Name: Procédures chirurgicales et méthodologie pour un modèle murin préclinique de De Novo Métastase du cancer mammaire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Découvrez la résection chirurgicale de tumeurs mammaires chez la souris pour étudier la métastase de novo du cancer du sein. Ce modèle murin MMTV-PyMT permet d'évaluer l'efficacité des thérapies adjuvantes.

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Les auteurs remercient Jo Hill pour l&#39;assistance à l&#39;histopathologie, le Dr John Gleysteen pour l&#39;enseignement de la technique chirurgicale, Tessa Diebel pour l&#39;assistance de la vidéographie, tous les membres des laboratoires Wong et Coussens pour une analyse critique et des discussions, et l&#39;OHSU Knight Cancer Institute pour le soutien financier. Les auteurs reconnaissent le soutien de T32GM071388-10 et T32CA106195-11 à CEG, du NCI / NIH, du Programme de recherche sur le cancer du sein du ministère de la Défense, de la Fondation Susan G Komen, de la Fondation de recherche sur le cancer du sein et d&#39;une Fondation Stand Up To Cancer Lustgarten Subvention de recherche translationnelle de l&#39;équipe des rêves de convergence du cancer du pancréas (SU2C-AACR-DT14-14) à LMC, un prix de la cérémonie de promotion de la santé des femmes à MHW et le Centre Brenden-Colson pour la santé du pancréas à MHW et LMC.

Les animaux utilisés dans le protocole suivant sont couverts par le Comité institutionnel des soins et de l&#39;utilisation des animaux de l&#39;Université Oregon Health &amp; Science (IACUC), qui est conçu pour être conforme aux règlements de la Loi sur le bien-être animal et à la Politique sur le service de santé publique (PHS). Entretien des conditions stériles: les instruments stérilisés doivent être utilisés et entre les souris doivent être nettoyés avec de la gaze stérile, rincés dans du PBS, puis stériliser avec un désinfectant à 70% d&#39;éthanol pendant au moins 15 minutes. Un casque chirurgical, une manchette, une robe et des gants devraient être portés pour des chirurgies de survie. La préparation préopératoire de l&#39;animal pour les chirurgies de survie est incluse dans le protocole suivant. Reportez-vous au tableau 1 pour une liste des réactifs et du matériel. 1. Isolation et préparation de suspensions cellulaires simples à partir de tumeurs mammaires primaires <ol><li> Anesthésier les souris donneuses de 100 jours de MMTV transgéniques-PyMT (FVB / n) et maintenir sous cSédation ontinuous en administrant 2% d&#39;isoflurane via un masque d&#39;anesthésie. Confirmez que la souris est correctement anesthésiée avec un réflexe de pincement de pied absent. </li><li> Dans un contexte stérile, résister aux tumeurs mammaires primaires chez les souris MMTV-PyMT (FVB / n) transgéniques femelles de 100 jours en séparant la tumeur mammaire de la peau sus-jacente et des tissus adipeux environnants et / ou des ganglions lymphatiques à l&#39;aide de ciseaux stériles. Euthanaser les souris anesthésiées par dislocation cervicale. </li><li> Avec des ciseaux stériles ou un scalpel, pique les tumeurs primaires manuellement en petits morceaux (~ 1,0 mm 3 ). Placez les morceaux de tumeur dans 3,0 mg / mL de collagénase A et 4,0 U / ml de DNase I dissous dans du DMEM. Utiliser ~ 10 ml du milieu de digestion ci-dessus pour une tumeur de 1,0 cm de diamètre. <ol><li> Effectuer la digestion dans un flacon stérile de 25 ml avec une barre d&#39;agitation stérile à ~ 125 tr / min et 37 ° C pendant 40 min. </li></ol></li><li> Arrêtez la digestion en ajoutant du sérum bovin fœtal (FBS) à une dilution finale de 10% et placez le mélange entier sur wEt la glace où elle est maintenue. </li><li> Filtrer la suspension de tumeur digérée à travers un filtre de nylon de 0,7 μm dans un tube conique de 50 ml et éliminer toute tumeur restant dans la crépine. Centrifuger le surnageant à 300 xg à 4 ° C. </li><li> Remettre en suspension la pastille dans 10 mL de DMEM par tumeur de 1,0 cm et ré-filtrer à travers une crépine de nylon de 0,7 μm. Déterminer la concentration des cellules, puis centrifuger à 300 xg à 4 ° C. </li><li> Remettre en suspension la pastille dans du diméthylsulfoxyde à 10% avec 90% de FBS à une concentration de 2 x 10 7 cellules vivantes / mL. Stocker des suspensions monocellulaires de tumeur primaire entière à -80 ° C. </li></ol> 2. Injection orthotopique de la tumeur mammaire <ol><li> Décongeler partiellement les suspensions de tumeurs primaires congelées à 37 ° C jusqu&#39;à ce que la pastille congelée puisse être libérée du tube cryogénique dans 20 mL de DMEM et compter les cellules. Centrifuger à 300 xg à 4 ° C et remettre en suspension les cellules dans un DMEM 1: 1: facteur de croissance - préparation réduite de la membrane solaire solubilisée eTiré du sarcome de souris Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) à une concentration de 1 x 10 7 cellules / mL (voir la Table des matières ). </li><li> Placez le côté ventral synagénétique anesthésique de la ventre gauche et maintenez-le sous sédation continue en administrant 2% d&#39;isoflurane via un masque d&#39;anesthésie. </li><li> Stériliser le bon site de la 4ème injection mammaire mammaire en utilisant de l&#39;éthanol à 70% en aérosol et appliquer Poly (vinylpyrrolidone) -Idéine avec un coton-tige stérile. </li><li> Injecter 100 μL (1 x 10 6 cellules vivantes à partir de suspensions de tumeurs primaires congelées) côté biseau vers le haut dans la 4ème glande mammaire non éclairée de la FVB / n femelle de 6 à 10 semaines utilisant une seringue à insuline de 29 G 0,3 ml. </li></ol> 3. Résection chirurgicale de la tumeur mammaire orthotopique <ol><li> 38 à 60 jours après l&#39;injection de cellules tumorales, euthanasier des souris ne présentant pas de volumes de tumeurs orthotopiques allant de 172 à 450 mm 3 en volume [longueur x (largeur 2 </Sup&gt;) / 2] (environ 75% de souris injectées). </li><li> Placez des souris anesthésiées ayant une taille de tumeur appropriée dans le ventral vers le haut sous sédation continue en administrant 2% d&#39;isoflurane via un masque d&#39;anesthésie et confirmez que la souris est correctement anesthésiée avec un réflexe de pincement de pied absent. Appliquer une pommade vétérinaire aux yeux pour prévenir la sécheresse pendant la sédation. </li><li> Pulvériser 70% d&#39;éthanol pour stériliser la zone chirurgicale entourant la tumeur primaire, puis appliquer Poly (vinylpyrrolidone) -Iodine avec un coton-tige stérile. NOTE: L&#39;épilation au site chirurgical a entraîné des excoriations de la peau et / ou des infections pour ~ 5% de souris et a donc été exclue de cette étape (données non présentées). </li><li> Comme le montre la figure 1C , faites une incision cutanée initiale à l&#39;aide de ciseaux brusques à l&#39;intérieur de la tumeur. </li><li> Ensuite, faites une excision supérieure de la peau ( Figure 1C ) à l&#39;intérieur de la tumeur. Faites attention à la nécessité de cautériser toute vasculature feÉmettant la tumeur située sur la peau avant d&#39;étendre l&#39;incision. </li><li> Continuer l&#39;incision cutanée latéralement (postérieure à la tumeur), puis effectuer une excision cutanée supérieure (latérale à la tumeur) et une excision médiale (supérieure à la tumeur) ( figure 1C ). </li><li> Une fois que la peau a été excisée circonférentiellement autour de la tumeur ( Figure 1C ), soulevez la peau qui recouvre la tumeur en attaquant la tumeur en utilisant une pince tout en disséquant la tumeur loin de la musculature de la paroi abdominale et en gardant les glandes mammaires intactes. </li><li> Identifier (par dissection) et cautériser les grands navires qui traversent les 4 ème et 5 ème glandes mammaires. </li><li> Accise environ la moitié de la 4 ème et 5 ème glandes mammaires sur le site de cautérisation pour libérer la tumeur, de la peau sus - jacente, et les segments des glandes mammaires (figure 1c). </li><li> En cas de saignement, identifiez le saignement actifEt les cautériser immédiatement. Si plus de 250 μL de sang est perdu, exclure la souris de l&#39;étude et l&#39;euthanasier. </li><li> Fermez les sites d&#39;excision avec des clips enroulés à l&#39;aide d&#39;un applicateur de clip enroulé ( Figure 1C ). REMARQUE: Retirez les bouchons de la plaie 10 jours après la chirurgie avec un décapant de bande blessure. </li><li> Administrer une solution saline stérile chaude par voie sous-cutanée (4% du poids corporel de l&#39;animal) et garder l&#39;animal chaud avec une lampe chauffante. Vérifiez les animaux tous les 5-10 min pendant la récupération de l&#39;anesthésie. NOTE: L&#39;administration de bupivacaïne ou de lidocaïne a augmenté la mortalité post-opératoire (données non présentées). Les souris qui présentaient des signes de douleur (hunching, ne voulant pas se déplacer, absence de toilettage) 1 h après la chirurgie ont été euthanasiées. <ol><li> Une fois la souris complètement récupérée, renvoyez-la à la société d&#39;autres souris. </li></ol></li></ol> 4. Isolation et traitement du sang et du poumon pour la cytométrie et l&#39;histologie du flux &lt;Ol&gt; <li> Aux points d&#39;évaluation de l&#39;étude, préparer des souris pour diverses évaluations histopathologiques si désiré. 90 min avant l&#39;euthanasie, donner à chaque souris une injection intrapéritonéale de bromodeoxyuridine (BrdU, 50 μg / g de poids de souris) à une concentration de 6,25 μg / μL dans 1x PBS. NOTE: Les stocks congelés de bromodésoxyuridine dissoute sont utilisés dans un mois après la préparation. </li><li> 10 min avant l&#39;euthanasie, avec la souris anesthésiée, collecter du sang rétroorbital (&gt; 500 μL) en utilisant des tubes capillaires héparinés et ensuite transférer sur des tubes revêtus d&#39;EDTA dipotassique sur glace. </li><li> Pour éliminer les poumons et les tissus mammaires restants, effectuer une incision de la ligne médiane avec des ciseaux du bas de l&#39;abdomen jusqu&#39;à la bouche pour exposer les cavités thoraciques et péritonéales ( Figure 2A ) et éplucher la peau latéralement pour exposer également les 4 th et 5 th mammaire Les glandes. </li><li> Accepter le tissu mammaire mammaire restant et examiner iT pour exclure la repousse de la tumeur primaire en évaluant le tissu intégré à la paraffine fixée au formol (FFPE) en série par la coloration par l&#39;hématoxyline et l&#39;éosine (H &amp; E) ( Figure complémentaire 1 ). </li><li> Pour enlever les poumons, ouvrir la paroi abdominale sur le diaphragme avec des ciseaux, puis éuthanasier l&#39;animal en coupant l&#39;aorte abdominale pour évacuer le sang avant la perfusion de poumons ( Figure 2B- 2C ). </li><li> Coupez le diaphragme le long de la cage thoracique d&#39;une approche abdominale en vous assurant d&#39;éviter les poumons et le cœur. Ensuite, exposez le thorax en découpant les côtés latéraux de la cage thoracique ( figure 2D ). </li><li> À l&#39;aide d&#39;une aiguille de calibre 23 sur une seringue de 20 mL, perfusez des poumons avec ~ 5,0 mL de DPBS (~ 10 mL / min) par le ventricule droit du cœur jusqu&#39;à ce que les poumons deviennent entièrement blancs ( Figure 2E -2F ). Couper immédiatement le cœur de la vence principalePar conséquent, le sang ne re-perfuse pas dans le poumon. </li><li> Pour que les tissus pulmonaires soient réparés et traités pour des évaluations histopathologiques, injecter 1,0 ml de formol à 10% à 4 ° C dans le coin de la trachée exposée vers le haut vers les poumons en utilisant une aiguille de calibre 23 ( Figure 2G - 2H ). Cesser l&#39;injection une fois que les poumons sont complètement expansés et remplis de fixateur ( figure 2I ). </li><li> Les lobes des poumons d&#39;accise de la trachée et l&#39;émersion fixent le tissu pulmonaire dans un formol tampon neutre pour l&#39;insertion ultérieure de paraffine ou le milieu congélateur OCT, selon les procédures histopathologiques standard. </li><li> Évaluer quantitativement le fardeau métastatique dans les poumons par séparation en série du tissu pulmonaire FFPE et évaluer les sections de microtome (100 μm, treize sections), par coloration H &amp; E ( figure 1B ). </li></ol>

<ol><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212(2006).</li>
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</ol>

Les auteurs n&#39;ont aucune divulgation de conflit avec les données présentées ici.

Modifications et dépannage: Lorsqu&#39;une tumeur disséquante qui se dissout loin de la paroi abdominale, la tumeur peut rester adhérente à la paroi abdominale. Ceci a été observé chez &lt;5% de souris injectées avec une tumeur (données non présentées). Pour les souris atteintes de tumeurs adhérentes à la paroi abdominale, la souris doit être euthanasiée car la résection est difficile sans repousse primaire de la tumeur. Limites du modèle...

Les femmes en Amérique du Nord ont un risque de croissance de cancer du sein de ~ 12% à vie 2 ; La plupart de ces personnes auront des tumeurs primaires éliminées par voie chirurgicale, et selon le sous-type de cancer, recevront alors une thérapie ciblée, endocrinienne, chimiothérapie et / ou radiologique dans le cadre adjuvant 3 . Les exemples incluent les femmes diagnostiquées avec des cancers positifs aux récepteurs hormonaux recevant des thérapies anti-oestrogènes et des femmes atteintes de tumeurs positives à l&#39;HER2 recevant des thérapies ciblées par HER2 avec radiothérapie / chimiothérapie, alors qu&#39;aucune thérapie ciblée n&#39;est encore disponible pour les tumeurs négatives 3 . Malgré les progrès dans les traitements radiologiques, de chimiothérapie, personnalisés et hormonaux qui complètent la résection chirurgicale, la maladie se retrouve chez 30 à 70% des femmes diagnostiquées avec une maladie de stade II ou III 4 , car les thérapies sont largement inefficaces dans l&#39;élimination de la maladie métastatique dans les organes distants, y compris Poumon, os, bPluie et / ou foie 5 . Ceci est particulièrement important étant donné que lorsque la maladie métastatique se produit en l&#39;absence de repousse tumorale primaire, cela implique que les cellules malignes disséminées étaient probablement déjà présentes dans les organes secondaires au moment de la chirurgie définitive. Ainsi, les traitements capables d&#39;éradiquer ou de ralentir la croissance des tumeurs métastatiques sont nécessaires de toute urgence. Alors que les modèles de souris de nouveau de la carcinogenèse mammaire ont été remarquablement informatifs dans les mécanismes révélateurs régissant la progression néoplasique 1 , les modèles existants ont également plusieurs limites. L&#39;un d&#39;entre eux est le fait que les modèles transgéniques de novo développent généralement des tumeurs primaires dans de multiples glandes mammaires, dans lesquelles le fardeau tumoral primaire limite la durée des études. Bien que l&#39;évasion de cellules tumorales primaires et l&#39;ensemencement métastatique se produisent probablement au début de la progression néoplasique dans ces modèles, le développement franche de tumeurs métastatiques se produit tardivement et en fonction deN le modèle de la souris et le fond de la déformation, est souvent partiellement pénétrant 1 . Cela limite encore l&#39;utilité des modèles de novo pour la découverte de molécules régulant les métastases dans les organes secondaires et pour évaluer l&#39;efficacité préclinique de la thérapeutique dans le milieu adjuvant. Pour contourner ces limites, nous avons développé un modèle autochtone nouveau de métastase de carcinome mammaire dans les poumons. Femelles transgéniques parentales (c. -à- MMTV-PyMT sur le FVB / N fond de contrainte pour les études décrites ici) portant un stade avancé de novo des tumeurs mammaires sont vieillis à environ 100 jours 6, à quel point les tumeurs primaires sont chirurgicalement réséquées et enzymatiquement dissociées en Suspensions cellulaires simples. Les suspensions (1 x 10 6 cellules) sont à leur tour expliquées orthotopiquement chez des souris femelles syngéniques réceptrices de 6-7 semaines, où des tumeurs mammaires primaires primaires se développent sur une période de 38 à 60 jours ( 3 ), les souris destinataires sont anesthésiées et les tumeurs primaires sont résistées chirurgicalement de sorte que la repousse de la tumeur au site chirurgical est minimisée, conformément à la chirurgie chez les femmes ( Figure complémentaire 1 ). Sur le fond de la souche FVB / n, les souris développent des foyers métastatiques histologiquement détectables dans les poumons avec une pénétrance de 45% par ~ 115 jours après la chirurgie ( figure 1B ). Avec cette latence prolongée de la croissance tumorale métastatique, le modèle est idéalement positionné pour la distribution de la thérapie adjuvante et pour élucider et évaluer la biologie sous-jacente influençant la progression métastatique suite à l&#39;élimination chirurgicale des tumeurs primaires.

<table><tbody><tr><td>Isofluorane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>N/A</td><td>Prescription commander</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Roche</td><td>11088793001</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>25 mL Flacon Pyrex</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS139525</td><td></td></tr><tr><td>Sérum Bovin Fœtal</td><td>Atlanta Bio&nbsp;</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.7 et micro ; Crépine en nylon M&nbsp ;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>Tube conique de 50 ml.</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel à facteur de croissance&nbsp ;</td><td>BD</td><td>354230</td><td>Préparation de membrane basale solubilisée à facteur de croissance réduit extraite du sarcome de souris d’Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)</td></tr><tr><td>Poly(vinylpyrrolidone)&ndash ; Complexe d’iode</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td>29 gauge 0.3 mL seringue à insuline</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>Kit de cautériseur pour petits vaisseaux</td><td>FST</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>Clips de plaie</td><td>Texas Scientific</td><td>205016</td><td></td></tr><tr><td>Applicateur de clip de plaie AutoClip&nbsp ;</td><td>BD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip extracteur de clip de bobinage&nbsp ;</td><td>BD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>Bromodeoxyuridine</td><td>Roche</td><td>10280879</td><td></td></tr><tr><td>Tubes capillaires héparinisés&nbsp ;</td><td>Fisher</td><td>22362566</td><td></td></tr><tr><td>Tubes microtainer avec EDTA dipotassique&nbsp ;</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>seringue de 20 mL</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo-Fisher</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>OCT-moyen de congélation&nbsp ;</td><td>VWR</td><td>25608930</td><td></td></tr><tr><td>Formol, tamponné, 10 % (tampon phosphate)</td><td>Fisher</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille 23g</td><td>Fisher</td><td>14-826-6B</td><td></td></tr><tr><td>FVB/n souris</td><td>Jackson Laboratories</td><td>001800</td><td></td></tr></tbody></table>

procédures chirurgicales et méthodologie pour un modèle murin préclinique de de novo métastase du cancer mammaire

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Un aspect limitant le taux des modèles murins transgéniques d’adénocarcinome mammaire est que la charge tumorale primaire dans le tissu mammaire définit généralement les critères d’évaluation de l’étude. Ainsi, les études axées sur l’élucidation des mécanismes des métastases de novo à un stade avancé sont compromises, tout comme les études examinant l’efficacité des thérapies anticancéreuses ciblant les médiateurs des métastases dans le cadre adjuvant. De nombreux modèles murins de cancer du sein ont été développés via l’expression ciblée d’oncoprotéines dominantes dans les cellules épithéliales mammaires, produisant des modèles imitant variablement les sous-types de cancer du sein histopathologiques et définis par le transcriptome fréquents chez les femmes1. Bien que l’on ait beaucoup appris sur la biologie de la cancérogenèse mammaire avec ces modèles, leur utilité dans l’identification des molécules régulant la croissance des métastases à un stade avancé est compromise car les souris sont généralement euthanasiées à des moments plus précoces en raison d’une charge tumorale primaire importante. De plus, étant donné qu’un pourcentage important de femmes diagnostiquées avec un cancer du sein reçoivent un traitement adjuvant après la résection chirurgicale des tumeurs primaires et avant la présence d’une maladie métastatique détectable, des modèles précliniques de métastases de novo sont nécessaires de toute urgence en tant que plateformes pour évaluer de nouvelles thérapies visant à cibler les foyers métastatiques. Pour remédier à ces lacunes, nous avons développé un modèle murin de métastases de novo du cancer mammaire, dans lequel les tumeurs mammaires primaires sont réséquées chirurgicalement, et des foyers métastatiques se développent par la suite sur une période post-chirurgicale de 115 jours. Cette longue latence fournit un modèle traitable pour identifier les régulateurs fonctionnellement significatifs de la progression métastatique chez les souris dépourvues de tumeur primaire, ainsi qu’un modèle pour évaluer l’efficacité thérapeutique préclinique des agents visant à bloquer les molécules fonctionnellement significatives aidant à la survie et à la croissance des tumeurs métastatiques.

Plus de 75% des souris recevant 1 x 10 6 cellules provenant de tumeurs mammaires primaires dérivées de souris MMTV-PyMT, développent des adénocarcinomes mammaires simples allant de 172 à 450 mm 3 dans les 38 à 60 jours (données non présentées). Les souris admissibles à la randomisation sont ensuite inscrites dans les groupes d'étude suite à la résection chirurgicale des tumeurs primaires, comme indiqué ( Figure 1C ). La repousse tumoral...

Les modèles précliniques évaluant la thérapie adjuvante ciblant les métastases du cancer du sein sont insuffisants. Pour remédier à cela, nous avons développé un modèle murin de métastases de l&#39;adénocarcinome mammaire pulmonaire de novo , dans lequel les thérapies administrées dans le milieu adjuvant (résection post-chirurgicale des tumeurs primaires) peuvent être évaluées en fonction de l&#39;impact sur les métastases pulmonaires préalablement ensemencées.

Procédures chirurgicales et méthodologie pour un modèle murin préclinique de De Novo Métastase du cancer mammaire

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

Nous avons développé un nouveau modèle murin de métastases de novo du cancer mammaire qui imite étroitement l’évolution du cancer du sein humain, fournissant une plate-forme préclinique pour évaluer la biologie, la progression métastatique sous-jacente de la maladie et l’efficacité des thérapies administrées dans le cadre adjuvant. Les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvées par le comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Oregon Health and Science University. Notre modèle murin est établi en récoltant des tumeurs primaires dissociées enzymatiquement à partir de souris transgéniques âgées de 100 jours, de souris atteintes du virus de la tumeur mammaire, du polyome moyen T ou MMTV-PyMT.Une fois, 10 à la sixième cellules tumorales sont injectées orthotopiquement dans des souris femelles receveuses syngéniques et les tumeurs primaires se développent sur une période de 38 à 60 jours. Des souris porteuses de tumeurs de 170 à 450 millimètres cubes sont inscrites pour une résection chirurgicale de la tumeur primitive. L’analyse effectuée 115 jours après l’intervention a révélé que les souris présentaient des foyers métastatiques histologiquement d

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Imagerie time-lapse est utilisé pour évaluer le comportement des principaux pré-néoplasiques des cellules épithéliales mammaires issues de modèles de souris génétiquement modifiées de risque de cancer du sein afin de déterminer s'il existe des corrélations entre certains paramètres comportementaux et génétiques distinctes des lésions.

Imagerie time-lapse de primaires prénéoplasiques cellules épithéliales mammaires issues de modèles de souris génétiquement modifiées de cancer du sein

Un modèle murin de cancer du cerveau de métastase est établi par échographie injection intracardiaque guidée par imagerie de cellules MDA-MB231/Br-GFP. Développement des métastases intracrâniennes multifocales a été suivie longitudinalement en utilisant à haute résolution de 9,4 T IRM.

Ultrasound Imaging guidée injection intracardiaque de développer un modèle de souris de cancer du sein métastases cérébrales Suivi par IRM longitudinale

L'activation de mutations latentes avec l'adénovirus Cre dans les résultats du système canalaire mammaire dans un cancer cliniquement pertinente du sein métastatique. L'incorporation d'un promoteur YFP permet de suivre les cellules tumorales métastatiques distales. Ce modèle est utile pour étudier la métastase latente, l'immunité anti-tumorale, et pour la conception de nouvelles immunothérapies pour traiter le cancer du sein.

Initiation de carcinome du sein métastatique en ciblant de l&#39;épithélium canalaire avec adénovirus Cre: un modèle de souris transgénique roman du cancer du sein

Un modèle murin de métastases hépatiques préclinique réalisée par une technique d'injection de hemispleen.

Un préclinique modèle murin de métastases hépatiques

L’objectif de ce protocole est d’étudier la tumorigenèse mammaire. Avec cette technique, les tumeurs mammaires de souris sont retirées et des cellules primaires sont préparées à partir des tumeurs. Un protocole d’extraction pulmonaire est inclus pour l’étude des métastases pulmonaires. De plus, un autre protocole d’analyse des fibroblastes embryonnaires de souris à partir de l’embryon de souris est inclus.

Tumeur primaire et MEF cellule d&#39;isolement pour étudier métastases pulmonaires

Afin de clarifier le processus en plusieurs étapes de la dissémination peritoneale d'un carcinome de l'ovaire, l'étude actuelle présente un modèle expérimental murin du développement de la tumeur d'origine et métastases péritonéales par inoculation orthotopique avec ces cellules tumorales.

Murin modèle expérimental de tumeur de développement original et péritonéale Métastase<em&gt; via</em&gt; Orthotopique Inoculation avec des cellules de l&#39;ovaire Carcinome

Nous introduisons un modèle de cancer du sein orthotopique murin et modèle de mastectomie radicale avec la technologie de la bioluminescence pour quantifier le fardeau tumoral pour imiter la progression du cancer du sein humain.

Génération d’un modèle de Cancer du sein métastatique orthotopique murin et effectuant une mastectomie radicale Murine

Dans ce protocole, nous décrivons un modèle de souris de résection chirurgicale incomplète du sarcome de tissu mou pour tester (neo)thérapies adjuvantes.

Un modèle de souris de sarcome de tissus mous incomplètement réséqué pour l’essai (Neo)adjuvant thérapies

Les modèles de xénogreffes dérivées de patients (PDX) et les modèles murins génétiquement modifiés transplantables récapitulent fidèlement les maladies humaines et sont des modèles préférés pour la recherche fondamentale et translationnelle sur le cancer du sein. Ici, une méthode est décrite pour transplanter orthotopiquement des fragments de tumeur mammaire dans le coussinet adipeux mammaire afin d’étudier la biologie tumorale et d’évaluer la réponse médicamenteuse.

Transplantation orthotopique de tumeurs mammaires comme modèles précliniques pour le cancer du sein

La modélisation intracrânienne de métastase de cerveau est compliquée par une incapacité de surveiller la taille et la réponse de tumeur au traitement avec des méthodes précises et opportunes. La méthodologie présentée couple l’injection intracrânienne de tumeur avec l’analyse de formation image de résonance magnétique, qui une fois combinée, cultive des injections précises et cohérentes, la surveillance accrue d’animal, et les mesures précises de volume de tumeur.

Modélisation des métastases cérébrales par injection intracrânienne et imagerie par résonance magnétique

Le manuscrit décrit une méthodologie pour l’établissement ainsi que le suivi longitudinal de la croissance des métastases pulmonaires spontanées à partir de tumeurs mammaires injectées orthotopiquement, susceptible d’intervention à tous les stades de la cascade métastatique.

In vivo Imagerie pour mesurer les métastases pulmonaires spontanées de cellules tumorales mammaires injectées orthotopiquement

Découvrez la résection chirurgicale de tumeurs mammaires chez la souris pour étudier la métastase de novo du cancer du sein. Ce modèle murin MMTV-PyMT permet d'évaluer l'efficacité des thérapies adjuvantes.

Procédures chirurgicales et méthodologie pour un modèle murin préclinique de De Novo Métastase du cancer mammaire

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