Séparation des mélanges par précipitation

1. la précipitation de CaCO₃

1. Préparer 5 mL de 1 M CaCl₂.
2. Préparer 5 mL 1 M Na₂CO₃.
3. Dans un tube à centrifuger petit (1,5 mL), ajouter 750 µL de CaCl₂ et 750 µL de Na₂CO₃.
4. Attendre 2 min pour la réaction de se produire. La solution devrait tourner nuageuse.
5. Centrifuger le mélange à 10 000 × g pendant 5 min.
6. Décanter le liquide surnageant.
7. Ajouter 1 mL d’eau froide dans le culot.
8. Resuspendre le culot en mélangeant dans un vortex pour 10 s.
9. Centrifuger le mélange à 10 000 × g pendant 5 min.
10. Décanter le liquide surnageant.

2. la précipitation des protéines du lait

1. Versez le lait dans un bol et ajouter un.
2. Lait chaud doucement jusqu'à 40 ° C dans une plaque de cuisson en remuant. Ne pas chauffer à plus de 40 ° C.
3. Préparer un 15 % (v/v) d’acide acétique en mélangeant 7,5 mL d’acide acétique et diluer dans l’eau jusqu’à 50 mL.
4. Plonger l’électrode d’un pH-mètre dans le lait tiède et surveiller le pH.
5. Ajoutez l’acide acétique goutte-à-goutte au lait jusqu'à atteindre un pH de 4,6.
6. Filtration du lait
   1. Flûte d’un morceau de papier filtre et le placer dans un entonnoir.
   2. Placez l’entonnoir dans une fiole et verser la solution de lait acidifié dans l’entonnoir.
   3. Que la solution est versée, le papier filtre peut s’obstruer. À l’aide d’un agitateur, agiter la solution et le papier filtre occasionnellement pour déboucher. Si elle n’améliore pas le passage de la solution, changer le filtre en papier.
   4. Placer un nouveau filtre en papier sur la paillasse et le transfert tout autant de l’humide solide pour le nouveau filtre en papier. Cela devrait absorber plus d’eau du solide.
   5. Si le nouveau filtre en papier est trop mouillé, continuer à le modifier jusqu'à ce qu’il y a peu d’humidité sur le papier filtre. Appuyez légèrement pour absorber plus d’eau si nécessaire.
   6. Prendre le solide séché et remettre en suspension dans environ 70 % éthanol. Filtrer le solide à la suite de mesures 2.6.1 à 2.6.5.
7. Centrifugation du lait (comme alternative à la filtration)
   1. Transférer des portions de 50 mL du mélange de tubes à centrifuger de 50 mL.
   2. Centrifuger à 4 500 × g pendant 10 min, puis décanter le liquide surnageant.
   3. Ajouter 50 mL d’éthanol à 70 % au culot.
   4. À l’aide d’un agitateur, resuspendre le culot dans l’éthanol.
   5. Centrifuger cette suspension après étape 2.7.2.
8. Resuspendre le culot dans un tampon pour approfondir l’analyse comme le SDS-PAGE, sinon conserver à 4 ° C.

3. la recristallisation de KCl

1. Peser 50 g de KCl dans un erlenmeyer et ajouter 100 mL d’eau
2. Faire chauffer le mélange jusqu'à ce que l’eau bout. Veillez à ce que toute la poudre KCl est dissoute. Certaines impuretés ne peuvent pas dissoudre dans l’eau.
3. Faire chauffer une autre fiole d’Erlenmeyer (vide) avec le mélange et gardez-le très chaud.
4. Placez un entonnoir avec filtre en papier dans le ballon chaud, vide.
5. Versez la solution sur le papier filtre pour éliminer les impuretés non dissoutes. Le ballon récepteur est gardé au chaud pour vous assurer qu'aucun changement de température se produire pendant la filtration, sinon qu'un précipité brut formera. Le cas échéant, réchauffez le mélange jusqu'à ce que tous le précipité se dissout.
6. Enlever le ballon avec la solution de la chaleur.
7. Gardez-le dans un endroit frais dans la chambre et laissez-le refroidir lentement pendant environ 30 minutes, ou jusqu'à ce qu’il n’est donc plus chaud au toucher.
8. Une fois refroidi à la température de la pièce, placer le ballon dans un bain de glace pour réduire la température. Alternativement, on peut laisser le ballon à l’intérieur du réfrigérateur ou une salle de contrôle de la température à 4 ° C.
9. Cristaux peut être récoltées par filtrage tout comme aux étapes 3,4 – 3,5 (utilisez une fiole et entonnoir à température ambiante).