe dans la cage lors de l&#39;enregistrement en regardant le sonogramme en temps réel sur l&#39;écran de l&#39;ordinateur après l&#39;introduction du stimulus. Sinon, essayez de ré-exposer le mâle à une femme sexuellement mature / réceptive pendant la nuit, puis les loger seul pendant plusieurs jours ou jusqu&#39;à une semaine avant d&#39;enregistrer à nouveau. Sur la base d&#39;observations anecdotiques, nous constatons que certains hommes chantent beaucoup sur une journée (pour presque 5 minutes entières), et pas beaucoup le lendemain, puis encore un autre jour. Nous ne connaissons pas la raison pour laquelle il existe une telle variation dans la matière, mais nous supposons qu&#39;il est probablement motivant ou saisonnier chez les mâles et l&#39;état d&#39;oestrus pour l&#39;urine féminine. Si aucun USV n&#39;est enregistré, essayez d&#39;enregistrer l&#39;animal sur plusieurs jours pour reprendre ces effets variables. UnlDans les oiseaux chanteurs, nous n&#39;avons pas noté de différences manifestes quant à la quantité de chant en fonction de l&#39;heure. Nous trouvons que les mâles ne chantent pas beaucoup (&lt;100 syllabes en 5 min) avant qu&#39;elles aient 7 semaines. Les méthodes de détection présentées ici peuvent extraire des milliers de syllabes et tous les paramètres acoustiques en quelques minutes. Mais comme toute méthode de détection automatique, elle est très sensible au bruit de fond. L&#39;utilisation du logiciel de détection Mouse Song Analyzer avec des enregistrements bruyants (par exemple à partir d&#39;animaux enregistrés avec literie) peut nécessiter un ajustement du seuil de détection pour permettre une plus grande flexibilité. Cependant, cela augmentera également le nombre de syllabes fausses positives et la détection automatique pourrait échouer. Dans de telles circonstances, le codage manuel peut être utilisé. Comme indiqué précédemment, le nombre, les répertoires et la latence des vocalisations sont largement variables en fonction de la contrainte, il se peut donc qu&#39;il soit nécessaire de modifier les paramètres (longueur d&#39;enregistrement,Stimulus, détection de syllabes automatiques, etc. ) pour certaines contraintes pour assurer des enregistrements optimaux pour les analyses statistiques.

Par rapport aux humains, les souris produisent des vocalisations à faible et à haute fréquence, plus tard connues sous le nom de vocalisations ultrasonores (USV) au-dessus de notre gamme auditive. Les USV sont produites dans une variété de contextes, y compris de la recherche de la mère-chiot, des interactions juvéniles, des interactions adultes opposées ou du même sexe 4 , 12 . Ces USV sont composés d&#39;un répertoire multisyllabique diversifié qui peut être catégorisé manuellement 9 ou automatiquement 10 , 11 . Le rôle de ces USV dans la communication a fait l&#39;objet d&#39;une enquête approfondie ces dernières années. Ceux-ci incluent l&#39;utilisation des USV comme lectures de modèles de souris de troubles neuropsychiatriques, de développement ou de comportement 7 , 8 et des états motivationnels / émotionnels internes 13 . On pense que les USV transmettent des informations fiables sur le eL&#39;état du mitter qui est utile pour le destinataire 14 , 15 . En 2005, Holy et Guo 11 , ont avancé l&#39;idée que les souris américaines adultes USV étaient organisées comme une succession d&#39;éléments appelants multisyllabiques ou de syllabes similaires aux oiseaux chanteurs. Dans de nombreuses espèces, un répertoire multisyllabique permet à l&#39;émetteur de combiner et de commander des syllabes de différentes manières pour augmenter l&#39;information potentielle portée par la chanson. La variation de cette syntaxe est considérée comme ayant une pertinence éthologique pour le comportement sexuel et les préférences du couple 16 , 17 . Des études ultérieures ont montré que les souris mâles pouvaient modifier la composition relative des types de syllabes qu&#39;ils produisaient avant, pendant et après la présence d&#39;une femelle de 5 , 18 . C&#39;est-à-dire que les souris mâles adultes utilisent leurs USV pour le comportement de la cour, soit pour attirerOu maintenir un contact étroit avec une femme, ou pour faciliter l&#39;accouplement 19 , 20 , 21 . Ils sont également émis dans les interactions homme-homme, probablement pour véhiculer l&#39;information sociale pendant les interactions 4 . Pour capturer ces changements dans les répertoires, les scientifiques mesurent généralement les caractéristiques spectrales (paramètres acoustiques, tels que l&#39;amplitude, les fréquences, etc. ), le nombre de syllabes ou d&#39;appels USV et la latence au premier USV. Cependant, peu d&#39;entre eux examinent en détail la dynamique de séquence de ces USV 22 . Récemment, notre groupe a développé une nouvelle méthode pour mesurer les changements dynamiques dans les séquences de syllabes USV 23 . Nous avons montré que l&#39;ordre de la syllabe au sein d&#39;une chanson (à savoir la syntaxe) n&#39;est pas aléatoire, qu&#39;il change en fonction du contexte social et que les animaux qui écoutent détectent ces changements comme pertinents sur le plan éthologique. Nous notons queChez de nombreux chercheurs qui étudient la communication animale n&#39;attachent pas au terme «syntaxe» la même signification exacte que la syntaxe utilisée dans le langage humain. Pour les études de communication animale, on entend simplement une séquence de sons ordonnée, non aléatoire, avec certaines règles. Pour les humains, en outre, on sait que des séquences spécifiques ont des significations spécifiques. Nous ne savons pas si c&#39;est le cas pour les souris. Dans cet article et dans la vidéo associée, nous nous efforçons de fournir des protocoles fiables pour enregistrer les USV de la parade masculine dans différents contextes et effectuer des playbacks. L&#39;utilisation de trois logiciels séquentiellement utilisés pour: 1) enregistrements automatisés; 2) détection et codage de la syllabe; Et 3) une analyse approfondie des caractéristiques de la syllabe et de la syntaxe est démontrée ( Figure 1 ). Cela nous permet d&#39;en apprendre davantage sur la structure et la fonction USV des souris mâles. Nous croyons que de telles méthodes facilitent l&#39;analyse des données et peuvent ouvrir de nouveaux horizons pour caractériser la communication vocale normale et anormale dans mouSe modèles de communication et les troubles neuropsychiatriques, respectivement.

<table><tbody><tr><td>Glacière de plage insonorisée</td><td>Voir le papier Gus a plus d’informations sur le type</td><td></td> spécifique <td>Dimensions intérieures (L 27 x L 23 x H 47 cm) :</td></tr><tr><td>Microphone à ultrasons à condensateur CM16/CMPA</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlin, Allemagne</td><td>#40011</td><td>Comprend un câble d’extension&nbsp ;</td></tr><tr><td>Carte son Ultrasound Gate 1216H</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlin, Allemagne</td><td>#34175</td><td>Carte son 12 canaux</td></tr><tr><td>Ultrasound Gate Player 216H</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlin, Allemagne</td><td>#70117</td><td>Lecteur de lecture 2 canaux</td></tr><tr><td>Haut-parleur électrostatique à ultrasons ESS polaroid</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlin, Allemagne</td><td>#60103</td><td>2 haut-parleurs de lecture</td></tr><tr><td>Cage d’essai&nbsp ;</td><td>Ace</td><td>#PC75J</td><td>30 x 8 x 13 cm de hauteur ; plexiglas</td></tr><tr><td>plexiglas séparation</td><td>fait</td> <td>maison-4</td> <td>x 13 cm plexiglas avec trous de 1 cm</td></tr><tr><td>Caméra vidéo</td><td>Logitech</td><td>C920</td><td>logitech HD Pro webcam C920</td></tr><tr><td>Coussin chauffant&nbsp ;</td><td>Sunbeam</td><td>722-810-000</td><td></td></tr><tr><td>Labyrinthe en Y&nbsp ;</td><td>Fait</td> <td>maison-Dimensions</td> <td>intérieures (L 30 x L 11 x H 29 cm) :</td></tr><tr><td>Pince à épiler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Avisoft Recorder (Software A)</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany</td><td>#10101, #10111, #10102, #10112</td><td>http://www.avisoft.com</td></tr><tr><td>MATLAB R2013a (Software B)</td><td>MathWorks</td><td>-</td><td>MATLAB R2013a (8.1.0.604)</td></tr><tr><td>Mouse Song Analyzer v1.3 (Software C)</td><td>Conçu sur mesure par Holy, Guo, Arriaga & Jarvis; Fonctionne avec le logiciel B</td><td></td><td>http://jarvislab.net/wp-content/uploads/2014/12/Mouse_Song_Analyzer_ v1.3-2015-03-23.zip</td></tr><tr><td>Microsoft Office Excel 2013 (Logiciel D)</td><td></td><td>Microsoft-Microsoft</td> <td>Office</td></tr><tr><td>Excel Song Analysis Guide v1.1 (Logiciel E)</td><td>Conçu sur mesure par Chabout & Jarvis. Feuilles de calculatrice Excel, fonctionne avec le logiciel D</td><td></td><td>http://jarvislab.net/wp-content/uploads/2014/12/Song-analysis_Guided.xlsx</td></tr><tr><td>Syntax decorder v1.1 (Logiciel F)</td><td>Conçu sur mesure par Sakar, Chabout, Dunson, Jarvis - dans R studio</td><td></td><td>https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/</td></tr> <tr><td>Graphiz (Software G)</td><td>AT& T Research et autres&nbsp ;</td><td></td><td>http://www.graphviz.org</td></tr><tr><td>Avisoft SASLab (Logiciel H)</td><td>Avisoft Bioacoustics, Berlin, Allemagne</td><td>#10101, #10111, #10102, #10112</td><td>http://www.avisoft.com</td></tr><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (20 mg/mL)</td><td>Anased-Kétamine</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>HCl (100 mg/mL)</td><td>Henry Schein</td><td>#045822</td><td></td></tr><tr><td>eau</td><td></td><td></td><td></td>distillée</tr><tr><td>Pommade oculaire&nbsp ;</td><td>Puralube Pommade vétérinaire&nbsp ;</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Embouts</td><td></td><td></td><td></td>en coton</tr><tr><td>Boîte</td><td></td><td></td><td></td> de Pétri</tr></tbody></table>

Éliminer et analyser les chansons de la vocalisation par ultrasons de souris masculine (usv)

Eliciting and Analyzing Male Mouse Ultrasonic Vocalization (USV) Songs

Les souris produisent des vocalisations à ultrasons (USV) dans divers contextes sociaux tout au long du développement et de l&#39;âge adulte. Ces USV sont utilisés pour la recherche de la mère-chiot 1 , les interactions juvéniles 2 , les interactions opposées et du même sexe 3 , 4 , 5 et les interactions territoriales 6 . Depuis des décennies, les enquêteurs ont utilisé les USV comme proxys pour étudier les troubles neuropsychiatriques et développementaux ou comportementaux 7 , 8 , 9 et plus récemment pour comprendre les mécanismes et l&#39;évolution de la communication vocale entre les vertébrés 10 . Dans les interactions sexuelles, les souris mâles adultes produisent des chansons USV, qui présentent des caractéristiques similaires à celles des oiseaux chanteurs 11 . L&#39;utilisation de ce répertoire multisyllabiqueLes efforts peuvent accroître la flexibilité et l&#39;information potentielles qu&#39;ils portent, car ils peuvent être variés dans la façon dont les éléments sont organisés et recombinés, à savoir la syntaxe. Dans ce protocole, on décrit une méthode fiable pour susciter des chansons USV de souris mâles dans divers contextes sociaux, tels que l&#39;exposition à de l&#39;urine féminine fraîche, des animaux anesthésiés et des femelles d&#39;oestrus. Cela comprend des conditions pour induire une grande quantité de syllabes chez les souris. Nous réduisons l&#39;enregistrement des bruits ambiants avec des chambres sonores peu coûteuses et nous présentons une méthode de quantification pour détecter, classer et analyser automatiquement les USV. Ce dernier comprend l&#39;évaluation du taux d&#39;appel, du répertoire vocal, des paramètres acoustiques et de la syntaxe. Différentes approches et connaissances sur l&#39;utilisation des playbacks pour étudier la préférence d&#39;un animal pour des types de morceaux spécifiques sont décrites. Ces méthodes ont été utilisées pour décrire les changements acoustiques et syntaxiques dans différents contextes chez les souris mâles et les préférences de chanson chez les souris femelles.

Dans le présent protocole, des changements dans le comportement vocal et la syntaxe des souris mâles B6D2F1 / J ont été caractérisés. En général, en utilisant ce protocole, nous avons pu enregistrer, en moyenne par homme par session de 5 minutes, des syllabes classées 675 ± 98,5 en réponse à une UR féminine, 615,6 ± 72 en FE, 450 ± 134 dans AF, 75,6 ± 38,9 en AM et 0,2 ± 0,1 en UR masculin (n = 12 mâles). Les taux étaient de ~ 130 syllables / min pour les femmes UR, ~ 120 syllables / min pour FE, ou ~ 100 syllables / min pour les contextes AF ( Figure 5A ). Les hommes produisent une quantité beaucoup plus grande de syllabes en réponse à l'urine fraîchement recueillie par rapport à l'urine collectée pendant la nuit 10 , 23 . Les mâles chantent également beaucoup moins en présence d'une urine masculine ou fraiche d'anesthésie Figure 5A ). Les hommes changent également leur répertoire dans le contexte 23 . Par exemple, les mâles B6D2F1 / J augmentent de manière significative Production de syllabes de catégorie «m» de saut à pas multiple dans l'état de l'urine féminine ( figure 5B ). Ils modifient également les caractéristiques acoustiques des syllabes individuelles à travers le contexte. Par exemple, les mâles B6D2F1 / J chantent des syllabes à une amplitude et une largeur de bande plus élevées dans le contexte de l'urine féminine et une plus grande pureté spectrale dans le contexte féminin éveillé par rapport aux autres ( figure 6 ) 23 . Ce protocole fournit également un moyen de mesurer les caractéristiques dynamiques de la séquence et donc des changements de syntaxe. En utilisant une méthode adaptée de Ey, et al. 22 , nous utilisons l'ISI pour définir les écarts entre les séquences ( Figure 7A ) 23 , puis utiliser les lacunes pour distinguer et analyser les motifs temporels des séquences syllabes. Nous avons montré que des longueurs de séquence plus longues sont produites dans le contexte féminin réveillé ( Figure 7B )F "&gt; 23. Cette technique nous permet de calculer le rapport des séquences complexes (composé d'au moins 2 occurrences du type" m "syllable) par rapport à des séquences simples (composées d'un ou d'un type" m ", et donc principalement de" S "). Nous avons constaté qu'avec les mâles B6D2F1 / J, le contexte urinaire féminin a déclenché un ratio plus élevé par rapport aux autres ( Figure 7C ) 23 , indiquant qu'ils produisaient des syllabes plus complexes dans l'état de l'urine féminine, mais aussi que ces syllabes étaient distribuées Sur plus de séquences. Nous sommes également en mesure de calculer les probabilités de transition conditionnelle d'un type de syllabe à l'autre (24 types de transition total incluant les transitions depuis et vers l'état "silence") 23 . Nous avons constaté que dans différents contextes, le choix des souris pour les types de transition pour les syllabes de départ donnée diffère et qu'il y a plus de division de syntaxeErsité dans l'état de l'urine féminine ( figure 8 ) 23 . Ces observations sont conformes aux rapports précédents qui montrent que les hommes peuvent modifier les caractéristiques acoustiques ou la composition du répertoire de leurs vocalisations en réponse à différents stimuli et expériences 4 , 5 , 24 . Enfin, le présent protocole fournit des conseils pour tester les préférences féminines avec les reproductions. Nous avons constaté que les femelles B6D2F1 / J préfèrent des chansons plus complexes (contenant 2 ou plus de syllabes "m") par rapport aux chansons simples 23 . La plupart des femmes ont choisi de rester plus souvent sur le côté du labyrinthe Y qui a joué les chansons complexes ( figure 4B ). <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig1.jpg"> Figure 1: diagramme de flux de SofTachez l'utilisation et les analyses. Chaque programme et code associé reçoit un nom de lettre pour expliquer son identité et son utilisation dans le texte principal. In () sont les programmes spécifiques que nous utilisons dans notre protocole. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig1large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig2.jpg"> Figure 2: Configurer pour enregistrer des morceaux de souris mâles. (A) Image d'une boîte d'enregistrement d'atténuation sonore et configurée pour enregistrer les vocalisations USV. (B) Exemple de sonogramme d'un enregistrement réalisé avec le logiciel A ( Tableau 1 ), y compris les caractéristiques spectrales détaillées calculées par "Mouse Song Analyzer v1.3": durée, intervalle inter-syllabes (ISI), fréquence de crête min (Pf min), Fréquence de crête maximale (Pf max), début de fréquence de crête (début Pf), fréquence de pointe Fin (fin Pf) et bande passante. (C) Sonogrammes d'un autre chant masculin à une femelle en direct, à l'intérieur de la boîte d'atténuation sonore et à l'extérieur de la boîte sur le banc de laboratoire dans la même pièce. Nos observations anecdotiques indiquent que les enregistrements dans la boîte du même animal montrent un volume plus important (intensité plus forte) et moins d'harmoniques, mais aucune preuve d'échos dans la boîte sans mousse sonore. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig2large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="figure 3" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig3.jpg"> Figure 3: Capture d'écran de la fenêtre "Mouse Song Analyzer v1.3" whis_gui montrant les différentes options disponibles pour les analyses. Les paramètres présentés sont ceux utilisés pour enregistrer les USV mâles dans les figures et les analyses de données présentées (à l'exception de la durée minimale de la note était de 3 ms). .com / files / ftp_upload / 54137 / 54137fig3large.jpg "target =" _ blank "&gt; Cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig4.jpg"> Figure 4: Choix féminins entre les reproductions de morceaux complexes et simples. (A) Image de l'appareil Y-labyrinthe utilisé et mesures dimensionnelles. (B) Le temps passé par les femelles dans chaque bras, en jouant soit à partir d'une chanson complexe (orchidée féminine) ou plus simple (éveillée féminine) du même mâle. Les données sont présentées pour n = 10 souris femelles B6D2F1J comme moyenne ± SE, avec des valeurs individuelles également indiquées; 9 des 10 femelles ont montré une préférence pour la syllabe plus complexe / la chanson de séquence. * P &lt;0,05 test jumelé de l'élève. Figure modifiée de Chabout, et al. 23 avec la permission.Vide "&gt; Cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure. <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig5.jpg"> Figure 5: nombre de syllabes émis et répertoire dans toutes les conditions . (A) Taux de production de syllabe chez les hommes dans différents contextes. (B) Répertoire des compositions de mâles en présence d'urine féminine (UR), de femmes femelles anesthésiées (FA), de femmes éveillées (FE) et anesthésiées (AM). Les données sont présentées sous la forme moyenne ± SEM. * P &lt;0,03; ** p &lt;0,005; *** p &lt;0,0001 pour le test t d'étudiant jumelé post-hoc après correction Benjamini et Hochberg (n = 12 mâles). Figure de Chabout, et al. 23 avec la permission. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig5large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> Together.within-page = "1"&gt; <img alt="Figure 6" src="/files/ftp_upload/54137/54137fig6.jpg"> Figure 6: Exemples de caractéristiques spectrales dans un contexte différent. (A) Amplitude. * P &lt;0,025 pour le test post-hoc jumelé après la correction. (B) Fréquence ou bande passante. *: P &lt;0,041; **: p &lt;0,005; ***: p &lt;0,0001 après correction. (C) Pureté spectrale des syllabes. * P: &lt;0,025; **: p &lt;0,005; ***: p &lt;0,0001 après correction. Abréviations: urine féminine (UR), femelle anesthésiée (FA), femme réveillée (FE) et mâle anesthésié (AM). Figures modifiées de Chabout et al. 23 avec la permission. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig6large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> 37fig7.jpg "/&gt; Figure 7: Mesures de séquence. (A) Utilisation de l'ISI pour séparer la séquence. L'ISI (SI) court et l'ISI moyen (MI) sont utilisés pour séparer les syllabes dans une séquence, et l'ISI long sur 250 ms (LI) séparent deux séquences. (B) Longueur des séquences, mesurées en nombre de syllabes par séquence, produites par des hommes dans différents contextes. *: P &lt;0,025; ** p &lt;0,005; *** p &lt;0.0001 après correction. (C) Ratio de chansons complexes sur des chansons simples produites par des hommes dans différents contextes. * P &lt;0,041; ** p &lt;0,005; *** p &lt;0.0001 après correction. Les données sont présentées comme moyen ± SEM (n = 12 mâles). Figure de Chabout, et al. 23 avec la permission. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig7large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> Figure 8: Diagrammes de syntaxe Syllable de séquences basées sur des probabilités conditionnelles pour chaque contexte. L'épaisseur de la flèche est proportionnelle à l'occurrence de probabilité conditionnelle d'un type de transition dans chaque contexte moyen de n = 12 mâles: P (occurrence d'une transition donnée par la syllabe de départ). Pour plus de clarté, les transitions rares inférieures à une probabilité de 0,05 ne sont pas affichées. Figure de Chabout, et al. 23 avec la permission. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54137/54137fig8large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a>

Les souris produisent un répertoire multisyllabique complexe de vocalisations ultrasonores (USV). Ces USV sont largement utilisés comme lectures pour les troubles neuropsychiatriques. Ce protocole décrit certaines des pratiques que nous avons apprises et développées pour induire, collecter et analyser systématiquement les caractéristiques acoustiques et la syntaxe des chansons de souris.

Éliminer et analyser les chansons de la vocalisation par ultrasons de souris masculine (USV)

Mice produce ultrasonic vocalizations (USVs) in a variety of social contexts throughout development and adulthood. These USVs are used for mother-pup ...

L’objectif global de cette procédure est de collecter et d’effectuer de manière fiable une analyse acoustique sur les vocalisations ultrasonores ou USV d’une souris mâle adulte dans une variété de contextes sociaux. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur la communication vocale et les troubles associés. Y compris les troubles neuropsychiatriques et les troubles autistiques à l’aide de modèles murins.L’un des principaux avantages de cette technique est qu’elle permet d’obtenir des USV dans divers contextes. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode peuvent avoir du mal à faire en sorte que leurs souris se comportent, vous devez donc manipuler vos souris avec soin et douceur afin de les faire chanter. Un logement standard pour les animaux est suffisant pour ce protocole.Trois jours avant de faire un enregistrement dans des cages neutres, exposez les mâles à une femelle réceptive sexuellement mature pendant la nuit. Dans chaque cage, jusqu’à trois mâles peuvent être accouplés à une femelle. Le lendemain, retirez les femelles.Gardez les mâles logés dans leurs groupes pendant au moins deux jours de plus avant la première session d’enregistrement. Pour enregistrer les USV d’un mâle préparé, transférez doucement l’animal par la queue dans une cage propre sans litière. Placez cette cage à l’intérieur d’une boîte insonorisée.Couvrez ensuite la cage avec le couvercle grillagé ouvert. Fermez la boîte et laissez l’animal s’y habituer pendant 15 minutes Pendant ce temps, préparez un stimulant pour le test comme décrit dans la section suivante. Pour utiliser des échantillons d’urine frais, prélevez-les dans les cinq minutes suivant la session d’enregistrement.Saisissez d’abord une souris par la peau comme pour une injection de drogue. Ensuite, à l’aide d’un coton-tige tenu par une pince à épiler, frottez doucement et poussez sur la vessie de l’animal pour extraire une goutte d’urine et l’absorber complètement avec le coton. Ensuite, sélectionnez une souris dans une autre cage et répétez le processus en utilisant le même coton-tige.Il est important d’utiliser un mélange d’urines fraîches. Conservez l’embout en coton sur un plat propre jusqu’à ce qu’il soit nécessaire Pour préparer une femelle alerte comme stimulus, choisissez-en une qui est au stade pré-œstrus ou œstrus. La souris aura une large ouverture vaginale et des tissus roses environnants.Isolez une telle femelle jusqu’à ce que vous en ayez besoin. Pour préparer une souris anesthésiée, il suffit de fournir une anesthésie comme d’habitude. Confirmez l’état anesthésié avec un pincement des orteils et appliquez une pommade ophtalmique.Jusqu’à ce que vous en ayez besoin, conservez l’animal anesthésié dans une cage propre sur une serviette en papier avec un coussin chauffant sous la cage réglé pour minimiser la chaleur. Assurez-vous de vérifier régulièrement la respiration et la température corporelle des animaux. La souris anesthésiée peut être utilisée jusqu’à trois séances consécutives.Lorsque vous êtes prêt à enregistrer, cliquez sur le bouton d’enregistrement dans le logiciel tout en présentant simultanément le stimulus. Pour présenter de l’urine ou un animal vivant, il suffit de placer l’un ou l’autre à l’intérieur de la cage. Pour présenter un animal anesthésié, placez-le sur le couvercle de la cage.Ensuite, fermez tranquillement la boîte et enregistrez les USV pendant environ cinq minutes. Pour terminer un enregistrement, appuyez sur le carré d’arrêt dans le logiciel. Vérifiez l’animal anesthésié au moins toutes les 15 minutes.Jusqu’à ce qu’il ait retrouvé sa décubitus sternal. Ensuite, il peut être renvoyé dans sa cage d’origine. Entre les tests, nettoyez la cage d’essai avec de l’alcool à 70 % et de l’eau distillée.Traitez les enregistrements acoustiques à l’aide du logiciel d’analyse des chants de la souris. Leur syllabe, leur structure acoustique et leur syntaxe peuvent ainsi être analysées et restructurées pour la lecture selon les besoins. Lavez d’abord l’appareil de lecture avec de l’alcool à 70 %, puis de l’eau distillée.Utilisez un labyrinthe en Y opaque de couleur noire avec des bras de 30 centimètres. Aux extrémités de deux bras, des trous sont percés au niveau du sol pour s’adapter aux haut-parleurs à ultrasons. Après le lavage, séchez le labyrinthe avec une serviette.Une fois séché, installez-le à l’aide des haut-parleurs de lecture et de la caméra vidéo suspendue montée. Pour commencer le test, placez d’abord la femelle dans le labyrinthe pendant une période d’habituation de 10 minutes. Après 10 minutes, si la femelle n’est pas dans le bras de départ, repoussez-la doucement vers le bras de départ et fermez doucement la fenêtre de séparation en plastique.Démarrez ensuite l’enregistrement vidéo et démarrez les enregistrements audio en lecture en boucle. Par exemple, jouez une chanson capturée à partir d’une stimulation urinaire dans un bras et jouez une chanson capturée à partir d’une stimulation féminine dans l’autre bras. Laissez maintenant la femelle explorer le labyrinthe pendant cinq minutes.Il s’agit d’une seule séance. Au bout de cinq minutes, arrêtez l’enregistrement et remettez la femelle dans le bras de départ. Gardez-la là pendant une minute pendant le nettoyage à l’aide d’eau distillée pour éliminer toute urine ou excréments.Faites-le entre toutes les sessions. Pour la deuxième séance, basculez la lecture enregistrée sur les bras opposés et enregistrez la femelle explorant ce scénario pendant cinq minutes. Pour les troisième et quatrième sessions, répétez les deux paramètres de session précédents pour un total de 20 minutes d’enregistrements de test.Arrêtez toujours l’enregistrement vidéo à la fin de toutes les sessions. Une semaine plus tard, effectuez un autre test sur la même cohorte d’animaux. Mais utilisez des exemples de chansons différents.Faites-le pour renforcer la fiabilité des résultats. Pour l’analyse, mesurez le temps passé par les femelles dans chaque bras pour chaque séance. À l’aide du protocole présenté, les changements dans le comportement vocal et la syntaxe des souris mâles B6D2F1J ont été caractérisés.Au cours d’une session d’enregistrement de cinq minutes, un homme moyen a réagi très différemment aux trois stimuli. Les mâles ont également changé leur répertoire à travers le contexte. Par exemple, en réponse à de l’urine fraîche, les mâles ont produit une fraction significativement plus élevée de vocalisations de plusieurs syllabes dans leurs chansons.Les mâles ont également modifié les caractéristiques acoustiques des syllabes individuelles à travers le contexte. Par exemple, ils ont chanté certaines syllabes à une amplitude et une bande passante plus élevées dans le contexte de l’urine féminine. Et à une pureté spectrale plus élevée dans le contexte féminin éveillé.Dans un test de préférence de chanson, les femelles d’un labyrinthe en Y ont choisi de passer plus de temps dans le bras avec des chansons complexes contenant deux vocalisations de plusieurs syllabes ou plus. Par opposition au bras opposé où seules des chansons simples étaient jouées. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de collecter des USV de souris dans une variété de contextes sociaux, comment les lire aux souris et comment effectuer une analyse acoustique et séquentielle de leurs vocalisations.Une fois masterisés, les enregistrements de comportement peuvent être effectués en cinq à 10 minutes par souris. Il faut prévoir plusieurs heures pour l’analyse. Et assurez-vous de manipuler les souris avec soin, afin de ne pas altérer les réponses comportementales.

eliciting-and-analyzing-male-mouse-ultrasonic-vocalization-usv-songs

Research

Recherche

JoVE Journal

Behavior

Comportement

Les vocalisations ultrasonores (USV) chez la souris diffèrent selon l’âge, le sexe, l’état et le patrimoine génétique. En utilisant deux émetteurs d’ultrasons diffusant simultanément à des endroits différents, ce test à deux choix peut évaluer la reconnaissance murine et les réponses de préférence à différentes caractéristiques des USV.

Déterminer ultrasons vocalisation Préférences chez la souris en utilisant un test de lecture à deux choix

Les vocalisations ultrasonores de souris sont utilisées comme substituts pour modéliser les bases génétiques des déficits de communication vocale dans les modèles murins pour les troubles neuropsychiatriques. Le présent protocole décrit trois contextes expérimentaux qui déclenchent de manière fiable des vocalisations ultrasonores chez les petits (tout au long du développement) et les souris adultes (interactions entre personnes du même sexe, interactions entre mâles et femelles avec œstrus).

Enregistrement souris vocalisations ultrasoniques pour évaluer la Communication Sociale

l'activité locomotrice (LMA) est une mesure simple et facile à réaliser de comportement chez la souris. Couplage d'un logiciel de suivi vidéo (VTS) et LMA permet l'amélioration de la spécificité et de la sensibilité, surtout en comparaison avec le manuel, la ligne de méthode de franchissement d'analyse LMA. En outre VTS permet un suivi à long terme des souris LMA.

Souris à court et à long terme de l&#39;activité locomotrice analysées par un logiciel de suivi de la vidéo

Cet article présente un protocole pour un test de conditionnement peur contextuelle et indicé l'aide d'un système vidéo d'analyse pour évaluer l'apprentissage peur et la mémoire chez la souris.

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Le paradigme de liaison distracteur-réponse est décrit. Il peut être utilisé pour mettre en lumière l’influence que des stimuli non pertinents, en concurrence avec des cibles pour une réponse, peuvent avoir sur l’action humaine. Les effets de récupération de la réponse et les effets d’inhibition du distracteur peuvent être analysés dans le cadre du paradigme.

Stimuli pertinents et de contrôle d&#39;action: analyse de l&#39;influence de stimuli Ignoré par le distracteur-réponse Reliure Paradigm

Ce manuscrit décrit un protocole de labyrinthe aquatique de Morris (MWM) conçu pour être utilisé avec un modèle murin couramment utilisé de la maladie d’Alzheimer. Le MWM est largement utilisé dans les modèles de souris transgéniques. La mise en œuvre d’une procédure sensible à la déformation de fond du modèle murin est essentielle pour détecter les différences entre les groupes.

Labyrinthe aquatique de Morris Test: Optimisation pour les souris de souche et environnement de test

Ce protocole étape par étape analyse le comportement de géotaxie négative de drosophile à l’aide d’un système automatisé de multicylindre qui héberge des centaines de mouches et synchronise leur action par un moteur électrique. Lors de la synchronisation, comportement de la mouche géotaxie négative est analysé, enregistrés numériquement et analysées en utilisant le logiciel RflyDetection individu-conçu.

Un dosage automatisé rapide géotaxie négative itérative pour analyser le comportement d’escalade adultes dans un modèle drosophile de la neurodégénérescence

Nous présentons la détection, acquisition et analyse des taux d’eyeblink tout en regardant le contenu des médias.

À l’aide de mesures d’électroencéphalographie et l’enregistrement vidéo de haute qualité pour l’analyse de la Perception visuelle du contenu multimédia

Cet article présente un appareil automatisé de labyrinthe en t que nous avons inventé, et un protocole basé sur cet appareil pour l’analyse axée sur le retard de prise de décisions et processus décisionnel fondé sur l’effort chez les rongeurs mobiles gratuits.

Un labyrinthe en t automatisée basée appareil et protocole d’analyse de retard - et fondé sur l’Effort de prise de décision chez les rongeurs de déplacement gratuit

Ce protocole mesure spatiale d’apprentissage et de mémoire à l’aide du labyrinthe de Barnes. Un nouveau paradigme de demoiselle en détresse sert à évaluer l’activité locomotrice et comportement prosocial chez la souris.

Analysant l’apprentissage Spatial et comportement Prosocial chez la souris à l’aide de la Maze de Barnes et paradigmes de la demoiselle en détresse

Apprenez à enregistrer et analyser les vocalisations ultrasoniques de souris mâles dans divers contextes sociaux. Cette méthode permet d'étudier la communication vocale et les troubles neuropsychiatriques chez les modèles murins.

Éliminer et analyser les chansons de la vocalisation par ultrasons de souris masculine (USV)

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