Murine Transplantation de peau pleine épaisseur

L'objectif général de cet article vidéo est de réaliser une greffe de peau en épaisseur totale et de décrire les étapes importantes nécessaires à la réussite de cette procédure. La greffe de peau en épaisseur totale chez la souris est un modèle bien établi pour l'étude des réponses allo-immunes et du rejet de greffe. La procédure est facile à réaliser et ne nécessite pas de techniques microchirurgicales délicates.

Le rejet de greffe, dans ce modèle, survient selon une réaction immunologique très reproductible et peut être facilement surveillé par inspection directe et palpation. En outre, une greffe cutanée secondaire avec des greffons cutanés provenant du même donneur ou d'un tiers peut être réalisée pour des modèles de transplantation plus complexes, offrant ainsi une méthode alternative et simple pour évaluer la tolérance spécifique au donneur. Après avoir anesthésié une souris donneur conformément au protocole décrit, utilisez un rasoir électrique pour raser le dos de l'animal.

Et, avec de la povidone-iodée à 10 %, désinfecter la peau. À l’aide de ciseaux et d’une dissection émoussée, prélever la peau dorsale du donneur de la hanche jusqu’au cou au niveau du tissu conjonctif aréolaire. Placer la peau dorsale sous un microscope et utiliser des ciseaux à ténotomie fins pour séparer le tissu conjonctif et le pannicule carnosus de la peau.

Découper des greffons de 15 par 15 millimètres dans la peau du dos pour un lit de greffe de 10 par 10 à 15 par 15 millimètres. Conserver les greffons sur une gaze imprégnée de PBS dans une boîte de Pétri, puis placer celle-ci sur de la glace. Anesthésier la souris receveuse conformément au protocole indiqué dans le texte.

Raser le flanc du dos de l'animal, là où la greffe sera insérée, puis administrer 0,02 milligramme par kilogramme de buprénorphine pour le soulagement de la douleur postopératoire. Utiliser de la povidone-iodine à 10 % pour désinfecter la zone. À l’aide de ciseaux, et de manière aussi superficielle que possible, découper un carré de peau de 10 × 10 à 15 × 15 millimètres.

Veillez à préserver le panniculus carnosus et les vaisseaux sanguins qui courent en superficie par rapport à celui-ci. Ensuite, positionnez la greffe sur le lit de greffe en évitant les plis sur les bords. Puis, placez huit points de suture aux coins de la greffe et à mi-chemin le long de chaque bord, en passant l'aiguille à travers la greffe, puis à travers le panniculus carnosus du lit de greffe, sous la peau réceptrice environnante.

Placer un tampon de gaze plié sur un pansement doublé, puis positionner l'animal sur le pansement, côté greffe vers le bas, en retirant le masque anesthésique pour permettre à l'animal de récupérer partiellement. Ensuite, enrouler le pansement autour de l'animal. Le facteur le plus critique dans le processus de greffe est la révascularisation du tissu greffé par l'envahissement des vaisseaux de l'hôte vers la greffe.

La dissection du panniculus carnosus et le positionnement correct du pansement sont les étapes les plus importantes. Immédiatement après la chirurgie, administrer 5 milligrammes par kilogramme d'enrofloxacine pour la prophylaxie des infections. Placer la souris transplantée dans une cage propre jusqu'à ce qu'elle se rétablisse complètement de l'anesthésie.

Observer la souris pendant une heure après l'intervention chirurgicale, avant de la ramener au lieu d'hébergement. Surveiller attentivement la souris pendant la période de récupération afin de s'assurer que le pansement n'entrave pas l'excursion thoracique et la respiration. Huit jours plus tard, observer et palper la greffe à la recherche de signes de croûte, de rétraction ou de rigidité.

Si l'un de ces signes est présent, la greffe n'aura peut-être pas atteint une vascularisation adéquate et devra être considérée comme un échec technique. Surveiller la greffe quotidiennement pour détecter les signes de rejet. Considérer qu'une greffe est rejetée lorsque plus de 90 % du tissu greffé devient nécrotique.

Dans les modèles de disparité complète, les greffes de peau en pleine épaisseur sont généralement rejetées entre huit et douze jours. Dans les modèles de légère disparité, les réponses de rejet sont plus lentes, plus variables, et l'apparence de la greffe de peau se caractérise par des modifications moins nettes, telles que la contraction ou la perte de poils. Le rejet aigu de la greffe commence généralement par un gonflement et une érythème de la greffe.

Ces événements sont suivis par la dessiccation de la greffe, la formation d'une croûte et un rétrécissement, comme on le voit ici. Selon le degré d'incompatibilité du CMH et le protocole d'immunosuppression, le rejet peut survenir selon un processus subaigu marqué par des changements subtils, tels que la perte de poils, de pigmentation, des crêtes dermiques et du volume de la greffe. Dans ces cas, une greffe rejetée apparaît luisante, blanche et sans poils, avec des bords irréguliers.

En utilisant des souris BALB/c comme donneurs et des souris C57 black 6 comme receveurs, on a observé que l'inhibition de la glycolyse et de la phosphorylation oxydative, ou du métabolisme du glutamine seul, prolongeait la survie des greffes cutanées. Toutefois, le blocage simultané des trois voies entraînait une augmentation significative de la survie de la greffe. De plus, la triple thérapie métabolique s'est révélée plus efficace que la cyclosporine conventionnelle ou la rapamycine.

En outre, l'histologie des greffes de peau provenant du groupe ayant reçu la thérapie métabolique a révélé un alignement tissulaire plus intact et un infiltrat inflammatoire lymphocytaire réduit, par comparaison avec le tissu non traité. Les résultats des transplantations d'organes se sont considérablement améliorés grâce aux progrès réalisés dans les techniques chirurgicales et les protocoles d'immunosuppression. Toutefois, l'immunosuppression à long terme est associée à des effets secondaires importants, et le développement de nouvelles stratégies favorisant la tolérance constitue toujours l'objectif de la recherche moderne en transplantation.

On connaît bien l'importance du métabolisme dans la régulation des lymphocytes T. En inhibant la glycolyse, la phosphorylation oxydative et le métabolisme de la glutamine, nous avons pu augmenter significativement la survie des greffes allogéniques. Cette approche novatrice s'est révélée plus efficace que le traitement conventionnel et représente un changement de paradigme dans les stratégies potentielles de régulation immunitaire et de transplantation.