Ouvrir trachéotomie acide gastrique Aspiration modèle murin de lésion pulmonaire aiguë Résultats dans Maximal aiguë non létaux Lung Injury

L’objectif global de ce modèle d’aspiration d’acide gastrique murin est de produire une lésion pulmonaire aiguë stérile chez une souris qui est étroitement liée à la pathogenèse de la pneumonie acide observée chez l’homme. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le cadre des soins intensifs sur l’identification de stratégies thérapeutiques susceptibles de réduire la gravité et d’améliorer l’issue des lésions pulmonaires aiguës stériles. Le principal avantage de cette technique est qu’elle produit un modèle cliniquement pertinent qui peut tirer parti des nombreux animaux génétiquement modifiés disponibles pour disséquer les mécanismes impliqués.

Bruce Davidson, Ph. D., collègue et collaborateur du corps professoral, et Barbara Mullen, notre associée principale de recherche commerciale, feront la démonstration de la procédure. Induire l’anesthésie dans une chambre contenant 2,75 % d’isoflurane. Confirmez que l’anesthésie a été obtenue par une absence de réponse à un pincement de l’orteil et l’application d’une pommade sur les yeux de l’animal.

Utilisez une tondeuse électrique pour raser la partie ventrale du cou et désinfecter la zone chirurgicale. Ensuite, utilisez une longueur de 15 centimètres d’une suture en soie tressée zéro pour suspendre la souris par les incisives supérieures en position couchée sur une planche de dissection inclinée à 60 degrés, avec le nez inséré dans un cône nasal, délivrant 2,75 % d’isoflurane. Désinfectez davantage la zone chirurgicale en appliquant de la povidone iodée.

Retirez l’excès d’antiseptique avec de la gaze. Infiltrez la ligne médiane du cou de l’encoche sternale à la partie inférieure de la mâchoire avec 100 microlitres de bupivacaïne à 0,5 %. Ensuite, à l’aide d’un scalpel, faites une incision longitudinale de 1 à 1,5 centimètre dans le cou, suivie d’une dissection contondante de la membrane fasciale entre les glandes salivaires à l’aide de deux pinces dentelées incurvées.

Lorsque la trachée est visible, utilisez la pince pour écarter un côté de la musculature paratrachéale. Tout en disséquant entre les fibres musculaires longitudinalement à côté de la trachée. Une fois le plan de dissection établi, maintenez le muscle paratrachéal rétracté avec une paire de pinces, tout en travaillant sous la trachée avec la deuxième pince.

Ensuite, à l’aide de la pince, placez un deuxième brin de 15 centimètres d’une suture en soie tressée zéro sous la trachée. Pour l’instillation intra-trachéale, remplissez d’abord une seringue de 0,5 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 22 avec 0,2 millilitre d’air suivi de 3,6 millilitres par kilogramme d’acide chlorhydrique. Tirez immédiatement la suture trachéale vers le haut pour fournir une traction et demandez à un assistant de presser doucement la cage thoracique pour expulser la capacité vitale.

Insérez l’aiguille de la seringue, côté biseau vers le haut, dans la trachée entre le premier et le deuxième anneau cartilagineux sous le larynx. Ensuite, lorsque le biseau est juste au-delà de la trachée, avec l’aiguille aussi parallèle que possible à la trachée, relâchez le thorax et administrez rapidement le bolus d’acide chlorhydrique pour assurer la dispersion et le dépôt du traitement dans les voies respiratoires distales et les alvéoles. Retirer l’aiguille après la première respiration spontanée pour confirmer l’inhalation de la totalité du volume du bolus dans les poumons, car une administration incomplète n’entraîne que des lésions des voies respiratoires supérieures et ne représente pas la pneumonie sévère aiguë observée chez les patients humains.

Après la première respiration spontanée, utilisez des agrafes chirurgicales pour fermer l’incision et utilisez une seringue de cinq millilitres avec une aiguille de calibre 26 pour injecter un millilitre de solution saline normale stérile par voie sous-cutanée dans la peau du cou pour la réanimation liquidienne. Après avoir confirmé l’absence de réponse à un pincement de l’orteil, fixez l’animal en position couchée comme nous venons de le démontrer et appliquez une pommade pour les yeux. Après avoir rouvert les agrafes, faites une incision longitudinale médiane à travers la peau de la paroi abdominale inférieure à travers l’incision précédente du cou jusqu’à la mandibule.

Suivi d’une autre incision médiane à travers la musculature péritonéale. Utilisez des éponges et rétractez les organes abdominaux pour exposer l’espace rétropéritonéal. Ensuite, clampez la veine de l’artère iliaque externe gauche pour fournir une force de rétraction et utilisez une pince pour retirer doucement le fascia recouvrant l’aorte abdominale et la veine cave.

Utilisez une seringue CC, équipée d’une aiguille de calibre 26 par demi-pouce, pour prélever du sang de l’aorte. Suivi d’une perforation du diaphragme pour provoquer un collapsus pulmonaire. Utilisez des ciseaux de coupe d’os pour couper le diaphragme.

Ensuite, coupez la cage thoracique parallèlement et des deux côtés du sternum, et utilisez un hémostat verrouillable pour rétracter le rabat sternal. Injectez cinq millilitres de calcium et de magnésium à 37 degrés Celsius HBSS dans le ventricule droit pour rincer le système vasculaire pulmonaire. Ensuite, inclinez la planche de dissection à un angle de 60 degrés.

Facilitez l’insertion de la canule en perçant la face ventrale de la trachée juste en dessous du larynx à l’aide d’une aiguille de calibre 20. Ensuite, insérez une canule en acier inoxydable de calibre 20 par demi-pouce dans la trachée par l’ouverture trachéale, comme cela vient d’être démontré. Sécurisation de la canule avec une suture zéro.

Lorsque la canule est en place, remplissez une seringue de cinq millilitres de solution saline normale stérile. Vissez la seringue dans l’un des ports d’un robinet d’arrêt à trois voies. Fixez une seringue vide de cinq millilitres à un deuxième orifice et fixez le dernier orifice à la canule intratrachéale.

Ensuite, instillez un millilitre de solution saline normale dans les poumons et récupérez le lavage avec une deuxième seringue. Vingt-quatre heures après l’atteinte pulmonaire, comme cela vient d’être démontré, des cellules nécrotiques, une perte de l’architecture parenchymateuse pulmonaire et des cellules et débris dans les espaces aériens présentant une infiltration significative de neutrophiles polynucléaires sont clairement observés. Similaire à celui observé chez les patients humains atteints de SDRA sur le plan histologique.

La concentration d’albumine dans le lavage broncho-alvéal est augmentée après l’aspiration acide par rapport aux témoins salins normaux deux et cinq heures après la blessure. La concentration d’albumine est significativement plus élevée cinq heures après les lésions acides par rapport à deux heures, en raison de la réponse inflammatoire. Ceci est cohérent avec la physiopathologie observée chez les patients humains après aspiration acide.

Une fois maîtrisée, la technique des lésions pulmonaires aiguës peut être réalisée en trois à cinq minutes. Et le prélèvement de l’échantillon après les différents moments après la blessure peut être terminé en six à huit minutes si les méthodes sont exécutées correctement. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de ne pas endommager la trachée et l’œsophage lors de la dissection contondante.

Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des lésions pulmonaires aiguës pour explorer des stratégies thérapeutiques visant à réduire la gravité des lésions pulmonaires dues à une induction majeure de lésions pulmonaires inflammatoires aiguës stériles. En utilisant cette procédure, le modèle murin de pneumopathie acide peut également être utilisé pour examiner l’interaction des agressions à faible PH, avec d’autres agressions pulmonaires associées, y compris les particules alimentaires et les bactéries. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de produire une lésion pulmonaire aiguë stérile chez la souris qui ressemble beaucoup à la pathogenèse de la pneumonie acide observée chez l’homme.

N’oubliez pas qu’un bon système de récupération doit être utilisé lorsque vous travaillez avec les anesthésiques volatils utilisés pour effectuer cette procédure.