Name: Méthode de Direct segmentaire livraison intra-hépatique Lutilisation dun modèle hilaire de foie de rat Clamp (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Découvrez une méthode de clampage hilaire hépatique chez le rat pour étudier les molécules pharmacologiques réduisant les lésions d'ischémie-reperfusion. Cette technique permet une infusion directe dans la veine portale.

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Nous tenons à remercier Dennis Mathias pour son travail d&#39;illustration. Ce travail a été soutenu par le NIH T32AI 106704-01A1 et le Fonds T. Flesch pour la transplantation d&#39;organes, Perfusion, d&#39;ingénierie et de régénération à l&#39;Ohio State University.

Toutes les procédures ont été effectuées conformément aux directives du Institutional Animal Care et le Guide du Conseil national de recherches pour l&#39;humanisation des soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire (IACUC) et a fait l&#39;objet d&#39;approbation par le comité Ohio State University IACUC. 1. Mise en place initiale <ol><li> Mise en place du microscope chirurgical et de la salle d&#39;opération (figure 3, figure 4). Allumez tous les équipements y compris pour le maintien de l&#39;anesthésie et la surveillance des signes vitaux. Allumez l&#39;appareil et électrochirurgie pad réchauffement. Placez la pompe à perfusion près de la table d&#39;opération. <ol><li> Dresser 10 ml d&#39;isoflurane liquide pour inhalation (poids moléculaire 184,5) dans la seringue d&#39;anesthésie et le placer dans l&#39;unité d&#39;anesthésie. </li><li> Mise en place d&#39;un récipient de 200 ml d&#39;azote liquide à proximité de la table d&#39;opération et un autre près de la centrifugeuse où des échantillons de sang seront traités. </li><li> Position les instruments chirurgicaux, 4-0 et 7-0 suture en soie tressé, des tampons de coton stérile, 4x4 éponges non-tissés, des seringues de 5 ml, et 27 seringues à insuline de calibre à proximité de la table d&#39;opération. </li></ol></li><li> Préparer la chambre isoflurane et veiller à ce que l&#39;isoflurane suffisante est instillé dans le système de distribution de l&#39;induction de l&#39;anesthésie. </li></ol> 2. L&#39;induction de l&#39;anesthésie <ol><li> Avant de manipuler le rat mis sur l&#39;équipement de protection individuelle (EPI) suivant: masque chirurgical, gants chirurgicaux et blouse à usage unique. </li><li> Peser le rat et enregistrer le poids. REMARQUE: Des rats Sprague Dawley doivent être utilisés. </li><li> Placez le rat dans la chambre d&#39;anesthésie et allumez l&#39;isoflurane et l&#39;oxygène. Induire une anesthésie à l&#39;aide de la chambre isoflurane. </li><li> Pincer les cheveux abdominale de l&#39;animal à l&#39; aide d&#39; une tondeuse à cheveux électrique pour permettre une exposition plus propre (Figure 5). </li><li> Placez le dos des animaux dans la chambre isoflurane pour un supplénal une minute. Effectuer une pincée de pointe afin de vérifier la profondeur de l&#39;anesthésie. </li></ol> 3. procédure <ol><li> Positionner le rat avec le nez de l&#39;animal dans le cône de nez et les quatre extrémités immobilisées avec des dispositifs de retenue ou de ruban adhésif sur le coussin chauffant. </li><li> Continuer l&#39;anesthésie en utilisant le système de délivrance d&#39;anesthésie, cône de nez et de l&#39;isoflurane avec une anesthésie à 3,6% pour les animaux d&#39;un poids compris entre 200 et 250 g et 4% pour les animaux d&#39;un poids supérieur à 250 g. Confirmer la profondeur de l&#39;anesthésie en effectuant une pincée d&#39;orteil et une pincée de peau. </li><li> Faire une incision abdominale médiane du pubis à xiphoïde à travers la peau en utilisant des ciseaux tranchants (figure 6). </li><li> Faire une incision dans le péritoine le long de la linea alba de pubienne à Xiphoid et pénétrer dans l&#39;abdomen en prenant soin de ne pas endommager la vessie ou de l&#39;intestin. Comme le foie colle également au péritoine en avant à proximité de la pointe du sternum, en sorte qu&#39;il libère avant l&#39;incision de la paroi abdominale dans cette arch. </li><li> Faire une incision transversale à travers la peau et le péritoine au niveau de la frontière inférieure du lobe droit du foie. </li><li> Mettez l&#39;anesthésie à 1,6% pour les animaux d&#39;un poids compris entre 200 et 250 g et 2% pour les animaux d&#39;un poids supérieur à 250 g. </li><li> Rétracter la pointe du sternum au moyen d&#39;un collier de moustique courbe. </li><li> Placer nervure écarteurs tirant les nervures aussi loin que possible de la ligne médiane (figure 7). Couper le falciforme, phrénique et ligaments gastriques. Retournez le foie à l&#39;aide de cotons-tiges stériles humidifiées. </li><li> Couper les ligaments supplémentaires si nécessaire pour accéder à la porte. Effectuer une rotation viscérale avec de la gaze humecté d&#39; une solution saline (figure 7). </li><li> Retirez le tissu conjonctif lâche recouvrant le hile portail à l&#39;aide bistouri ou émoussée. Retirez le tissu conjonctif lâche recouvrant la longueur de la veine porte. </li><li> Utilisez une pince pour pousser à travers le conjonctif lâche tquestion postérieure à la veine porte gauche, artère et conduit la bile faisant une fenêtre et placez 4-0 suture Potts , mais ne pas cinch vers le bas (figure 8). </li><li> Dégagez le tissu conjonctif lâche recouvrant la branche postérieure à la veine porte qui arrive à peu près au niveau du rein droit. Cette veine sera utilisée pour canulation. </li><li> Dessiner 0,5 ml de sang de la veine cave inférieure (VCI) avec une seringue d&#39;insuline (figure 9). Placer les 0,5 ml de sang dans un petit flacon, centrifuger à 135 g pendant 12 min. Tenter de prélever du sérum. <ol><li> Si une ligne distincte ne peut pas être appréciée entre les globules rouges et du sérum, essayer de centrifuger pendant encore 2 - 3 min à 135 x g. Prélever le sérum et le placer dans un flacon pour l&#39;alanine-aminotransférase (ALT). geler encliquetage cet échantillon en le plaçant directement dans l&#39;azote liquide. </li></ol></li><li> Coupez deux morceaux de 7-0 suture et lieu près de la veine qui seront utilisés pour la canuletion. Placez la première boucle 7-0 autour de cette veine jusqu&#39;à médial que possible. Attachez cette boucle et l&#39; utiliser pour se rétracter à l&#39; aide d&#39; une pince de moustique courbe (figure 10). Placez une deuxième boucle 7-0 sur la veine qui sera utilisée pour canulation près de son intersection avec la veine porte et placez un lien, mais ne pas cinch vers le bas. </li><li> Préparer la pompe de perfusion avec une seringue de 5 ml avec 3 ml de réactif. Amorcer le tube. </li><li> Pince veine porte distale à l&#39;aide d&#39;une pince microchirurgicale. NOTE: Cela permettra de réduire les saignements lorsque la veine est incisé pour canulation. </li><li> Coupez un trou de 0,5 mm dans la veine entre la suture séjour et 7-0 son intersection avec la veine porte à l&#39;aide de petits ciseaux de microchirurgie. Utilisation cathéter 27-0 à cathétériser la veine porte gauche (Figure 11, Figure 12). Insérez le cathéter après la bifurcation des veines portail gauche et à droite. </li><li> Vérifiez le positionnement de la canule par infusing 1 ml de solution saline normale et surveiller les lobes médians et latéraux gauche du foie à blanchir. confirmer manuellement que le cathéter est passé le décollage de la veine porte droite, mais pas au-delà du décollage de la veine porte alimentant le lobe médian. </li><li> Cinch sur la suture Potts et commencer à temps d&#39;ischémie. Serrer 7-0 suture autour veine et cathéter 27-0 pour le maintenir en place et retirer la pince de la veine porte distale. </li><li> Commencer l&#39;injection de polyéthylène glycol-superoxyde dismutase (SOD PEG-, 0,00067 g / ml) en utilisant la pompe à perfusion. Démarrez la perfusion le plus près possible du début du temps ischémique. </li></ol> 4. Suivi <ol><li> Continuer à surveiller les signes vitaux tout au long de la perfusion de l&#39;animal. L&#39;administration de 2 ml de 0,9% de solution saline normale ou de 2 ml de PEG-SOD (0,00067 g / ml) dissous dans une solution saline normale à 0,9% sur une période de 15 min. </li></ol> 5. revascularisation <ol><li> Prévoyez une heure pour passer du début de l&#39;itemps schemic. Ceci est 1 h de temps d&#39;ischémie chaude. </li><li> Retirez la suture Potts. Retirer le cathéter 27-0. Cinch sur la suture 7-0 autour de la veine. Notez le temps. Cela marque le moment de la reperfusion. </li></ol> 6. L&#39;échantillonnage Suite <ol><li> Dessiner 0,5 ml de sang de la veine cave inférieure à 120 min après la reperfusion. Dessiner le sang lentement pour éviter la lyse des globules rouges. goutte à goutte lentement le sang dans un flacon. Assurez-vous que le saignement de la veine cave inférieure est contrôlé après chaque prélèvement de sang. <ol><li> Si on continue à saigner appliquer une légère pression avec un coton-tige stérile ou un petit 1 cm par 1 cm section coupe de la gaze. </li></ol></li><li> Centrifuger à 135 g pendant 12 min. Si une séparation suffisante est pas atteint, essayer un supplément de 2 - 3 min à 135 x g. </li><li> Placez la moitié du sérum dans un flacon pour un traitement ultérieur pour ALT. Snap geler ces spécimens. </li></ol> 7. euthanasie <ol><li> Bien que le rat est encore sous anesthésie coupe la veine cave inférieure et superior veine cave (SVC) et de surveiller jusqu&#39;à ce que la circulation sanguine, la respiration et cessez de battement de coeur. </li><li> Inciser la membrane et effectuer une brève hépatectomie en incisant la membrane dans un cercle et inciser le tissu conjonctif supplémentaire qui reste reliant le foie à la cavité péritonéale. Retirer le foie de la cavité peritoneale. </li><li> Prenez quatre échantillons des lobes gauche et médiane du foie et quatre échantillons du lobe droit du foie. Les échantillons doivent être aussi grand que possible et leur taille ne sera limitée que par la quantité de tissu hépatique disponible. Placez-les dans de petits flacons étiquetés, et enclenchez gel dans l&#39;azote liquide. Utilisez-les pour un traitement ultérieur pour l&#39;adénosine triphosphate tissulaire (ADP), malondialdéhyde (MDA) et le glutathion (GSH). </li></ol> 8. Analyse post-expérience <ol><li> Déterminer le glutathion (GSH), le malondialdéhyde (MDA) et de l&#39;alanine aminotransférase activités (ALT) dans le tissu du foie et des échantillons de sérum en utilisant des kits de diagnosticselon les instructions du fabricant. </li><li> Homogénéiser le tissu hépatique avec du tampon de lyse et de quantifier en utilisant un dosage de Bradford. Analyse lysat de tissu par électrophorèse sur gel de polyacrylamide-dodécylsulfate de sodium et immunoblot en utilisant des anticorps contre Capase-3 et de l&#39;actine clivée. Quantifier Western blots réalisée avec le logiciel public. </li></ol>

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</ol>

Tous les auteurs déclarent qu&#39;ils ont aucune divulgation.

Cette série d&#39;expériences a montré que l&#39;injection de PEG-SOD dans les lobes gauche et médian conduit à une diminution significative de la libération de ALT, peroxydation lipidique des membranes cellulaires (MDA), et le maintien de glutathion (GSH) par rapport aux témoins (Saline normale ). tissus hépatiques transaminases notamment l&#39;alanine aminotransférase (ALT) sont fixés des marqueurs de lésion hépatocellulaire. La diminution de l&#39;ALT lorsque le lobe gauche est injecté avec du PEG-SOD suggère un effet protecteur du PEG-SOD. L&#39;augmentation des tissus MDA indique une augmentation peroxydation des lipides et est considérée comme un marqueur du stress oxydatif et une lésion tissulaire. La surproduction d&#39;espèces réactives de l&#39; oxygène provoque une augmentation de la production de MDA 26. La réduction significative des tissus MDA dans les lobes gauche et médiane de l&#39;animal lorsqu&#39;il est injecté avec PEG-SOD montre un effet protecteur de PEG-SOD. Ceci est cohérent avec la compréhension actuelle que le PEG-SOD protège les cellules contre les dommagescausée par une réduction partielle des espèces réactives de l&#39; oxygène 27. De plus, en présence d&#39;espèces réactives de l&#39; oxygène, du disulfure de glutathion réduit au glutathion (GSH) 28. Le maintien en GSH dans les lobes gauche et médiane du foie injecté avec du PEG-SOD renforce encore l&#39;effet protecteur du PEG-SOD. En outre, il est démontré que il y a une augmentation de la caspase-3 clivée, un produit de l&#39;apoptose, dans des tissus exposés à une lésion d&#39;ischémie-reperfusion. La diminution de la caspase-3 clivée dans le lobe gauche lorsqu&#39;il est traité avec du PEG-SOD suggère que le PEG-SOD conduit à une diminution de l&#39;apoptose. La superoxyde dismutase (SOD) est une enzyme essentielle dans la détoxication d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène. L&#39;enzyme catalyse la conversion de deux anions superoxyde en peroxyde d&#39;hydrogène et de l&#39;eau. L&#39;enzyme catalase convertit ensuite le peroxyde d&#39;hydrogène en eau et oxygène, 25 l&#39; achèvement du processus. La demi-vie deSOD native a limité son utilisation dans des modèles expérimentaux jusqu&#39;à ce que le développement de glycol-superoxyde dismutase conjugué polyéthylène (PEG-SOD). Conjugaison de SOD de polyethylene glycol augmente sa demi-vie de 6 min à 14 h. Nguyen et al. démontré sa capacité à réduire la peroxydation des lipides dans l&#39; ischémie hépatique chez un modèle de rat, en utilisant une délivrance systémique 29. Il existe une variété de modifications possibles de la technique détaillée ici et certains ont déjà été décrits dans la littérature. Selon le modèle utilisé molécules ont été livrés à l&#39; aide inhalation 11, infusion péridurale 12, injection intraperitoneale 17, 18, 21, 22, l&#39; administration intraveineuse de 10, 14, 15 <sup&gt;, 19, 23, 24 ou par injection dans la veine mésentérique supérieure périphérique 8. Il y a plusieurs étapes critiques dans ce protocole. Le plus important est la canulation de la veine porte. Il faut veiller à ce que le trou découpé dans la veine est pas trop grand. Le tissu est très élastique et le trou agrandira lui-même. Nous vous recommandons de commencer par couper un trou qui est de 0,5 mm avec les ciseaux de microchirurgie. La canule peut être introduite à travers le trou à l&#39;aide d&#39;un instrument, ce qui permet une plus grande souplesse que si la tentative d&#39;exécution de cette partie de la procédure à la main. En outre, tout en alimentant d&#39;abord la canule, il devrait viser directement vers la bifurcation des veines portail gauche et à droite pour éviter piquer un trou dans le mur arrière de la veine. Lorsque la pointe de la canule atteint la bifurcation, il peut alors être introduit dans la veine spécifique gaucheallié. Une fois que la canule est introduite dans la veine porte gauche, qui fournit à la fois les lobes gauche et médiane, sa position peut être confirmée manuellement par le sentiment à l&#39;intérieur de la veine. Sa position peut également être confirmée par l&#39;injection d&#39;une petite quantité de solution saline froide et de voir l&#39;effet sur les segments blanchissement fournis du foie. Le modèle de pince hilaire du foie chez le rat fournit une plate-forme reproductible et stable pour démontrer une lésion ischémique-reperfusion hépatique. Modèles de serrage hile variables ont été utilisées par les chercheurs d&#39;étudier les effets protecteurs des anti-oxydants et d&#39; autres petites molécules 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14. Les points de variation comprennent quels sont les navires de serrage<html> ed, lequel segment sont fabriqués ischémique, si oui ou non le canal biliaire est inclus et la durée de la période de reperfusion 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21. En outre, lorsque ce modèle est utilisé pour étudier les effets de l&#39; administration d&#39;une molécule de la voie d&#39;administration est également hétérogène 8, 10, 11,« &gt; 12, 14, 15, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24. Il y a plusieurs avantages à l&#39;approche décrite. En premier lieu , la canulation directe de la fourniture de portail au segment ischémique permet une livraison hépatique segmentaire directe de la substance pharmacologique à l&#39;étude. Cela permet l&#39;utilisation des autres lobes des foies comme un contrôle interne. en second lieu, canulation hépatique segmentaire permet un volume de distribution réduit pour la molécule étudiée. Cette approche réduit ainsi le risque d&#39;effets secondaires systémiques la substance est injectée directement dans le segment de foie d&#39;intérêt. canulation directe du segment hépatique permet la substance à délivrer de pré-ischémie, Intra-ischémie ou post-ischémie. Cela permet une étude de l&#39;effet de la molécule à tout moment du cycle de lésions d&#39;ischémie-reperfusion. Avec augmentation de la durée ischémique et le niveau accru de blessures occasion supplémentaire pour étudier la régénération du foie serait disponible. Il y a aussi quelques limites de cette approche. Le premier est le coût de démarrage. L&#39;achat d&#39;un microscope chirurgical pourrait être un coût de démarrage significatif pour un laboratoire qui ne possède pas déjà un. Cette technique peut être difficile, voire impossible, sans microscope. Le second est le temps d&#39;apprentissage de la courbe. Bien que cette procédure est relativement simple, il nécessite une certaine pratique et il est probable qu&#39;un novice exigera un grand nombre de procédures pour devenir un expert. En résumé, ce modèle permet une plate-forme reproductible, simple et économique pour étudier les lésions d&#39;ischémie-reperfusion hépatique. Bien que dans le protocole décrit ici polyéthylène gldismutase superoxyde-ycol, un capteur de radicaux libres 25, a été infusé, ce modèle pourrait être utilisé pour insuffler une variété de différentes substances pharmacologiques afin d&#39;évaluer leur impact sur les blessures I / R dans le foie.

Major chirurgie hépatique avec occlusion d&#39;entrée et une transplantation hépatique, nécessite une période d&#39;ischémie chaude, et une période de reperfusion conduisant à une ischémie / reperfusion (I / R) 1 blessure. Les conséquences de blessures I / R dans le foie ont été détaillées largement 1, 2, 3. Les conséquences de I / blessure R détaillée dans la littérature comprennent: la génération d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène, l&#39;initiation de la cascade inflammatoire, y compris l&#39;activation des neutrophiles, des cellules de Kupffer et les cellules endotheliales, l&#39;activation du système d&#39;hème oxygénase et de l&#39;activation des récepteurs de type Toll, un déséquilibre entre l&#39; endothéline et de l&#39; oxyde nitrique, l&#39; activation du facteur nucléaire-kB, et la promotion des cytokines pro - inflammatoires et des molécules d&#39;adhésion synthèse 1, 2, 3. Ces événements peuvent l proinflammatoiresead à l&#39; apoptose, la nécrose, la dysfonction d&#39;organes et de défaillance d&#39; un organe éventuel 3. I / R blessures dans les organes destinés à une transplantation hépatique peut conduire à la perte précoce de la greffe et contribue à la pénurie actuelle des donateurs comme des organes marginaux sont plus sensibles aux blessures 3. Il y a actuellement 15,226 bénéficiaires potentiels sur la liste d&#39; attente pour une transplantation du foie aux États-Unis 4 et seulement 5950 transplantations hépatiques ont été réalisées en 2015 5. En raison de cette limitation extrême disponibilité des organes, la recherche exploration des blessures I / R hépatique est nécessaire afin d&#39;optimiser la fonction du greffon et de l&#39;utilisation d&#39;organes. Les modèles animaux utilisés pour étudier les blessures I / R hépatique comprennent des modèles de serrage de rat hilaire et modèles de transplantation de foie de rat. Il existe une variété de modèles de serrage de hile de rat actuellement en cours d&#39;utilisation. Le plus courant est celui dans lequel la veine porte, l&#39;artère hépatique et biliaire duct à fournir les lobes latéraux et médians de gauche sont serrées au moyen de clips de microchirurgie 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 pendant 30 à 60 min 6, 7, 10, 13, 14, puis une période de reperfusion de 60 min à 24 h 7, 9, 10, 13, 14 est autorisé. Les lobes latéraux et médian gauche du foie de rat représentent environ 70% du parenchyme hépatique 9. Certains protocoles destinés à l&#39;étude préconditionnement ischémique comprennent serrage intermittente des vaisseaux hilairesou le membre postérieur avant une période d&#39;ischémie induite par serrage plus les vaisseaux hilaires 9, 13. Il y a aussi plusieurs modifications décrites dans la littérature. La première consiste à serrer la veine porte et l&#39; artère hépatique fournir les lobes latéraux et médian gauche, mais exclure la voie biliaire 15. Une deuxième modification est d&#39;induire une ischémie hépatique totale par serrage de la veine porte, l&#39; artère hépatique et des voies biliaires avant leur division 16, 17, 18, 19, 20. Une troisième modification comprend le serrage des pédicule au lobe droit pendant 30 à 60 min 8. Une modification supplémentaire consiste à serrer le faisceau vasculaire dans une patte postérieure afin d&#39;induire une lésion du foie 13, 21 </sup&gt;. Diverses approches de la procédure de serrage hilaire sont illustrés sur la figure 1A-D. foie de rat modèles de serrage hile ont été utilisées pour étudier l&#39;impact des molécules et des composés différents sur I / R hépatique. Selon le modèle utilisé ces molécules ont été livrés à l&#39; aide inhalation 11, infusion péridurale 12, injection intraperitoneale 17, 18, 21, 22, l&#39; administration intraveineuse de 10, 14, 15, 19, 23, 24 ou par injection dans la veine périphérique mésentérique supérieure 8 . Le modèle de pince hilaire de foie de rat décrit dans ce rapport includes canulation directe de la fourniture de portail au segment ischémique par l&#39; intermédiaire d&#39; une branche latérale de la veine porte (figure 2), ce qui permet une livraison hépatique segmentaire directe de la substance pharmacologique à l&#39;étude. Notre approche est d&#39;induire une ischémie dans les lobes latéraux et médians gauche pendant 60 min, temps pendant lequel une infusion de la substance à l&#39;étude, dans ce cas, dismutase pégylée-dismutase, un piégeur de radicaux libres 25, est perfusée directement dans le segment ischémique . Des échantillons de sang sont prélevés avant l&#39;induction de l&#39;ischémie et à 120 min après la reperfusion. A ce stade, le rat est sacrifié et des échantillons sont prélevés à partir des lobes gauche et médiane. En outre, des échantillons sont prélevés à partir du lobe droit de servir de contrôle interne. Il existe de nombreux avantages à cette approche. Tout d&#39;abord, quand on peut injecter directement la substance pharmacologique à l&#39;étude dans le segment ischémique o le volumeRépartition de f est très faible en comparaison avec le volume de distribution de l&#39;injection dans la circulation systémique ou la cavité péritonéale. De plus, cette approche réduit, mais ne supprime pas la possibilité d&#39;effets secondaires systémiques.

<table><tbody><tr><td>Rat Sprague-Dawley&nbsp ;</td><td>Harlan Sprague Dawley Inc.&nbsp ;</td><td>200- 250 grammes&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Microscope chirurgical&nbsp ;</td><td>Leica&nbsp ;</td><td>M500-N avec bonbonnes de charbon OHS</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-2001-8</td><td></td></tr><tr><td>Poids moléculaire de l’isoflurane 184.5&nbsp ;</td><td>Piramal Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringue analytique de précision Pressure-Lok&nbsp ; &nbsp ;</td><td>Valco Instruments Co., Inc.&nbsp ;</td><td>SOMNO-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Unité électrochirurgicale</td><td>Macan&nbsp ;</td><td>MV-7A</td><td></td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Braintree Scientific&nbsp ;</td><td>HHP2</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Système d’anesthésie pour petits animaux</td><td>Kent Scientific&nbsp ;</td><td>SS-MVG-Module</td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite</td><td>Kent Scientific&nbsp ;</td><td>PS-MSTAT-RT</td><td></td></tr><tr><td>Chambre d’isoflurane</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0530LG</td><td></td></tr><tr><td>SurgiVet</td><td>Isotec</td><td>CDS 9000 Oxygène de table</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ;</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>27-0 Micro-Canule</td><td>Braintree Scientific&nbsp ;</td><td>MC-28</td><td></td></tr><tr><td>Enrouleurs de côtes&nbsp ;</td><td>Kent Scientific&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>INS600240 Polyéthylène glycol - Superoxyde dismutase (PEG-SOD)</td><td>Sigma Aldrich&nbsp ;</td><td>S9549 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>GenieTouch</td><td>Kent Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Saline Normale</td><td>Baxter</td><td>NDC 0338-0048-04</td><td></td></tr><tr><td>4 x 4 Éponges Non Tissées&nbsp ;</td><td>Critère</td><td>104-2411</td><td></td></tr><tr><td>cotons-tiges stériles</td><td>Henry Schein Santé animale</td><td>1009175</td><td></td></tr><tr><td>U-100 Seringue à insuline de calibre 27</td><td>Terumo</td><td>22-272328</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 5 mL</td><td>BD&nbsp ;</td><td>REF 309603</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Suture en soie tressée</td><td>Deknatel, Inc.</td><td>198737LP</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Suture en soie tressée</td><td>Teleflex Medical&nbsp ;</td><td>REF 103-S</td><td></td></tr><tr><td>1,8 mL Arcticle Tube cryogénique</td><td>USA Scientific&nbsp ;</td><td>1418-7410</td><td></td></tr><tr><td>Instruments microchirurgicaux</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nom</td><td>Société&nbsp ; </td><td>Numéro de catalogue</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Small Scissors&nbsp ;</td><td>Roboz&nbsp ;</td><td>RS-5610</td><td></td></tr><tr><td>Grands Ciseaux</td><td>S& T&nbsp ;</td><td>SAA-15</td><td></td></tr><tr><td>Pince - Grand angle</td><td>S& T&nbsp ;</td><td>JFCL-7</td><td></td></tr><tr><td>Pince - Petit coudé&nbsp ;</td><td>S& T</td><td>FRAS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>Applicateur de clips</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux - non micro</td><td>FST 14958-11</td><td>14958-11</td><td></td></tr><tr><td>Pince - Pointe droite&nbsp ;</td><td>S& T&nbsp ;</td><td>FRS-15 RM8TC</td><td></td></tr><tr><td>Grande pince microchirurgicale</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Petite pince microchirurgicale</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Petite pince microchirurgicale</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18055-02</td><td></td></tr><tr><td>Petite pince microchirurgicale</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>Autres instruments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nom</td><td>Entreprise&nbsp ; </td><td>Numéro de catalogue</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Small Mosquito Clamps</td><td>Générique&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td><Analyse>forte&nbsp ; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nom</td><td>Entreprise&nbsp ; </td><td>Numéro de catalogue<</td><td>strong>Comments</td></tr><tr><td>Alannine aminotransférase (ALT) essai&nbsp ;</td><td>Biovision</td><td>K752-100</td><td></td></tr><tr><td>Dosage du malondialdéhye (MDA)&nbsp ;</td><td>Abcam&nbsp ;</td><td>ab118970</td><td></td></tr><tr><td>Glutathion (GSH) Dosage</td> des anticorps <td>chimiques 7030002</td><td></td><td>des Caïmans</td></tr><tr><td>- Caspase-3 clivée et actine</td><td>Anticorps</td><td>9661</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ Software&nbsp ;</td><td>Instituts nationaux de la santé&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse et d’extraction RIPA&nbsp ;</td><td>Millipore</td><td>10-188</td><td></td></tr></tbody></table>

méthode de direct segmentaire livraison intra-hépatique l&#39;utilisation d&#39;un modèle hilaire de foie de rat clamp

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major chirurgie hépatique avec occlusion d&#39;entrée et une transplantation hépatique, nécessite une période d&#39;ischémie chaude, et une période de reperfusion conduisant à une ischémie / reperfusion (I / R) des blessures avec des conséquences négatives multiples. Potentiel blessure I / R dans les organes marginaux destinés à la transplantation du foie contribue à la pénurie de donneurs courant secondaire à un taux d&#39;utilisation d&#39;organes a diminué. Un besoin important existe pour explorer des blessures I / R hépatique afin de médier son impact sur la fonction du greffon dans la transplantation. foie de rat modèles de serrage hile sont utilisés pour étudier l&#39;impact des différentes molécules sur les blessures I / R hépatique. Selon le modèle, ces molécules ont été livrées en utilisant l&#39;inhalation, la perfusion péridurale, injection intra-péritonéale, l&#39;administration ou l&#39;injection intraveineuse dans la veine mésentérique supérieure périphérique. Un foie de rat modèle de pince hilaire a été développé pour être utilisé dans l&#39;étude de l&#39;impact des molécules pharmacologiques dans l&#39;amélioration des blessures I / R. le described modèle de pince hilaire de foie de rat comprend canulation directe de la fourniture de portail au segment hépatique ischémique par l&#39;intermédiaire d&#39;une branche latérale de la veine porte, permettant une livraison hépatique segmentaire direct. Notre approche est d&#39;induire une ischémie dans les lobes latéraux et médians gauche pendant 60 minutes, au cours de laquelle la substance à l&#39;étude est infusé. Dans ce cas, pégylée-superoxyde dismutase (SOD PEG-), un capteur de radicaux libres, est perfusée directement dans le segment ischémique. Cette série d&#39;expériences démontre que la perfusion de PEG-SOD est de protection contre les blessures I / R hépatique. Les avantages de cette approche comprennent l&#39;injection directe de la molécule dans le segment ischémique avec une diminution conséquente du volume de distribution et à la réduction des effets secondaires systémiques.

Cette expérience a été réalisée avec 2 groupes de n = 3 rats chacun. Trois foies de rats ont reçu une injection avec 2 ml de solution saline normale (NS) avec la pompe de perfusion sur une période de 15 min. Trois foies de rats ont reçu une injection avec 2 ml de solution saline normale (NS) mélangé avec pégylé-superoxyde dismutase (SOD PEG-, 0,00067 g / ml) avec la pompe de perfusion sur une période de 15 min. Comme décrit dans le protocole ci-dessus, des échantillons de sang ont été prélevés pince de pré-hilaire et au post-reperfusion de 120 min. En outre, après achèvement de 120 min de reperfusion quatre échantillons de tissus du foie ont été prélevés sur les lobes gauche et médiane et quatre échantillons de foie ont été prélevés dans le lobe droit du foie de rat. Sérum alanine aminotransférase (ALT) a été mesurée pince de pré-hilaire et au post-reperfusion de 120 min dans la commande (NS) et les animaux expérimentaux (PEG-SOD). Il y avait une différence significative entre le niveau d'ALT de contrôle (NS)animaux de serrage pré-hilaire et au post-reperfusion 120 min. Il y avait une différence significative entre le niveau de contrôle ALT (NS) et les animaux de laboratoire (PEG-SOD) à 120 min (Figure 13). malonaldéhyde tissulaire (MDA) a été mesurée pour la commande (NS) et les animaux expérimentaux (PEG-SOD) dans les deux lobes droit et gauche du foie. Tissue MDA dans le lobe droit (pince non-hilaire) avec injection de commande (NS) et l'injection expérimentale (PEG-SOD) montrent pas de différence significative. lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) MDA tissu avec injection de commande (NS) est significativement différent de celui du lobe droit (pince non-hilaire) p &lt;0,001. Lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) a significativement différents niveaux de MDA tissu avec injection de commande (NS) par rapport à l' injection expérimentale (PEG-SOD) p &lt;0,005 (Figure 13B). glutathion tissulaire (GSH) a été mesurée et le glutathion tissulaire dans le lobe droit (pince non-hilaire) avec injection de commande (NS) unnd injection expérimentale (PEG-SOD) démontrent aucune différence significative. lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) GSH tissu avec injection de commande (NS) est significativement différent de celui du lobe droit (pince non-hilaire) avec injection de commande (NS) p &lt;0,05. Lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) a significativement différents niveaux de glutathion tissulaire avec injection de commande (NS) par rapport à l' injection expérimentale (PEG-SOD) p &lt;0,005 (Figure 13C). Western Blot a été réalisée comparant lobe droit et gauche des animaux témoins et démontre une augmentation clivée dans le lobe gauche caspase-3 après pince hilaire et reperfusion (figure 13D). Un second western blot a été réalisée en comparant les lobes gauche des animaux traités avec le contrôle et avec le PEG-SOD (Figure 13E). Cela démontre une diminution de la caspase-3 clivée dans le tissu hépatique des animaux traités par PEG-SOD. Densitométrie a également été réalisé démonstrationsTing que le niveau de la caspase-3 dans les tissus du foie clivée est significativement augmentée par rapport à la gauche lobe droit des animaux témoins (Figure 13F). En comparant le tissu hépatique du lobe gauche des animaux de laboratoire, infusé avec PEG-SOD, et les tissus du foie lobe gauche des animaux témoins, infusé avec normale Saline, densitométrie démontre une diminution significative de la caspase-3 clivée chez les animaux traités par PEG-SOD par rapport aux animaux traité avec le contrôle (figure 13G). <img alt="Schéma d’anatomie du foie ; veine porte détaillée, artère hépatique, branches des voies biliaires ; l’éducation médicale." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figure 1: Illustrations Anatomique. A. illustration anatomique du foie de rat. B. Anatomical illustration du foie de rat. Le pédicule portail aux lobes gauche et médiane du foie est serré. Les lobes gauche et médiane sont ischémique. C. Anatomicalillustration du foie de rat. Le pédicule portail au lobe gauche est serré. Le lobe gauche est ischémique. D. Anatomical illustration du foie de rat. Le pédicule portail au lobe droit est serré et le lobe droit est ischémique. <img alt="Schéma de perfusion hépatique avec canule pour l’étude vasculaire, illustrant la structure anatomique." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Figure 2: Illustrations Anatomique. illustration anatomique du foie de rat avec portail veine canulée par une branche latérale. Le pédicule du portail pour les lobes gauche et médiane du foie est entourée d'un fil de suture et une pince de microvaisseaux a été utilisé pour serrer autour du faisceau vasculaire. Les lobes gauche et médiane sont ischémique. <img alt="Configuration des instruments chirurgicaux ; Outils : ciseaux, pinces, scalpel. Équipement de stérilisation visible." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="figure 3"> Figure 3: Instrument Set-up. Ce chiffre témoigne e instrument électronique mis en place. <img alt="Configuration du microscope chirurgical pour un travail de précision ; Microscope, panneau de commande, outils d’établi visibles." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> Figure 4: Salle d' opération Set-up. Ce chiffre démontre la salle d'opération mise en place. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig4large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Expérience en laboratoire ; chercheur manipulant des rongeurs pour l’étude ; Procédure de recherche biologique." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> Figure 5: parage des cheveux abdominale. Ce chiffre démontre la coupure des cheveux abdominale. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig5large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> charge / 54729 / 54729fig6.jpg »/&gt; Figure 6: Immobilisation et peau Incision. Ce chiffre démontre l'immobilisation du rat et l'incision cutanée. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig6large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Dissection chirurgicale de rat, étude de l’anatomie, mise en place d’expériences, présentation d’organes internes et analyse de tissus." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> Figure 7: Rib Rétracteur Placement et éviscération. Ce chiffre démontre la mise en place de l'écarteur thoracique et éviscération. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig7large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Dissection animale, intervention chirurgicale, exposition d’organes internes, étude de l’anatomie, recherche pédagogique." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig8.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> Figure 8: Lieu ment de Suture. Ce chiffre démontre la mise en place de la suture. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig8large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Intervention chirurgicale sur rat de laboratoire pour étude expérimentale, instruments de dissection, technique précise." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig9.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 9"> Figure 9: prise de sang de la veine cave inférieure. Ce chiffre démontre la prise de sang de la veine cave inférieure. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig9large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Dissection animale montrant les organes internes ; Mise en place d’une expérience de biologie éducative." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig10.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 10"> Figure 10: Direction Vein ligaturées et rétractés. Ce chiffre démontre la veine branche nouée et rétractée. ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig10large.jpg » target = « _ blank »&gt; S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre. <img alt="Intervention chirurgicale sur rat de laboratoire ; Configuration de la dissection pour l’étude anatomique et la recherche biomédicale." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig11.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 11"> Figure 11: Processus de canulation. Ce chiffre illustre le processus de canulation. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig11large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> <img alt="Dissection chez le rat montrant les organes internes ; outils chirurgicaux visibles ; étude d’anatomie." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig12.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 12"> Figure 12: Canulation. Ce chiffre démontre la canulation. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54729/54729fig12large.jpg" target="_blank">S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.</a> contenu » fo: keep-together.within page = "1"&gt; <img alt="Étude d’ischémie-reperfusion hépatique ; graphiques à barres, immunobuvardage ; taux d’ALT, de MDA, de glutathion ; PEG-SOD." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/54729/54729fig13.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 13"> Figure 13: Les résultats représentatifs: Direct segmentaire intrahépatique Livraison de pégylé-superoxyde dismutase L' utilisation d' un modèle de rat hilaire Clamp. NS = solution saline normale. PEG-SOD = pégylé-superoxyde dismutase, ALT = alanine aminotransférase, MDA = malondialdéhyde. A. Serum alanine aminotransférase (ALT, mU / mL) par rapport entre la pince de pré-hilaire et post-reperfusion de 120 min. Il y a une différence significative entre le contrôle (NS) pince de pré-hilaire et de commande (NS) au niveau post-reperfusion de 120 min (p &lt;0,001). Il existe également une différence significative entre le contrôle (NS) et les groupes expérimentaux (PEG-SOD) à post-reperfusion de 120 min (p &lt;0,05). a été utilisé T test d'un étudiant. Les barres d'erreur représentent l'écart type. B. malondialdéhyde tissulaire dans le lobe droit (pince non-hilaire) avec injection de commande (NS) und injection expérimentale (PEG-SOD) montrent pas de différence significative. est significativement différent de celui du lobe droit (pince non-hilaire) p &lt;0,001 lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) de malondialdéhyde tissulaire avec injection de commande (NS). p &lt;0,005 lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) a significativement différents niveaux de tissu malonaldéhyde avec injection de commande (NS) par rapport à l'injection expérimentale (PEG-SOD). a été utilisé T test d'un étudiant. Les barres d'erreur représentent l'écart type. C. de glutathion tissulaire dans le lobe droit (pince non-hilaire) avec injection de commande (NS) et l' injection expérimentale (PEG-SOD) montrent pas de différence significative. est significativement différent de celui du lobe droit (pince non-hilaire) avec injection de commande (NS) p &lt;0,05 lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) glutathion tissulaire avec injection de commande (NS). lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) a des niveaux sensiblement différents de glutathion tissulaire avec contrôle injection (NS) par rapport à l'injection expérimentale (PEG-SOD) p &lt;0,005. a été utilisé T test d'un étudiant. Les barres d'erreur représentent l'écart type. D. Western Blot a augmenté la démonstration caspase-3 clivée dans le tissu hépatique du lobe gauche (pince post-hilaire et reperfusion) par rapport au lobe droit (pince non-hilaire) des animaux témoins (solution saline normale). E. Western blot démontrant une diminution de la caspase-3 dans les tissus du foie clivée des animaux traités avec le PEG-SOD par rapport aux animaux traités avec le témoin (solution saline normale). F. Niveau de caspase-3 dans les tissus du foie clivée est significativement augmentée dans serrage post-hilaire et les animaux reperfusion (p &lt;0,05). a été utilisé T test d'un étudiant. Les barres d'erreur représentent l'écart type. G. En comparant les tissus de foie de lobe gauche des animaux de laboratoire (infusé avec du PEG-SOD) et de tissus de foie de lobe gauche des animaux témoins (infusé avec du sérum physiologique), il y a une diminution significative de la caspase-3 clivée dans unimals traités par PEG-SOD par rapport aux animaux traités avec le contrôle (sérum physiologique normal). a été utilisé T test d'un étudiant. Les barres d'erreur représentent l'écart type.

Un modèle de pince hilaire de foie de rat unique a été développé pour étudier l&#39;impact des molécules pharmacologiques dans l&#39;amélioration ischémie-reperfusion. Ce modèle comprend la canulation directe de la fourniture de portail au segment hépatique ischémique via une branche de la veine porte, permettant une livraison directe hépatique.

Méthode de Direct segmentaire livraison intra-hépatique L&#39;utilisation d&#39;un modèle hilaire de foie de rat Clamp

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

L’objectif global de ce modèle unique de clamp hilaire hépatique de rat est de permettre l’étude de l’impact des molécules pharmacologiques d’intérêt dans l’amélioration des lésions d’ischémie-reperfusion. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la transplantation hépatique sur les molécules qui peuvent être directement perfusées dans le foie pour aider à médier les lésions d’ischémie-reperfusion. Le principal avantage de cette technique est que la molécule d’intérêt est directement injectée dans la veine porte, réduisant ainsi le volume de distribution.Les implications de cette technique s’étendent à la transplantation de tous les organes, car elle permet de tester des molécules qui pourraient être ajoutées aux perfusats d’organes pour réduire les lésions d’ischémie et de reperfusion. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle en raison de la petite taille de la branche de la veine porte utilisée pour la canulation. Commencez par confirmer le niveau de sédation approprié par pincement des orteils, puis placez le rat sur un coussin chauffant sous un microscope à dissection et retenez les membres.Ensuite, faites une incision cutanée abdominale médiane du pubis au xiphoïde, suivie d’une incision similaire dans le péritoine le long de la ligne blanche. Entrez dans l’abdomen, en prenant soin de ne pas endommager la vessie ou l’intestin, et libérez le foie du péritoine vers l’avant près du processus xiphoïde. Faites une incision transversale à travers la peau et le péritoine au bord inférieur du lobe droit du foie, et utilisez une pince anti-moustique incurvée pour rétracter le processus xiphoïde.Utilisez des écarteurs de côtes pour ouvrir les côtes aussi loin que possible de la ligne médiane et coupez les ligaments falciforme, phrénique et gastrique. Ensuite, utilisez des cotons-tiges stériles humidifiés pour retourner le foie vers le haut et coupez des ligaments supplémentaires si nécessaire pour accéder à la porta. À l’aide d’une gaze humidifiée d’une solution saline, faites pivoter viscéralement le foie, puis retirez le tissu conjonctif lâche recouvrant le hile porte et le tissu conjonctif lâche recouvrant la longueur de la veine porte.À l’aide d’une pince, poussez à travers le tissu conjonctif lâche situé en arrière de la veine porte gauche, de l’artère et du canal biliaire pour créer une fenêtre et entourez lâchement les vaisseaux avec une suture de Potts 4-0. Ensuite, dégagez le tissu conjonctif lâche recouvrant la branche postérieure de la veine porte au niveau du rein droit. Ensuite, à l’aide d’une seringue à insuline, prélevez 0,5 millilitre de sang de la veine cave inférieure et transférez le sang dans un petit flacon.Centrifugez l’échantillon et recueillez le sérum dans un nouveau flacon pour une congélation instantanée dans de l’azote liquide. Coupez deux morceaux de suture 7-0. Placez la première boucle 7-0 autour de la veine porte gauche aussi loin que possible et utilisez une pince anti-moustique incurvée pour rétracter la veine.Placez une deuxième boucle 7-0 lâchement attachée sur la branche postérieure de la veine porte près de son intersection avec la veine porte. Maintenant, chargez la pompe à perfusion avec une seringue de cinq millilitres contenant trois millilitres de réactif dans une solution saline à 0,9 %, et amorcez la tubulure. Utilisez une pince microchirurgicale pour saisir la veine porte distale afin de réduire les saignements pendant la canulation, et utilisez de petits ciseaux microchirurgicaux pour percer un trou de 0,5 millimètre dans la veine entre la suture de maintien 7-0 et son intersection avec la veine porte.À l’aide d’un cathéter 27-0, canulez le système veineux porte gauche, en insérant le cathéter au-delà de la bifurcation des veines portes gauche et droite. Perférez un millilitre de solution saline normale pour confirmer l’emplacement de la canule et surveillez le blanchiment des lobes latéraux et médians gauches du foie. Évaluez manuellement que le cathéter a dépassé le décollage de la veine porte droite, mais pas au-delà du décollage de la veine porte alimentant le lobe médian, puis serrez la suture de Potts, fixez le cathéter avec la suture 7-0 et retirez la pince de la veine porte distale.Commencer immédiatement la perfusion de deux millilitres du réactif d’intérêt sur une période de 15 minutes, avec une surveillance continue des signes vitaux de l’animal tout au long de la perfusion. Une heure après le début de la période ischémique, retirez la suture de Potts et le cathéter, puis serrez la suture 7-0 sur la branche postérieure jusqu’à la veine porte. Deux heures après le début de la reperfusion, prélevez lentement 0,5 millilitre de sang de la veine cave inférieure, puis transférez lentement le sang dans un nouveau flacon.Appliquez une légère pression pour arrêter le saignement de la veine si nécessaire. Ensuite, centrifugez le sang et congelez instantanément la moitié du sérum pour le traitement en aval, comme nous venons de le démontrer. Au point final de l’expérience, inciser le diaphragme en cercle et sectionner tout tissu conjonctif supplémentaire qui relie le foie à la cavité péritonéale.Prélevez le foie et obtenez quatre gros échantillons des lobes gauche et médian, et quatre gros échantillons du lobe droit. Ensuite, placez les échantillons dans des flacons étiquetés individuellement et congelez les tissus dans de l’azote liquide pour un traitement en aval. La mesure sérique de l’alanine aminotransférase chez des animaux normaux traités à une solution saline et à l’oreille avec persfusion de PEG-SOD démontre une différence significative entre les niveaux d’expression des enzymes hépatiques chez les animaux témoins et les animaux expérimentaux à 120 minutes après la reperfusion.L’expression tissulaire du malondialdéhyde dans le lobe droit de la pince non hilaire ne présente pas de différence significative entre le groupe témoin et le groupe expérimental. Cependant, le clamp post-hilaire gauche et le lobe de reperfusion présentent un niveau significativement plus élevé d’expression tissulaire du malondialdéhyde par rapport au lobe témoin non reperfusé et non perfusé, ainsi qu’au lobe droit perfusé de PEG-SOD. Le même schéma est également observé pour l’expression tissulaire du glutathion.L’analyse par transfert Western indique une augmentation du niveau d’expression de la caspase-3 clivée dans le lobe gauche après clamp hilaire et reperfusion, qui diminue chez les animaux traités par perfusion de PEG-SOD, différences qui sont confirmées comme étant significatives par densitométrie. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en trois heures et 30 minutes si elle est exécutée correctement. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler d’obtenir une traction substantielle sur la branche de la veine porte pour la canulation lors de la mise en place de la pince de la veine porte distale.Une fois cette procédure maîtrisée, elle peut être utilisée pour explorer l’impact d’une variété de substances pharmacologiques. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de canuler le système veineux du portail gauche.

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