Name: Quantification histologique chronique Infarctus du myocarde chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Découvrez la quantification histologique de l'infarctus du myocarde chez le rat par échantillonnage systématique et analyse d'images. Cette méthode évalue précisément la taille de l'infarctus et le remodelage du ventricule gauche.

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L’étude a été soutenue par le Fonds national suisse [FNS 310030-149986 à MNG], l’Université de Fribourg et l’Hôpital de Fribourg.

Tous les animaux ont reçu des soins humains en conformité avec la Convention européenne de protection des animaux. Les interventions chirurgicales ont été réalisées conformément à la loi suisse sur la protection des animaux après avoir obtenu l&#39;autorisation de l&#39;Office vétérinaire de l&#39;Etat, Fribourg, approuvé par l&#39;Office vétérinaire fédéral, Suisse. 1. Coeur de récolte REMARQUE: Toutes les interventions chirurgicales ont été réalisées sous anesthésie isoflurane. Des efforts ont été faits pour diminuer la souffrance animale. En particulier, tous les animaux ont reçu une injection sous-cutanée de 0,1 mg / kg de buprénorphine pré-anesthésie. Le protocole chirurgical pour introniser un infarctus du myocarde a été précédemment décrit ailleurs 13. <ol><li> Effectuer une sternotomie sur un animal myocardially infarci sous anesthésie (animal intubé, 2,5% d&#39;isoflurane, l&#39;anesthésie appropriée confirmée par la patte de pincement réflexe). <ol><li> Ouvrez l&#39;animal en coupant la peau et les musclesavec des ciseaux chirurgicaux. Couper les nervures sur la gauche et à droite, puis retirez la poitrine. </li><li> Retirez les adhérences qui restent après la chirurgie antérieure (LAD de ligature). Couper l&#39;aorte et retirer le cœur. Mettez le tissu dans 1 M KCl (dans du PBS), puis le laver avec du PBS. </li></ol></li></ol> 2. Préparation des tissus <ol><li> Mettez le cœur infarci longitudinalement dans une matrice de coeur de rat acrylique. Gardez-le à -20 ° C pendant 1 heure. </li><li> Couper le coeur directement dans la matrice à l&#39;aide d&#39;une lame de rasoir avec une sécante. Veiller à chaque tranche est de 2 mm d&#39;épaisseur. Couper environ 5-7 diapositives pour chaque coeur (en fonction du niveau de remodelage); ce qu&#39;on appelle l&#39;échantillonnage systématique. </li><li> A ce stade, effectuer la coloration chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium de (TTC) est facultatif (conserver l&#39;orientation des tranches cardiaques base-apex). <ol><li> Incuber à 1% dans du PBS CTT pendant 50 min à 37 ° C. Incuber dans 4% de paraformaldehyde (PFA) pendant 20 min à 1 h. Mettez les sections between deux plaques de verre avec 2 mm d&#39;écartement et de prendre des photos avec un microscope stéréologique couplé avec un appareil photo à un grossissement 15X. PRUDENCE! Paraformaldéhyde est toxique. </li></ol></li><li> Glisser congélation (1 er choix) <ol><li> Mettre chaque lame dans un moule en plastique (10 x 10 x 5 mm) avec un milieu pour Cryotomie (température de coupe optimale, EAO) de montage, de maintenir l&#39;orientation (placer le côté de sommet orienté de la section vers le bas sur le fond du moule). Congeler les blocs avec les vapeurs 2-méthylbutane sous azote liquide de refroidissement pendant 10 - 15 min. Enfin, stocker le tissu à -80 ° C. </li></ol></li><li> Paraffinization (2 e en option) <ol><li> Placer chaque lame dans l&#39;intégration des cassettes (maintenir l&#39;orientation en plaçant le côté orienté vers le sommet, de la section vers le bas sur le fond de la cassette), puis dans 4% de PFA pendant 24 heures. Mettez-le dans une machine pendant la nuit du processeur de tissus. <ol><li> Incuber dans de l&#39;éthanol à 70% pendant 2 heures. Incuber dans ethanol 95% pendant 2 heures. Incuber dans de l&#39;éthanol à 100% pendant 3 h. Incuber dans du xylol pendant 4 heures. Incuber dans de la paraffine (fondu à 60 ° C dans un four) pendant 5 heures. Enfin, faire des blocs en intégrant chaque diapositive de coeur dans de la paraffine. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Masson-Goldner trichrome Coloration <ol><li> Faire des coupes de tissus provenant des blocs de paraffine avec un microtome manuel (épaisseur: 5 pm) ou à partir de blocs d&#39;OCT avec un cryostat fixé à -18 ° C (épaisseur: 7 pm). </li><li> Colorer une diapositive de chaque partie de coeur pour chaque rat (3 - 4 sections transversales par diapositive) avec Masson-Goldner trichrome coloration (voir annexe). REMARQUE: à partir de cette étape pour les sections de paraffine. <ol><li> Faire fondre les lames à 60 ° C dans un four. Sous une hotte, Déparaffiner eux xylol deux fois pendant 10 minutes chacun. Réhydrater dans 100% d&#39;éthanol, 95% d&#39;éthanol, 70% d&#39;éthanol et de l&#39;eau distillée pendant 3 min à chaque fois. REMARQUE: à partir de cette étape pour le cryosections. </li><li> Fixez-Bouin solution du jour au lendemain. Ensuite, rincez-les dans de l&#39;eau du robinet pendant 10 - 15 min. Rincez-les dans de l&#39;eau distillée. Incuber eux dans l&#39;hématoxyline de Mayer pendant 3 min. </li><li> Retirez les diapositives et les laisser dans l&#39;eau distillée pendant 5 min. Ensuite, les incuber dans de l&#39;acide Fuchsine-Ponceau pendant 5 min. Rincer dans de l&#39;acide acétique à 1% pendant 1 min. </li><li> Ensuite, les incuber dans de l&#39;acide phosphomolybdique Orange G pendant 1 min. Rincez-les dans de l&#39;acide acétique à 1% pendant 1 min, les incuber dans la teinture vert clair pendant 10 minutes, et rincez-les dans de l&#39;acide acétique à 1% pendant 1 min. </li><li> Déshydrater dans 70% d&#39;éthanol (30 s), 95% d&#39;éthanol (30 s) et 100% d&#39;éthanol (5 min). Mettre une goutte d&#39;un milieu de montage résineux sur les coupes de tissus, les couvrir avec des lamelles, et les laisser sécher. </li></ol></li></ol> 4. Infarctus Analyse de la taille <ol><li> Acquérir une image de chaque diapositive sur un stéréomicroscope (grossissement 15X) couplé avec un appareil photo. Photographie d&#39;une règle avec le même réglages. </li><li> Utiliser un logiciel d&#39;analyse d&#39;image pour mesurer l&#39;épaisseur de la cicatrice au milieu de l&#39;infarctus, l&#39;épaisseur de la cloison, le ventricule gauche (VG), la zone de cavité, la zone de l&#39;infarctus et de la zone de tissu à l&#39;aide de LV. <ol><li> Réglez l&#39;échelle avec l&#39;image de la règle (figure 1A). <ol><li> Cliquez sur Mesures puis sélectionnez Conversion Factor Set. Tracez une ligne sur la barre d&#39;étalonnage. Faites un clic droit sur l&#39;image et cliquez sur Terminer le calibrage. Notez la valeur de la barre, puis cliquez sur OK. </li></ol></li><li> Sélectionnez le LV de l&#39;image du cœur teinté (figure 1B). Utilisez l&#39;outil multiple de segment. Sélectionnez le point par point LV, et cliquez ensuite à droite Copier / Coller partout. </li><li> Mesurer l&#39;épaisseur de la cicatrice et le septum en utilisant l&#39;outil de mesure du seul segment (figure 1C </strong&gt;). </li><li> Détecter automatiquement la LV cavité, Infarctus, et les zones BT en utilisant l&#39;outil de mesure de la zone automatique en mode RGB (figure 1D). <ol><li> Cliquez sur l&#39;outil. Activer seulement les frontières et Contigu en mode RVB. Enfin, cliquez dans la zone d&#39;intérêt pour le détecter. Si nécessaire, utiliser des outils de précision. </li></ol></li></ol></li><li> Calculer la taille de l&#39;infarctus comme étant le rapport de la zone de l&#39;infarctus dans la zone basse tension. </li><li> Calculer l&#39;indice d&#39;expansion comme suit: [LV zone de cavité / surface entière LV] / [épaisseur de l&#39;infarctus / épaisseur de la cloison], avec toute la surface LV comprenant à la fois de la cavité VG et des zones de tissu BT. </li><li> Enfin, calculer une &quot;moyenne&quot; pour chaque coeur comme suit: [moyenne de l&#39;indice d&#39;expansion des diapositives infarcis] * [Nombre de diapositives infarcis / Nombre total de diapositives]. </li></ol>

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<li>Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroid+administration+after+myocardial+infarction+promotes+early+infarct+expansion.+A+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat.</a> J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Étapes critiques dans le Protocole tissu fibrotique peut être évalué avec précision dans un modèle de rat MI chronique en utilisant l&#39;échantillonnage systématique du cœur et de l&#39;image récoltées analyses de coupes histologiques trichromatiques tachés obtenus de la base à l&#39;apex. Deux étapes sont particulièrement importantes pour la mise en oeuvre du protocole de succès. Tout d&#39;abord, l&#39;utilisation de KCl pour le coeur la récolte permet au muscle cardiaque...

L&#39;infarctus du myocarde (MI) est une cause majeure de décès et d&#39;invalidité dans le monde entier. La maladie coronarienne est la principale cause; MI résulte d&#39;une ischémie coronarienne consécutive à des événements tels que l&#39;occlusion. Lorsque reperfusion est pas effectuée dans les 6 premières heures, l&#39;ischémie induit une nécrose myocardique irréversible. Chez les patients, la caractérisation des MI repose sur différents outils de diagnostic, y compris les signes cliniques, l&#39; électrocardiographie, l&#39; évaluation des niveaux plasmatiques de biomarqueurs, l&#39; échocardiographie, l&#39; imagerie IRM, et des analyses histologiques 1. MI aiguë et chronique sont classés comme deux phases différentes de blessures selon le calendrier de la nécrose myocardique par rapport au temps de l&#39;occlusion coronaire. La phase aiguë, survenant pendant les 7 premiers jours, est associée à la perte de cardiomyocytes, une inflammation généralisée, et le recrutement de fibroblastes. La phase subaiguë, caractérisé par cicatrisation du tissu cardiaque et la formation d&#39;une cicatrice, surviententre 1 et 4 - 6 semaines. Expansion de l&#39;infarctus, paroi du ventricule amincissement, et le ventricule dilatation caractérisent la phase chronique. Remodelage extensif du ventricule gauche entraîne progressivement une insuffisance cardiaque sévère 2. MI induite par artère descendante antérieure gauche permanente (LAD) ligature représente le modèle standard pour rongeurs d&#39;infarctus du myocarde chronique. Les ligatures imite coronaires l&#39;occlusion coronaire. La taille de l&#39;infarctus dépend du site de la ligature. Caractérisation de la lésion ischémique du myocarde chez un modèle de rongeur est réalisée de façon classique en utilisant les taux plasmatiques des marqueurs biologiques tels que la troponine I et T 3 échocardiographie, l&#39; IRM et l&#39; histologie 4,5. les niveaux de biomarqueurs sont corrélés avec le degré de cardiomyocytes mort. Échocardiographie évalue la gauche altération de la fonction ventriculaire résultant d&#39;anomalies de mouvement de la paroi régionales. En outre, les techniques d&#39;imagerie non invasives, telles que l&#39;IRM à haute résolution ouéchocardiographie, permet l&#39;évaluation de la réduction du mouvement de la paroi, le volume de la zone de cicatrice réduite et la perfusion myocardique viable et l&#39;amincissement de la paroi. dimensions LV permettent l&#39;évaluation précise de la taille de l&#39;infarctus. Enfin, la quantification du myocarde viable et morte peut être effectuée en utilisant des taches spécifiques post-mortem de coupes histologiques de coeurs récoltés et permet de vérifier la taille de l&#39;infarctus (IS). Une autre caractéristique importante est l&#39;évaluation de l&#39;indice d&#39;expansion de l&#39; infarctus (IE) 6. L&#39;assurance-emploi est associé à l&#39;infarctus transmural et commence dans les 3 premiers jours. L&#39;assurance-emploi est caractérisé par une réduction progressive de l&#39;épaisseur de paroi, une augmentation de la taille de la cavité LV, et les changements qui en découlent dans la forme de LV. Afin d&#39;évaluer l&#39;efficacité thérapeutique des nouveaux traitements - en particulier, les stratégies de régénération basée sur des cellules, des matrices, et le gène évaluation de la prestation-précise de MI chez les rongeurs est d&#39;une importance primordiale.Lorsqu&#39;elle est mesurée sur une section transversale unique obtenue au niveau du muscle papillaire, la taille IS peut être biaisée en raison de la grande variabilité qui existe dans le développement des infarctus après ligature LAD; l&#39;infarctus apex pourrait alors être occultée. Fait important, des méthodes plus précises à la taille MI déterminée ont été décrits pour les souris ou les rats 7-9 10. Néanmoins, IS est insuffisante pour quantifier avec précision le remodelage du VG ou des réductions thérapeutiquement induites (ou empêchements) du remodelage. En effet, IS est généralement exprimée en pourcentage du volume de LV totale évaluée sur des coupes transversales du coeur. Bien que cette méthode est valable pour l&#39; IM aigu, l&#39;amincissement de la paroi de LV se produisant pendant le remodelage reste sous-évalué 11,12. Une quantification morphométrique complète de la taille de l&#39;infarctus et des changements structurels devrait quantifier plusieurs paramètres, tels que la longueur endocardique et épicardique et de diamètres, ainsi que des infarctus et des zones saines. Nous décrivons une appr méthodologiqueoche d&#39;évaluer avec précision MI et le remodelage dans un modèle de rat chronique.

<table><tbody><tr><td>Matrice cardiaque de rat acrylique 2 mm</td><td>72-5015</td><td>Harvard Appartus</td><td></td></tr><tr><td>Inspira ventilateur avancé à volume contrôlé</td><td>Harvard Apparatus</td><td>557058</td><td></td></tr><tr><td>Catheter Insyte 14 G</td><td>BD</td><td>381267</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T</td><td>BDHA361603E</td><td>VWR</td><td></td></tr><tr><td>TTC</td><td>T8877-10G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Mayer hématoxyline</td><td>MHS32-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Acide Fuchsin CI 42685</td><td>F8129-50G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Ponceau Xylidin CI 16150</td><td>P2395-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Orange G CI 16230</td><td>O3756-100G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Vert clair CI 42095</td><td>L5382-25G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>P9333-500G</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Xylol</td><td>10315083</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol absolu</td><td>10303990</td><td>HoneyWell</td><td></td></tr><tr><td>2-méthylbutane</td><td>M32631-1L</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stéréographique</td><td>SM2800</td><td>Nikon</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>99340</td><td>Reactolab</td><td></td></tr><tr><td>Cassette d’enrobage</td><td>K113.1</td><td>Carl Roth</td><td></td></tr><tr><td>Bersoft Logiciel</td><td></td> de mesure <td>d’image Bersoft.com</td><td>Logiciel sous licence</td></tr></tbody></table>

quantification histologique chronique infarctus du myocarde chez le rat

Histological Quantification of Chronic Myocardial Infarct in Rats

L’infarctus du myocarde est défini comme la mort des cardiomyocytes due à une ischémie prolongée ; une réponse inflammatoire et la formation de cicatrices (fibrose) suivent la lésion ischémique. Après la phase aiguë initiale, le remodelage chronique du ventricule gauche (VG) modifie la structure et la fonction du cœur. La ligature coronarienne permanente chez les petits animaux a été largement utilisée comme modèle de référence pour un modèle chronique d’infarctus du myocarde. L’évaluation histologique de la taille de l’infarctus est couramment effectuée ; Néanmoins, il n’y a pas de standardisation des méthodes de quantification. En effet, des aspects méthodologiques importants, tels que le nombre de sections analysées et les méthodes d’échantillonnage et de quantification, ne sont généralement pas décrits et empêchent donc toute comparaison entre les enquêtes. Trop souvent, la quantification est réalisée sur une seule section obtenue au niveau des muscles papillaires. Étant donné que de nouvelles stratégies visant à réduire l’expansion et le remodelage de l’infarctus sont à l’étude, il est important de normaliser des protocoles précis de prélèvement cardiaque. Nous décrivons une méthode précise pour quantifier la taille de l’infarctus à l’aide d’un échantillonnage systématique du cœur de rat récolté et d’analyses d’images de coupes histologiques colorées trichromatiques obtenues de la base à l’apex. Nous fournissons également des preuves que le calcul de l’indice d’expansion (EI) a permis d’évaluer la taille de l’infarctus, en tenant compte des changements du ventricule gauche tout au long du remodelage.

Six semaines après la ligature LAD, les cœurs ont été récoltées à partir de rats Lewis. coupes de tissus de 2 mm ont été obtenus à partir de l&#39;apex à la base. Une procédure de coloration TTC a été réalisée pour visualiser la zone de l&#39; infarctus, qui apparaît en blanc, et le myocarde sain, qui apparaît en rouge (Figure 2). Selon le site de la ligature de la LAD, la taille de l&#39;infarctus varie. Pour les grands MI, Infarctus transmural ont été observées du somm...

L’évaluation post-mortem de l’infarctus du myocarde (IM) chez les rongeurs est basée sur la quantification de l’infarctus sur des coupes cardiaques colorées. Nous décrivons une méthode précise pour quantifier la taille de l’infarctus en utilisant un échantillonnage systématique de cœurs de rats récoltés de la base à l’apex et des analyses d’images de coupes histologiques colorées en trichrome.

Quantification histologique chronique Infarctus du myocarde chez le rat

Myocardial infarction is defined as cardiomyocyte death due to prolonged ischemia; an inflammatory response and scar formation (fibrosis) follow the ...

L'objectif général de cette procédure histologique est de réaliser une quantification morphométrique de l'indice d'expansion de l'infarctus et des paramètres structurels cardiaques à l'aide d'un modèle de rat souffrant d'infarctus du myocarde afin d'évaluer la taille de l'infarctus et le remodelage du ventricule gauche. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine cardiaque, telles que l'effet d'une thérapie régénérative après un infarctus du myocarde ou de nouvelles stratégies visant à réduire l'expansion de l'infarctus. Le principal avantage de cette technique réside dans l'utilisation d'un échantillonnage systématique du cœur de rat prélevé pour évaluer précisément la taille de l'infarctus et tenir compte des modifications du ventricule gauche au cours du remodelage.La mise en œuvre de cette méthode permet d'évaluer la taille de l'infarctus dans un modèle chronique de rat souffrant d'infarctus du myocarde. Elle peut également être appliquée aux souris ou à d'autres modèles ischémiques, tels que l'infarctus aigu du myocarde ou l'ischémie-reperfusion. Pour commencer cette procédure, réalisez une sternotomie sur un animal présentant un infarctus du myocarde, sous anesthésie.Faites une incision dans la peau et les muscles le long du sternum à l’aide de ciseaux chirurgicaux. Ensuite, coupez les côtes à gauche et à droite pour retirer le thorax. Puis, retirez les adhérences résiduelles après la ligature de l’artère descendante antérieure (LAD).Couper l'aorte et retirer le cœur, puis placer le tissu dans du PBS contenant un molaire de chlorure de potassium pendant moins d'une minute avant de le rincer avec du PBS. Afin de préserver le tissu, il convient de retirer soigneusement le PBS présent à l'intérieur des ventricules. Ensuite, transférer le cœur infarci vers une matrice cardiaque pour rat en acrylique et le positionner longitudinalement.Ensuite, conservez-le à moins 20 degrés Celsius pendant une heure. Pour un échantillonnage systématique après une heure, découpez le cœur directement dans la matrice à l’aide d’un rasoir. Veillez à ce que chaque section ait une épaisseur de deux millimètres.Ensuite, réalisez la coloration au TTC en incubant les sections dans du TTC à 1 % pendant 15 minutes à 37 degrés Celsius, puis incubez-les dans du PFA à 4 % pendant 20 à 60 minutes à température ambiante. Par la suite, placez les sections entre deux plaques de verre munies d'espacers de deux millimètres et prenez des photographies à l’aide d’un microscope stéréologique couplé à une caméra avec un grossissement de 15x. Une procédure de coloration au TTC a été effectuée afin de visualiser la zone d’infarctus, qui apparaît en blanc, et le myocarde sain, qui apparaît en rouge.Pour un infarctus du myocarde de grande taille, des infarctus transmuraux ont été observés de l'apex à la base. Les infarctus plus petits présentaient un tissu infarci blanc visible de l'apex jusqu'à la région médiane du cœur. Pour les petits infarctus non transmuraux, un tissu fibrotique était observé sur une ou deux sections seulement à partir de l'apex.Pour congeler les sections, placez chaque section dans un moule en plastique contenant un milieu de montage pour cryotomie et positionnez l'apex vers le bas dans le moule. Congelez les blocs avec des vapeurs de 2-méthylbutane refroidies par azote liquide pendant 10 à 15 minutes. Ensuite, conservez les tissus à moins 80 degrés Celsius.Pour la paraffinage, placer chaque section dans une cassette d'inclusion avec l'apex orienté vers le bas, puis conserver les cassettes dans du PFA à 4 % pendant 24 heures. Ensuite, placer les cassettes dans un appareil de traitement des tissus pendant la nuit. Une fois le traitement terminé, réaliser des blocs en incluant chaque section cardiaque dans de la paraffine.Dans cette procédure, préparez des coupes tissulaires de 5 micromètres d'épaisseur à partir des blocs de paraffine à l'aide d'un microtome manuel. Ensuite, coloriez une lame provenant de chaque section cardiaque pour chaque rat par la coloration trichrome de Masson-Goldner. Pour les sections en paraffine, faites fondre les tissus à 60 degrés Celsius dans une étuve.Sous une hotte, déparaffinisez-les deux fois dans du xylène pendant dix minutes chacun. Ensuite, réhydratez-les dans de l’éthanol à 100 %, de l’éthanol à 95 %, de l’éthanol à 70 %, puis dans de l’eau distillée pendant trois minutes chacun. Pour les sections déparaffinisées et pour les sections cryogéniques, fixez-les dans la solution de Bouin toute la nuit.Le lendemain matin, rincez-les à l’eau courante pendant 10 à 15 minutes, puis rincez à nouveau à l’eau distillée. La fixation à l’acide picrique de Bouin est l’étape la plus importante pour garantir une excellente coloration de Goldner. Incubez-les dans l’hématoxyline de Mayer pendant trois minutes.Après trois minutes, retirez les lames et laissez-les dans de l'eau distillée pendant cinq minutes. Incubez-les ensuite dans du fuchsine acide ponceau pendant cinq minutes avant de rincer avec de l'acide acétique à 1 % pendant une minute. Ensuite, incubez les sections dans de l'acide phosphomolybdique orange g pendant une minute, puis rincez-les dans de l'acide acétique à 1 % pendant une minute.Incuber pendant dix minutes dans l'agent colorant vert clair, puis rincer à l'acide acétique à 1 % pendant une minute. Enfin, déshydrater les sections successivement dans de l'éthanol à 70 % pendant 30 secondes, dans de l'éthanol à 95 % pendant 30 secondes, puis dans de l'éthanol à 100 % pendant cinq minutes. Appliquer une goutte de milieu de montage résineux sur les sections tissulaires, les recouvrir de lamelles et les laisser sécher.À cette étape, acquérez une image de chaque lame à l’aide d’un microscope stéréo couplé à une caméra, avec un grossissement de 15x. Prenez une photographie d’une règle selon les mêmes paramètres. Des sections minces de cinq micromètres ont été découpées à partir de chaque tranche cardiaque et colorées au trichrome de Masson-Goldner.Les tissus sains apparaissaient en rouge et le tissu conjonctif en vert. Ensuite, utilisez le logiciel d'analyse d'image pour mesurer l'épaisseur de la cicatrice au milieu de l'infarctus, l'épaisseur du septum, la surface de la cavité du ventricule gauche, la surface de la zone d'infarctus et la surface du tissu du VG. Pour ce faire, définissez l'échelle à l'aide de l'image de la règle.Cliquez sur les mesures et sélectionnez le facteur de conversion. Tracez une ligne sur la barre d'étalonnage. Cliquez avec le bouton droit sur l'image et cliquez sur terminer l'étalonnage.Prenez note de la valeur de la barre, puis cliquez sur OK. Utilisez l'outil de segmentation multiple pour sélectionner point par point le VG, puis effectuez un clic droit et collez à n'importe quel endroit. Ensuite, mesurez l'épaisseur de la cicatrice et du septum à l'aide de l'outil de mesure segmentaire unique. Puis, détectez automatiquement la cavité du VG, l'infarctus et les zones du VG à l'aide de l'outil de mesure automatique des surfaces en mode RVB.Activez uniquement les bords et les zones contiguës en mode RVB. Enfin, cliquez à l'intérieur de la zone d'intérêt pour la détecter. Ensuite, calculez la taille de l'infarctus comme le rapport entre la surface de l'infarctus et la surface du VG.Ensuite, calculez l'indice d'expansion à l'aide de cette formule. Enfin, calculez une moyenne pour chaque cœur en utilisant la formule indiquée. L'indice d'expansion calculé à partir de la coloration de Goldner constitue un bon indicateur pour évaluer le développement de l'infarctus.Comme le montre la figure, il est corrélé à la taille de l'infarctus exprimée en pourcentage du ventricule gauche et à la fraction d'éjection mesurée par échocardiographie. Sur les graphiques sont représentées la régression linéaire et les intervalles de confiance à 95 %. L'indice d'expansion de l'infarctus a été calculé comme décrit dans la formule ci-dessous.La surface totale du VG a été mesurée comme la somme de la cavité du VG et de la surface du tissu du VG. Le pourcentage d'infarctus a été calculé comme indiqué. La fonction a été évaluée six semaines après la ligature de l'artère descendant antérieure à l'aide d'une échographie à haute résolution.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'effectuer un échantillonnage systématique du cœur et d'évaluer la taille de l'infarctus à partir d'une analyse d'image de coupes colorées.

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