Intracarotidienne Cancer Cell Injection pour produire des modèles de souris de Brain Métastase

L’objectif global de cette injection microchirurgicale de cellules cancéreuses à travers l’artère carotide est de produire des modèles expérimentaux cohérents de métastases cérébrales in vivo chez la souris. Cette méthode peut donc aider à répondre à des questions clés dans le domaine des métastases cérébrales, par exemple si un nouveau traitement peut montrer son efficacité dans le traitement des métastases cérébrales. Le principal avantage de cette technique est donc qu’elle permet la production de métastases cérébrales expérimentales in vivo avec une reproductibilité élevée et une faible variabilité.

En général, les personnes qui ne connaissent pas cette technique auront du mal au début, car il faut beaucoup de pratique pour maintenir une main stable afin d’injecter des cellules cancéreuses dans l’artère carotide de ces souris au microscope. Commencez cette procédure en ensemencant les cellules cancéreuses avec un milieu DMEM F12 complété par 10 % de FPS et en les cultivant pendant un à deux jours avant l’injection. Le jour de l’opération chirurgicale, retirez les cellules de l’incubateur et récoltez-les lorsqu’elles atteignent 70 % à 80 % de confluence en les lavant avec un milieu sans sérum.

Ensuite, incubez les cellules avec 0,25 % de trypsine pendant une à deux minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, retirez-les de l’incubateur et ajoutez 10 % de FBS contenant du DMEM F12 dans les cellules pour éteindre la puce. Centrifugez les cellules à 80 fois G pendant trois minutes.

Ensuite, retirez le milieu et lavez deux fois les cellules sans sérum pour éliminer le sérum résiduel. Ensuite, comptez les cellules à l’aide d’un hémocytomètre et mettez-les en suspension dans HBSS. Ensuite, gardez les cellules sur de la glace jusqu’au moment de l’injection.

Dans cette procédure, anesthésez la souris avec un cocktail kétamine/xylazine par injection intrapéritonéale. Confirmez l’anesthésie complète en pinçant les pattes de l’animal et observez l’absence de réponse. Ensuite, enlevez les poils du cou en vous rasant ou en utilisant une petite quantité de produit dépilatoire.

Ensuite, placez la souris sur une plaque de verre et fixez-la avec des élastiques. Nettoyez la peau en appliquant 70 % d’alcool dans de la povidone iodée. Maintenant, faites une incision dans la peau d’environ un centimètre de long avec un scalpel chirurgical.

Ensuite, disséquez brutalement le muscle avec une pince chirurgicale pour exposer l’artère carotide en dessous. Séparez l’artère carotide du nerf vague adjacent à l’aide d’une pince chirurgicale. Ensuite, placez deux sutures.

Un distal et le proximal à la boule de coton et faire des nœuds lâches. Serrez le nœud proximal pour bloquer le flux sanguin dans le site d’injection. Après cela, humidifiez une petite boule de coton avec un tampon et placez-la sous l’artère carotide du site d’injection prévu.

Ensuite, procédez à l’injection de cellules cancéreuses si l’artère carotide sur la boule de coton semble entièrement pressurisée avec du sang rouge frais. Dans cette étape, vortex et aspirez 100 microlitres de cellules cancéreuses dans la seringue. Sous le microscope de dissection, insérez lentement l’aiguille de calibre 31 avec biseau vers le haut dans la lumière de l’artère carotide, posée sur la boule de coton.

Injectez lentement les cellules de la seringue dans l’artère carotide. Le succès de l’injection peut être observé par le changement de couleur des vaisseaux sanguins et de la musculature voisins lorsque les cellules cancéreuses tamponnées sont poussées dans la circulation. Lorsque l’injection est terminée, soulevez doucement la ligature distale pour éviter les régurgitations.

Ensuite, resserrez rapidement le nœud distal pour terminer le processus d’injection. Une fois l’injection terminée, resserrez les ligatures et coupez l’excédent de suture de soie avec des micro-ciseaux. Reculez le muscle séparé pour couvrir le site de la plaie et fermez la peau avec deux agrafes.

Pour récupérer, transférez l’animal sur un coussin chauffant. Ensuite, administrez de la buprénorphine par injection sous-cutanée comme analgésie post-chirurgicale. Une fois qu’elle a repris conscience et qu’elle a repris un comportement normal, ramenez la souris à son lieu de logement.

Donnez à l’animal de la nourriture en gel pendant plusieurs jours après l’opération. Ces images montrent que les cellules cancéreuses du sein MDA MB231 modifiées ont été marquées avec le gène rapporteur foraise lâche ex-vivo. À partir de 24 heures après l’injection de l’artère carotide, le développement des métastases cérébrales a été surveillé de manière non invasive par imagerie répétée du système d’imagerie in vivo.

La quantification des données d’imagerie indique une baisse initiale de la charge tumorale après l’injection de l’artère carotide, suivie d’une croissance exponentielle des métastases cérébrales jusqu’à ce que l’animal soit plus abondant. Donc, ce qui est maîtrisé, cette technique peut être faite en moins de 10 minutes pour chaque injection de souris si elle est effectuée correctement. Donc, lors de l’exécution de cette procédure, la chose la plus importante à retenir est que vous devez assurer, étudier et sécuriser le placement de l’artère carotide sur la boule de coton avant de procéder à l’injection des cellules cancéreuses.

Suite à cette procédure, d’autres méthodes peuvent être réalisées telles que des traitements thérapeutiques pour répondre à d’autres questions. Par exemple, si un nouveau médicament serait efficace pour inhiber les métastases cérébrales, il y a plus de croissance. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine des métastases cérébrales pour explorer des questions fondamentales ou translationnelles sur des modèles expérimentaux in vivo chez la souris.

Donc, après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’injecter les cellules cancéreuses dans l’artère carotide de souris pour produire un modèle expérimental de métastases cérébrales in vivo.