Une étude comparative des médicaments Méthodes de livraison ciblés à l'oreille de la souris intérieure: Bullostomy Versus Transtympaniques Injection

L’objectif global de ce travail est de décrire et de comparer deux approches de microchirurgie pour l’administration locale de médicaments dans l’oreille interne en termes d’impact sur les paramètres auditifs et les marqueurs de cytoarchitecture cochléaire. Ces procédures peuvent nous aider à répondre à des questions clés dans le domaine auditif, en particulier dans le développement d’études prochimiques animales. Le principal avantage de ces techniques est qu’elles sont peu invasives.

Et cela permet à la substance d’atteindre didactiquement l’oreille interne. L’application de ces techniques s’étend au traitement de la perte auditive, car ses procédures microchirurgicales conviennent à l’administration sèche dans l’oreille moyenne. La démonstration pacifique de cette méthode est essentielle, car la bullostomie et l’injection transtympanique sont difficiles à apprendre et nécessitent des connaissances anatomiques et une formation chirurgicale.

Pour commencer, placez un bouchon d’oreille dans l’oreille controlatérale d’une souris anesthésiée pour obtenir des réponses principalement mono-auriculaires. Ensuite, placez la souris en position couchée sur un coussin chauffant à l’intérieur d’une chambre d’atténuation du son. Placez l’électrode de l’aiguille sous-cutanée positive en acier inoxydable dans le cuir chevelu entre les oreilles au-dessus du sommet du crâne.

Placez l’électrode de référence dans la région parotide sous le pavillon. Placez ensuite l’électrode de terre dans la région du dos, de la queue ou des membres postérieurs. Vérifiez l’impédance électrique dans les électrodes positive et négative.

Assurez-vous que l’impédance est inférieure à trois kiloohms. Placez le haut-parleur prérempli à une distance fixe face à l’oreille sélectionnée, avec le centre du haut-parleur aligné avec le conduit auditif externe. Assurez-vous qu’il n’y a pas d’obstacles entre le haut-parleur et l’oreille et que le pavillon de l’oreille est complètement ouvert.

Connectez la sortie numérique-analogique de la station de travail au haut-parleur sélectionné. Des haut-parleurs en champ libre sont utilisés ici. Connectez un amplificateur à faible bruit et avec un bon rapport signal/bruit à l’entrée analogique/numérique.

Ensuite, commencez le processus de délivrance de stimuli acoustiques dans le conduit auditif externe à l’aide de stimuli prédéfinis ou de nouveaux signaux conçus avec le logiciel approprié. Présentez les stimuli en commençant par une intensité élevée et en réduisant l’intensité par paliers de niveau de pression acoustique de cinq à 10 décibels. Enregistrez la réponse électrique dans les 10 premières millisecondes après la stimulation, car les réponses ABR évoquées apparaissent entre six et huit millisecondes.

Utilisez le logiciel pour déterminer le seuil ABR comme décrit dans la partie écrite du protocole. Après avoir administré l’anesthésie selon les protocoles approuvés, vérifiez qu’un plan chirurgical d’anesthésie a été atteint par l’absence de réaction à un pincement de l’orteil et la présentation d’une respiration régulière. Utilisez une tondeuse pour enlever la fourrure à la surface ventrale du cou et protégez les yeux de la kératite cornéenne avec un gel à base d’hydroxy-propyl-méthylcellulose.

Placez la souris dans la zone chirurgicale stérile en position couchée sur le dos. Nettoyez la peau avec une solution antiseptique à base de povidone iodée et recouvrez d’un drap stérile. Après avoir utilisé un scalpel pour faire une incision longitudinale de deux centimètres de la mandibule à la clavicule, regardez au microscope chirurgical et identifiez les glandes sous-maxillaires.

Séparez les deux glandes sous-mandibulaires à l’aide d’une pince, rétractez-les et localisez l’origine du muscle digastrique dans le nerf facial. Ensuite, faites une incision à l’origine du muscle digastre avec des ciseaux et rétractez-la ventralement, exposant la face médiale inférieure sous-jacente de la bulle tympanique. Ensuite, utilisez une aiguille de calibre 27 pour percer la bulle et créer une ouverture.

Nettoyez le sang de la zone percée avec une éponge de gélatine résorbable. Localisez l’artère stapédiale dans la membrane de fenêtre ronde qui lui est dorlotée. À l’aide d’un cathéter de calibre 34 et d’une micro-seringue en verre, injectez lentement trois à cinq microlitres de solution pour véhicule à travers la bullostomie et directement sur la niche ronde de la fenêtre pour la remplir.

Scellez la bullostomie avec une à deux gouttes d’adhésif tissulaire. Remettez les glandes sous-mandibulaires dans leur position initiale et fermez les incisions cutanées avec une suture chirurgicale en soie 5-0. Appliquez un antiseptique à base de povidone iodée ou de chlorhexidine autour de l’incision pour éviter l’infection de la plaie.

Gardez la souris sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’elle ait repris une conscience suffisante pour maintenir le décubitus sternal. Ne remettez l’animal dans la cage familiale qu’une fois qu’il est complètement rétabli. Placez la souris en position de décubitus latéral et préparez-la dans une zone chirurgicale septique sous le méat auditif externe, comme indiqué précédemment.

Après avoir pratiqué une incision longitudinale de 0,5 centimètre dans la partie verticale du conduit auditif externe, localisez la membrane tympanique à l’aide du microscope chirurgical. Identifiez la pars flaccida supérieure dans la pars tensa inférieure, qui est divisée en sections antérieure et postérieure par la poignée du marteau. Ensuite, faites une petite myringostomie dans la partie caudale de la pars flaccida, et une incision supplémentaire dans la pars tensa de la membrane tympanique pour permettre l’évacuation de l’air pendant l’injection.

À l’aide d’une micro-seringue en verre reliée à un cathéter de calibre 34, injectez doucement 10 à 15 microlitres de véhicule à travers la pars flaccida, près de la niche ronde de la fenêtre, jusqu’à ce que l’oreille moyenne soit clairement pleine. Fermez les incisions cutanées avec une suture chirurgicale en soie 5-0 et nettoyez comme décrit précédemment. Ce graphique montre les seuils ABR chez les souris C57BL/6J mâles âgées de 8 semaines en réponse à des stimuli de clic avant la chirurgie et sept, 14 et 28 jours après la microchirurgie.

données sur les bullostomies sont indiquées en orange, les données sur les injections transtympaniques sont indiquées en bleu et les données sur les animaux non opérés sont indiquées en gris. Ce graphique montre les seuils ABR en réponse à des stimuli de tonalité dans la gamme de huit à 40 kilohertz sur la même période de temps après la microchirurgie. Encore une fois, aucune différence significative n’a été observée entre la bullostomie et les approches transtympaniques.

Les études morphologiques démontrent que la rampe médiane ne présente pas d’altérations après l’administration du véhicule par bullostomie ou injection transtympanique, ce qui indique que l’une ou l’autre procédure seule n’entraîne pas de dommages. Lors de la tentative de bullostomie, il est important de se rappeler de revoir la structure critique et anatomique entourant l’oreille moyenne et interne des rongeurs. À la suite de ces procédures, d’autres techniques pourraient être effectuées.

Par exemple, l’échantillonnage de Berlin pour des études pharmacocinétiques Après son développement, ces techniques ouvrent la voie aux chercheurs dans le domaine des neurosciences auditives pour explorer des thérapies locales potentielles dans des modèles animaux, principalement chez les rongeurs. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’administrer des médicaments dans l’oreille moyenne et de la façon d’évaluer l’audition chez les rongeurs.