RMN Spectroscopie comme outil robuste pour l'évaluation rapide du profil des suppléments Lipid huile de poisson

L’objectif global de cette méthode est de déterminer le profil lipidique des suppléments d’huile de poisson à l’aide de la spectroscopie par résonance magnétique nucléaire. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés pour l’analyse des lipides, telles que la teneur en lipides des suppléments d’huile de poisson et la distribution positionnelle de divers acides gras sur le squelette glycérol. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet d’analyser rapidement et efficacement plusieurs molécules différentes en un seul cliché sans utiliser d’étapes de séparation et de purification.

Pour préparer les échantillons à l’analyse RMN des protons et du carbone, extrayez d’abord 120 microlitres, soit environ 110 milligrammes d’huile de poisson, d’une capsule diététique à l’aide d’une seringue et placez-la dans un flacon en verre de 4 ml. Notez le poids de l’huile de poisson. Utilisez 500 microlitres d’une solution mère de BHT pour dissoudre 100 milligrammes plus ou moins 10 milligrammes d’huile de poisson.

Après avoir dissous l’huile, transférez toute la solution directement dans un tube RMN de cinq millimètres de haute qualité et fixez un bouchon. Analysez les échantillons dans les 24 heures suivant leur préparation. Insérez le tube RMN dans une turbine tournante.

Placez le cône et le tube sur le dessus d’une jauge de profondeur graduée et poussez doucement le haut du tube jusqu’à ce que sa partie inférieure touche le bas de la jauge. Placez ensuite le tube RMN dans un endroit ouvert de la boîte d’échantillon. Notez le numéro de l’emplacement dans lequel l’échantillon est placé.

Pour charger l’échantillon dans l’instrument RMN, retournez à l’ordinateur de contrôle et tapez le numéro SX, où le numéro est la fente dans le boîtier de l’échantillon contenant l’échantillon. Attendez que le signal de deutérium du chloroforme deutéré apparaisse à l’écran. Dès que le signal de deutérium est visible, tapez « lock » sur la ligne de commande et sélectionnez chloroforme deutéré dans la liste des solvants pour verrouiller l’échantillon en utilisant sa résonance de deutérium.

Tapez bsmsdisp"dans la ligne de commande pour vous assurer que la rotation n’est pas active. Si le bouton de rotation est vert, cliquez dessus pour désactiver la rotation. Après avoir tapé la commande new"pour créer un nouvel ensemble de données, entrez un nom pour l’ensemble de données dans l’onglet Nom et le numéro de l’expérience dans l’onglet Numéro d’expérience intitulé EXPNO.

Utilisez le numéro un dans l’onglet du numéro de processus intitulé PROCNO. Écrivez le titre de l’expérience dans l’onglet TITRE. Dans l’onglet Expérience, appuyez sur Sélectionner et choisissez le fichier de paramètres C13IG.

Appuyez ensuite sur Définir l’élément sélectionné dans l’éditeur" et cliquez sur OK. Tapez getprosol" dans la ligne de commande pour obtenir les paramètres standard de la sonde RMN et du solvant actuels. Tapez ensuite la commande atma"pour effectuer le réglage automatique et l’appariement de la sonde pour les noyaux de carbone et de protons. Ensuite, effectuez un calage de gradient unidimensionnel pour obtenir un champ magnétique très homogène et donc une forme de ligne optimale pour les signaux RMN.

Pour ce faire, utilisez la procédure automatique standard pour le calage 1D simplement en exécutant séquentiellement les commandes qu topshim 1dfast ss ; qu topshim tuneb ss ; et qu topshim report"dans la ligne de commande. Après l’optimisation des paramètres décrite dans le protocole texte, acquérez des spectres RMN de carbone unidimensionnels. Pour ce faire, allez dans l’ensemble de données carbon et utilisez une séquence d’impulsions découplées à déclenchement inverse en tapant pulprog zgig"dans la ligne de commande.

Tapez des commandes sur la ligne de commande pour configurer le spectre avec nppm, le centre de l’émetteur RF, le nombre de balayages, le nombre de balayages factices, le nombre de points de données et la durée d’impulsion pour un angle d’impulsion de quatre-vingt-dix degrés. Tapez digmod baseopt"dans la ligne de commande pour acquérir un spectre avec une ligne de base améliorée. Réglez ensuite un délai de relaxation de 60 secondes pour l’instrument de 850 mégahertz en tapant di 60s" dans la ligne de commande.

Réglez le gain du récepteur à une valeur appropriée à l’aide de la commande rga"pour le calcul automatique du gain du récepteur. Enfin, démarrez l’acquisition en tapant la commande d’acquisition d’impulsion zg" dans la ligne de commande. Pour traiter les données, tapez d’abord si 64K" dans la ligne de commande pour appliquer le remplissage du zéro et définir la taille du spectre ferroviaire sur 64K.

Définissez ensuite le paramètre d’élargissement de ligne sur 1,0 hertz en tapant lb 1,0" dans la ligne de commande pour appliquer une fonction d’attente avec un facteur d’élargissement de ligne de 1,0 hertz avant la transformation 4ea. Exécutez la transformation 4ea en tapant efp"dans la ligne de commande. Ensuite, effectuez une correction de phase automatique en tapant la commande apk" dans la ligne de commande.

Si des ajustements de phase supplémentaires sont nécessaires pour améliorer encore le spectre, cliquez sur l’onglet Processus. Cliquez ensuite sur l’icône Ajuster la phase et sur les icônes de correction de phase pour la correction de phase d’ordre zéro et de premier ordre. Tout en cliquant sur les icônes de correction de phase d’ordre zéro et de premier ordre, faites glisser la souris jusqu’à ce que tous les signaux soient en mode d’absorption positive.

Appliquez et enregistrez les valeurs de correction de phase en cliquant sur le bouton Retour et Enregistrer pour quitter le mode de correction de phase. Appliquez une fonction polynomiale de quatrième ordre pour la correction de la ligne de base lors de l’intégration en tapant la commande abs n" dans la ligne de commande. Pour signaler les changements chimiques en ppm à partir du TMS, zoomez sur le signal TMS, puis cliquez sur l’icône d’étalonnage et placez le curseur avec la ligne rouge au-dessus du signal RMN à référencer, TMS dans ce cas.

Pour régler l’intensité du seuil, utilisez le bouton central de la souris si nécessaire. Faites un clic gauche et tapez 0. Lorsque vous utilisez le BHT comme étalon interne, intégrez le pic au delta 151,45 en étendant cinq hertz de chaque côté du pic.

Réglez ensuite l’intégrale égale aux micromoles de BHT pour 0,5 millilitre de solution mère. Intégrez les pics d’intérêt s’étendant sur cinq hertz de chaque côté du pic. S’il est nécessaire de se concentrer sur une région, cliquez sur l’icône de surbrillance pour la désactiver.

Ensuite, faites un clic gauche et faites glisser pour zoomer sur la région. Cliquez à nouveau sur l’icône de surbrillance pour activer la fonction d’intégration et passer au pic suivant. Faites un clic gauche et faites glisser le curseur à travers l’intégrale.

Cliquez sur le bouton Retourner les régions d’enregistrement. Voici un spectre représentatif de l’analyse RMN du carbone dans la région du carbone carbonyle. Les signaux RMN de l’EPA et du DHA sur les positions sn-1, 3 et sn-2 sont représentés.

Ces signaux peuvent être utilisés pour la détermination quantitative de l’EPA et du DHA. Voici un spectre représentatif de l’analyse RMN des protons. Les signaux RMN de l’EPA et du DHA qui peuvent être utilisés pour leur détermination sont présentés.

Le spectre RMN des protons se caractérise par une largeur spectrale plus étroite par rapport au spectre RMN du carbone et donc une résolution spectrale plus faible. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en moins de 30 minutes si elle est correctement exécutée. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’analyse des lipides pour analyser rapidement divers composants lipidiques qui apparaissent dans les matrices à plusieurs composants, tels que les compléments alimentaires, les huiles végétales et les biocarburants.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’appliquer la spectroscopie RMN de protons et de carbone pour l’analyse du profil lipidique des suppléments d’huile de poisson. N’oubliez pas que travailler avec des champs magnétiques puissants produits par des spectromètres RMN peut être extrêmement dangereux pour les stimulateurs cardiaques et les prothèses chirurgicales, ainsi que pour les articles électroniques tels que les cartes de crédit et les montres.