Name: Un procédé de production de protéine recombinante mCD1d en cellules dinsectes. (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-10T22:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Découvrez la production de protéine recombinante mCD1d en cellules d'insectes High Five infectées par baculovirus. Cette méthode permet de générer des tétramères essentiels pour l'étude des cellules NKT en immunologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

I. Décongeler les cellules Prenez le flacon congelé des cellules TN5, et le placer dans un bain d&#39;eau à 37 ° C. Ajouter 5 ml d&#39;insectes express moyennes (Invitrogen, numéro de catalogue 10486-) dans 25cm 2 flacon de CT. Notez que cinq express vient sans glutamine; besoin d&#39;ajouter 10ml de streptocoque stylo 100X glutamine ou glutamine seule à une des médias lt. Ajouter TN5 cellules en elle et incuber pendant 30 minutes dans un incubateur à 27 ° C. Ensuite, aspirer le milieu avec du DMSO en douceur sans perturber les cellules attachées au fond du flacon. Ajouter 5 ml de milieu frais. II. Croissance et l&#39;expansion des cellules Surveiller les cellules chaque jour. Lorsque flacon est près de 70% de confluence, mettre les cellules en suspension en tapant dans le ballon des deux côtés et le transfert aux cellules de 175cm 2 flacon en ajoutant 21 ml d&#39;exprimer moyennes insectes et 5ml de culture cellulaire. Chaque flacon T175 devrait avoir autour de 25-30ml médium comme un volume final. Fractionner flacon confluence (environ 1 million / ml conc.) 1 / 4 ou 1 / 5 des besoins. Ne laissez pas envahir les cellules. Comptez le nombre de passages que vous avez fractionner les cellules. Ne pas pousser plus de 30 le nombre de passages, car il peut causer le vieillissement des cellules résultant lyse cellulaire. Lorsque vous atteignez le volume souhaité à la concentration de 1 million / ml, infectent les cellules. J&#39;ai généralement une croissance de 2 à 2,5 litres, ce qui équivaut généralement à soixante-dix 175cm 2 flacons et env. 25 à 30ml flacon / ou de cinq litres 1 erlenmeyers et env. 400ml à 500 ml dans chaque flacon Note: Vous pouvez soit cultiver des cellules de T-175 flacon joint fiche ou Corning Erlenmeyer. Des cellules en croissance dans des erlenmeyers est plus rapide et plus facile. III. Titrage du virus par la méthode de dilution End Point <ol><li> Assiette 3000-5000 cellules par puits dans le fond 96 plaque plane bien dans 200ul de milieu express GDF cinq. Laissez les cellules s&#39;établir à 27 ° C pendant au moins 30 minutes. </li><li> Faire de dilution en série de stock de baculovirus. On devrait faire de dilution 1 / 10 dans une ligne de 96 puits plaque de fond en U, en utilisant 250ul par puits. Les dilutions sont faites en milieu express GDF Cinq. </li><li> En utilisant une pipette multicanaux, le transfert d&#39;un montant fixe (généralement 20 ul) de différentes dilutions pour les cellules. </li><li> Culture à 27 ° C pendant 7 jours. Pour éviter l&#39;évaporation à partir des lignes de pointe, envelopper les bords de la plaque avec du parafilm. </li><li> Après 7 jours, vérifier la plaque et de déterminer ce qui donne de dilution du virus d&#39;une infection de 50% - la moitié du puits à cette concentration de virus sont infectés). Ensuite, utilisez une formule pour calculer le titre, ce qui est exprimé en pfu / ml (UFP-unités formant la plaque). La formule se trouve dans la plupart des manuels de baculovirus. </li></ol> IV. Infectant les cellules Il est très important de connaître le titre exact du virus. Ajoutez la quantité requise de virus. Pour la préparation de stock viral des cellules infectées doivent être à une multiplicité d&#39;infection (MOI) de pas plus de 1 (1pfu d&#39;1High Cinq cellulaire) supérieur MOI mène à la production de mutations virales. Pour la production de protéines, la quantité habituelle est MO1 5-10. Exemple: Le titre de baculovirus mCD1d = 1X108 pfu / ml Ajouter MOI = 1 (pour amplifier le virus) = 20X10 ^ 6 cellules / flacon / 1x10 ^ 8 pfu / ml = 200 ul / flacon MOI = 5 à 10 (pour la production de protéines) = 1 ml à 2 ml Pour 20x10 ^ 6 cellules / flacon Au jour 4, après l&#39;infection, regarder les cellules infectées. Ils devraient être détachée, flottante, saucisses gonflées et formant. Surnageants V. Récupération Prenez la moyenne des flacons infectés, et transfert à 250ml bouteilles bouchon bleu Falcon Spinning. Ils peuvent être autoclavés et réutilisés. Remplissez les bouteilles de façon égale et centrifuger les cellules Sorvall GSA rotor à 200rpm, 20 minutes, 4 ° C. Recueillir le surnageant et procéder d&#39;une purification supplémentaire. VI. Purification de recombinaison mCD1d <ol><li> La dialyse et la concentration dans tampon phosphate de sodium 150 mM (pH 7,4) </li><li> Par Ni-NTA agarose chromatographie, éluer la protéine mCD1d + B2M avec 150 mM de phosphate de sodium 200 mM Immidazole </li><li> Exécuter colonne de dessalage en utilisant 20 mM Tris HCl pH8 tampon pour se débarrasser des Immidazole </li><li> Exécuter chromatographie échangeuse d&#39;anions en utilisant la colonne MonoQ pour éliminer les contaminants restants. </li><li> Concentré à 1mg/ml utilisant YM 30 concentrateur (Millipore) </li><li> BirA biotynlation enzymatique de mCD1d selon le protocole du fabricant (avidité) </li><li> La biotine libre est éliminé par S200 colonne (Chromatographie d&#39;exclusion stérique) à l&#39;aide du tampon phosphate salin (PBS), pH 7,4. Une moyenne de 2 à 3 mg de protéine biotynlated pourrait être obtenu à partir de 2 litre de surnageant </li><li> Production d&#39;un tétramère-GalCer CD1d. </li></ol> Afin de charger molécule CD1d avec un GalCer-, soluble biotynlated CD1d-b2m est incubé une nuit à température ambiante avec trois fois excès molaire d&#39;un GalCer-, dissous dans 0,5% de Tween -20 en PBS, chlorure de sodium O.9%. Tétramères sont générées par le mélange d&#39;un-GalCer monomères chargés CD1d avec 4 excès molaire pli du PE - streptavidine conjuguée et incubation pendant 4 heures à température ambiante. Entreposer à 48 ° C.

<ol><li>Benlagha, K., Weiss, A., Beavis, A., Teyton, L., Bendelac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+identification+of+glycolipipd+antigen-specific+T+cells+using+fluorecent+CD1d+tetramers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo identification of glycolipipd antigen-specific T cells using fluorecent CD1d tetramers.</a> J. Exp. Med. 191, 1895-1903 (2000).</li>
<li>Kinjo, Y., Wu, D., Kim, G., Xing, G. W., Poles, M. A., Ho, D. D., Tsuji, M., Kawahara, K., Wong, C. H., Kronenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+bacterial+glycosphingolipids+by+natural+killer+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Recognition of bacterial glycosphingolipids by natural killer T cells.</a> Nature. 434, 520-525 (2005).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+and+antigen+presentation+of+ceramide-containing+glycolipids+by+soluble+mouse+and+human+CD1d+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Binding and antigen presentation of ceramide-containing glycolipids by soluble mouse and human CD1d molecules.</a> J. Exp. Med. 190, 1069-1080 (1999).</li>
<li>Porcelli, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CD1+family%3A+A+third+lineage+of+antigen-+presenting+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The CD1 family: A third lineage of antigen- presenting molecules.</a> Adv. Immunol. 59, 1-98 (1995).</li>
<li>Sidobre, S., Kronemberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD1+tetramers%3A+A+powerful+tool+for+the+analysis+of+glycolipid-reactive+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD1 tetramers: A powerful tool for the analysis of glycolipid-reactive T cells.</a> J. Immunol. 169, 1340-1348 (2002).</li>
</ol>

Dans cette procédure, il est montré comment initier, grandir, infecter les cellules d&#39;insectes et la façon de titrer la baculovirus utilisation de ces cellules. Les aspects les plus importants de cette procédure sont la maintenance des cellules et de connaître le titre exact de baculovirus. Une fois que vous avez généré CD1 tétramères, ils peuvent être utilisés comme un outil puissant pour l&#39;analyse des glycolipides des cellules T réactives. Systèmes baculovirus sont également largement utilisées pour produire des protéines recombin...

<table><tbody><tr><td>Express Five SFM</td><td> Milieu sans sérum</td><td>Invitrogen</td><td>10486025</td><td></td></tr><tr><td>High Five TM</td><td> Cellules d'insectes</td><td>Invitrogen</td><td>B855-02</td><td></td></tr><tr><td>Glutamine Pen strep</td><td>Antibiotiques</td><td>Invitrogen</td><td>10378-016</td><td></td></tr><tr><td>Flacon TC 25 cm2</td><td> En plastique</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-28</td><td></td></tr><tr><td>Flacon TC 175 cm2</td><td> Flacon à scellage par bouchon</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-126-8</td><td></td></tr><tr><td>Flacon Erlenmeyer</td><td> Flacon de culture cellulaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>07 200 672</td><td></td></tr><tr><td>Concentrateur YM 30</td><td>30 000 MWCO</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC 903096</td><td></td></tr><tr><td>Équipement FPLC</td><td></td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Enzyme BrA et tampon</td><td>Kits de biotinylation</td><td>Avidity</td><td>BIRA500</td><td></td></tr><tr><td>Colonne de chromatographie Ni-NTA Agarose</td><td>Colonne de purification des protéines His-tag</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colonne de désalinisation</td><td>Pour éliminer le sel de la protéine</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colonne MonoQ</td><td>Chromatographie d'échange d'anions</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colonne S200</td><td>Chromatographie d'exclusion par taille</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>alpha-Galcer</td><td> Glycolipide</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Streptavidine-PE</td><td> Pour la conjugaison des protéines</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td>S-866</td><td></td></tr></tbody></table>

un procédé de production de protéine recombinante mcd1d en cellules d&#39;insectes.

A Method For Production of Recombinant mCD1d Protein in Insect Cells.

CD1 protéines constituent une troisième classe de molécules présentatrices d&#39;antigène. Ils sont des glycoprotéines de surface cellulaire, exprimée en environ 50 kDa glycosylée lourdes chaînes qui sont non covalente associée à béta2-microglobuline. Ils se lier aux lipides plutôt que les peptides. Bien que leur structure confirme la similitude des protéines CD1 du CMH de classe I et molécules de classe II présentant l&#39;antigène, la rainure mCD1d est relativement étroite, profonde et hautement hydrophobe et il a deux poches de liaison au lieu de la faible profondeur des poches de plusieurs classiques décrites pour la MHC- codée molécules présentatrices d&#39;antigène. Sur la base de leurs séquences d&#39;acides aminés, une telle rainure hydrobphobic fournit un environnement idéal pour la fixation des antigènes lipidiques. Le Natural Killer T (NKT), les cellules utilisent leur TCR à reconnaître glycolipides liés à ou présentés par CD1d. Les cellules T réactives aux lipides présentés par CD1 ont été impliqués dans la protection contre les maladies auto-immunes et infectieuses et dans le rejet de la tumeur. Ainsi, la capacité d&#39;identifier, purifier, et de suivre la réponse du CD1-réactive cellules NKT est de grande importance. La génération de tétramères d&#39;alpha galactosyl céramide (une-GalCer) avec CD1d a aperçu significatif de la biologie des cellules NKT. Tétramères construits à partir d&#39;autres molécules CD1 ont aussi été générés et ces nouveaux réactifs ont considérablement élargi les connaissances sur les fonctions des cellules T réactives de lipides, avec une utilisation potentielle dans le suivi de la réponse aux vaccins à base de lipides et dans le diagnostic des maladies auto-immunes et d&#39;autres traitements.

Une méthode pour préparer les cellules d&#39;insectes et de les infecter avec le baculovirus à des fins de production de l&#39;recombinante proteinand mCD1d générant tétramères mCD1d.

Un procédé de production de protéine recombinante mCD1d en cellules d&#39;insectes.

Les protéines CD1 constituent une troisième classe de molécules de présentation d'antigènes. Ce sont des glycoprotéines de surface cellulaire, exprimées sous la forme de glycoprotéines glycosylées d'environ 50 kDa...

Bonjour, je suis Ashra Corona du laboratoire du Dr. Mitch Kronenberg, du département d'immunologie du développement à l'Institut de La Jolla pour l'allergie et l'immunologie. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment préparer des cellules d'insectes High Five et les infecter avec un VIR afin de produire des tétramères MA CD1D. Les tétramères CD1D sont utilisés par notre laboratoire et par d'autres pour la reconnaissance des cellules NKT.Le système VIR est largement utilisé pour produire des protéines recombinantes, notamment les tremblements de type TE de classe C du MS. Ainsi, la procédure que vous allez voir présente une applicabilité beaucoup plus étendue. Cette procédure consiste à initier et cultiver des cellules d'insectes High Five, infecter les cellules avec un réovirus porteur du cDNA de CD1D, récolter le surnageant par centrifugation après quatre jours d'infection, lyser les cellules et concentrer les protéines dans un tampon de phosphate de sodium 150 millimolaire, pH 7,4, purifier la protéine murine CD1D par chromatographie d'affinité au nickel et échange d'ions, concentrer la protéine CD1D murine à 1 mg par mL à l'aide d'un concentrateur YM-30, puis effectuer une biotinylation enzymatique de la protéine murine CD1D selon le protocole AvidD, suivie de l'élimination de la biotine libre par colonne S-200.Et enfin, la production de gel alpha CD 1D Tet. Bien que l'ensemble de la procédure comprenne toutes ces étapes, aujourd'hui nous allons uniquement vous montrer comment manipuler ces cellules et les infecter avec le virus dans le but de produire davantage de CD 1D tremors. Commençons.Tout d'abord, je souhaite vous montrer comment cultiver les cellules d'insecte TN5, la lignée cellulaire High Five provenant des cellules ovariennes de la tordeuse du chou. Elles sont utilisées dans ce protocole car elles se développent en milieu sans sérum, sont adaptables à la culture en suspension et produisent de fortes quantités de protéines recombinantes dans 5 ml de milieu InsectExpress dans des flacons de culture tissulaire de 25 centimètres carrés. Notez que le milieu InsectExpress ne contient pas de glutamine.Nous devons donc ajouter 10 ml d’un glutamine pen strip à 100 x ou du glutamine seul dans un litre de milieu. Je vais maintenant prendre l’ampoule congelée de cellules d’insectes High Five, la décongeler immédiatement dans un bain d’eau à 37 degrés Celsius, ajouter les cellules d’insectes High Five au flacon et incuber pendant 30 minutes à 27 degrés Celsius. Ensuite, dans l’incubateur, aspirer le milieu pour éliminer le milieu contenant le DMSO, délicatement, sans perturber les cellules attachées au fond du flacon.À présent, nous devons ajouter cinq ml de milieu frais dans le flacon après avoir effectué le hâlage. Nous devons maintenant étendre les cellules avant l'infection par le virus. Surveillez les cellules chaque jour lorsque le flacon est presque à 70 % confluents. Mettez les cellules en suspension en frappant le flacon sur les deux côtés.Transférez les cellules dans un flacon carré de 75 centimètres carrés en ajoutant 25 ml de milieu insect express et 5 ml de milieu de culture cellulaire provenant du flacon de division. Divisez-les selon un rapport d’un à quatre ou d’un à cinq, selon les besoins. Ne laissez pas les cellules surcroître ; comptez le nombre de passages au cours desquels vous avez divisé les cellules.Ne pas dépasser le numéro de passage 30, car cela pourrait provoquer un vieillissement des cellules entraînant une lyse cellulaire. Les cellules doivent être divisées tous les deux jours. Lorsqu'on effectue une division, le rapport est de un à cinq.Lorsque vous atteignez le volume souhaité à une concentration d'un million de cellules par mL pour infecter les cellules, je fais généralement pousser jusqu'à deux litres, ce qui correspond habituellement à 71 flacons de 75 cm² avec environ 25 mL par flacon, ou à quatre flacons ER d'un litre avec environ 500 mL par flacon. La culture des cellules dans des flacons ER est beaucoup plus rapide : ajoutez 100 mL de milieu de culture et 400 mL de milieu SFM Express Five, puis faites croître les cellules dans un agitateur à 125 tr/min (RPM) à une température de 27 degrés Celsius, jusqu'à atteindre un million de cellules par mL pour le volume désiré. Avant d'infecter les cellules, je souhaite vous montrer comment titrer le virus belo, ce que nous ferons ensuite. Afin de déterminer le titre viral, placez de 3 000 à 5 000 cellules par puits.Puits dans une plaque 96 puits à fond plat contenant 200 microlitres de milieu SFM InsectExpress Five. Laisser les cellules se déposer à 27 degrés Celsius pendant au moins 30 minutes. Préparer la dilution sérielle du stock d'Avius.On doit effectuer une dilution en série dans une ligne de 96 puits. Plaque inférieure utilisant 250 microlitres par puits. Les dilutions sont réalisées dans le milieu SFM Express Five.À l’aide d’une pipette multicanal, transférez une quantité fixe, généralement 20 microlitres de différentes dilutions, dans les cultures cellulaires placées dans un incubateur à 27 degrés Celsius pendant sept jours afin d’éviter l’évaporation provenant des puits périphériques. Entourez les bords de la plaque avec du film après sept jours. Vérifiez la plaque et déterminez quelle dilution du virus provoque une infection à 50 %.Ensuite, utilisez une formule pour calculer le titre, exprimé en PFU par ml. Cette formule est indiquée dans la plupart des manuels concernant le virus belo. Après avoir mis en place le virus, la quantité nécessaire de virus pour infecter les cellules en vue de la production de protéines doit correspondre à une multiplicité d'infection comprise entre cinq et dix.Par exemple, si le titre des virus belo de souris CD1D est d'une centaine de millions d'unités formant des plaques par ml et que nous avons 20 millions de cellules par flacon, nous devons ajouter de un à deux ml de virus belo pour infecter les cellules. Les cellules doivent être infectées pendant quatre jours. Au quatrième jour suivant l'infection, les cellules doivent se détacher, flotter, être gonflées et former des agrégats ressemblant à des saucisses.Il est maintenant temps de récupérer le surnageant. Prélevez le milieu du flacon infecté et transférez-le dans des bouteilles coniques Falcon de 250 ml à bouchon bleu. Elles peuvent être stérilisées à l'autoclave et réutilisées.Remplissez uniformément les bouteilles et envoyez-les pour centrifuger les cellules avec un rotor GSA à 2000 tr/min pendant 20 minutes à quatre degrés Celsius. Récupérez le surnageant et poursuivez la purification. Je viens de vous montrer comment initier, cultiver et infecter les cellules d'insectes High Five, ainsi que titrer le virus baculovirus.À l'aide de ces cellules, les aspects les plus importants de cette procédure concernent la manière de maintenir les cellules et de déterminer précisément le titre des baus. Une fois que vous avez généré les tremblements CD 1D, ceux-ci peuvent être utilisés comme un outil puissant pour l'analyse des lymphocytes T réactifs aux glycolipides. Cette procédure de manipulation et de dosage du virus balo peut également être utilisée pour de nombreuses autres protéines recombinantes.Voilà, c'est tout. Merci d'avoir regardé et bonne chance avec vos expériences.

a-method-for-production-of-recombinant-mcd1d-protein-in-insect-cells

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dans l'ère post-génomique humaine, la disponibilité de protéines recombinantes dans des conformations natives est cruciale pour la recherche structurelle, fonctionnelle et thérapeutique et le développement. Ici, nous décrivons un test et à grande échelle du système expression des protéines dans les cellules embryonnaires humaines de rein 293T qui peuvent être utilisés pour produire une variété de protéines recombinantes.

Une plate-forme d&#39;expression pratique et général pour la production de protéines sécrétées à partir de cellules humaines

complexes de protéines catalysent les fonctions cellulaires essentielles. Caractérisation fonctionnelle et structurale détaillée de nombreux complexes essentielles nécessite la production recombinante. MultiBac est un système cellulaire baculovirus / insecte particulièrement adaptées pour l'expression de protéines eucaryotes et de leurs complexes. MultiBac a été mis en œuvre comme une plate-forme en libre accès, et les procédures d'exploitation normalisées développés afin de maximiser son...

La protéine plate-forme de production complexe MultiBac à l&#39;EMBL

Ici, nous utilisons transduction rétrovirale et transfection concatémérique pour créer une lignée cellulaire qui peut exprimer les composantes d'un vecteur lentivirus (LV) en l'absence de tétracycline. Ce LV code pour la GFP et est pseudotypé avec une glycoprotéine, SVGmu, qui est spécifique d'un récepteur sur les cellules dendritiques.

Un régulée par la tetracycline lignée cellulaire produit vecteurs lentiviraux titre élevé qui ciblent spécifiquement les cellules dendritiques

Kindlins sont fondamentales pour l'adhésion cellulaire intégrines mais les études d'entre eux ont été entravés par la difficulté rencontrée dans leur expression par recombinaison dans des hôtes bactériens. Nous décrivons ici des procédés pour leur production efficace dans des cellules d'insecte infectées par un baculovirus.

La production efficace et purification de recombinant murin Kindlin-3 à partir de cellules d&#39;insectes pour les études biophysiques

Dans cette étude, l’expression d’une protéine recombinante humaine cible dans différentes plateformes de production a été comparée. Nous nous sommes concentrés sur les cultures traditionnelles à base de fermenteurs et sur les plantes, en décrivant la configuration de chaque système et en mettant en évidence, sur la base des résultats rapportés, les limites et les avantages inhérents à chaque plateforme.

Une analyse comparative des recombinant expression des protéines dans différents bio-usines: bactéries, cellules d&#39;insectes et Plant Systems

Les systèmes d'expression de cellules d'insecte non lytique sont sous-utilisées pour la production, le trafic / la localisation cellulaire, la protéine recombinante et l'analyse fonctionnelle. Nous décrivons ici les méthodes pour générer des vecteurs d'expression et l'expression des protéines transitoire suivante dans des lignées cellulaires lépidoptères disponibles dans le commerce. La co-localisation de Bemisia tabaci aquaporines avec des protéines de marqueur fluorescent subcellulaires est...

Expression transitoire et localisation cellulaire des protéines recombinantes dans les cellules d&#39;insectes Cultured

Nous rapportons en utilisant une artificiel intronic petit RNA expression stratégie à élaborer un recombinant non défectueux densovirus (AaeDV) Aedes aegypti in vivo système de livraison. Une procédure détaillée pour la construction, emballage et l’analyse quantitative des vecteurs rAaeDV aussi bien en ce qui concerne l’infection larvaire est décrite.

Utilisation d’un moustique Recombinant Densovirus comme un vecteur de livraison de gène pour l’analyse fonctionnelle des gènes chez les larves de moustiques

Ce protocole décrit un système d’expression de protéine induite par le choc de chaleur (système de pile à pDHsp/V5-His/sf9), qui peut être utilisé pour exprimant des protéines étrangères ou évaluation de l’activité anti-apoptotique de protéines étrangères potentiels et leur tronqué amine acides dans les cellules d’insectes.

Expression transitoire de gènes étrangers dans des cellules d’insecte (sf9) pour l’analyse fonctionnelle de la protéine

Nous présentons ici un protocole pour produire chambre carboxylestérase mouche protéines in vitro avec un système d’expression baculovirus médiée par cellule insectes et plus tard fonctionnellement caractériser leurs rôles en métabolisant perméthrine, ainsi, conférant aux pyréthrinoïdes résistance en procédant à base de cellules MTT dosage et in vitro études métaboliques.

Caractérisation fonctionnelle des carboxylestérases chez les mouches maison résistant aux insecticides, Musca Domestica

Nous présentons ici les protocoles utilisant les insectes cellulaire et baculovirus protein expression pour produire de grandes quantités de protéines végétales sécrétée de cristallisation de protéines. Un vecteur d’expression baculovirus a été modifié par GP67 ou peptide signal hemolin insectes pour expression plante de sécrétion des protéines dans des cellules d’insecte.

Modification des vecteurs d’Expression Baculovirus pour produire sécrétée des protéines végétales dans des cellules d’insecte

Le système de vecteur d’expression de baculovirus (BEVS) est une plate-forme robuste pour le criblage d’expression et la production des méthyltransférases d’arginine de protéine (PRMTs) à utiliser pour des études biochimiques, biophysiques et structurelles. Des quantités milligrammes de matière peuvent être produites pour la majorité des PRT et d’autres protéines d’intérêt nécessitant une plate-forme d’expression eucaryote.

Production de protéines PRMT recombinantes à l’aide du système vectoriel d’expression du baculovirus

Découvrez la production de protéine recombinante mCD1d en cellules d'insectes High Five infectées par baculovirus. Cette méthode permet de générer des tétramères essentiels pour l'étude des cellules NKT en immunologie.

Un procédé de production de protéine recombinante mCD1d en cellules d'insectes.

Explorer plus de vidéos