Le modèle de coeur inversé pour la collecte de transudat interstitielle à partir du coeur de rat isolé

L’objectif global de ce modèle de cœur inversé est de collecter un transsudat interstitiel cardiaque à partir d’un cœur de rat isolé. Dans le cœur qui bat, le sens individuel du cœur libère des facteurs paracrines et les libère dans l’espace liquide interstitiel environnant. C’est important, car l’espace du liquide interstitiel, il transporte des informations pour la communication entre les cellules cardiaques.

Et cela est particulièrement important dans des conditions d’inflammation et de régénération du myocarde infarctus. Dans cette vidéo, mes collaborateurs, Dr.Ding et Tan, vous montreront les techniques par lesquelles nous collectons ici, dans cet amour, du liquide interstitiel à la surface d’un cœur de rat isolé et perfusé. Pour fabriquer le couvercle de cœur en latex, ou capuchon, disposez d’un moule en aluminium qui correspond à la taille moyenne du cœur d’un rat et qui a été poli avec du papier émeri ultrafin.

Fixez verticalement le col du moule à la fraiseuse et commencez à faire tourner lentement le moule. Ensuite, versez 20 millilitres de latex liquide dans un bécher en verre de 50 millilitres et abaissez le moule rotatif dans le latex jusqu’à ce qu’il soit immergé. Ensuite, soulevez-le lentement et continuez à tourner le moule pendant 15 minutes supplémentaires jusqu’à ce que le latex se solidifie.

La rotation est essentielle pour fabriquer cette mousse et répartir uniformément la couche de latex liquide à la surface du moule. Assurez-vous donc que le moule tourne lorsqu’il est soulevé du latex. Une fois que le latex est sec, enduisez-le de talc pour éviter d’endommager le latex.

Arrêtez la rotation, puis détachez doucement le moule de la machine. Retirez délicatement le latex du moule. Maintenant, fixez une longueur de 25 centimètres de tube en silicone à la sortie du capuchon en latex.

Ce tube est utilisé pour recueillir le transsudat cardiaque interstitiel, ou TDM. Ensuite, fixez fermement le ballon ventriculaire de la taille d’un rat sur une canule métallique en forme de L, reliée à une seringue remplie d’eau d’un millilitre. Et remplissez d’eau le ballon ventriculaire de la taille d’un rat. Assurez-vous que le ballon est hermétique en le gonflant et en le dégonflant plusieurs fois à l’aide de la seringue.

Ensuite, connectez la canule à un transducteur de pression, via une butée à trois voies. Enfin, faites une marque sur la seringue où le ballonnet remplira la cavité ventriculaire pour la mesure de la pression intraventriculaire. Avant de procéder à la préparation du cœur, préparez le système de perfusion Langendorff selon le protocole de texte.

Maintenant, après avoir complètement anesthésié un rat Wistar mâle de 300 à 350 grammes, transférez-le sur une table d’opération à température ambiante. Avec l’expérience, les étapes suivantes menant à la canulation du cœur ne devraient prendre que trois minutes environ. Soulevez la peau et le muscle juste en dessous du sternum, à l’aide d’une pince, et coupez autour du bord inférieur des côtes à l’aide de ciseaux lourds.

Ensuite, avec des ciseaux fins, faites une petite entaille dans le diaphragme au bord des côtes. Ensuite, coupez la côte caudale pour faire un rabat de toute la paroi ventrale de la poitrine. Maintenant, saisissez doucement le cœur et vivez-le lentement jusqu’à ce que les vaisseaux cardiaques commencent à s’étirer.

Ensuite, excisez le cœur jusqu’à ce que l’aorte soit complètement exposée et transférez le cœur dans un bécher de 100 millilitres contenant 50 millilitres de KHB glacé. Maintenant, amenez immédiatement le cœur à l’appareil de profusion et montez l’aorte sur une canule goutte à goutte. Fixez-le hermétiquement avec une suture 4-0, afin qu’aucune bulle d’air ne puisse pénétrer dans le cœur.

Ensuite, appliquez soit une pression de profusion constante, soit un débit de profusion. Pour établir la configuration du cœur inversé, tournez d’abord doucement la canule aortique jusqu’à ce que la paroi postérieure du cœur soit en face. Ensuite, coupez le tissu conjonctif pour exposer l’ouverture de l’oreillette gauche.

Ensuite, saisissez doucement le cœur et retournez-le. Montez le cœur sur le ballon ventriculaire préparé, avec le ballon dégonflé, et introduisez-le dans le ventricule gauche. Le cœur est maintenant stabilisé mécaniquement en position verticale, en utilisant l’ensemble du cathéter à ballonnet comme support.

Gonflez le ballonnet jusqu’à ce qu’il remplisse toute la cavité ventriculaire, en avançant le piston jusqu’à la marque de remplissage. Sécurisez le cœur afin qu’il y ait un minimum de stress sur la racine aortique. Cette partie de la procédure demande de la pratique.

Maintenant, observez la jauge sur le ballon et ajustez la pression diastolique à trois à cinq millimètres de mercure. De petites gouttelettes doivent se former sur l’épicarde si la pression est correctement réglée. Ensuite, tirez doucement le capuchon en latex sur le cœur.

Même la surface la plus ventriculaire doit être couverte. Avant de continuer, vérifiez qu’il n’y a pas de bulles d’air à l’intérieur du bouchon. Pour éliminer les bulles d’air, utilisez une aspiration douce de la seringue.

Maintenant, positionnez l’extrémité du tube de laisser 10 centimètres sous le cœur. Recueillez le TC goutte à goutte dans un tube de 1,5 millilitre et maintenez le tube en dessous de quatre degrés Celsius en l’incrustant dans un mélange 1:1 de glace et de chlorure de sodium. Prélevez entre 0,15 et 1,5 millilitre de TDM, puis pesez l’échantillon et congelez-le dans de l’azote liquide.

Conservez-le à moins 80 degrés Celsius jusqu’à ce qu’il puisse être traité. Lors de la rétroperfusion du modèle de cœur inversé à une pression constante de 100 centimètres d’eau, entre 1/10 et 1 % de l’effluent veineux coronaire a pu être collecté. La teneur en protéines du scanner a été mesurée à l’aide du test BCA et était en moyenne de 1,1 milligramme par millilitre.

Une simple électrophorèse sur gel a révélé un large spectre de protéines. Des échantillons normaux ont été comparés à des échantillons de cœurs soumis à 50 minutes de reperfusion d’ischémie à l’aide de DIGE 2D. Plusieurs protéines se sont avérées être régulées à la hausse dans la tomodensitométrie des cœurs ischémiques.

Une analyse protéomique a été effectuée sur les protéines régulées à la hausse. Les purines étaient également d’un grand intérêt. Les purines sont des molécules de signalisation essentielles qui régulent la réponse immunitaire cardiaque, le tonus vasomoteur et la fonction cardiaque, en particulier après une lésion ischémique.

L’analyse HPLC de la TDM a montré des concentrations élevées de nombreuses purines dans les cœurs blessés. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de se rappeler qu’un trans-in-date cardiaque formé dans un cœur isolé n’imitera pas entièrement la véritable composition des conditions in-vee-vuh.