Mesure de la signalisation des récepteurs couplés à la protéine G via liaison GTP radiomarquée

L’objectif global de cette procédure est d’isoler les membranes cellulaires qui contiennent des récepteurs couplés aux protéines G ou RCPG et d’étudier la pharmacologie des RCPG à l’aide d’un essai de liaison fonctionnelle au GTP. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biochimie concernant les propriétés pharmacologiques des récepteurs couplés aux protéines G établis ou orphelins. Les principaux avantages sont qu’il est simple, rapide et mesure l’événement le plus proximal dans la signalisation des récepteurs couplés aux protéines G.

Tout d’abord, placez des cellules rénales embryonnaires humaines sur une plaque de culture tissulaire de 10 centimètres dans 10 millilitres de DMEM complet. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone, jusqu’à ce que 70 à 80 % de confluence soient atteintes. Après l’incubation, transfecter les cellules avec HAMOR1 à l’aide d’un réactif de transfection approprié conformément aux directives du fabricant.